BIORREMEDICIACION INTRODUCCIN: El aumento de la poblacin y el desarrollo industrial sin precedentes alcanzados durante el siglo XX han elevado la presencia de contaminantes

slidos y lquidos convencionales a niveles crticos. La consecuencia ha sido la aparicin de problemas de contaminacin que antes se desconocan y para los cuales la sociedad no estaba preparada. La industria qumica produce gran cantidad de compuestos xenobiticos, cuya estructura qumica difiere considerablemente de los compuestos orgnicos naturales. Algunos de estos compuestos xenobiticos, con grupos halgenos y nitrogenados, utilizados como propelentes, refrigerantes, disolventes, bifenoles poli clorados(PCB),plsticos, detergentes,,explosivos y plaguicidas, son resistentes (recalcitrantes) a la biodegradacin. Otros se degradan muy lentamente, de modo co-metablico slo en presencia de un segundo sustrato, que es empleado como fuente primaria de energa, o dan lugar a residuos ,a veces polimricos, peligrosos para el ambiente. Algunos de los xenobiticos ms recalcitrantes sufren un proceso de biomagnificacin en las redes trficas. Este proceso se inicia con los microrganismos y causa la acumulacin del xenobitico en los niveles trficos superiores, donde provoca graves daos ecolgicos. Aunque los hidrocarburos del petrleo no sean xenobiticos, su uso a gran escala y los vertidos accidentales como el caso del Prestige han provocado daos ambientales graves. Por eso en este trabajo dentro la amplitud del tema nos centraremos en la biorremediacin de hidrocarburos. Adems dado que los compuestos xenobiticos pueden ser considerados hidrocarburos con diversos grupos sustituidos, conviene tener en cuenta las rutas de degradacin de los hidrocarburos alifticos, alicclicos y aromticos. La forma en que algunos grupos de sustituyentes bloquean esas rutas bioqumicas de degradacin explica por qu la estructura molecular de algunos xenobiticos les confieren su carcter recalcitrante.

La compresin cientfica de estos fenmenos complejos y del papel que los microrganismos desempean en ellos es esencial para prevenir o controlar los daos que pueden ocasionar los vertidos o fugas de hidrocarburos y xenbioticos. La degradacin de estos contaminantes es un proceso que se puede dar de forma natural por los microrganismos autctonos de la zona contaminada siempre que tengan las vas metablicas apropiadas. Por eso actualmente para mejorar estas posibilidades que los microrganismos nos pueden ofrecer se estn desarrollando tecnologas basadas en el uso de los microrganismos con amplias capacidades biodegradadoras para su uso en la prevencin y remediacin de la contaminacin.

RESUMEN
En las ltimas dcadas, paralela al desarrollo de la industria petrolera, ha aumentado la contaminacin en los ecosistemas marinos. El vertimiento de petrleo crudo y sus derivados provocan efectos negativos a corto, mediano y largo plazo. La eliminacin natural de los contaminantes puede tardar aos, e incluso no ocurrir. Para acelerar este proceso y garantizar la reparacin del ecosistema daado, se emplean tcnicas de biorremediacin. Esta variante emergente de la biotecnologa ambiental, se basa en el empleo de la actividad metablica microbiana (bacterias, hongos, levaduras, algas y tapetes microbianos) para degradar los hidrocarburos del petrleo. Su aplicacin tiene dos propsitos esenciales: la bioestimulacin de la poblacin autctona viable, y la bioaumentacin (introduccin de poblaciones microbianas viables). Su seleccin requiere el anlisis de factores abiticos y biticos, que influyen en el proceso de biodegradacin. Los primeros incluyen los relacionados con el contaminante y las condiciones medioambientales; y los biticos, lo referente a la poblacin microbiana. En el desarrollo de esta tecnologa, se han formulado varios productos comercializables para la limpieza de desastres: fertilizantes construidos por nutrientes con funciones bioestimuladoras; bioproductos conformados por microorganismos; y productos qumicos con la funcin de aumentar o estimular la poblacin microbiana que interviene en el proceso de biodegradacin.

OBJETIVOS:
Dar a conocer la importancia ecolgica de la biorremediacin, la cual se presenta como una alternativa a los mtodos tradicionales de limpieza de residuos peligrosos persistentes en el medio ambiente. Conocer acerca de las ventajas y desventajas de la biorremediacin. Promover el crecimiento de poblaciones idneas de microorganismos que puedan degradar contaminantes. Determinar los niveles de hidrocarburos totales en suelos contaminados artificialmente a lo largo de la experiencia. Estudiar el comportamiento de la microbiota conformada por bacterias hetertrofas totales a lo largo del tiempo. Determinar la factibilidad del uso del agua residual tratada para estimular los procesos de biodegradacin de hidrocarburos en suelos. Comparar dos tratamientos de Biorremediacin de suelos en los que se utiliza distintos mtodos de estimulacin del proceso.

1. Definicin: La biorremediacin es una tecnologa que utiliza el potencial metablico de los microrganismos (fundamentalmente bacterias, pero tambin hongos y levaduras) para transformar contaminantes orgnicos en compuestos ms simples poco o nada contaminantes. La biorremediacin usa microrganismos como levaduras, hongos y bacterias para resolver problemas causados por compuestos orgnicos e inorgnicos vertidos a los ecosistemas desde fuentes industriales, urbanas o agrcolas. Se basa en la capacidad de los organismos para realizar procesos degradativos en presencia de oxgeno, mediante la respiracin aerbica, o en ausencia de l, mediante la respiracin anaerbica.

2. Aspectos relevantes y factores que influyen en la biorremediacin Para la descripcin de los aspectos ms relevantes de los procesos de biorremediacin se ha optado por sistematizarlos segn se refieran a las sustancias contaminantes (2.1), a los microorganismos que van a desarrollar la remediacin (2.2) o al medio (suelo, agua) en que el proceso se desarrolla (2.3). No obstante, hay un conjunto de aspectos que se refieren a la denominada biodisponibilidad que se refieren a la interaccin de los microorganismos con los contaminantes, interaccin condicionada por factores ambientales. Algunos aspectos de la biodisponibilidad se han incluido en alguno de los tres apartados mencionados, pero finalmente se ha aadido un apartado 2.4 para incluir lo que pareca no encajar del todo en ninguno de los anteriores. 2.1. Relativos a los contaminantes Vamos a considerar tanto los relativos a la constitucin qumica del contaminante, como los relativos a su disponibilidad para los organismos (estado fsico, solubilidad, volatilidad) y los que tienen que ver con su facilidad de transformacin (biodegradabilidad). Constitucin qumica.- No cualquier contaminante puede ser objeto de biorremediacin, aunque s un amplio abanico de tipos. Se han aplicado procedimientos de biorrecuperacin, con distintos grados de xito y rapidez en alcanzarlo a: Hidrocarburos. De diverso tipo: alifticos, aromticos (como BTEX), aromticos policclicos (PAH) y tambin sus mezclas como el petrleo y sus derivados (gasolinas, gasleos, fueles). Es el grupo de compuestos sobre el que ms se ha trabajado en biorremediacin. Organoclorados. Tanto pesticidas de diversos tipos, como disolventes clorados o PCB. Nitroaromticos, como explosivos (TNT y otros). Metales pesados. Otros: organofosforados, fenoles, dioxinas, etc.

Estado fsico.- Para que los microorganismos puedan actuar sobre los contaminantes, estos deben ser accesibles a aquellos (biodisponibilidad) y uno de los factores que primero influye en esa disponibilidad es el estado de agregacin. Los contaminantes pueden encontrarse en fase vapor, lquida y slida. Los gases tienden a escapar a la atmsfera. Los slidos presentan movilidad y superficie de contacto escasas. Desde el punto de vista de la biorremediacin, en ocasiones se considera que estn en fase slida contaminantes asociados a las partculas de suelo, tpicamente adsorbidos sobre su superficie. Son los lquidos los que mayores posibilidades tienen para desplazarse y disolverse en la fase acuosa. Respecto a los lquidos, hay que distinguir lo que est disuelto en agua y las fases no acuosas que forman las sustancias orgnicas no miscibles con el agua (NAPL: Non- Aqueous Phase Liquid), que pueden ser ligeras (LANPL: Light NAPL, como muchos hidrocarburos) o pesadas (DNAPL: dense NAPL, como disolventes clorados).

Solubilidad en agua.- Para estar disponible para los organismos la sustancia ha de ser soluble en agua o, al menos, poderse dispersar en ella (emulsionar) con auxilio de surfactantes. Recordemos que la solubilidad viene condicionada por la estructura molecular de la sustancia: Es menor cuanto mayor son las cadenas hidrocarbonadas de la molcula. Es menor cuanto menos grupo funcional polar (con oxgeno o nitrgeno) tenga la molcula. En el caso de organoclorados, es menor cuanto mayor sea el grado de sustitucin de hidrgenos por cloros. En el caso de PAH, es menor cuanto mayor sea el nmero de anillos aromticos. Es mayor para aromticos que para alifticos de anlogo peso molecular.

Muchas sustancias orgnicas son hidrfobas por su carcter apolar y as ocurre con muchos contaminantes: hidrocarburos, pesticidas, disolventes, PCBs... Estas sustancias, adems de ser relativamente poco solubles en agua, tienen una mayor afinidad por los medios apolares, como es la materia orgnica del suelo (MOS), por lo que suelen adsorberse o absorberse sobre dicha fraccin orgnica. Muchas veces se emplea el trmino sorcin para referirse a esta asociacin con la materia orgnica edfica, dado que en muchos casos se comprueba que no slo hay una unin superficial sino que la sustancia contaminante se mezcla con la MOS, pudiendo describirse matemticamente mejor con un modelo de disolucin que con uno de adsorcin. Para modelizar el grado de hidrofobicidad de una sustancia suele emplearse el coeficiente de reparto octanol-agua (KOW)2 y a partir de este se deducen otros parmetros relativos a la solubilidad en agua y a la distribucin entre la fase acuosa y la MOS.

Volatilidad.- La presin de vapor de muchas sustancias orgnicas es apreciable, sobre todo las de bajo peso molecular. Por ello, en la evolucin natural de una mezcla de contaminantes orgnicos interviene la prdida por volatilizacin de las fracciones ms ligeras. Tambin la volatilidad viene dada por la estructura molecular, siendo mayor para molculas de bajo PM y para aquellas que presentan menos grupos funcionales polares, y que aumenta notablemente con la temperatura. Tambin hay que recordar que los lquidos confinados en pequeos recintos, como los poros del suelo, presentan una presin de vapor menor que el lquido libre. Efectivamente, en un capilar, como los mencionados poros, la superficie del lquido forma un menisco por efecto de la tensin superficial, que conlleva una diferencia de presiones a ambos lados de la superficie, lo que se traduce en un descenso de presin de vapor.

Biodegradabilidad.- Aunque, como veremos, la biodegradacin ser ms o menos fcil y rpida segn qu microorganismos se hallen presentes y de una serie de factores (temperatura, pH, concentracin de nutrientes, etc.) y, por tanto, la biodegradabilidad no slo depende de la sustancia, s que algunas caractersticas de composicin y estructura molecular facilitan un mayor grado de degradabilidad. En principio, sern ms biodegradables las sustancias con molculas que: Sean de menor peso molecular (o tamao de molcula) Tengan cadenas poco ramificadas (las ramificaciones ocasionan impedimentos estricos) Sean poco insaturadas (pocos enlaces mltiples) Incluyan pocos anillos aromticos. A pesar de lo mencionado en relacin con el peso molecular, se comprueba que los hidrocarburos de menos de 9-10 C son poco degradables, en parte por su mayor volatilidad que les hace escapar del medio, en parte por resultar txicos para bastantes microorganismos. El nmero ptimo de tomos de C para la biodegradacin se puede considerar que est entre 10 y 20. Adems, favorecen la biodegradabilidad grupos funcionales como: alcohol, amino, carbonilo o carboxilo, mientras que disminuyen la biodegradabilidad grupos funcionales como: halgenos, cido sulfnico (que aporta mayor resistencia que los halgenos), ter, nitro o nitrilo, as como los C cuaternarios y los N trisustituidos. La degradacin de compuestos con N o S habitualmente est ligada a su utilizacin como fuente de dichos nutrientes. La experiencia muestra que, aunque es frecuente hablar de sustancias persistentes, refractarias o recalcitrantes, la gran mayora de las sustancias orgnicas pueden ser biodegradadas por algunos microorganismos, en condiciones adecuadas y plazos de tiempo suficientes. Polmeros de larga cadena que no pueden entrar en la clula slo se degradarn si existen enzimas exocelulares apropiados. Polietileno o cloruro de polivinilo son ejemplos en los que no existen esos enzimas y son compuestos tpicamente no degradables.

La experiencia indica que la degradacin en condiciones naturales difiere notablemente de la que se produce en laboratorio en condiciones optimizadas y controladas. Esto ha ocasionado fracasos en prctica de la biorremediacin. Existen demasiados factores ambientales con influencia sobre el grado de degradabilidad como para asegurar que sea posible pronosticar con detalle el nivel de eficacia del proceso de biodegradacin. Hay que recordar, adems, que los suelos son medios de gran heterogeneidad, de forma que las condiciones ambientales pueden variar en muy pequeas distancias. Dicho todo esto, hay que recomendar vivamente la realizacin de ensayos de tratabilidad previos a la implementacin de una tcnica de biorremediacin, sobre todo con suelos, ambientes y/o contaminaciones que tengan alguna particularidad. Lo que es importante es que los ensayos de tratabilidad se extiendan a escala piloto, en las condiciones lo ms similares a las que se aplicaran en el tratamiento. Eso permite detectar influencias no contempladas a escala de laboratorio: efecto de las oscilaciones trmicas (diurnas y estacionales), de los vientos, de la insolacin, posibles excesos de humectacin por las precipitaciones, estrs hdrico, etc.

Concentracin de contaminantes.- Es habitual que la tasa de biodegradacin sea condicionada por la concentracin de contaminante en el medio. En unos casos, la elevada concentracin de contaminante genera efectos txicos o de inhibicin; p. ej. se suele considerar que en el caso de hidrocarburos una concentracin en suelo por encima del 10-15% disminuir la actividad biolgica. En otros casos, existe un lmite inferior de concentracin por debajo del que no se produce la biodegradacin de forma apreciable; parece ser que a bajas concentraciones no se activa la expresin de los enzimas necesarios para la degradacin, ya que no le resultar rentable energticamente a la clula, frente a otras fuentes alternativas de energa y/o C. De la concentracin de contaminante tambin depende su velocidad de degradacin. Las sustancias solubles en agua tienen, generalmente, cinticas de degradacin tipo Michaelis-Menten, con lo que la velocidad de degradacin

resulta proporcional a su concentracin para rango de concentraciones bajas (cuando se puede aproximar a una cintica de primer orden). De todas formas, la aproximacin a primer orden es slo una de las posibles y hay que ser cuidadosos a la hora de modelizar el consumo de contaminante por los microorganismos y elegir una ecuacin que se adapte a las condiciones del caso y no la ms habitual o la ms sencilla.

3. Estrategias de biorrecuperacin Los procesos que tienen lugar durante la biorremediacin ocurren naturalmente sin que intervencin tecnolgica alguna: es lo que se denomina biorremediacin pasiva, intrnseca o atenuacin natural. Pero cuando se aborda un proyecto de biorrecuperacin interesa alcanzar los objetivos de limpieza (ms o menos exigentes) en plazos lo ms breves que sea posible. Para ello se interviene aplicando soluciones tecnolgicas diversas para activar el proceso: biorremediacin activa. En lo que sigue, se desarrolla la biorremediacin activa en dos grandes estrategias, no excluyentes, sino ms bien complementarias: bioaumento y bioestimulacin.

3.1. Atenuacin natural Todos los ecosistemas presentan un cierto grado de resiliencia: la capacidad para retornar a las condiciones previas a una perturbacin. Es decir, es la capacidad de los ecosistemas de absorber perturbaciones sin alterar significativamente sus caractersticas de estructura y funcionalidad, es decir, pudiendo regresar a un estado similar al original una vez que la perturbacin ha terminado. Los suelos, como ecosistemas, tambin presentan, en mayor o menor grado, esta capacidad y ante la perturbacin que supone una contaminacin reaccionan en el sentido de recuperar un estado parecido al original. Esta reaccin espontnea implica una variedad de procesos naturales, fsicos,

qumicos y biolgicos, que bajo condiciones favorables y actuando sin intervencin humana, van eliminando y/o transformando los contaminantes. Estos procesos incluyen dispersin, dilucin, sorcin, volatilizacin y la destruccin, estabilizacin o transformacin qumica o biolgica de contaminantes. Con ello se consigue reducir la masa, la toxicidad, la movilidad, el volumen y/o la concentracin de los contaminantes en el suelo o el agua subterrnea. De hecho, se ha venido confiando en esta capacidad, directa o indirectamente, al utilizar tecnologas de confinamiento o aislamiento: por un lado impiden la migracin de los contaminantes y por otro dejan tiempo a que estos procesos puedan ir actuando. Tras la contaminacin, la naturaleza puede trabajar a travs de cuatro vas principales en el proceso de recuperacin: Las sustancias contaminantes pueden adherirse o sorberse sobre la matriz slida del suelo. Esto no limpia, pero puede impedir que los contaminantes alcancen el agua subterrnea. Algunos contaminantes pueden evaporarse. Estos gases se escapan al aire dejando el suelo. Al alcanzar la superficie, la luz del sol puede provocar su foto degradacin. Segn la contaminacin se mueve a travs de suelo y del agua subterrnea, puede mezclarse con sta, lo que reduce la contaminacin por dilucin. Los organismos utilizan algunas sustancias qumicas contaminantes como alimento, lo que las transforma en materiales inocuos, en general.

Esta evolucin natural y espontnea del suelo (y agua subterrnea) se denomina de varias formas: biorremediacin pasiva, intrnseca o natural, reduccin natural o atenuacin natural.

La atenuacin natural ocurre en la mayora de sitios contaminados y con la mayora de los contaminantes. No obstante, deben existir condiciones apropiadas para que los sitios se vayan depurando. Si no se dan dichas condiciones, esta auto limpieza no avanzar a suficiente velocidad ni alcanzar unos niveles de concentracin que supongan riesgo aceptable. Este proceso se incluye dentro de los de biorremediacin porque la principal contribucin a la recuperacin es la degradacin por la actividad de los microrganismos autctonos, en general, por el concurso de poblaciones microbianas mixtas, que operan bajo complejas regulaciones simbiticas. La velocidad de la transformacin de molculas complejas en sencillas est en funcin de la masa microbiana activa. Ya se ha mencionado varias veces en este apartado la velocidad o el factor tiempo. Esta es la principal limitacin: los procesos de atenuacin natural son excesivamente lentos para lo que la mayora de ocasiones interesa. Hablamos de aos y, ms bien, decenios. Slo en los casos en que el terreno no va a tener uso y por su ubicacin u otras circunstancias puede restringirse el acceso de personas (lo cual evita todo riesgo para la salud humana), se puede emplear la atenuacin natural como nica alternativa de recuperacin. Es ms frecuente, utilizar la atenuacin natural como una segunda etapa de recuperacin, tras una primera fase en la que se aplica alguna otra tecnologa y se elimina con ella la mayor parte de la contaminacin. En general, funciona mejor en los casos en que es posible eliminar la fuente de contaminacin (p. ej., residuos enterrados que pueden desenterrarse) y, por tanto, dejan de incorporarse contaminantes al terreno.

No obstante lo dicho, es posible que la atenuacin natural que d los mismos resultados y con casi la misma rapidez que otros mtodos, al menos, que otros mtodos de biorremediacin. Cuando pueda esperarse que la atenuacin natural consiga los objetivos de recuperacin en un tiempo razonable comparado con el de otros mtodos ms activos, podr ser considerada una alternativa aceptable. Si las condiciones resultan ser ptimas para la accin de

los microorganismos, esta estrategia sera la ms apropiada, y no habra necesidad de acudir a ninguna de las estrategias mejoradas que veremos a continuacin. Los procesos involucrados en la atenuacin natural operan siempre en todos los suelos contaminados, aunque se aplique otro tipo de tecnologas de tratamiento, pero su contribucin a la consecucin de los objetivos de remediacin vara en las diferentes situaciones. Mientras que en algunos casos la atenuacin natural podra satisfacer del todo los objetivos de recuperacin, en otros casos su contribucin ser escasa o nula. Por tanto, antes de escoger una alternativa de recuperacin, es necesario evaluar cuidadosamente el emplazamiento contaminado para determinar qu grado de atenuacin natural es esperable. En ocasiones se emplea la terminologa de la EPA que la denomina atenuacin natural monitorizada (MNA) 10 o supervisada. El trmino monitorizada pone nfasis en la necesidad de control o supervisin por parte de los tcnicos responsables para verificar peridicamente que la atenuacin natural est funcionando. Como ventajas cabe citar que no es necesario excavar ni construir (slo lo necesario para el aislamiento adecuado de la zona y la eliminacin de la fuente, cuando es posible), no genera residuos que haya que eliminar a continuacin como otros mtodos, disminuye mucho el contacto de los trabajadores con la contaminacin, afecta menos a la poblacin y al medio ambiente, requiere menos equipamiento y trabajo que la mayora de los otros mtodos y, por tanto, resulta ms econmica. Es evidente que la supervisin y control durante aos tiene un coste, pero en conjunto sigue siendo menor que el de otros mtodos. No obstante, estas ventajas pueden ser compartidas con las estrategias de biorremediacin mejorada que vamos a comentar y el incremento de coste que pueda suponer la aportacin de nutrientes, oxgeno y otros acondicionadores puede ser compensado con creces por la disminucin de plazos para alcanzar

los objetivos de la remediacin, y el consiguiente ahorro de aos de control del emplazamiento. 3.2. Bioaumento:

El bioaumento (o bioaumentacin11) consiste en la adicin al medio (suelo, agua) al objeto de optimizar la biodegradacin de microorganismos alctonos vivos especializados, cuya eficiencia en la degradacin del contaminante est probada. Se incrementa la poblacin nativa de microorganismos del sistema incorporando un inculo de otros adaptados selectivamente, desarrollados para que tengan la capacidad para degradar los contaminantes en cuestin, compuestos previamente considerados como no o difcilmente biodegradables. Estos microorganismos pueden ser naturales o modificados genticamente, aunque esta ltima opcin no est libre de crtica y controversia. La inoculacin adicional de cultivos especficos pretende colaborar con la actual biomasa o restituirla en casos de mortandad. El bioaumento no sustituye la poblacin de organismos existentes, pero incrementa su habilidad de degradar compuestos o responder en ciertas situaciones, dando como resultado una mejora del tratamiento. Recordemos lo ya mencionado sobre la relativa facilidad de transferencia de plsmidos, incluso entre especies diferentes. Esta tecnologa se utiliza cuando la microflora autctona es insuficiente en nmero o capacidad degradadora o cuando se requiere el tratamiento inmediato de un sitio contaminado sin tiempo para esperar a que la poblacin autctona desarrolle una capacidad apropiada para degradar la contaminacin. La bioaumentacin modifica es el tiempo de aclimatacin, es decir, el que tardan los microorganismos nativos a adaptarse al contaminante, que se reduce, haciendo que la biodegradacin comience antes y se evite el riesgo txico hacia plantas, animales y humanos. El tamao del inculo a utilizar depende de la extensin de la zona a recuperar, de la dispersin de los contaminantes y de la velocidad de crecimiento de los microorganismos degradadores.

Hay que reconocer que es un enfoque discutido. Por un lado, hay que recordar que la introduccin de microorganismos (bacterias y hongos) especficos es una prctica agrcola que se realiza desde hace dcadas con propsitos diversos: suministrar nutrientes, estimular el crecimiento de los vegetales, p. ej., mediante la produccin de hormonas vegetales, controlar patgenos, mejorar la estructura del suelo, etc. Adems, las caractersticas de los inculos anunciadas por quienes los comercializan, parecen impresionantes: Mezclas microbianas concentradas (200 millones/g) de ms de 50 especies, aclimatadas especficamente de microbios de los que se encuentran naturalmente, no patgenos de rpida multiplicacin: espontneamente en minutos al ponerlos en condiciones adecuadas efectivos en amplios rangos de temperatura (50-100F) y de pH (4-10) capaces de degradar un amplio nmero de contaminantes dejando como subproductos nicamente CO2, agua y trazas de sales. Sin embargo, hay investigadores como Lee y Merlin (1999)12 o Van Hamme et al. (2003)13 que concluyen que varias investigaciones, de laboratorio y de campo, han indicado que la adicin de cultivos microbianos comerciales no aumenta significativamente las velocidades de degradacin de petrleo respecto a lo que se consigue por enriquecimiento con nutrientes de la poblacin microbiana natural (bioestimulacin). Parece existir un cierto acuerdo en que esta estrategia tiene mayor aplicabilidad en procesos ex situ. Hay varias razones que avalan la dificultad de aplicarla in situ: La dificultad o imposibilidad de incrementar la poblacin microbiana con capacidad de degradar mediante inculo externo cuando sta ya ha crecido en respuesta a la contaminacin. La mayor adaptacin de la poblacin autctona a las condiciones ambientales que la lleva a competir con ventaja con la poblacin inoculada.

 La existencia de depredadores, parsitos y competidores con respuestas txicas o de inhibicin frente a la poblacin extraa. Con frecuencia se indica que los inculos microbianos funcionan mejor si se trata de organismos obtenidos en el ambiente en el que se van a aplicar. Para incrementar la eficiencia in situ del bioaumento se propone caracterizar fisicoqumica y biolgicamente el emplazamiento de forma completa, al objeto de poder desarrollar un inculo con las mayores garantas de xito. Es decir, que los inculos no se han de desarrollar con vocacin universal. Se propone tambin una aclimatacin al medio previa a la inoculacin. Hace falta estudiar mejor qu densidad de microorganismos inoculados es conveniente. Una alternativa en estudio es la incorporacin de los organismos encapsulados en algn soporte fsico que los proteja de actividades microbianas hostiles. El diseo mediante ingeniera gentica de microorganismos es, en opinin de algunos, una alternativa de futuro al permitir la incorporacin al medio de capacidades de degradacin superiores a las que pueden desarrollar los microorganismos naturalmente. La primera patente de un organismo modificado por ingeniera gentica que se reconoci en el mundo14 era de una bacteria utilizable para biorremediacin. Es decir, esta posibilidad se contempla desde el nacimiento mismo de la ingeniera gentica. No obstante, parece recomendable restringir el uso de estos organismos modificados a aplicaciones ex situ por los riesgos asociados a su desarrollo y proliferacin no controlados, con la posibilidad de transferir genes modificados a los organismos autctonos y alterar el pool gentico de la comunidad. Aplicaciones. Se ha usado bioaumento para tratar suelos contaminados con herbicidas (2,4-D, clorofam), insecticidas (lindano, clordano, paratin), clorofenoles (PCP) y nitrofenoles, PCBs, petrleo y derivados y HAPs. Tambin se ha aplicado efectivamente para tratar desechos con concentraciones relativamente altas de metales. Limitaciones. Antes de llevar a cabo la bioaumentacin en un sitio, deben realizarse cultivos de enriquecimiento, aislar microorganismos capaces de

cometabolizar o utilizar el contaminante como fuente de carbono, y cultivarlos hasta obtener grandes cantidades de biomasa (Alexander, 1994)

3.3. Bioestimulacin La bioestimulacin responde a la idea de aplicar biorremediacin, pero creando condiciones. Es decir, intentar que se alcancen las condiciones para que la biodegradacin transcurra de forma idnea. Se denomina tambin biorremediacin mejorada (enhanced bioremediation) o acelerada. La bioestimulacin consiste en estimular a los microorganismos autctonos de un ambiente natural por medio de la adicin de nutrientes y otros aditivos, de humedad y la aireacin del sistema para as mejorar la eliminacin del los contaminantes. A veces se aade a esta definicin la idea de que estos parmetros se deben, adems, controlar para ir regulando su adicin. Es de destacar que esta estrategia de descontaminacin utiliza los agentes biolgicos propios del suelo, en la idea de que los microorganismos indgenas, una vez adaptados y aclimatados, desarrollarn la capacidad de degradar los contaminantes, acelerando el proceso mediante los aportes mencionados. Vamos a repasar los principales aportes que se emplean en bioestimulacin: Oxgeno. Se puede proporcionar inyectando aire al suelo de forma directa, o como perxido de hidrgeno (lquido) o perxido de manganeso (slido) que lo proporcionan al descomponerse en el suelo. La ventaja del perxido de hidrgeno es que puede incorporarse a las disoluciones nutritivas en los casos en que se usan (de forma continua o discontinua). Se puede aplicar en pozos, tuberas o difusores. En los procesos ex situ, se puede proceder adems con aradas, volteos, etc., segn la tcnica de biorremediacin empleada. Humedad. -Ya se han comentado las necesidades de humedad. El aporte de agua se puede hacer mediante diversos sistemas de riego, de forma continua o discontinua, y siempre mejor si se va controlando el nivel de humedad.

Nutrientes.- Se pueden aportar de distintas formas: productos naturales con contenidos apropiados de nutrientes, residuos orgnicos, fertilizantes en grnulos o briquetas, abonos de liberacin lenta, fertirrigacin, etc. En algunos casos se han empleado fertilizantes especficamente diseados para la biorremediacin. Es conocido el Inipol EAP22, empleado en la biorremediacin del petrleo vertido del Exxon Valdez en Alaska: se trata de un fertilizante oleoflico con capacidad de adherirse a la interfase hidrocarburo-agua e incluye, adems de los nutrientes, un surfactante. Se han desarrollado otros mejorados, con mayor poder emulsionante y menor toxicidad del surfactante, que son de utilidad en los casos de contaminaciones costeras y similares, en que no son de aplicacin fertilizantes solubles o de liberacin lenta. Adems, tambin biorremediacin: puede incorporarse al suelo para estimular la

Otros aceptores de electrones diferentes al O2, cidos o bases para ajuste del pH, Los ya citados surfactantes, Cometabolitos para activar ciertos enzimas, etc.

Limitaciones. Esta tecnologa no es recomendable para suelos arcillosos, altamente estratificados o demasiado heterogneos, ya que pueden provocar limitaciones en la transferencia de O2. Otros factores que pueden limitar su aplicacin seran: que el tipo del suelo no favorezca el crecimiento microbiano, que se produzca incremento en la movilidad de los contaminantes, o que se puedan obstruir los pozos de inyeccin a causa del crecimiento microbiano. 4. APLICACIONES:

CONCLUSIONES:
La biorremediacin como tecnologa tiene un gran potencial en la recuperacin de sitios contaminados y adems es menos costoso que otras alternativas de restauracin. Se debe persistir en el descubrimiento, en la investigacin y estudio de nuevos microorganismos los cuales pueden ser potencialmente tiles en la biorremediacin. El estudio previo de parmetros de degradacin en el laboratorio sobre muestras y condiciones anlogas a las del medio natural (microcosmos), constituye una fuente de informacin muy valiosa para la aplicacin en la biorremediacin.

 Es importante que las personas dedicadas a las Ciencias Biolgicas sepan de la importancia de la biorremediacin en el medio ambiente. La biorremediacin es una prctica que est tomando importancia a nivel mundial. El empleo de microorganismos para el tratamiento de desechos txicos ya es una prctica habitual en pases desarrollados.

BIBLIOGRAFA
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