UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS TECNOLOGIA MDICA

Lic. Jos Carlos Martnez

INMUNOENSAYOS ELISA
El ELISA se basa en el uso de antgenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunolgica como enzimtica. Al estar uno de los componentes (antgeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte (inmunoadsorbente) la reaccin antgeno-anticuerpo quedar inmovilizada y, por tanto, ser fcilmente revelada mediante la adicin de un substrato especifico que al actuar la enzima producir un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotmetro o un colormetro. Los diferentes tipos de ELISA: Anticuerpos marcados: ELISA Directo ELISA Indirecto La prueba de Elisa es utilizada en diferentes enfermedades: Por ejemplo: Sida Chagas Hepatitis B Hepatitis C Core HCV Sfilis, etc.

ELISA DIRECTO El mtodo directo de Elisa es el ms utilizado en la mayora de los elisas.

Consta de las siguientes etapas:

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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS TECNOLOGIA MDICA Fijacin del soporte antgenos especficos. con

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El equipo agrega suero diluyente, incuba a 37 C por un tipo de 45 minutos, en este tiempo se produce la reaccin antgeno anticuerpo (Ag -Ac). Se lava por 5 veces, para remover todo lo que no pertenece a la reaccin antgeno anticuerpo (Ag Ac).

Despus del lavado se le agrega el conjugado. El conjugado contiene anticuerpo especficos contra antgenos (Ag) pegados en la base y se une a la unin (Ag - Ac), junto con la enzima (peroxidasa). Despus de agregar el conjugado se incuba a 37 C por un tiempo de 45 minutos y se lava Despus del lavado se pone el sustrato y con la presencia de la enzima (peroxidasa) genera color. Se incuba a temperatura ambiente en un tipo de 15 20 minutos.

Se le agrega la solucin de parada

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ELISA INDIRECTA: NEGATIVA:

Consta de las siguientes etapas: Fijacin al soporte con antgenos especficos para los anticuerpos. Lavado para eliminar

Se le agrega el suero mas aditivo, que contiene anticuerpos especficos y se realiza la unin antgeno anticuerpo (Ag Ac). Se incuba 1 hora a 37 C. Se lava

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Adicin de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los anticuerpos especficos aadidos en el paso anterior y que se encuentran fijados a los antgenos. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado. Se incuba 1 hora a 37 C

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Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima (peroxidasa) marcadora.

Se le agrega la solucin de parada

ELISA INDIRECTA: POSITIVO

Antgeno especifico

Suero + aditivo El aditivo realiza la unin Antgeno - anticuerpo

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Conjugado Encuentra la unin (Ag - Ac)

Sustrato acta sobre la Enzima

Solucin de parada

PLACAS PARA LAS PRUEBAS DE ELISA

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1 A BLANCO B CONTROL (-) C D E CALIBRADORES F G CONTROL (+) H

El blanco se le resta las lecturas de todas las copas, y solo se le agrega se le agrega el sustrato. El control (-), calibradores, control (+) tienen suero, conjugado y sustrato.

Control: Cut off (punto de corte)

(-) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9

1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 (+)

Zona gris del 0.9 a 1.1 10 % La zona gris es la parte en que la prueba se debe volver hacer .porque el sistema inmune del paciente recin empezara a formar inmunoglobulinas. PIERINA MILAGROS DELGADO COILA Pgina 6