Mdulo 6.

LA RELACIN DE LA CLULA CON SU ENTORNO

CUBIERTAS EXTERNAS Glicoclix Las protenas de la membrana plasmtica no estn expuestas directamente al ambiente extracelular, sino que estn cubiertas por una capa de carbohidratos que se presentan como oligosacridos asociados a lpidos (glicolpidos). El trmino glicoclix o cubierta celular hace referencia a la capa rica en carbohidratos de la superficie celular. Esta zona puede ser visualizada por el uso de diversos colorantes como el rojo de rutenio o tambin por su afinidad a protenas llamadas lectinas (que se unen especficamente a los carbohidratos), que pueden marcarse con un reactivo fluorescente. Las cadenas laterales de los oligosacridos y de los glicolpidos son extremadamente diversas en cuanto a la organizacin de sus azcares. A pesar de que habitualmente contienen menos de 15 residuos glucdicos , estos estn a menudo ramificados y los azcares pueden estar unidos entre s mediante diversos enlaces covalentes. La diversidad y la posicin expuesta de estos polisacridos en la superficie les hace especialmente indicados para tomar parte en procesos de reconocimiento celular. Siempre se pens que una de las funciones primordiales que cumple el glicoclix es la de proteger a la membrana de dao Molculas de glicolpidos mecnico o qumico. Ms recientemente fueron consideradas adems otras funciones, tales como la asociacin transitoria de clulas, incluyendo las interacciones esperma-vulo, la coagulacin sangunea, la recirculacin de linfocitos y algunas respuestas inflamatorias. Matriz extracelular en animales Los tejidos no estn hechos solamente de clulas. Una parte sustancial de su volumen es el espacio extracelular, que est parcialmente ocupado por una intrincada red de macromolculas que constituyen la matriz extracelular. La matriz est compuesta de una variedad de protenas verstiles y de polisacridos que son secretados localmente y ensamblados en una malla en estrecha asociacin con la superficie de la clula que la ha producido. En el tejido conectivo, que constituye el soporte estructural del cuerpo de los vertebrados, la matriz es mucho ms abundante que las clulas a las que rodea y en consecuencia determina las propiedades fsicas del tejido. Las variaciones en las cantidades relativas de los diferentes tipos de molculas y la forma en que son organizadas en la matriz extracelular da lugar a una gran diversidad de formas, cada una adaptada a los requerimientos funcionales de cada tejido. La matriz puede calcificarse como en los dientes y huesos, ser transparente como en la crnea o adoptar la estructura fibrosa que permite a los tendones soportar fuertes tensiones. Hasta hace poco tiempo se pensaba en la matriz como una especie de andamiaje inerte que estabilizaba la estructura fsica de los tejidos. Ahora es claro que la matriz juega un rol mucho ms activo y

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complejo en la regulacin del comportamiento de las clulas que interactan con ella, influenciando su desarrollo, migracin, proliferacin, forma y funcin. La matriz extracelular tiene una composicin

Tejido conectivo subyacente a un tejido epitelial. Constituido en su mayor parte por una matriz extracelular que es secretada por los fibroblastos

compleja, de la cual se estn caracterizando rpidamente sus principales componentes. En la mayora de los tejidos conectivos las macromolculas de la matriz son secretadas por los fibroblastos (llamados condroblastos en el cartlago, osteoblastos en el tejido seo) y son de dos tipos: a) polisacridos del tipo de los glicosilaminoglicanos, que usualmente se unen covalentemente con protenas formando proteoglicanos b) protenas de dos tipos: las que son principalmente estructurales, como el colgeno y la elastina y las que son principalmente adhesivas, como la fibronectina y la laminina Los glicosilaminoglicanos (GAGs) son cadenas de polisacridos no ramificados compuestos de unidades de disacridos. El disacrido est constituido por un aminoazcar (usualmente Nacetilglucosamina) y otra molcula (usualmente cido urnico, un azcar cido). Todos son fuertemente hidroflicos, adoptan conformaciones extendidas y forman geles an en bajas concentraciones. Como estn negativamente cargados atraen contraiones que le dan alta presin osmtica, lo que carga de agua a la matriz y le permite resistir fuerzas compresivas relativamente altas. Los GAGs estn asociados a protenas en forma de proteoglicanos. Las protenas son producidas en el retculo endoplsmico rugoso (RER) y los polisacridos son asociados en el lumen del aparato de Golgi.

Estructura de un proteoglicano

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El colgeno es la principal protena de la matriz extracelular y constituye el 25% de la masa de protenas de un vertebrado. Est constituido por una triple hlice ordenada hacia la izquierda, con tres residuos aminoacdicos por vuelta. Uno de ellos siempre es glicina y de los otros dos es bastante frecuente que uno sea prolina y otro hidroxiprolina. Hasta ahora se han aislado 15 tipos de colgenos (tipos I a XV). El colgeno Tipo I es el ms comn en piel y huesos. Se sintetiza en ribosomas asociados al RER en forma de propptido (conteniendo aminocidos adicionales en ambos extremos de la cadena). En el lumen del RER prolina y lisina son hidroxiladas a hidroxiprolina e hidroxilisina y sta ultima es

glicosilada. Dentro del Golgi se forma la triple hlice que es transportada en vesculas hacia la membrana. Fuera de la membrana se produce el clivaje (separacin) de los propptidos. Se piensa que la funcin de los propptidos es la de guiar la formacin de la triple hlice y que impiden la asociacin de molculas de colgeno en fibras, proceso que ocurre en el seno de la matriz extracelular y que sera fatal que ocurriera dentro de la clula. Las molculas de colgeno se asocian posteriormente en fibrillas de colgeno (10 a 300 nm de dimetro, visibles con el microscopio electrnico) y luego en estructuras ms complejas, las fibras de colgeno, que son visibles al microscopio ptico. Luego de su formacin las fibrillas de colgeno se entrecruzan con otras. El grado de entrecruzamiento es variable: en el tendn de Aquiles es muy significativo. Muchos tejidos de los vertebrados, como la piel, los vasos sanguneos y los pulmones, necesitan al mismo tiempo ser
Estiramiento de una red de molculas de elastina

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fuertes pero elsticos para poder cumplir acabadamente con su funcin. En estos tejidos existe una red de fibras elsticas en la matriz extracelular de sus clulas que les permite expandirse y volver a su posicin inicial. El principal componente de las fibras es la elastina, una protena hidrofbica rica en glicina y prolina pero no en hidroxiprolina ni hidroxilisina, ni tampoco es glicosilada. Al igual que en el colgeno, las molculas de elastina estn entrecruzadas por uniones covalentes. La matriz extracelular contiene un nmero de protenas adhesivas que tpicamente poseen mltiples dominios, cada uno de ellos especializado en unirse con componentes de la matriz o con receptores de la superficie de las clulas. Una de ellas es la fibronectina, una protena constituida por dos cadenas que se une por dos puentes disulfuro Se ha dicho que la matriz extracelular est destinada a cubrir el espacio extracelular. Pero en ciertos lugares, especialmente en la parte basal de las clulas epiteliales, la matriz se organiza en una estrecha capa denominada lmina basal, constituida por distintas macromolculas. La lmina basal es una capa fina que adems de ubicarse en la base de todas las clulas epiteliales rodea las clulas musculares, adiposas y las clulas Estructura de la laminina de Schwann1 (clulas que rodean trozos del axn de las neuronas perifricas, constituyendo la vaina de mielina, de funcin aislante). La lmina basal est constituida por una protena, la laminina . Esta es una de las primeras protenas de la matriz extracelular sintetizada por un embrin en desarrollo; tiene tres cadenas polipeptdicas ordenadas en forma de cruz, con distintos dominios destinados a unirse a los otros componentes de la lmina basal. La lmina basal puede cumplir diferentes funciones, entre ellas actuar como barrera selectiva impidiendo el movimiento de las clulas: la lmina basal del epitelio impide el pasaje de fibroblastos pero no de los macrfagos, linfocitos o nervios. Finalmente, la lmina basal juega un importante papel en la regeneracin de tejidos luego de una herida. El recambio de las molculas que componen la matriz extracelular es esencial en algunos procesos biolgicos, como la involucin del tero luego del parto o la reabsorcin de la cola del renacuajo en la etapa final de la metamorfosis. La pared celular vegetal La pared celular es una matriz extracelular compleja que rodea a las clulas vegetales. Las paredes de clulas colindantes, unidas entre s formando la planta, son generalmente gruesas, fuertes y ms rgidas que la matriz extracelular sintetizada por las clulas animales. En una planta pluricelular, la mayora de las clulas se producen en regiones especializadas denominadas meristemas. Las nuevas clulas generadas son pequeas en comparacin a su tamao final y para poder crecer sus paredes, denominadas paredes celulares primarias, son delgadas y semirgidas. Cuando el crecimiento se detiene y la pared ya no ha de expandirse ms, se sintetiza una pared secundaria rgida por depsito de nuevas capas por debajo de las ms antiguas. Adems de su papel estructural, la pared celular protege a las clulas subyacentes e interviene en el transporte de fluidos dentro de la planta. Cuando las clulas vegetales se especializan producen tipos de paredes adaptadas especialmente, en funcin de las cuales pueden reconocerse y clasificarse en distintos tipos celulares.

Los axones de las nervios perifricos estn aislados por una vaina de mielina, constituida por las clulas de Schwann. La clula de Schwann rodea varias veces apretadamente el axon. Las interrupciones entre clula y clula constituyen los nodos de Ranvier, donde estn ubicados los canales inicos.

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Las paredes celulares primarias de plantas superiores varan en cuanto a composicin y organizacin, pero todas las matrices extracelulares estn diseadas segn un principio comn: obtienen su fuerza de traccin de las largas fibras y su resistencia a la compresin de la matriz de protenas y polisacridos en la cual se insertan estas fibras. Las fibras estn constituidas por el polisacrido celulosa (el polisacrido ms abundante en la naturaleza). Estas molculas se agrupan en haces de fibras que le dan estructura a la pared celular. En la pared celular primaria tambin se encuentran abundante cantidad de otros polisacridos, hemicelulosas y pectinas, que forman enlaces cruzados entre las fibras de celulosa. Las protenas estructurales presentes en la pared celulsica forman tambin enlaces cruzados con las fibras de celulosa, los que resultan importantes en el mantenimiento de la estrucura de la red y en el crecimiento celular.

Porcin de pared primaria de un vegetal que muestra las dos mayores redes de polisacridos

Una molcula de celulosa consiste de al menos 500 molculas de glucosa. Unas 60 a 70 molculas de celulosa se agrupan formando microfibrillas de celulosa. Los grupos de fibrillas se asocian en capas debido a la asociacin con hemicelulosas. Hay muchas clases de hemicelulosas, pero generalmente consisten de una cadena lineal de un tipo de azcar con ramificaciones formadas por otros azcares. Conjuntamente con esta red hay otra constituida por pectinas, un grupo de polisacridos derivados del cido galacturnico, frecuentemente asociados con iones calcio. A diferencia de la matriz extracelular de los animales, la celulosa, el principal componente de la misma, es producido por un complejo enzimtico ubicado en la propia membrana (celulosa-sintetasa), que usa como precursores molculas de glucosa, en forma de nucletidos, producidos en el citosol. En la pared de las clulas vegetales, cada capa de celulosa corre en distinta direccin que la capa anterior, lo cual se debe a la orientacin que tienen los microtbulos 2 en la cara interna de la membrana plasmtica, los que determinan la ubicacin de los complejos celulosa-sintetasa. A medida que la celulosa se forma, el complejo enzimtico que la sintetiza debe ir movindose a lo largo de la membrana, ya que las fibras tienden a disponerse en la misma orientacin que las anteriores. Pero los microtbulos pueden variar su orientacin luego de cada capa de celulosa que se forma, generando fibras que se disponen en orientaciones distintas a las de la capa previa.

Los microtbulos son integrantes del citoesqueleto, que se vern ms adelante en este mismo mdulo.

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Paredes celulares bacterianas Las paredes celulares bacterianas se presentan en todas las bacterias, excepto en los micoplasmas. Ofrecen a la clula proteccin contra los choques mecnicos y osmticos. Las bacterias se clasifican en Gram positivas y Gram negativas, dependiendo de cmo retienen la tincin con el complejo cristal violeta-yodo, llamada tincin de Gram. Esta diferencia se basa en las caractersticas qumicas y estructurales de la pared celular. Un tipo importante de macromolcula presente en las paredes celulares de ambos tipos es el pptidoglicano bacteriano denominado murena, molcula que consiste en cadenas paralelas de un polisacrido acetilado, unidas covalentemente mediante un oligopptido ramificado, formando una red tridimensional en forma de bolsa. Las paredes celulares de bacterias Gram positivas contienen, adems del pptidoglicano, polisacridos que muestran gran variacin segn la especie y cidos teicoicos (polmeros del ribitol o glicerol al que se une D-alanina y azcares). Estos carbohidratos constituyen los principales antgenos de superficie de bacterias Gram positivas. Las bacterias Gram negativas slo tienen una pequea proporcin de pptidoglicano en su pared celular, pero contienen fosfolpidos, protenas y lipopolisacridos, que se organizan formando la denominada membrana externa que cubre la capa de pptidoglicano. En la membrana externa, la monocapa interna est formada por fosfolpidos y la capa externa por lipopolisacridos. En el lipopolisacrido pueden distinguirse tres regiones: el lpido A que consiste en 6 residuos de cidos grasos y un disacrido, un oligosacrido central y la cadena lateral O, formada por un polisacrido de azcares poco comunes. Esta membrana externa contiene protenas, principalmente porinas, que forman canales inespecficos que permiten el pasaje de diversas sustancias.

INTERIOR DE LAS CELULAS EUCARIOTICAS Antiguamente los bilogos pensaban que las clulas estaban formadas por una gelatina uniforme a la que llamaban protoplasma. Con la microscopa electrnica y otras herramientas modernas de investigacin, se ha extendido la percepcin del mundo con respecto a las clulas. En la actualidad sabemos que la clula eucaritica tiene un alto nivel de organizacin y que es sorprendentemente compleja: tiene su propio centro de control (el ncleo), su sistema de transporte interno (elementos del citoesqueleto y vesculas de transporte), fuentes de energa (cloroplastos y mitocondrias), fbricas para procesar la materia que requiere, plantas de empaquetamiento (Golgi) e incluso un sistema de autodestruccin (lisosomas, proteasomas). En nuestros das el trmino protoplasma, si acaso se utiliza, es en un sentido muy general. La porcin de protoplasma que se encuentra fuera del ncleo se llama citoplasma y el material interno del ncleo se llama nucleoplasma. Los organelos se encuentran suspendidos en el componente lquido del citoplasma. Cada uno de los organelos delimitados por sus membranas forma uno o ms compartimientos independientes dentro del citoplasma. En una clula animal tpica, todos los compartimientos en conjunto abarcan cerca de la mitad del volumen del citoplasma.

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CITOESQUELETO La capacidad de las clulas eucariticas para adoptar una variedad de formas y de llevar a cabo movimientos dirigidos y coordinados depende de una compleja red de filamentos proteicos que se extiende a todo lo largo del citoplasma. Esta red se denomina citoesqueleto, pero a diferencia del esqueleto seo, es una estructura altamente dinmica que se reorganiza continuamente a medida que la clula cambia de forma, se divide y responde a su ambiente. De hecho, el citoesqueleto podra igualmente ser bien llamado citomusculatura, porque es directamente responsable de movimientos tales como el desplazamiento de algunas clulas sobre un sustrato, la contraccin muscular y los muchos cambios de forma de un embrin de vertebrados; tambin provee la maquinaria para los movimientos intracelulares, tales como el transporte de organelos de un lugar a otro en el citoplasma y la segregacin de cromosomas durante la mitosis. El citoesqueleto est aparentemente ausente en las bacterias y puede haber sido un factor crucial en la evolucin de las clulas eucariticas. Los filamentos de protena que forman el marco del citoesqueleto son todos polmeros y se clasificaron originalmente con base en su tamao relativo. Hay dos tipos principales de filamentos que conforman el de todas las clulas eucariticas: microfilamentos, de 7 nm de dimetro (tambin conocidos como filamentos de actina), y microtbulos de 25 nm de dimetro. Tanto los microfilamentos como los microtbulos son fibras formadas por subunidades de protenas globulares , que pueden unirse y disociarse rpidamente dentro de la clula. Aunque estos dos tipos de filamentos son los componentes principales del citoesqueleto, tambin intervienen en la formacin de otras estructuras a las que se debe la motilidad y organizacin celular. En muchas clulas se observa un tercer tipo de filamento: el filamento intermedio, que tiene un dimetro de 8 a 10 nm, intermedio entre los otros dos: este se forma con subunidades de protenas fibrosas, y es ms estable que los microtbulos y los microfilamentos. Por s mismos, los tres tipos de filamentos no podran proporcionar forma y sostn a la clula; su funcin depende de la existencia de un conjunto de protenas accesorias que unen los filamentos unos con otros y a los otros componentes celulares. Las protenas accesorias son tambin esenciales para controlar el ensamble de los filamentos en determinadas ubicaciones y adems proveen los motores que mueven los organelos a lo largo de los filamentos.

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Filamentos intermedios Las subunidades que forman los filamentos intermedios son protenas fibrosas que tienen una cabeza animo terminal, una cola que corresponde al carboxilo terminal y un dominio central en forma de varilla, consistente en una -hlice formando un dmero, donde las dos cadenas estn dispuestas en forma paralela (cabeza con cabeza y cola con cola); este dmero se aparea con otro dmero en posicin antiparalela, constituyendo un tetrmero que parece constituir la subunidad fundamental, ya que se ha encontrado libre en las clulas. Los tetrmeros pueden irse asociando para formar largas fibras. Hay tres tipos de filamentos intermedios citoplasmticos (queratinas, vimentinas y neurofilamentos) y uno nuclear (lminas). Las queratinas constituyen una gran familia, de las cuales hay alrededor de veinte tipos en clulas epiteliales y 8 ms en pelos y uas (a todas ellas se las llama a veces -queratinas para diferenciarlas de las -queratinas de las alas de los pjaros, que tienen una estructura diferente.

Las protenas del tipo vimentina incluyen filamentos intermedios que se forman con polmeros de un solo tipo de protena. Entre ellos se encuentra la vimentina (fibroblastos, clulas endoteliales y glbulos blancos), desmina (clulas musculares) y los neurofilamentos, que forman el citoesqueleto primario de los axones (prolongacin de la clula nerviosa). En cuanto al ncleo, los filamentos intermedios estn compuestos de lmina y constituyen la capa interna de protena que se encuentra en la cara interna de la membrana nuclear interna (lmina nuclear). Hay una fuerte evidencia de que la principal funcin de los filamentos intermedios citoplasmticos es la de otorgar resistencia a la clula al estrs mecnico, gracias precisamente a la estructura de tetrmeros que se superponen parcialmente para formar los largos polmeros. Microtbulos Estn constituidos por molculas de tubulina, cada una de las cuales es un dmero de dos polipptidos globulares llamados -tubulina y -tubulina, Un microtbulo es una estructura cilndrica y hueca en la que los dmeros de tubulina estn asociados en 13 protofilamentos lineares que constituyen las paredes del microtbulo. Cada microtbulo posee un extremo minus que crece lentamente y un extremo plus que crece con mayor velocidad. En las clulas animales los microtbulos se polimerizan y depolimerizan constantemente. Su vida media es de diez minutos en los fibroblastos, en tanto que la vida

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media de una molcula de tubulina es de 20 horas, por lo que en este lapso participar del proceso de ensamble y desensamble de distintos microtbulos. La estabilizacin del microtbulo y su funcionalidad se ve sensiblemente aumentada mediante las protenas asociadas a los microtbulos (MAPs), que unen uno de sus extremos al microtbulo y el otro a algn componente celular. Para que los microtbulos acten como marco estructural o para que intervengan en los movimientos celulares debe anclarse a otras partes de la clula. En una clula que no est en divisin, el centro de nucleacin es el centrosoma , tambin llamado centro celular o centro de organizacin de los microtbulos. En la clula en divisin el centro de nucleacin son los polos del huso mittico. En los cilios y flagelos es el cuerpo basal. En el centro celular de casi todas las clulas animales se observan dos estructuras dispuestas en ngulo recto una con respecto a la otra, llamados centrolos. Durante la interfase el centrosoma se duplica y da origen a un nuevo par de centrolos. Rodeando al par de centrolos, tanto en metafase como en interfase, hay una regin compuesta por una red de pequeas fibras que constituye la matriz centrosomal o regin pericentriolar. Su composicin es desconocida pero contiene protenas especficas, entre ellas -tubulina, que puede interactuar con las - y -tubulinas para iniciar la formacin de los microtbulos. En las plantas no hay centrolos, ni tampoco en los oocitos de ratn, pero en ambos casos se observa la presencia de protenas especficas del centrosoma, con presencia de -tubulina y protenas relacionadas, por lo que el mecanismo de nucleacin de microtbulos parece contar con un alto grado de conservacin evolutiva. Los centrolos y los cuerpos basales estn constituidos por nueve tripletes de microtbulos, de los cuales slo uno es completo (con 13 protofilamentos), en tanto que los otros dos poseen slo 11 protofilamentos. Adems de poseer propiedades estructurales, los microtbulos funcionan como carriles, a travs de los cuales los organelos se desplazan de un sitio a otro de la clula. Las mitocondrias, las vesculas secretoras y otros organelos se unen a los microtbulos y son transportadas a varias partes de la clula a travs de la red de microtbulos con ayuda de protenas que requieren ATP y que actan como "motores" del transporte. Se han identificado dos clases de protenas motor: las quinesinas y las dinenas citoplsmicas (para diferenciarlas de las dinenas de cilios y flagelos). Las quinesinas son ms variadas y los miembros de esta familia participan en el transporte de organelas, en la mitosis, en la meiosis y en el transporte de vesculas sinpticas a lo largo de los axones. Tanto las quinesinas como las dinenas son oligmeros constituidos por dos cadenas pesadas y dos livianas, con una cabeza globular unida al ATP que se asocia al microtbulo y una cola que se une componentes especficos de la clula y por lo tanto define el tipo de carga que transporta la protena. Las quinesinas generalmente se desplazan hacia el extremo plus del microtbulo, alejndose del centro celular, en tanto que las dinenas lo hacen en sentido contrario. Cilios y flagelos Los microtbulos actan en los movimientos celulares. Muchas clulas poseen estructuras mviles, en forma de ltigo que se proyectan desde su superficie y exhiben movimientos pulstiles. Si una clula tiene slo uno o unos cuantos de estos apndices y ms o menos largos en proporcin con el tamao de la clula se los denomina flagelos. Si la clula tiene muchos apndices cortos, se denominan cilios. Tanto los cilios como los flagelos los utilizan las clulas para moverse a travs de un medio acuoso o para mover lquidos y partculas a travs de la superficie celular. Estas estructuras con frecuencia se

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encuentran en organismos unicelulares, y en organismos multicelulares pequeos. En los animales encontramos flagelos en las clulas espermticas, formando la cola de estos, y cilios en la superficie de las clulas de conductos internos del cuerpo (ej., vas respiratorias). Cada cilio o flagelo consta de un haz cilndrico y delgado, denominado axonema, cubierto por una extensin de la membrana plasmtica. El centro del haz contiene un grupo de microtbulos dispuestos en nueve pares que forman la circunferencia, y dos tbulos ms en el centro. Los pares estn constituidos por un microtbulo completo (13 filamentos) y uno incompleto (11 filamentos). Esta disposicin 9 (pares) + 2 es caracterstica de todos los cilios y flagelos de las clulas eucariticas. Los microtbulos de un axonema estn asociados con numerosas protenas, algunas de las cuales sirven para mantener la estructura como un todo, en tanto que otras generan las fuerzas que provocan el movimiento ondulatorio. La ms importante de estas protenas motores es la dinena ciliar, que es similar a la dinena citoplasmtica en el sentido de que tiene ATP unido a la cabeza, cuya hidrlisis genera la energa necesaria para el movimiento. La cabeza se une al microtbulo entero (el de 13 protofilamentos) y la cola se une a un par vecino. Al producirse el movimiento de la dinena hacia el extremo minus, el efecto que se logra es que el microtbulo vecino se doble en el mismo sentido, inicindose el movimiento ciliar o flagelar. Estas protenas utilizan la energa almacenada en el ATP, de modo que parece que los brazos de un par de microtbulos son capaces de "caminar" a lo largo de pares adyacentes de tbulos, provocando que toda la estructura se incline de un lado a otro Flagelos bacterianos Los flagelos bacterianos son apndices mviles de longitud diversa que permiten el movimiento en medios lquidos. Estos apndices no tienen ninguna semejanza estructural con los flagelos en clulas eucariota, aunque se denominen de igual forma . La fuerza motriz que desarrolla se obtiene mediante un movimiento circular en ambos sentidos a partir de la energa obtenida de una bomba de protones. Los flagelos de las bacterias tienen una estructura helicoidal y estn compuestos principalmente de la protena flagelina, cuya composicin es un poco excepcional, ya que es rica en aminocidos cidos como glutmico y asprtico, ausencia de triptfano y cistena y escasez de tirosina, prolina, histidina y metionina. En el filamento, las subunidades de flagelina se disponen en una conformacin cilndrica con un canal en su interior. La forma y la longitud de onda del flagelo estn determinadas por la estructura de la flagelina, por lo que cambios en su estructura provoca cambios en la estructura del flagelo. El flagelo bacteriano est formado por unas 50 protenas, desde la flagelina a protenas que intervienen en el ensamblaje o en la interaccin con las envueltas externas de la clula o las protenas que participan en los procesos quimiotcticos. Microfilamentos (Filamentos de actina) En general, los microtbulos en el citoplasma funcionan individualmente, en tanto que los microfilamentos o filamentos de actina trabajan en redes o manojos. Los filamentos de actina se encuentran justo debajo de la membrana plasmtica y estn entrecruzados por varias protenas especficas formando el crtex celular, o corteza celular. Los microfilamentos son fibras compuestas por una protena globular, la actina, por lo que se trata de un homopolmero. Existen diferentes tipos de actinas, todas ellas estructuralmente relacionadas.

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Las -actinas son constituyentes de las clulas musculares y las - y -actinas se encuentran en clulas no musculares. Al igual que en los microtbulos, el microfilamento tiene un extremo plus que crece rpidamente y uno minus que crece muy lentamente. La polimerizacin del microfilamento est regulada por distintas protenas que se asocian con las molculas libres de actina: entre ellas puede citarse a la timosina, que inhibe la polimerizacin, la profilina que actuara en sentido opuesto y el factor depolimerizante de actina (ADF) que participa en la despolimerizacin. Los filamentos de actina son responsables de muchos movimientos celulares asociados con la superficie celular. La acumulacin de microfilamentos de actina puede producir protrusiones como microespigas o agujas, o formar proyecciones lameliformes (lamelipodios) o generar invaginaciones de la membrana celular, como ocurre al comienzo de la citocinesis . Todas las protenas motoras de los filamentos de actina pertenecen a la familia de las miosinas . Las miosinas de las fibras musculares pertenecen a la subfamilia de la miosina-II, que est compuesta de dos cabezas y una cola en forma de varilla. Cada una de las cabezas tiene un sitio de unin al ATP y otro para unirse a la actina. A su vez, cada cabeza est asociada a dos cadenas livianas. El rol principal de la cola en forma de varilla es el de permitir que las molculas polimericen en filamentos bipolares, que pueden desplazarse sobre s mismos y sirven para explicar el mecanismo de la contraccin muscular. Las clulas no musculares tambin contienen miosinas , de las cuales la ms conocida es la miosina-I, presumiblemente ms primitiva que la miosina-II. Es tambin una protena motora y de acuerdo a su cola permite mover un filamento de actina sobre otro, una vescula a lo largo de un filamento de actina o un filamento de actina sobre la membrana plasmtica. La figura muestra los distintos roles de mioisina I (no muscular) y miosina II (muscular) en clulas eucariticas. En (1) se muestra el movimiento de una molcula de actina en relacin a otra, en (2) se ve como se mueve una vescula a lo largo de un filamento de actina, en (3) se muestra cmo acta la miosina II sobre los filamentos de actina en la contraccin muscular y en (4) un filamento se mueve en relacin a una membrana. La miosina-II forma ensamblajes transitorios en muchas clulas no musculares. Uno de ellos es el anillo contrctil que se genera al finalizar la mitosis y que dar lugar a la citocinesis. Algunas clulas, como las de la mucosa intestinal, tienen microvellosidades digitiformes (en forma de dedo), que se proyectan desde su superficie, ampliando considerablemente la superficie celular. Estas estructuras se extienden y retraen por la polimerizacin y depolimerizasin de las fibras de actina localizadas en las microvellosidades. La contraccin muscular resulta de la accin de unidades de actina y de miosina-II . Las clulas musculares son polinucleadas y resultan de la fusin de mioblastos. Los ncleos estn dispuestos perifricamente y el centro de la clula (denominada fibra muscular) est ocupada por una masa de miofibrillas, que son los elementos contrctiles de la fibra muscular. Cada miofibrilla consta de una serie de unidades denominadas sarcmeros. compuestos de actina y que se ven como banda clara en el microscopio. en el centro hay una banda oscura de filamentos gruesos de miosina-II. La contraccin tiene lugar cuando las molculas de miosina caminan sobre los filamentos de actina, produciendo el deslizamiento de los mismos.

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CONTACTOS INTERCELULARES En los organismos multicelulares, las clulas que entran en contacto con otras desarrollan uniones intercelulares especializadas en sus membranas plasmticas. Estas estructuras permiten que las clulas vecinas formen fuertes conexiones entre s, o que se establezcan comunicaciones rpidas entre clulas adyacentes. Estas uniones o contactos intercelulares ocurren prcticamente en todos los tejidos, pero son especialmente importantes en las clulas epiteliales. De acuerdo a la funcin que les tocar desempear, las uniones celulares pueden ser clasificadas en tres grandes grupos, como se muestra en la tabla adjunta.
1. Uniones de oclusin o de cerrado (uniones estrechas) 2. Uniones de 2.1. Uniones con 2.1.1. uniones de adhesin clula-clula (cinturones de adhesin) anclaje filamentos de actina 2.1.2. uniones de adhesin clula-matriz celular (contactos focales) 2.2. Uniones con 2.2.1. uniones clula-clula (desmosomas) filamentos intermedios 2.2.1. uniones clula-matriz (hemidesmosomas) 3. Uniones de 3.1. Uniones de hendidura (gap junctions) comunicacin 3.2. Sinapsis qumica 3.3. Plasmodesmos (solamente en plantas)

Resumen de los distintos tipos de uniones celulares hallados en el epitelio de clulas animales

Uniones estrechas Literalmente las uniones estrechas son conexiones estrechas entre las membranas de clulas adyacentes. Estas conexiones son realmente tan estrechas que los espacios alrededor de las clulas prcticamente desaparecen; de esta manera se previene el paso de sustancias a travs de la capa de clulas por el espacio intercelular. Las micrografas electrnicas de las uniones estrechas muestran que en el sito de unin las membranas de las clulas adyacentes estn en contacto real una con otra. En dichos sitios las membranas estn unidas a travs de la asociacin de hileras de protenas de membrana pertenecientes a cada una de las clulas. En las clulas epiteliales del intestino delgado, las uniones estrechas formadas

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entre ellas evitan que las sustancias del intestino entren al organismo o al torrente circulatorio sin pasar por ellas. Esta capa de clulas acta como una barrera selectiva para incorporar al torrente circulatorio los nutrientes que el organismo necesita; stos deben ser transportados activamente a travs del citoplasma de las clulas intestinales, evitando de este modo que las toxinas y materiales de desecho pasen al torrente circulatorio. Uniones de anclaje Estn ampliamente distribuidas en los tejidos animales. Permiten a grupos de clulas, tales como las de los epitelios, funcionar como una unidad estructural robusta mediante la conexin de los elementos del citoesqueleto de una clula con la vecina o con su propia matriz extracelular. Como ya se han mencionado, en las uniones pueden intervenir filamentos de actina o filamentos intermedios. En ambos casos el esquema es el mismo e intervienen dos clases de protenas: a) protenas intracelulares, que forman una placa en la cara citoplasmtica de la membrana y se unen a los filamentos del citoesqueleto y b) protenas transmembrana de enlace, cuyo dominio extracelular interacta con protenas de la matriz extracelular o con la porcin equivalente de la protena transmembranosa de la clula vecina Como vimos en la tabla precedente, las uniones de anclaje con filamentos de actina son los cinturones de adhesin y los contactos focales. Los cinturones de adhesin permiten la unin de dos clulas y se establecen alrededor de la clula, habitualmente por debajo de la unin estrecha. Las protenas intermembranosas que actan en el proceso pertenecen a una familia de protenas denominadas cadherinas3. En cambio, en las uniones entre una clula epitelial y la matriz extracelular (lmina basal), denominados contactos focales o placas de adhesin, las protenas transmembrana pertenecen a la familia de las integrinas. Por su parte, las uniones de anclaje con filamentos intermedios son los desmosomas y los hemidesmosomas. Los desmosomas son puntos de contacto intercelular donde los filamentos intermedios se asocian a una placa densa placa proteica, que a su vez se conecta hacia el exterior a travs de protenas transmembrana del tipo de las cadherinas. Los hemidesmosomas unen los filamentos intermedios a la capa de la matriz celular de las clulas epiteliales (la lmina basal) que est en contacto con el tejido conectivo En estas uniones las protenas transmembrana pertenecen (al igual que en los contactos focales) a la familia de las integrinas. Uniones de hendidura Las uniones de hendidura (gap junctions) estn constituidas por molculas de protenas que no slo conectan a dos clulas vecinas, sino que tambin actan como poros que conectan los citoplasma de ambas. A este tipo de uniones se debe la rpida comunicacin qumica y elctrica que ocurre entre las clulas. Las clulas del pncreas estn unidas mediante uniones de hendidura, de manera que si un grupo de clulas es estimulado para secretar insulina, la seal se transmite a travs de todas las uniones, de un acino celular a otro, garantizando una respuesta coordinada al estimulo inicial. Las clulas del msculo cardaco tambin permanecen unidas mediante este tipo de uniones, las cuales proporcionan un adecuado acoplamiento elctrico entre ellas, que sincroniza de manera correspondiente su contraccin. Las uniones de hendidura estn constituidas por protenas transmembrana denominadas conexinas. Seis subunidades se asocian formando estructuras denominadas conexones. Cuando los conexones de membranas de clulas vecinas se alinean se contituye una unin de hendidura, llamada as porque a diferencia de la unin estrecha est formando un puente entre dos clulas que estn separadas por una hendidura (o brecha) de 2 a 4 nm. Al igual que los canales inicos, las uniones de hendidura no estn permanentemente abiertas. Una disminucin del pH intracelular o un aumento de la concentracin de calcio provoca el cierre. Cuando una clula es daada se produce un ingreso de calcio (y sodio) al interior, debido a que la concentracin
El nombre de cadherinas define un grupo de glicoprotenas responsables de la adhesin clula a clula calcio-dependiente. De all el nombre: calcio (Ca)-adherinas.
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de estos iones es mayor en el espacio extracelular; ello provocara el inmediato cierre de todas las uniones de hendidura, aislando la clula daada de las dems. Plasmodesmos Las clulas vegetales estn separadas entre s por paredes celulares rgidas y gruesas. El sistema de paredes celulares elimina la necesidad de las uniones de anclaje para mantener a las clulas en su lugar. Subsiste sin embargo la necesidad de comunicar los citoplasmas, lo que se realiza por medio de canales de 20 a 40 nm de dimetro, llamados plasmodesmos. El espesor de la pared celular entre dos clulas vegetales tpicas es de al menos 100 nm, con lo que el sistema de las uniones de hendidura no puede funcionar. La superficie de las membranas de clulas adyacentes se contina de una parte a otra, a travs de los plasmodesmos, lo cual permite el paso de agua y molculas pequeas de una clulas a otra. En casi todos los plasmodesmos existe una estructura cilndrica llamada desmotbulo, el cual pasa a travs de las aberturas y conecta los retculos endoplasmticos de dos clulas vecinas. De esta manera las clulas que componen una planta deben verse como un sincicio en el cual muchos ncleos comparten un citoplasma comn. A pesar de la diferencia en estructura, los plasmodesmos y las uniones de hendidura comparten propiedades comunes. Tampoco los plasmodesmos permiten el pasaje de molculas mayores de 0,8 kDa.

BIBLIOGRAFIA Alberts B., D. Bray, J. Lewis., M. Raff, K. Roberts & J.D. Watson. Biologa Molecular de la Clula. 3ra Ed. 1996. Cooper, G.M. (2002). La Clula. 2 edicin. Marbn Libros, S.L., Espaa. (traducido de la 2 edicin inglesa, 2000). Curtis, H. y N.S. Barnes (2000) Biologa. 6 edicin espaola. Editorial Mdica Panamericana. Lehninger, A.L., D.L. Nelson y M.M. Cox (1993) Principios de Bioqumica, Ediciones Omega, Barcelona, 2a edicin (traducido de la segunda edicin inglesa. 1993). Lodish, H., A. Berk, S.L. Zipursky, P. Matsudaira, D. Baltimore & J. Darnell (2002)Biologa Celular y Molecular, Editorial Mdica Panamericana (traducido de la 4. Ed. inglesa, 2000). Purves, K.W., D. Sadava, G.H. Orians & H.C. Heller (2003) Vida. La Ciencia de la Biologa, 6. Edicin. Editorial Mdica Panamericana (traducido de la 6 edicin inglesa, 2001). Solomon, E.P., L. R. Berg, D.W. Martin & C.A. Villee (1996) La Biologa de Villee, Interamericana McGraw-Hill.

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CUESTIONARIO TERICO 1. Cul es la composicin qumica del glucoclix y qu funciones cumple? 2. Qu caractersticas tiene y cules son las funciones de la matriz extracelular de los tejidos animales? 3. Por qu la matriz extracelular se considera un producto de secrecin celular?. 4. Cules son los principales componentes de la matriz extracelular?. 5. Qu caractersticas tiene la matriz extracelular presente en hueso, en cartlago y en pulmones? 6. Describa la ultraestructura de una pared celular vegetal y explique cmo intervienen la pared celular y las vacuolas en la regulacin de los fenmenos de smosis. 7. Qu caractersiticas poseen las paredes celulares bacterianas? Explique la diferencia entre bacterias Gram positivas y negativas 8. Indique cul de las siguientes funciones estn asociadas al citoesqueleto. a- Intervenir en la mitosis. b- Intervenir en la citocinesis. c- Dirigir el movimiento intracelular de los organoides celulares. d- Metabolizar glcidos. e- Constituir el soporte mecnico para organoides y membrana plasmtica. f- Intervenir en las estructuras unin clula-clula. g- Codificar la secuencia de protenas. h- Permitir el movimiento de las clulas por deslizamiento. i- Permitir el movimiento de las clulas por cilios y flagelos. j- Constituir las vesculas endocticas. 9. Explique por qu el citoesqueleto deber ser una estructura dinmica en continuo proceso de reorganizacin. 10. Cul es la justificacin para considerar funcionalmente similares las uniones de hendidura y los plasmodesmos? 11. Describa las diferencias entre microfilamentos y microtbulos. Compare sus estructuras y sus distintas funciones en la estructura y funcin celular. 12. Indicar cules de las siguientes proposiciones son verdaderas (V) y cules son falsas (F). Justificar la respuesta en el caso de las falsas. Los microtbulos estn formados por 13 cadenas de tubulina enrolladas entre s para formar una nica hlice, lo cual le otorga a los microtbulos el aspecto de una cuerda. Cada molcula de tubulina est formada por dos subunidades diferentes (alfa y beta; y se organizan en filamentos llamados protofilamentos. Los filamentos de actina tienen dimetro intermedio entre los microtbulos y los filamentos intermedios. Se denominan miosinas a las protenas motoras que se unen a los filamentos de tubulina. Los nicos filamentos que se unen a las protenas motoras son los filamentos de actina. El movimiento de organoides asociado con el citoesqueleto no requiere gasto de energa (ATP). 13. Describa la ultraestructura y funciones de cilias y flagelos. Se observar dicha ultraestructura al microscopio ptico? Qu relacin poseen las cilias y los flagelos con el citoesqueleto?.

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14. Existe alguna diferencias entre los flagelos de eucariotas y procariotas?

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Mdulo 6. TRABAJO EXPERIMENTAL

OBJETIVOS GENERALES 1) Conocer las propiedades fsicas y qumicas de las cubiertas celulares de los seres vivos. 2) Observar los diferentes mecanismos de movilidad que se producen en los seres vivos. I. CUBIERTA CELULAR DE CELULAS VEGETALES: PARED CELULAR Objetivos especficos 1) Detectar, en base a diferencias tintoreales, a los componentes de la pared celular de las clulas vegetales observadas. 2) Analizar las causas por las cuales se observan distintos tipos de coloracin en los componentes de la pared celular. Desarrollo de la experiencia Colocar un corte transversal de tallo de verbena en un portaobjeto y agregarle una gota del Reactivo Cloroioduro de Cinc (colorante). Esperar al menos 5 minutos, lavar con agua para eliminar los restos de colorante y observar al microscopio. Esquematizar. Fundamento de la tcnica de coloracin del Reactivo Cloroioduro de Cinc El reactivo cloroioduro de cinc tie la lignina (componente de la pared secundaria) de color amarillo oro intenso, y la celulosa (componente de la pared primaria) de color azul o azul grisceo. Se produce cambio de color por adsorcin en la celulosa. Preparacin del reactivo: Cloruro de Cinc Ioduro de potasio Iodo Agua destilada 30,0 gr 5,0 gr 0,9 gr 15,0 ml

II. OBSERVACIN DE PAREDES CELULARES BACTERIANAS (TINCIN DE GRAM) Materiales necesarios Portaobjetos con frotis bacterianos previamente preparados Aceite de inmersin Cubeta de tinciones Frasco lavador Safranina al 0,5% Cristal violeta al 1% Solucin diluida de yodo (Lugol) Alcohol-acetona 1:1 o alcohol 95 % Fundamento La tcnica es capaz de diferenciar dos grandes grupos de eubacterias: Gram positivas (G+) y Gram negativas (G-). La tincin de Gram requiere cuatro soluciones:

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1. Primer colorante: Es un colorante bsico que en contacto con las clulas cargadas negativamente, reacciona con ellas colorendolas. El ms utilizado es el cristal violeta 2. Solucin mordiente: Fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las clulas. Los mordientes empleados suelen ser sales metlicas, cidos o bases, como, p.ej., el Lugol. 3. Agente decolorante: es un disolvente orgnico, p.ej. alcohol-acetona (1:1). 4. Colorante de contraste: Es un colorante bsico de distinto color que el primer colorante, como, p.ej., la safranina o la fucsina. Los dos grupos bacterianos que distingue esta tcnica difieren en el color con el que finalmente aparecen. Las bacterias Gram (+) se teirn de azul por el cristal violeta y no perdern esta coloracin durante los pasos sucesivos. Las bacterias Gram () perdern la coloracin inicial del cristal violeta en los siguientes pasos y se teirn de rosa debido a la safranina. TCNICA Preparar los frotis bacterianos. Teir con cristal violeta 1 min. Lavar con abundante agua el exceso de colorante. Cubrir con Lugol 1 min. Lavar con agua el exceso de Lugol. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparacin deje de perder color (30 seg) Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente. Teir con safranina 1 min. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste. Secar la preparacin. Examinar al microscopio fijndose sobre todo en el color de cada preparacin. III. DETECCIN DE GLICOPROTEINAS EN LA MEMBRANA CELULAR DE GLBULOS ROJOS DE MAMFEROS Objetivos especficos 1) Estudiar la funcin de reconocimiento del glicoclix de membrana de clulas sanguneas de mamferos, como ejemplo de la diversidad funcional que presentan tales biomolculas en los sistemas biolgicos. 2) Analizar la razn por la cual en las transfusiones de sangre entre seres humanos debe existir compatibilidad sangunea entre el donante y el receptor. Desarrollo de la experiencia Se realizar el mtodo en placa para la subagrupacin del grupo A A) Colocar 1 gota de sangre sobre un portaobjeto. B) Agregar una gota anti-A o anti-B mezclar bien con una varilla de punta fina. C) Observar la aparicin de aglutinacin dentro del minuto. Los siguientes cuadros resumen los posibles resultados: Glbulos rojos problema Anti A + Anti B + Anti AB + + Grupo ABO A B O

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+ IV. MOVIMIENTOS CELULARES Objetivos especficos

AB

1) Observar las diferentes funciones del citoesqueleto en clulas animales y vegetales. 2) Averiguar los componentes del citoesqueleto que participan en cada uno de los movimientos celulares observados y relacionarlos con su funcin biolgica. 3) Establecer relaciones entre los movimientos celulares y el hbitat de los organismos estudiados. Desarrollo de la experiencia 1- Observacin microscpica de ciclosis en Elodea densa (monocotilednea acutica). Colocar entre porta y cubre una porcin de Elodea. Esquematizar. 2- Observacin microscpica de los disitntos movimientos que presentan los organismos unicicelulares acuticos en agua de charco. Esquematizar. 3- Observacin microscpica de cilios en protistas de muestras de agua de charco. Esquematizar. 4- Observacin microscpica de cilios en preparados fijos de Paramecium caudatum (Protista de agua dulce). Esquematizar