Genetic variation in a member of the laminin gene family affects variation in body composition in Drosophila and humans

Maria De Luca, Michelle Moses Chambers, Krista Casazza, Kerry H. Lok, Gary R. Hunter, Barbara A. Gower and Jos R. Fernndez

BMC Genetics 2008

Parte I. Revisin del estado del conocimiento previo al estudio en cuestin A causa del incremento de la obesidad a nivel mundial, se ha tratado de identificar distintas rutas genticas y mecanismos para controlar el almacenaje de grasas. Para esto se utiliz como modelo D. melanogaster. Al igual que los mamferos los insectos almacenan las grasas en forma de triglicridos, que se agregan como gotas de lpidos en el citosol de la clula. Drosophila comparte muchos de los componentes de la sntesis, degradacin y regulacin de triglicridos con los mamferos. Se ha probado que D. melanogaster es un modelo importante en la identificacin del loci gentico que contribuye a la variacin de rasgos cuantitativos. En los ltimos aos el nmero de regiones cromosmicas que contenan genes que afectaban la obesidad en humano y mamferos ha aumentado. Estudios de Quantitative Traits Loci han identificado regiones amplias en el cromosoma donde se encuentran genes que posiblemente estn relacionados a la composicin corporal.

Parte II. Objetivos del estudio El objetivo este estudio era localizar los loci que podran influerciar la variacin natural del almacenamiento de triglicridos. El mtodo utilizado son estudios de complementacin cuantitativa en Drosophila melanogaster. A base de los resultados obtenidos del estudio de complementacin con Drosophila, se llev a cabo un estudio de asociacin basado en la poblacin humana para investigar el efecto de la variacin natural del gen LAMA5 en la composicin del cuerpo humano.

Parte III. Procedimientos y Resultados a) Anlisis de complementacin con D. melanogaster Se llev a cabo una prueba de complementacin cuantitativa de deficiencias y mutaciones utilizando las cepas Oregon R y Russian 2b. En el experimento se cruzaron hembras vrgenes de ambas cepas con machos con cada deficiencia y cada mutacin. Se examinaron 38 deficiencias que abarcan los intervalos del Quantitative Trait Loci (QTL) de las regiones citolgicas 27B-30D y 63A65A. Ho hubo complementacin de siete de las deficiencias con los fenotipos de almacenamiento de triglicridos de las cepas Oregon R y Russian 2b en la regin QTL 27B-30D. Tampoco ocurri complementacin en cuatro de las deficiencias de la regin QTL 63A-65A. Estos datos revelan que existen

regiones sub-QTL mltiples que contienen al menos un gen que afecta la variacin en el almacenamiento de triglicridos. Para identificar los posibles genes que afectan los niveles de triglicridos se realiz una prueba de complementacin utilizando las cepas Oregon R y Russian 2b y mutantes de los 21 genes que aparecen en el mapa de las regiones sub-QTL. Con cuatro de los genes sometidos a prueba no ocurri complementacin, lo que indica que la diferencia en alelos de ambas cepas contribuyen a la diferencia en el almacenamiento de triglicridos. Los genes son: Ucp4c, CG9135, CG13993, y LanA. b) Anlisis espectrofotomtrico de triglicridos Para la complementacin cuantitativa de deficiencias se midieron cuatro valores de rasgos replicados de cada clase genotpica para cada sexo. Cada clase genotpica se preservo en cuatro tubos replicados que contenan la misma cantidad de individuos del mismo sexo. Luego de 4-5 das se anestesiaron las moscas y se pesaron en una balanza analtica. Se determino el contenido de triglicridos espectrofotomtricamente usando un kit (SigmaTriclyceride Assay Kit). Para la complementacin cuantitativa de los mutantes la nica diferencia fue que se midieron nueve valores de rasgos replicados para cada sexo. Con este anlisis se obtuvo que el gen LanA de Drosophila influencia el almacenamiento de triglicridos, el peso (live weight) y contenido total de protena. Para verificar independientemente el efecto del gen LanA en el almacenamiento de triglicridos, se midio este rasgo en moscas homocigotas para la mutacin LanABG02469 y moscas no mutantes del control. Tambin se investig el efecto de la mutacin en el peso y contenido proteico. Se obtuvo que para moscas machos no hubo una diferencia significativa entre mutantes y el control respecto al peso y el almacenamiento de triglicridos. Sin embargo, si hubo una leve reduccin en el contenido proteico de los mutantes. Por otro lado el efecto en hembras fue significativo; moscas con la mutacin presentaron un almacenamiento menor de triglicridos y peso y contenido de protenas menor al compararla con las moscas del control. c) Estudio humano entre mujeres de etnicidad caucsica y afroamericana Medidas antropomtricas y contenido lpido en el suero sanguneo

Se midi la altura y peso de los individuos en ropa liviana y sin zapatos. Se tomaron muestras de sangre en individuos en ayuna. Se realizaron anlisis para los lpidos del suero sanguneo. Tambin se midi la cantidad total de colesterol, HDLC (high density lipoprotein cholesterol) y triglicridos. El LDL-C (Low density lipoprotein cholesterol) se estim

usando la formula de Friedewald ([colesterol total] [HDL total] 20% de valor de triglicridos = LDL estimado ). Se encontr una diferencia significativa en la masa total de grasa, triglicridos en el suero sanguneo y en HDL-C entre las mujeres euroamericanas y las afro-americanas. Las mujeres euro-americanas tenan un promedio mayor de masa total y triglicridos. Mientras, las afro-americanas tenan un promedio mayor de HDL-C.

Genotipo

Para examinar las asociaciones entre variantes humanas del gen LAMA5 y los rasgos fenotpicos se seleccionaron tres Single Nucleotide Polymorphism (SNP) de este gen: rs659822, rs2297588, and rs944895. Los genotipos de estos polimorfismos se determinaron usando la tecnologa de Pyrosequencing. Se concluy que las variantes del gen humano LAMA5 contribuyen a la variacin en los rasgos antropomtricos, composicin corporal y lpidos en suero sanguneo. Hubo diferencias significativas en masa de grasa total, niveles de triglicridos y HDL-C entre mujeres de origen caucsico y mujeres de origen afroamericano. Se idntico una variacin significativa en el gen LAMA5 rs659822 en mujeres euro-americanas. Mujeres homocigotas para este alelo (CC) presentaban peso y masa total ms bajo que aquellas homocigotas para alelo T. En mujeres afro-americanas el genotipo CC tiene un efecto opuesto fenotpicamente. Las mujeres afro-americanas CC tenan mayor peso y masa total que aquellas TT. Otro SNP que demostr diferencias significativas en afro-americanas fue rs944895. En este SNP un triptfano es convertido a arginina en la laminina G. Mujeres afro-americanas homocigotas para este alelo (CC), en promedio, tenan menos triglicridos en el suero sanguneo y niveles ms bajos de HDLC que aquellas homocigotas para alelo T. La diferencia entre mujeres de ambas etnias se puede deber a la complejidad del proceso que determina la variacin de estos rasgos, tomando en cuenta las interacciones epistticas en alelos del gen LAMA5 y las interacciones con otros genes y con el ambiente. Los variacin fenotpica que se asocia con el gen LAMA5 se puede explicar por los cambios en la estructura de aminocidos en uno de los dominios de la laminina.

Parte IV. Conclusiones Este estudio sobre Drosophila sugiere que el gen LanA no se limita al almacenamiento de triglicridos sino que juega un papel en el peso y contenido de protena del cuerpo de la mosca. Esta investigacin reporta que la variacin natural del gen humano LAMA5, con funcin homologa a gen LanA en Drosophila, contribuye a la diferencia en estos rasgos dentro de la poblacin humana. La consistencia del efecto de este gen, miembro de la familia de genes laminin, en la mosca y el humano apoya un rol de regulacin conservado para este gen y su relacin a la composicin corporal.

Bibliografa De Luca, M., et. al. Genetic variation in a member of the laminin gene family affects variation in body composition in Drosophila and humans. BMC Genetics 2008, 9:52 Lewin, B. (2007) Genes IX. Jones & Barlett Publishers Nelson, D.L., Cox, M.M. (2008) Lehninger Principles of Biochemistry. W.H. Freeman & Co., NY Service P.M., How Good Are Quantitative Complementation Tests? Sci. Aging Knowl. Environ., 24 March 2004 Vol. 2004, Issue 12, p. pe13