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Introduccin a los mtodos espectroscpicos.

UV-Visible Mtodos espectroscpicos Plasma Fluorescencia molecular Absorcin atmica Refractometra Infrarrojo Raman RMN Rayos-x

UMSNH/FQFB/Ciclo 11-12

Espectrofotometra Absorcin-UV-Vis / Anl Inst / JLSH

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Espectrofotometra Absorcin-UV-Vis / Anl Inst / JLSH

REGIN DE TRABAJO DE LA ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN

ULTRAVIOLETA VISIBLE 180 nm 1100 nm

ABSORCIN

EMISIN

ATMICA

MOLECULAR

ATMICA

MOLECULAR

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Espectrofotometra Absorcin-UV-Vis / Anl Inst / JLSH

Espectrofotometra de absorcin.
La espectrofotometra de absorcin es un mtodo de anlisis cuantitativo y cualitativo que se basa en medir la cantidad de luz absorbida por una sustancia (muestra).

Cuando le aplicamos luz visible a una sustancia, si no absorbe ninguna , la veremos transparente e incolora. Cuando la absorcin ocurre a longitudes de onda que el ojo humano no percibe la veremos incolora. Cuando se absorbe toda la luz se ver negra y si absorbe selectivamente una sola longitud de onda la veremos coloreada.

La cantidad de luz absorbida a una longitud de onda en particular depender del tipo de sustancia y de la cantidad de tomos o molculas presentes en el trayecto del haz de luz.
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En este mtodo se hace pasar a travs de la muestra un haz de longitud de onda definida (Se usan filtros y luz visible), se mide la absorcin mediante un instrumento llamado fotocolormetro o un espectrofotmetro en donde la longitud de onda se obtiene usando rejillas de difraccin o un prisma, se puede usar luz UV o Infrarroja. El instrumento se calibra previamente para que de una lectura de cero de A usando el solvente puro y 100% de T bloqueando el paso de la luz. Cuando la sustancia que se quiere analizar no absorbe luz se hace una reaccin qumica para formar un producto que si absorba.

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Anlisis cualitativo: Se requiere de un espectrofotmetro. Se mide la cantidad de luz absorbida por la muestra en un intervalo apropiado de ; la grfica resultante (A vs ) se llama espectro de absorcin y es caracterstico para cada sustancia. La muestra se identifica por comparacin del espectro de absorcin contra el de una serie de substancias puras o interpretndolo. La interpretacin consiste en asignar una a cada banda de absorcin el grupo funcional que la produjo (grupo cromforo) en funcin de su posicin, forma e intensidad. Para las sustancias orgnicas ste mtodo tiene una utilidad muy limitada cuando se usa luz visible o ultravioleta; (es mucho ms selectivo cuando se usa luz infrarroja).

Absorcin emisin.

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Anlisis cuantitativo: Se mide la cantidad de luz absorbida por la muestra a una especfica. Esta es directamente proporcional a la concentracin de la sustancia, la cual podemos obtener por comparacin con la absorcin de uno o varios estndares. La a la que se realizan las mediciones generalmente es aquella donde la sustancia presenta su mxima absorcin (max, la cual se obtiene de su espectro) y en los mtodos analticos de rutina queda en la regin visible o UV.

Emisin.

Si se mide la emisin, la relacin es lineal.

C
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% Luz Transmitida.

Si se mide la transmisin la relacin es logartmica.

C
Las cantidades para medir la absorcin se llama absorbancia y son funcin logartmica del porcentaje de luz transmitida.

A.

C
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Cuando se usan varios estndares se hace una grfica de lectura contra concentracin. Esta grfica se llama curva de calibracin y es el mejor mtodo de anlisis. Tericamente debe de dar una lnea recta pero no siempre es as; si se da el caso, este es el nico mtodo de anlisis que dar resultados exactos. Las clases de sustancias que pueden analizarse con luz visible o UV son los compuestos orgnicos que contengan enlaces conjugados, as como muchos otros compuestos inorgnicos. Con luz IR, cualquier compuesto orgnico. Los anlisis de rutina se realizan con luz visible, ya que los equipos que permiten trabajar con luz UV e IR son muy costosos, sobre todo los IR.

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CURVA DE CALIBRACION
0.6 0.5 0.4
ABSORCION

0.3 0.2 0.1 0 0 0.1 0.2 0.3 0.4


%C

0.5

0.6

0.7

0.8

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Aplicaciones:
Anlisis cuantitativos de sustancias orgnicas e inorgnicas. Identificacin de sustancias desconocidas por comparacin del espectro con un estndar. Pruebas enzimticas. Determinacin de velocidades de reaccin. Anlisis qumicos, clnicos, farmacuticos, bromatolgicos (alimentos) y ambientales. Para detectar el paso de una sustancia en algunos mtodos de separacin (HPLC y CE). Anlisis remoto ambiental e industrial.
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Cantidad y estado fsico de la muestra.


La cantidad de muestra puede ser muy poca (fracciones de mL en lquidos) o g (muestra slidas) dependiendo del equipo. En los equipos varia entre 0.5-10 mL. La muestra puede ser slida, lquida o gaseosa, el requisito es que sea transparente y est libre de turbidez. Si la muestra es opaca puede medirse con un equipo especial para reflectancia (se mide la luz reflejada). Aunque lo ms comn es trabajar con soluciones.

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Preparacin de la muestra y tiempo de anlisis.


Los slidos deben disolverse en un solvente que no absorba a la de medicin. Si la muestra es incolora se hace una reaccin para formar un compuesto coloreado (si la medicin es en el visible). Si hay impurezas que interfieran o turbidez debe realizarse un tratamiento previo (filtracin, precipitacin, etc.). El material de vidrio debe estar escrupulosamente limpio. El tiempo de anlisis puede varias entre 2-30 minutos por muestra si se usa un instrumento manual. Con equipo automatizado puede llevarse unos cuantos segundos (aunque, si la muestra requiere de un tratamiento especial, el anlisis puede durar varias horas).

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Ventajas.
Alta precisin y exactitud, sobre todo si el anlisis es por curva de calibracin. Rapidez. El costo de los equipos es relativamente bajo (para el caso de anlisis en el visible).

Desventajas y limitaciones.
Las lecturas de A deben ser menores de 2. El intervalo ptimo de C vara entre 0.01-100 %. Los compuestos fotosensibles son difciles de analizar. La turbidez de la muestra produce dispersin de la luz (lecturas errneas). En anlisis de mezclas, si las donde los compuestos presentan su mxima absorcin estn muy prximas se reduce la precisin de los resultados. Los lmites de deteccin son relativamente altos (no permiten medir C muy bajas). Anlisis muy susceptibles a interferencias de otros compuestos que absorban a cercanas.
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FUNDAMENTOS DE ESPECTROFOTOMETRA. La espectrofotometra es cualquier procedimiento que se base en utilizar la luz para obtener la C de una sustancia (o identificarla): Espectrofotometra de absorcin, en la cual se hace pasar un haz de luz a travs de la muestra y se mide la cantidad de luz que absorbi. Espectrofotometra de emisin, en esta se mide la cantidad de luz producida por la muestra al aplicarle energa. El anlisis cuantitativo se basa en que la cantidad de luz absorbida (o emitida) es directamente proporcional a la C, el cualitativo en la comparacin de las caractersticas de absorcin (o emisin) de la muestra contra sustancias conocidas.

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Cmo es la Absorcin de la luz (energa radiante) y su interaccin con la materia a nivel atmico o molecular?.

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Absorcin de la luz.

Al recibir un fotn de la adecuada, los electrones de la capa de valencia pasan de un nivel a otro superior. El mover la masa del electrn de un nivel a otro consume energa y esta es la causa de la absorcin. El estado basal es la configuracin electrnica de mnima energa, mientras que el estado excitado es energticamente desfavorable. Esto da lugar a que los electrones regresen a su configuracin del estado basal y emitan el exceso de energa como un fotn, pero de mayor a la original debido a que parte de la energa se gast en mover al electrn.
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A) ORBITALES

B) TIPO DE TRANSICIONES

C) DEDUCCIN DE LA LEY DE BEER

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Las leyes que rigen la absorcin de la luz. El color de una sustancia se debe al hecho de que absorbe selectivamente la luz de ciertas . Si una solucin no absorbe, aparece transparente. Si absorbe completamente la luz, la veremos negra. Pero si absorbe solamente una parte de la energa radiante que la atraviesa, a definidas, la veremos coloreada en un tono complementario al que absorbi.

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La absorcin de la luz por una solucin est relacionada a la cantidad de energa luminosa (radiante) gastada en la excitacin de los electrones de las molculas que contiene. A mayor facilidad de excitacin de los electrones, la energa gastada en este proceso ser menor. Entre los compuestos inorgnicos, las sustancias coloreadas son principalmente aquellas que contienen elementos de los subgrupos secundarios con los orbitales electrnicos incompletos (Fe, Cr, Co). Entre las sustancias orgnicas, el requisito principal para que ocurra absorcin es la presencia de dobles ligaduras conjugadas. La y la intensidad de la absorcin se modifican por la presencia de sustituyentes donadores de electrones (-NH2, -OH, etc.), aceptores de electrones (-NO2, -SO3H, etc.) y algunos otros grupos funcionales.

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En los primeros experimentos se intent encontrar la correlacin entre la intensidad del color con: El espesor de la capa de la solucin. Esto dio lugar a la ley de Bouguer-Lambert: Las capas de espesores iguales de una misma sustancia, bajo las mismas condiciones, siempre absorben fracciones iguales de un flujo luminoso incidente. La concentracin, lo que dio lugar a la ley de Beer: En condiciones iguales, la cantidad de luz absorbida por una solucin es directamente proporcional a la concentracin de la sustancia absorbente.

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Generalizando, la cantidad de luz absorbida es directamente proporcional al nmero de molculas absorbentes que se encuentran en el trayecto del flujo luminoso. De que factores depende este nmero?:

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Del espesor de la capa de la solucin: a mayor


espesor, habr mayor nmero de molculas.

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De la concentracin: a mayor concentracin tambin


habr mayor nmero de molculas.

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A partir de aqu se obtiene la ley de Bouguer, Lambert y Beer, que relaciona los cambios de absorbancia debidos a los cambios en el espesor de la capa absorbente y la concentracin. A = a b c. Donde: A = Absorbancia. a = Absortividad. Es una constante que depende de la longitud de onda de la luz incidente, la naturaleza de la sustancia absorbente y la temperatura de la solucin. b = Longitud del trayecto del flujo luminoso a travs de la muestra (cm). c = Concentracin.

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Si la concentracin se expresa en g-mol / L, nos queda:

A = b c.
Donde se llama coeficiente de extincin molar.

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PRDIDAS POR REFLEXIN Y DISPERSIN.


b

Po Io Ir

P It

Ia

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Po Io Ir Ia

P It

Cuando se hace incidir un flujo luminoso Io sobre una celda que contenga una solucin, una parte de l ( Ir ) ser reflejada por la superficie de la celda, otra parte ( Ia ) ser absorbida por la solucin y otra parte ( It ) pasar a travs de la celda. Estas cantidades se relacionan de la siguiente manera:

I o = I r + I a + It

(1).

En la prctica, Ir es despreciable y puede despreciarse si se utiliza la misma celda para todas las determinaciones. Por tanto, la ecuacin nos queda:

Io = Ia+It
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(2).

Transmitancia: Como consecuencia de la interaccin de la radiacin


electromagntica con la materia, la potencia del haz disminuye de Io a It. La transmitancia de la solucin es la fraccin de radiacin incidente transmitida por la solucin. (Por lo general, la T se expresa en porcentaje).

T = P / Po = It / Io.
%T = P / Po X 100 = It / Io X 100.
Absorbancia: Es la cantidad de radiacin incidente absorbida ( Ia ) y
se define por la ecuacin:

A = - log T = log P o / P = log I o / I t.

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Nombre .* Absorbancia.

Smbolo.* A.

Definicin. Log (Io / It) = bc Log (100 / %T)

Alterno u obsoleto. Densidad ptica. D.O.

Por ciento de Transmitancia. Transmitancia. Absortividad. Absortividad molar. Espesor de celda.

% T.

100 (It / Io) 100 / 10A

Por ciento de transmisin. Transmisin. Coeficiente de extincin. Coeficiente de extincin molar. k l

T. a.** Am, . *** b.

It / Io A / (bc) A / (bc), c en moles / L La distancia entre paredes Internas de la celda (cm).


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*Terminologa recomendada por la American Chemical Society (ACS) (Anal. Chem.,1990, 62, 91).

**C puede expresarse en g/L o en otras unidades de concentracin; b puede expresarse en cm o en otras unidades de longitud.

***C se expresa en mol/L; b se expresa en cm.

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CAUSAS DE LA DESVIACIN DE LA LEY DE BEER.


Elevada concentracin. Equilibrio qumico asimtrico: Variacin del pH. Presencia de electrolitos (Na+, Cl-, K+). Formacin de complejos. Mala seleccin de la longitud de onda. HA

H + + A -.

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P-1.

Transformar los siguientes datos de absorbancia en porciento de transmitancia. a) 0.375; b) 1.325; c) 0.012

P-2.

Transformar los siguientes datos de porciento de transmitancia en absorbancia. b) 92.1; c) 1.75

a) 33.6;

P-3.

Calcular el porciento de transmitancia de disoluciones que presentan la mitad de los valores de absorbancia que aparecen en el problema 1. Calcular la absorbancia de disoluciones que presentan la mitad de los valores de porciento de transmitancia que aparecen en el problema 2.

P4.

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P-5. Utilizar los datos siguientes para calcular los valores faltantes. Cuando sea necesario, supngase que el peso molecular de la especie qumica que absorbe es de 280.

A a) b) c) d) 0.877 0.296

%T

b (cm) 2.5

c (M) 4.41x10-4 6.91x10-3 mg/L ppm g/ L 3.00x10-4

19.6

1.5 0.5

0.250

84.2

7.85x102

mg/100mL

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Una disolucin de 4.14 x10 -3 M en X present una transmitancia de 0.126 cuando se midi en una cubeta de 2.00 cm. Qu concentracin de X se necesitara para que la transmitancia aumente tres veces cuando se utiliza una cubeta de 1.00 cm?

P-6.

P-7.
a

Expresar las siguientes A en trminos de %T. b 0.918 c 0.379 d 0.261 e 0.485 f 0.072

0.0510

P-8.
a

convertir los siguientes datos de T en A. b 0.567 % c 32.8 % d 3.58 % e 0.085 % f 53.8 %

25.5 %

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P-9.
del P-7.

Calcular el %T de las disoluciones cuyas A son el doble de las

P-10.
del P-8.

Calcular la A de las disoluciones cuyos %T son la mitad de los

Una disolucin que contiene 4.48 ppm de KMnO4 presenta una T de 0.309 en una cubeta de 1 cm a 520 nm. Calcular la absortividad molar del KMnO4.

P-11.

P-12.

Una solucin con una concentracin de 2x10-4 M tiene una A de 1 a 320 nm, en una celda de 1 cm. Calcular: a) Absortividad molar a 320 nm. b) Transmitancia de la solucin. c) Transmitancia de una solucin 4x10-4 M.

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P-13.

Una substancia colorida con una absortividad molar de 14,000

L/cm mol la max. Calcular la concentracin de una solucin que presenta una A de 0.85 usando una celda de 1 cm.

P-14.

Una muestra particular de una solucin de una sustancia colorida que se sabe sigue la Ley de Beer, muestra un 80 % de T cuando se mide en una celda de 1 cm. a) Calcular el % T para una solucin del doble de concentracin usando la misma celda. b) Cul debe ser la longitud de la celda para obtener la misma T para la solucin que contiene el doble de concentracin. c) Calcular el % T de la solucin original cuando esta est contenida en una celda de 0.5 cm de longitud. d) Si la concentracin original es de 0.005 %. Cul es el valor de a.

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P-15.

Una muestra de 500 mg de un compuesto colorido X se disuelve y se lleva a 500 mL. Una alcuota de esta solucin presenta una A de 0.9 a 400 nm (max) en una celda de 1 cm. 10 mg del compuesto X puro se disuleve en 1 L de agua y la solucin presenta una A de 0.3 en una celda de 0.1 cm. Cul es el % de X en la primera muestra.

P-16.

Con los datos siguientes realizar una curva de calibracin y encontrar la concentracin de Y con A =0.5. Y (mg) A 1 0.26 2 0.44 3 0.54 4 0.61

P-17.

Se ha demostrado que la cafena (C8H10O2N4H2O) tiene una absorbancia igual a 0.51 para una concentracin de 1mg/100mL a 272 nm. Una mezcla de 2.5 g de una determinada marca de caf soluble, se mezcla con agua hasta un volumen de 500 mL; 25 mL de esta solucin se sometieron a un proceso de clarificacin y se afor a 500 mL y esta solucin present una absorbancia de 0.415 a 272 nm. a) Calcular la absortividad molar. b) Calcular la cantidad de cafena por libra de caf.
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Longitud de la celda 1 cm. Espectrofotometra Absorcin-UV-Vis /


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