MEDIOS DE CULTIVO

Introduccin Por su minsculo tamao, los microorganismos no pueden estudiarse como individuos, sino que es necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos, es decir, favorecer su multiplicacin in vitro, en ambientes especiales que proporcionen que las condiciones semejantes a las de sus hbitats naturales. Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiologa general por lo que un control en su fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.

OBJETIVOS Lavar, preparar y envolver correctamente el material que se someter a esterilizacin. Seleccionar los mtodos de esterilizacin adecuados para las diversas necesidades del laboratorio de microbiologa. Comprobar la efectividad del proceso de esterilizacin. Elaborar adecuadamente los medios de cultivo deshidratados y por componentes. Envasar los medios de cultivo de manera adecuada en los diferentes recipientes de acuerdo al uso que se les dar. Relacionar la composicin de los diversos medios de cultivo con sus caractersticas y aplicaciones.

Preparacin de caldo nutritivo Caldo nutritivo a lo pobre: Materiales HCl al 20% NaOH al 20% Agua Botellita Agitador Cinta de tornasol Extracto de carne 0.3% Peptona 1% NaCl 0.5%

Ajustamiento del agua respecto al su PH En una botellita agregamos 100 ml de agua potable; por ser agua potable es necesario ajustar su PH ya que tiene elevada concentracin de minerales y compuestos qumicos siendo poco adecuado para preparar el caldo nutritivo. A los 100ml de agua agregar HCl al 20% y NaOH al 20% para ajustar el PH. Despus de agregar los compuestos qumicos que ayudara a regularizar el PH del agua verificamos el resultado haciendo uso del papel de tornasol.

Una vez lista el agua agregar los ingredientes para preparar el caldo a lo pobre agregando ingrediente por ingrediente. Agregar los ingredientes para la preparacin del caldo nutritivo. 0.5 g de NaCl 1g de peptona 0.3 g de extracto de carne

Una vez agregado todos estos ingredientes ayudar a mover con un agitador. Una vez terminado con el proceso de agregar los componentes, colocamos un tapn de algodn en el extremo superior de la botellita, cubrirlo con papel y asegurarlo con pabilo. Esterilizar Esterilizar en autoclave a 121C, 15libras de presin durante 15 minutos.

Caldo nutritivo a lo rico: Materiales HCl al 20% NaOH al 20% Agua Botellita Agitador Cinta de tornasol Concentrado 0.8 g

Ajustamiento del agua respecto al su PH En una botellita agregamos 100 ml de agua potable; por ser agua potable es necesario ajustar su PH ya que tiene elevada concentracin de minerales y compuestos qumicos siendo poco adecuado para preparar el caldo nutritivo. A los 100ml de agua agregar HCl al 20% y NaOH al 20% para ajustar el PH. Despus de agregar los compuestos qumicos que ayudara a regularizar el PH del agua verificamos el resultado haciendo uso del papel de tornasol. Luego agregamos: Una vez lista el agua agregar los 0.8 gramos del concentrado, enseguida movemos con el agitador. Una vez terminado con el proceso de agregar los componentes, colocamos un tapn de algodn en el extremo superior de la botellita, cubrirlo con papel y asegurarlo con pabilo.

Esterilizar Esterilizar en autoclave a 121C, 15libras de presin durante 15 minutos.

Metodologa para servir medios de cultivo

Materiales Placas Petri Mechero de alcohol fosforos Ron de quemar Alcohol Algodn Campana de Durham Gradillas

Procedimiento Fundir los medios solidos al calor, enfriar a 50C. Acondicionar el lugar donde se va a ejecutar el trabajo desinfectando con alcohol. Enseguida encendemos el mechero de alcohol con el ron de quemar y frente la llama del mechero servimos en placas Petri, Campana de Durham, tubos de ensayo previamente esterilizados. Dejar solidificar, en el caso de los tubos de ensayo y las campanas de Durham ubicarlas en las en las gradillas. Una vez terminado con el proceso de siembra colocamos un tapn de algodn en el extremo superior de los tubos de ensayo y las campanas de Durham cubrirlo con papel y asegurarlo con pabilo. Acondicionar l placa Petri. Finalmente enviamos los medios de cultivo servido, previamente acondicionado a incubar durante 24 horas a temperaturas de 30C.

CONCLUSIONES
Por medio de esta prctica al investigar la teora y realizar la preparacin
de un medio de cultivo, se logr la elaboracin adecuada de los mismos, as como la seleccin apropiada para el uso que se les dar posteriormente a los medios del mtodo de esterilizacin que eliminara los restos microbianos que pudiesen haber quedado en el medio de cultivo ya que si existe alguno de estos, ya no sera adecuado para el uso que se le pudiera llegar a dar.

Los medios qumicamente definidos se preparan aadiendo al agua

destilada cantidades precisas de compuestos orgnicos o inorgnicos altamente purificados. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio.

Hemos aprendido a reconocer y clasificar medios de cultivo por su

origen animal, vegetal y mineral.

Quevedo F. 1991. Garanta de la Calidad de los Laboratorios de Microbiologa Alimentaria. Organizacin Panamericana de la Salud. Harla S.A. Mxico D.F. Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiologa. Manual de Mtodos Generales (2da edicin). Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela. Dugas Beverly Tratado de Enfermera Prctica Nueva Editorial Interamericana Mxico 1999.