Espectrofotometra

Los mtodos espectrofotomtricos se basan en la interaccin materia-energa. La radiacin EM interacciona con la materia produciendo algn efecto, se dice que materia absorbe energa. Se lleva la materia desde un estado fundamental a un estado excitado. Dependiendo de la cantidad de energa aplicada, la interaccin ocurrir a distintos niveles. Con ello se distinguen varios tipos de espectroscopia segn sea el tipo de interaccin con la REM: Para el caso de la espectrofotometra UV-visible la interracin ocurre a nivel de los e- de la capa de valencia existe un cambio en la distribucin electrnica. Absorcin UV-visible : Para que ocurra la absorcin de una radiacin UV-visible en molculas orgnicas, se requiere que la energa absorbida corresponda al salto de un orbital poblado a uno desocupado. En el caso molecular, los niveles no son tan discretos por lo que existe una gamma de frecuencias posibles. Absorcin y Emisin: Cuando se absorbe energa se pasa de un estado fundamental a un estado excitado. Este estado excitado vuelve a su estado basal luego de un cierto periodo de desfase, ocurriendo emisin de radiacin (no siempre puede ocurrir, la energa se puede disiparse de otras formas). Este fenmeno da origen a otro tipo de espectroscopa como la espectroscopia de luminiscencia, fluorescencia. Cada analito molecular tiene un mximo de absorcin en la zona del UV-visible. Atendiendo a esta para cada sustancia y a la intensidad en que se absorbe la radiacin se disea un mtodo para cuantificar la cantidad de sustancia . La cubeta: Recipente de la muestra Procedimiento experimental: Una vez que se tiene la muestra, se obtiene una solucin perfectamente disuelta y transparente que se coloca en la cubeta. En general se ocupan cubetas cuadradas de un cm de paso. Si la disolucin es muy diluida, se ocupa una cubeta ms ancha (mayor posibilidad de paso de luz y absorcin). Se ocupan cubetas de cuarzo (no absorbe radiacin visible ni UV) Los fenmenos pticos (reflexin, dispersin) causan atenuacin del haz que atraviesa la solucin que se deben considerar en la medicin. Para compensar estos efectos, se coloca una solucin blanco que da cuenta de las perdidas anteriores. Esta se conoce como solucin o cubeta de referencia. Absorcin de la Luz La figura ilustra la atenuacin (disminucin de energa por unid. de area) de un haz de radiacin monocromatica, antes y despus de haber atravesado una capa de solucin con un grosor de b cm y una concentracin c. A causa de la interaccin entre los fotones y las partculas absorbentes, la potencia del haz disminuye de Po a P. Se define la transmitancia T de una solucin como la fraccin de radiacin incidente transmitida por la solucin: Y el porcentaje de transmitancia como %T= (P/Po)*100. Los valores de transmitancia pueden ir de 0 a 1, cero si no pasa nada de luz y uno si pasa toda la luz. Se define la absorbancia A de una solucin: La absorbancia toma valores entre 0 e infinito. Obsrvese que la absorbancia aumenta conforme disminuye la transmitancia. Los instrumentos miden transmitancia, es decir, comparan la potencia incidente y emergente. Tienen un procesador integrado que convierte los valores en absorbancia. En general , los instrumentos comunes tienen una escala de absorbancia de 0 a 2. Ley de Beer: De acuerdo a la ley de Beer, la absorbancia esta relacionada linealmente con la concentracin de la especie absorbente (c ) y con la longitud de la trayectoria (b) de la radiacin con el medio absorbente. A es una constante de proporcionalidad denominada absortividad. Si c esta en gr/L, a esta en Lgr -1m-1 y se c esta en mol/L a se denomina absortividad molar y se designa por (unidades de Lmol-1cm-1)

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Anlisis Cuantitativo: Para efectuar el anlisis la radiacin de la fuente luminosa debe ser monocrmatica . Se debe elegir mximo para obtener la mxima sensibilidad y minimizar los errores. El espectrofotmetro contiene un monocromador, que transforma la luz policromtica en monocromtica. Depende de la calidad de este, que tan buena es esta transformacin. Se debe establecer el rango de concentracin donde la relacin con la absorbancia es lineal. Depende de la absorbilidad de la sustancia. Solo debera usarse el rango lineal. Existe un rango de absorbancia ptima para la medicin (alrededor de 0.15-0.7). Esto debido a que en la zona de alta absorbancia se producen desviaciones como consecuencia de que la luz que logra pasar es casi nula y se confunde con el ruido de fondo. Este rango depende de la calidad del aparato, incluso hay algunos que llegan a valores de 3 en absorbancia, pero llevan implcito cierto error. Esto se conoce como desviaciones instrumentales. Tambin pueden ocurrir desviaciones qumicas de la ley de Beer producto de que las especies que forman la muestra interactan y se desva de la linealidad. Esto ocurre a altas concentraciones. Para construir la curva de calibracin se toman valores limite de concentracin en los valores 0.15-0.7 de A y luego se toma un par de puntos ms. Lo ideal es que la curva de calibracin se construya en las mismas condiciones que la muestra (misma matriz). Cuando no procede esto, se puede eliminar el efecto de la matriz si se aplica el Mtodo de Adicin Estndar. Componentes de un Espectrofotmetro 1. 2. Monocromador: Dispersa la luz y selecciona una longitud de onda Colimador: Selecciona de la franja de luz una determinada longitud de onda

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3. 4.

Detector: Transforma los fotones recibidos en una seal elctrica. Fuentes radiante: Origen de luz (lamparas)

General mente se toman dos extremos: Blanco 100% de transmitancia Objeto opaco 0% de transmitancia Luego se toma el valor para la muestra. Fuentes radiantes: Lampara de Tungsteno no tiene una longitud de onda constante en su radiacin, lo que obliga a calibrar el instrumento cada vez que se cambia la longitud de onda. Permite medir solo en el rango del espectro visible. Lmpara de Deuterio Tambin tiene intensidad variable en la longitud de onda lo que obliga a recalibrar el instrumento cada vez que se varia la longitud de onda. Sirve para medir en el rango UV.

Selector de Longitud de Onda Dispositivo que selecciona la longitud de onda que ser utilizada a una banda estrecha que es absorbida por el analito. Con esto se garantiza de que al analito siga la ley de Beer, se asegura una mayor selectividad ya que no es probable que interfieran sustancias con un mximo de absorcin en regiones de otras longitudes de onda y adems se aumenta la sensibilidad ya que una banda estrecha origina una mxima variacin en la absorbancia al variar la concentracin. Monocromador: Dispositivo que dispersa un haz de radiacin policromtico en las longitudes de onda que lo componen, para luego selecciona una longitud de onda determinada del espectro. Filtros de Absorcin y rejilla de reflexin : En este tipo de monocromadores la dispersin angular se origina por la difraccin que se produce en la superficie reflectante. Se genera una dispersin pareja de la luz, es decir, la dispersin de la longitud de onda es independiente de la longitud de onda. Prisma: La difraccin en las dos caras del prisma da lugar a una dispersin angular de la radiacin. Algunas longitudes de onda son ms dispersadas que otras. La dispersin producida por un monocromador de prisma es mayor a longitudes de onda cortas que a longitudes de onda largas. Portamuestras, cubetas: Material Rango UV: cuarzo Rango visible : cuarzo, vidrio, plstico La cubeta debe estar perfectamente limpia (no tocar con las manos) No debe tener burbujas En general, el largo es de 1 cm. Cuando las soluciones son muy diluidas se debe utilizar una cubeta ms ancha para aumentar la sensibilidad (5-10 cm)

Detectores:

Espectrofotmetro de haz simple: Del tipo que se ha visto anteriormente, el problema es la sensibilidad del detector, ya que el detector puede ser ms sensible para una longitud de onda y menos para otras. Este tipo de espectrofotmetro esta bien adecuado para mediciones de absorcin de una sola longitud de onda.

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Espectrofotmetro de doble haz: Para compensar lo anterior, se invent un sistema de doble haz. Un haz pasa por un divisor de haz (espejo en forma de V) formando dos haces en el espacio. Un haz pasa por una celda de referencia y otra por una celda de muestra simultneamente (se requieren dos cubetas), luego los haces pasan por dos fotodetectores idnticos. Lo que se mide al final es la diferencia entre las dos mediciones (se utiliza un amplificador de diferencia). Es decir, cada medicin implica una recalibracin automtica. Con este tipo de instrumentos se puede obtener espectros de absorcin de una sustancia ya que se hace un barrido de las longitudes de onda. Espectrofotmetro de Fotodiodos (arreglo de diodos): La luz separada (mltiples longitudes de onda) se hace incidir en un arreglo de diodos que absorbe a las distintas longitudes de onda. El corazn del instrumento es la disposicin de varios centenares de diodos detectores de silicio que se fabrican de lado a lado sobre un solo chip de silicio. Estos perciben para cada una de las distintas longitudes de onda de manera electrnica mediante un arreglo de circuito. Experimentalmente se coloca primero un blanco y luego la muestra. Se percibe una menor seal de la muestra , es decir, con menos seales en el espectro. Con este instrumento se puede detectar el espectro completo en fraccin de segundos, es mucho mas til. Incluso, la cubeta puede estar en un lugar accesible a la luz ambiente, no se afectan las mediciones.

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