BIOTECNOLOGA PARA EL MEJORAMIENTO GENTICO DEL GANADO: SITUACIN ACTUAL Y PERSPECTIVAS

M. Georges Departamento de Gentica, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad de Lieja 20 Bd de Colonster, B-4000-Lieja, Blgica

Original: Ingls

Resumen: La biotecnologa es un elemento cada vez ms importante del arsenal de instrumentos que se pueden utilizar para mejorar la produccin animal a fin de atender las demandas del consumidor dentro de las limitaciones econmicas, ambientales y ticas impuestas por la sociedad. La biotecnologa contribuye a la produccin animal mejorando los componentes ambientales de los sistemas de produccin as como la composicin gentica del ganado. Tras una presentacin general de la biotecnologa y la produccin animal, este texto se centra en tres campos de la biotecnologa que contribuyen al mejoramiento gentico de los animales, esto es, la biotecnologa de la reproduccin, la modificacin del genoma y la seleccin mediante marcadores, y la transgnesis. Una encuesta basada en un cuestionario enviado a los Pases Miembros de la OIE nos permiti resumir brevemente las actividades en curso en esta esfera. El cuestionario tambin tena por objeto definir los principales desafos a los que debern responder los criadores que se proponen incorporar mtodos basados en la biotecnologa. Entre los principales problemas que plantear su aplicacin futura figuran la desconfianza del pblico, la falta de recursos financieros para el desarrollo tecnolgico en los pases en desarrollo y las dudas sobre su rentabilidad. 1. INTRODUCCIN Hace mucho tiempo que la biotecnologa forma parte de la cultura humana. La domesticacin de las especies vegetales y animales y los procesos de seleccin artificial que trae aparejados suponen una manipulacin de los genes, an involuntaria. La fabricacin de cerveza, quesos y pan, que se basa en el dominio de la fermentacin utilizando una variedad de microorganismos, es tan antigua como la historia de la humanidad. Con el advenimiento del ADN1 recombinante, empero, el poder de la biotecnologa se ha incrementado de modo espectacular, y ha estimulado la imaginacin de los cientficos y los legos por igual. Las aplicaciones de la biotecnologa estn prosperando sobre todo en los mbitos de la salud humana y la agricultura. No obstante, en los foros cientficos y pblicos han cobrado una importancia creciente las preocupaciones vinculadas a los posibles riesgos y a la tica, que han dado lugar a veces a moratorias decretadas por la propia comunidad cientfica o impuestas por el poder legislativo. 2. BIOTECNOLOGA Y PRODUCCIN ANIMAL El desafo que se plantea para la produccin animal consiste en proporcionar a la sociedad productos alimenticios que satisfagan sus cambiantes necesidades de nutricin, dentro de lmites econmicos y ambientales especficos. Sobre la base del principio fundamental F = G + A (es decir que el fenotipo de un animal refleja su aptitud gentica intrnseca o genotipo tal como se expresa en un medio ambiente determinado), los criadores de animales han adoptado un enfoque doble para mejorar la calidad de su produccin. Por un lado, han aprendido a dominar los componentes ambientales perfeccionando las prcticas de cra y alimentacin de los animales, la profilaxis y el tratamiento de las enfermedades. Por el otro, la seleccin artificial ha permitido obtener continuas mejoras de la composicin gentica de las especies domsticas. La aplicacin de complejos mtodos biomtricos en los programas de reproduccin ha generado progresos genticos espectaculares durante la segunda mitad de este siglo.

cido desoxirribonucleico - 21 -

La biotecnologa se ha integrado al arsenal de herramientas destinadas a mejorar los componentes ambientales (A) y naturales (G) de la ecuacin. Las aplicaciones de la biotecnologa destinadas a mejorar los componentes ambientales, recientemente analizadas por Robinson y McEvoy (1993), incluyen: - las manipulaciones genticas de las especies de forraje, para acrecentar su productividad o su valor nutritivo, - las manipulaciones genticas de microorganismos a fin de producir aditivos alimenticios, - las manipulaciones genticas de la microflora intestinal, - la produccin de compuestos teraputicos o profilcticos - comprendidas las vacunas - a partir de microorganismos genticamente modificados, - la produccin de hormonas o anlogos hormonales a partir de microorganismos genticamente tratados, - la inmunorregulacin de los procesos fisiolgicos, - el mejoramiento de los mtodos de diagnstico basados en el ADN. El presente informe se propone centrarse en las actividades actuales de aplicacin de la biotecnologa moderna a los componentes genticos de la ecuacin, con el fin de mejorar con mayor eficacia la composicin gentica de las especies domsticas. 3. BIOTECNOLOGA PARA EL MEJORAMIENTO GENTICO DEL GANADO 3.1. Presentacin general Las tcnicas de reproduccin recurren a la seleccin de los animales genticamente superiores como progenitores de las generaciones subsiguientes. Por consiguiente, en este nivel la seleccin artificial slo se podra aplicar a rasgos que revelan una variacin gentica "natural" en las poblaciones seleccionadas, esto es, rasgos caracterizados por algn grado de heredabilidad. El ndice de progreso gentico o de respuesta a la seleccin depende de: - la exactitud de la seleccin, esto es, la precisin en la identificacin de los animales genticamente superiores; - el intervalo entre generaciones: cuanto ms breve es el intervalo, ms rpidos son los progresos genticos; - la intensidad de la seleccin, es decir que cuanto ms se aparten los futuros animales reproductores del valor medio de sus contemporneos, mayor ser el mejoramiento gentico. La biotecnologa se est aplicando para acelerar los progresos genticos sobre la base de los cuatro factores siguientes: aumentar la variacin gentica (o el sustrato molecular de los programas de reproduccin), aumentar la exactitud de la seleccin, reducir el intervalo entre generaciones e incrementar la intensidad de la seleccin. Se pueden distinguir tres campos fundamentales en la biotecnologa aplicada al mejoramiento gentico del ganado: - las tcnicas de reproduccin, - la manipulacin del genoma y la seleccin mediante marcadores (SMM), y - la transgnesis aplicada a los animales de cra. En el siguiente cuadro se sintetizan las repercusiones posibles de estos tres campos de investigacin sobre los cuatro componentes que determinan el ndice de progreso gentico. Cuadro 1 Variacin gentica Reproduccin Modificacin del genoma y SMM Transgnesis 3.2. + + ++ Exactitud de la seleccin ++ + Intervalo entre generaciones ++ + Intensidad de la seleccin + ++

Biotecnologa de la reproduccin

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Se han elaborado o estn en estudio una serie de mtodos destinados a aumentar el potencial reproductivo del ganado (2, 8, 9, 10), entre ellos los siguientes: Inseminacin artificial (IA): Sobre todo desde la elaboracin de mtodos eficaces de congelacin del semen la IA ha pasado a ser la biotecnologa ms difundida en la produccin animal, en particular de bovinos. Al permitir la utilizacin en gran escala de un pequeo nmero de reproductores de lite, la IA ha tenido repercusiones espectaculares en la intensidad de la seleccin. Adems, ha facilitado la ejecucin del programa de evaluacin de la descendencia aplicado principalmente a las razas bovinas lecheras, y ha contribuido notablemente al mejoramiento del ganado al aumentar la exactitud de la seleccin pese a la prolongacin conexa del intervalo entre generaciones. Ovulacin mltiple y transferencia de embriones (OMTE): Al multiplicar la descendencia, sobre todo en especies que presentan pocas variaciones, la OMTE ofrece posibilidades para acentuar el mejoramiento gentico aumentando la intensidad de la seleccin de las hembras. En el ganado bovino, empero - la especie en la que ms difundida est esta tecnologa - el principal efecto de la OMTE podra deberse a la reduccin del intervalo entre generaciones, en comparacin con el programa clsico de evaluacin de la descendencia, si los reproductores se seleccionan sobre la base de los resultados de sus dobles hermanas producidas por OMTE antes que en los resultados de su descendencia hembra: es el llamado esquema de los ncleos de seleccin de la OMTE. Pese a las dificultades tcnicas que plantea, la OMTE podra llegar a desempear un papel importante en los pases en desarrollo, donde sera difcil poner en prctica la aplicacin en gran escala de un programa de evaluacin de la descendencia basado en la inseminacin artificial. Recoleccin de oocitos (RO), maduracin de oocitos in vitro (MIV), fecundacin in vitro (FIV): El nmero de embriones que se pueden obtener por ao de una vaca utilizando la OMTE se limita en promedio a unos 20 o menos, mientras que la combinacin de RO con MIV y FIV permite multiplicar ese nmero al menos por 5. Es ms, la recoleccin de embriones se puede aplicar a vacas preadas tanto como a animales prepuberales. El efecto de estas metodologas sobre la respuesta gentica se produce por las mismas vas que la OMTE, es decir, un aumento de la intensidad de la seleccin de las hembras y una mayor exactitud de la seleccin tanto de machos como de hembras. Transferencia de ncleos o clonacin de embriones: La transferencia de ncleos totipotentes a oocitos enucleados permite tericamente producir grandes nmeros de gemelos idnticos o "clonos". Los principios que rigen la clonacin de embriones se resumen en la Figura 1. Esta metodologa abre la posibilidad de afectar la respuesta gntica de muy distintas maneras, entre ellas la intensidad y la exactitud de la seleccin y el intervalo entre generaciones. Inicialmente, la fuente de ncleos totipotentes eran las blastmeras. Pese a la posible utilizacin de blastocitos de la primera generacin y de generaciones ulteriores como donadores de ncleos, la dimensin de los clonos ha seguido siendo muy pequea. La reciente generacin de clulas madres embrionarias totipotentes (de tipo ES) en ovinos, a la que seguirn probablemente adelantos similares en otras especies, podra acrecentar considerablemente la eficiencia de la clonacin de embriones (3). Seleccin del sexo: Recientes adelantos en la clasificacin por citometra de flujo permiten ahora separar eficazmente los espermatozoides viables portadores de un cromosoma X o Y. Aunque las cantidades de clulas recuperadas son incompatibles con las prcticas tradicionales de inseminacin artificial, son suficientes cuando se combinan con tcnicas de FIV. Este podra llegar a ser el mtodo predilecto para generar embriones del sexo deseado. La seleccin del sexo de los embriones tambin se puede lograr por microbiopsia y determinacin del sexo utilizando secuencias Y especficas amplificadas mediante la tcnica de reaccin de polimerizacin en cadena (PCR). Este mtodo, empero, slo se justifica muy excepcionalmente desde el punto de vista econmico. Criopreservacin de gametos y embriones: La mayora de los mtodos conocidos slo son eficaces si se los utiliza en combinacin con mtodos de congelacin de gametos y embriones. Adems, la criopreservacin desempea un papel esencial en los programas de conservacin destinados a preservar la diversidad gentica.

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Figura 1

EMBRIN DONANTE

OOCITO RECEPTOR

AISLAMIENTO DEL BLASTMERO

ENUCLEACIN

ELECTROFUSIN

CLONAJE EMBRIONARIO
CLONAJE MULTIGENERACIONAL

3.3.

Estudio del genoma y seleccin mediante marcadores (SMM) Los adelantos de la gentica molecular, impulsados por la Iniciativa del Genoma Humano, permiten ahora desarrollar cantidades ilimitadas de marcadores genticos, el instrumento fundamental del especialista en gentica. Estos marcadores se pueden utilizar para localizar genes determinantes de rasgos fenotpicos en los mapas genmicos correspondientes aplicando estrategias de enlace gentico. Este enfoque cartogrfico es el primer paso en el proceso denominado clonacin posicional que culmina con la identificacin del gen causante y la mutacin (5). Por primera vez, estos mtodos permiten descomponer los rasgos de produccin en sus componentes o genes mendelianos individuales. El Cuadro 2 presenta la lista los caracteres monognicos correspondientes a un solo gene que se han podido localizar en los animales de renta mediante el uso de esta tcnica. Para los caracteres polignicos, a los que pertenece la mayora de los rasgos de produccin, estos genes se denominan loci cuantitativos o Quantitative Trait Loci (QTL). Experimentos recientes en los que se estudiaban las caractersticas del crecimiento y de las canales porcinas, as como la produccin de leche en los bovinos, han demostrado de manera convincente la factibilidad de este enfoque basado en la cartografa de los QTL en los animales de cra (1, 6).

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Cuadro 2 Especie Locus Rasgos Posici n 6 8 Gene Referencias

Cerdo

MH I

hipertermia maligna color dominante de cerda blanco

CRC KIT

Fuji et al., 1991 Johansson et al., 1992 Johansson Moller et al., 1996 Mariani et al., 1996 Milan et al., 1995 & 1996; Mariani et al., 1996 Gurin et al., 1993 Edfors-Lilja et al., 1995 Voegeli et al., 1994 Tammen, I. & Harlizius, B., personal communication Georges et al., 1993a Georges et al., 1993b Charlier et al., 1996a Charlier et al., 1995 Klungland et al., 1995 Charlier et al., 1996b Montgomery et al., 1994 Cockett et al., 1994 & 1996 Vaiman et al., 1996 Johansson et al., 1994; Marklund, L., Johansson Moller, M.; Sandberg, K. & Andersson, L., personal communication Ruyter-Spira, C.P.; van der Poel, J.J.; Groenen, M.A.A., personal communication Huang et al., 1993; Duriez et al, 1993

E Rn

locus del color de cerda Extensin contenido de msculo en glicogno receptor intestinal para las fimbrias de E. Coli K88ab,ac receptor intestinal para las fimbrias de E. Coli F107 sndrome Campus de temblor

6 15

? ?

ECK88a b,acR ECF 107 R CPS

13

Bovino

PDME Polled Ruano MH E Sy

ataxia espinocerebelosa presencia/ausencia de cuernos locus de color de pelo ruano musculacin doble locus del color de cerda Extensin sindctilo gene de fecundidad Boroola hipertrofia muscular calpiga presencia/ausencia de cuernos locus del color de cerda Extensin

4 1 5 2 18 15 6 18 1 LGII

? ? ? ? MC1R ? ? ? ? MC1R

Ovino

FecB CLPG

Caprino Caballo

Polled E

Gallina

DW

blanco dominante

LG22

SLD

enanismo relacionado con el sexo

GHR

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Comprender la biologa molecular de los rasgos de produccin es importante por diversas razones. Se considera que la identificacin de los QTL permitir poner en prctica nuevos programas de seleccin "mediante marcadores" (10). Se confa en que la SMM aumentar la respuesta gentica al afectar a los cuatro factores pertinentes. La cartografa de los genes que explica las diferencias raciales en lo referente a caractersticas de importancia econmica facilitar su introgresin en otras poblaciones gracias a cruzamientos retrgrados mediante marcadores, lo que acrecentar la variacin gentica utilizable como sustrato de los programas de seleccin. El ejemplo ms conocido tal vez sea la bsqueda de los genes que causan hiperprolificidad en la descendencia de razas porcinas chinas. La informacin cartogrfica sobre los QTL aadida a los datos sobre los resultados de los animales evaluados y los de sus parientes aumentar la exactitud de la seleccin al explicar la variacin mendeliana de las muestras. Como el genotipo del marcador se puede obtener prcticamente en cada etapa del desarrollo e independientemente del sexo, hay muchas posibilidades de reducir el intervalo entre generaciones. Por ltimo, la genotipificacin de los marcadores resultar mucho menos costosa que la recoleccin de fenotipos, lo que facilitar la seleccin de ms rasgos en un mayor nmero de individuos y, por consiguiente, aumentar la diferenciacin o la intensidad de la seleccin. Adems, el conocimiento de la biologa molecular de rasgos complejos podra revelar nuevos mecanismos de la accin de los genes que requerirn un reajuste de los programas de seleccin con miras a su explotacin ptima. Una buena ilustracin de este argumento es el descubrimiento del modo de segregacin no mendeliano que caracteriza a la hipertrofia muscular calpiga ("callipygous") de los ovinos, al que se denomina huella dominante negativa (4). El conocimiento molecular de esta entidad ha demostrado la inadecuacin de los programas de seleccin tradicionales para su explotacin y sugerido apareamientos entre lneas paternas y maternas especficas pero fenotpicamente normales para producir una progenie 100% calpiga. Por ltimo, los marcadores genticos permiten cuantificar la diversidad gentica existente en poblaciones domsticas, lo que es esencial para la aplicacin de estrategias de preservacin rentables (7). 3.4. Transgnesis Mientras que las estrategias tradicionales de reproduccin y la SMM se limitan a la explotacin de la variacin gentica preexistente en las especies o incluso la raza interesante, la transgnesis ha abierto la excitante posibilidad de aprovechar las variantes genticas entre distintas especies o inclusive de crear de novo. Se han distinguido dos enfoques principales para la produccin de animales transgnicos: 1) por microinyeccin de estructuras de ADN en el proncleo macho de los embriones en etapa unicelular (Figura 2), y 2) por seleccin de genes en las clulas totipotentes (de tipo ES, por ejemplo) en cultivos, seguida sea por la transferencia de los ncleos a oocitos enucleados o la microinyeccin en blastocitos (Figura 3). Segn el primer mtodo el transgen se integra al azar en el genoma (lo que puede afectar su forma de expresin), en tanto que la seleccin gentica mediatizada por una recombinacin de homlogos es especfica del locus. Hasta hace muy poco el primer mtodo era la nica opcin disponible para los animales de cra en ausencia de lneas celulares totipotentes apropiadas. La descripcin reciente de clulas "ES" ovinas y su utilizacin para producir ovinos quimricos, empero, demuestra que tambin se podra disponer en un futuro prximo de mtodos de seleccin de genes para la produccin animal (3). Se estn realizando distintos proyectos transgnicos (9) con objeto de: 1) aumentar el crecimiento y mejorar las caractersticas de las canales, 2) aumentar la produccin de leche y modificar su composicin, 3) incrementar la resistencia a las enfermedades, y 4) mejorar la produccin de lana. Sin embargo, la aplicacin transgnica en especies ganaderas que ha resultado ms fructuosa hasta el presente es la utilizacin de animales como sistemas de expresin para la produccin de productos proteicos de valor ("gene pharming"). 3.5. Encuesta sobre las actividades en curso Con el fin de evaluar las actividades en curso en la esfera de la biotecnologa aplicada al mejoramiento gentico del ganado, se organiz una encuesta basada en un cuestionario que se envi a los 143 Pases Miembros de la OIE, de los cuales 46 respondieron.

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Figura 2

X
GENE DE INTERS
ESTADIO MONOCELULAR OOCITOS FERTILIZADOS

MICROINYECCIN EN PRONCLEO MACHO

TRANSFERENCIA A LA

MADRE PORTADORA

TEST PCR DEL ADN GENMICO DE LA DESCENDENCIA DESCENDENCIA TRANSGNICA

De esta encuesta se pueden inferir las siguientes conclusiones generales: Biotecnologa de la reproduccin: Este es con mucho el mbito de la biotecnologa ms difundido en la produccin animal. La mayora de los Pases Miembros que respondieron, por no decir todos, estn invirtiendo en investigaciones encaminadas a aumentar la eficacia de la inseminacin artificial y la transferencia de embriones, y tambin trabajan en tcnicas ms elaboradas de manipulacin de embriones. La inseminacin artificial y la transferencia de embriones se aplican ya en el terreno en la mayora de los pases, aunque en diversos grados. Modificacin del genoma y seleccin mediante marcadores: Pese a su desarrollo reciente las investigaciones cuyo fin es modificar el genoma estn notablemente difundidas en el sector de la produccin animal, aunque an estn ausentes en los programas de investigacin de varios pases econmicamente menos adelantados. Se estn realizando numerosos programas para identificar los genes correspondientes a diversos rasgos de produccin, en la mayor parte de las especies domsticas. Se han notificado resultados alentadores que constituyen probablemente el comienzo de una gran cantidad de descubrimientos previsibles en un futuro prximo.

Figura 3

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Selectable markers A B

Gene Y

ES cells

Postive (+B) / Negative (-A) Selection

Homologous recombination

MICROINYECCIN EN EL BLASTOCITO

TRANSFERENCIA A LA

MADRE PORTADORA

QUIMERA SOMTICA

QUIMERA GENTICA

ANLISIS DEL ADN

En la actualidad los marcadores genticos basados en el ADN se utilizan principalmente con fines de identificacin y verificacin de la ascendencia, as como para el control de las anomalas debidas a un gen nico. El diagnstico generalizado de la enfermedad bovina de adhesin de los leucocitos en los - 28 -

bovinos y del sndrome del estrs en los porcinos son slo dos ilustraciones de los adelantos en esta esfera. Las repercusiones de la seleccin mediante marcadores sobre la seleccin de los caracteres polignicos dependern de la proporcin de la variacin gentica que pueda explicarse con genes cartografiados, as como del desarrollo de programas de seleccin rentables que incorporen los datos relativos a los marcadores. El hecho de que se estn realizando numerosas investigaciones sobre la seleccin mediante marcadores aumenta las probabilidades de xito. Transgnesis: Como se ha dicho anteriormente, la aplicacin ms comnmente citada de las tcnicas transgnicas es la utilizacin de animales como vectores de expresin "gene pharming", financiada por el sector privado. Existen actividades de investigacin destinadas a mejorar la produccin ganadera tradicional, pero son escasas y se encuentran solamente en grandes centros de investigacin. Esto se debe en parte a los costos elevados de estas actividades, la dificultad de predecir el resultado de los experimentos y la percepcin negativa del pblico (al menos en algunos pases). El reciente desarrollo de lneas celulares totipotentes en los ovinos reactivar probablemente las investigaciones en esta esfera.

4. DESAFOS FUTUROS El aumento de la rentabilidad de la produccin de productos de origen animal, por manipulacin del medio ambiente o del genotipo, sigue siendo un elemento esencial de los medios disponibles para lograr alimentar de manera adecuada y sostenible a la creciente poblacin mundial. La biotecnologa es un componente fundamental del arsenal de instrumentos requeridos para alcanzar este objetivo. Es probable que la contribucin de la biotecnologa vaya aumentado en el futuro a medida que progresen los mtodos. Los Pases Miembros que respondieron al cuestionario sealaron esencialmente tres clases de problemas relacionados con la aplicacin de la biotecnologa en la produccin animal: 1. una creciente desconfianza y temor respecto de la biotecnologa en el pblico en general. Estas preocupaciones fueron expresadas principalmente por pases de Amrica del Norte y Europa Occidental. 2. la escasez de cientficos y tcnicos suficientemente capacitados y la falta de apoyo a los proyectos destinados a aplicar la biotecnologa a la produccin ganadera. Estas preocupaciones fueron manifestadas sobre todo por pases que no pertenecen a Amrica del Norte y Europa Occidental. 3. dudas en cuanto a la rentabilidad de la biotecnologa aplicada a la produccin animal. Sobre la base de estos problemas que plantea la biotecnologa, se propuso que la OIE emprendiera las siguientes actividades de apoyo: 1. Organizacin de campaas de informacin del pblico acerca de la naturaleza de la biotecnologa. 2. Asistencia a la capacitacin en biotecnologa de los futuros trabajadores en este mbito, mediante el fomento de conferencias y programas de intercambio entre pases.

REFERENCIAS

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1. 2.

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