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Cromatografa Fernndez Olavarrieta Mara Teresa

ANTECEDENTES
Cromatografa de capa fina
a) Concepto de cromatografa. Tipos de cromatografa de adsorcin y cromatografa de particin. Ejemplos. La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms compuestos por distribucin entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles, dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: slidoliquido (capa fina, papel o columna), liquido-lquido y gases-liquido ( fase vapor ). Todas las tcnicas cromatografas dependen de la distribucin de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase mvil, llamada tambin activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relacin con la otra, denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser un lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un lquido. Dentro de la cromatografa lquida destaca la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC, del ingls High Performance Liquid Chromatography), que es la tcnica cromatogrfica ms empleada en la actualidad, normalmente en su modalidad de fase reversa, en la que la fase estacionaria tiene carcter no polar, y la fase mvil posee carcter polar (generalmente agua o mezclas con elevada proporcin de la misma, o de otros disolvente polares, como por ejemplo metanol). El nombre de "reversa" viene dado porque tradicionalmente la fase estacionaria estaba compuesta de slice o almina, de carcter polar, y por tanto la fase mvil era un disolvente orgnico poco polar. Una serie eluotrpica es un rango de sustancias de diferentes polaridades que actan como fase mvil y que permiten observar un mejor desplazamiento sobre una fase estacionaria. b) Fenmeno de adsorcin. La propiedad de retencin. Concepto de Rf. Todos los slidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente' todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con ms facilidad que otras. Este fenmeno de adsorcin selectiva es el principio fundamental de la cromatografa. Rf es el registro, es una relacin de distancias, y se define como: p1 = (a) distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicacin (b) distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente.

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El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de saturacin, etc"). Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que es mejor correr duplicados de la misma Placa. c) La cromatografa en capa fina. Sus caractersticas y aplicaciones. En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta produciendo "manchas" de los componentes. En la cromatografa en capa fina (ccf), el grado de elucin de las sustancias depende tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado. El adsorbente se coloca en forma de una capa delgada adherida sobre un soporte rgido, que pueden ser placas de vidrio, aluminio o polister. Los tamaos de la placa para ccf convencional son: 20 x 20; 20 x20 y 5x2 cm. Hay adsorbentes que contienen un indicador de fluorescencia para facilitar la identificacin de muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos, se requerirn otras tcnicas de revelado. d) Eluyentes, soportes y reveladores ms comunes para la cromatografa en capa fina. Eluyentes ms comunes para cromatografa en capa fina - ter de petrleo - cloruro de metileno - n-hexano - acetato de etilo - ciclo hexano - acetona - tolueno iso-propanol - dietil-ter - etanol - f-butil-ter - metanol - cloroformo - cido actico Reveladores ms comunes para cromatografa en capa fina Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras pueden revelarse mediante: a) Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F25a F366), el nmero que aparece como subndice nos indica Ia longitud de onda de excitacin del indicador utilizado" b) La introduccin de la placa en vapores de yodo

Cromatografa Fernndez Olavarrieta Mara Teresa c) El roco con una solucin de agualH2SOa 1 :1 (dentro de un compartimiento especialmente protegido y bajo una campana de extraccin de gases). Despus calentar intensamente, por ejemplo, con un mechero hasta carbonizar los compuestos. Adsorbentes ms comunes para cromatografa en capa fina. a) Gel de slice (se utiliza en el 80% de las separaciones) b) Oxido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica) c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina) d) Poliamidas Para la seleccin del adsorbente deber tomar las siguientes consideraciones: a) Polaridad b) Tamao de partcula c) Dimetro d) rea Superficial e) Homogeneidad de Pureza e) Factores que influyen en una separacin por cromatografa de capa fina. a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase estacionaria. b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire. c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus dejar secar completamente antes de aplicar la muestra. d) Pureza de los disolventes.

Cromatografa en Columna
a) Cromatografa en columna. Caractersticas y aplicaciones. La cromatografa en capa fna es una tcnica para determinar el nmero de componentes de una mezcla y como una prueba preliminar para realizar una cromatografa en columna, entre otros. El proceso de cromatografa en columna se controla por cromatografa en capa fina, de tal manera que se puede separar cada componente de la mezcla. La cromatografa en columna se usa para separar grandes cantidades de material: >100 mg.

Cromatografa Fernndez Olavarrieta Mara Teresa El proceso de cromatografa consta de una fase mvil (eluyente) y una fase estacionaria (adsorbente), los cuales dependen de las sustancias que se deseen separar b) Cromatografa de adsorcin y de particin o reparto. La cromatografa de adsorcin o Lquido-Slido es la forma clsica de la cromatografa de lquidos. Es adecuada para compuestos no polares probablemente con masas moleculares inferiores a 5 000. Los mtodos de la cromatografa de adsorcin y reparto tienden a ser complementarios, aunque en algunos casos se superponen. En general la cromatografa Lquido-Slido es ms adecuada para muestras que son solubles en disolventes no polares y por ello tienen solubilidad limitada en disoluciones acuosas que son las que se utilizan en cromatografa de reparto en fase inversa. En este tipo de cromatografa tambin se pueden separar compuestos con diferentes grupos funcionales. Una caracterstica particular de este mtodo es su capacidad para diferenciar compuestos ismeros en mezclas. La cromatografa de reparto est formada por la cromatografa Lquido-Lquido y la cromatografa unida qumicamente. Estas tcnicas se diferencian en la forma en que se retiene la fase estacionaria sobre las partculas del soporte relleno. En el segundo caso, como su nombre lo indica, la fase estacionaria se une qumicamente a la superficie del soporte. Esta tcnica actualmente es ms usada debido a que la cromatografa lquidolquido necesita de un recubrimiento peridico de las partculas del soporte debido a la prdida de la fase estacionaria por disolucin en la fase mvil. c) Factores que influyen en una separacin por cromatografa en columna. (En una cromatografa de adsorcin). La cantidad de sustancia adsorbida, a temperatura constante, es tanto mayor cuanto mayor es la presin parcial del adsorbato (en el caso de los gases o vapores) o la concentracin (solutos). Es decir, la adsorcin ser tanto ms fcil, cuanto mayor sea el volumen y el peso de las molculas o iones del adsorbato, y cuanto menor sea la temperatura de trabajo. d) Seleccin de eluyentes y adsorbentes para la separacin de compuestos por cromatografa en columna. Principales eluyentes: Eter de petrleo. Eter dietlico. Ciclohexano. Acetato de etilo. Tetracloruro de carbono. Piridina. Benceno. Etanol. Cloroformo. Metanol. Diclorometano. Agua. cido actico. La eleccin del eluyente depender lgicamente del componente que se va a separar y del material en que la separacin se lleva a cabo. En la eleccin del eluyente influyen varios factores: Precio. Pureza. No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad). No utilizar compuestos muy voltiles. Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores). La eleccin del

Cromatografa Fernndez Olavarrieta Mara Teresa eluyente se realiza de forma emprica. Hay que estudiar la polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares. e) Tcnicas de separacin cromatogrfica por elucin, por adsorcin y por desplazamiento. especificando el estado fsico de las dos fases empleadas. En consecuencia, se usan los siguientes trminos: Cromatografa gas-lquido (GLC) Cromatografa gas-slido (GSC) Cromatografa lquido-lquido (LLC) Cromatografa lquido-slido (LSC) Se puede encontrar tambin en la bibliografa el trmino Cromatografa de Reparto GasLquido (GLPC). Sin embargo, a menudo la distincin entre estos modos no es sencilla. Por ejemplo, en cromatografa de gases se puede usar un lquido para modificar una fase estacionaria slida de tipo adsorbente. Cromatografa por elucin: Procedimiento en el que la fase mvil se pasa de forma continua a travs o a lo largo del lecho cromatogrfico y la muestra se suministra al sistema de forma discreta, como una pequea cantidad en un tiempo breve. Cromatografa y por desplazamiento: Procedimiento en el cual la fase mvil contiene un compuesto (el desplazante) que es retenido ms fuertemente que los componentes de la muestra analizada. La muestra se alimenta al sistema en forma discreta, como una pequea cantidad en un intervalo breve. Cromatografa Frontal: Procedimiento en el que la muestra (lquida o gasesosa) se alimenta de forma continua al lecho cromatogrfico. No se utiliza ninguna fase mvil adicional. La cromatografa de adsorcin o Lquido-Slido es la forma clsica de la cromatografa de lquidos. Bibliografa http://organica1.org/1311/1311_6.pdf