cloruro de plata (Ag/AgCl).

Para la medicin del potencial electroqumico de la solucin se utiliz el equipo pH 211 de Hanna instruments, con un electrodo de referencia de Ag/AgCl. El recuento de bacterias se realiz en un microscopio marca Nikon modelo Labophot, equipado con filtro para contraste de fase. El aumento de ocular fue de 10X mientras que el objetivo de 40X. El recuento se realiz sobre una cmara Petroff-Hausser de 0,02mm de profundidad.

2.2. Mtodos.
2.2.1. Biolixiviacin de pirita.

Los experimentos de biolixiviacin de pirita se llevaron a cabo en matraces de 250 ml a 100rpm de agitacin aproximadamente a 30C de temperatura. La cantidad de pirita en solucin fue de 0,5% p/v. Al medio de cultivo MC pH 1,6 se le agreg sulfato frrico con el fin de ajustar la concentracin de in frrico inicial a 2.4, 5 y 1.8 g/l segn el caso. Posteriormente el medio fue esterilizado por filtracin. El inculo de At. ferrooxidans proviene de un cultivo realizado con 4,5ml de una solucin de sulfato ferroso al 33% (concentracin final 3g/l) esterilizada previamente por filtracin y 5ml de un cultivo anterior o de mantencin de la cepa bacteriana, todo en un volumen final de 100ml con medio MC pH 1,6 estril. El cultivo se llev a agitacin a 100rpm y temperatura de 30C por 48 horas. La concentracin de bacterias alcanzada transcurrido este tiempo es aproximadamente 2x108 bacterias/ml. Para el caso de las cepas nativas provenientes de Minera Escondida, se coloc en un matraz estril 20g de mineral granulado proveniente de la mina sin esterilizar con 200ml de PLS. Se llev a agitacin a 100rpm y temperatura de 30C por aproximadamente una semana o hasta que el potencial de la solucin alcanz los 600mV vs Ag/AgCl. Para recuperar las clulas se filtr el cultivo bajo vaco en un equipo de filtracin con una membrana Millipore de nitrocelulosa de 0,2um de dimetro. Una vez filtrado el total de la solucin, se lav la membrana con un pequeo volumen de medio MC pH 1,6 sin desmontar del equipo de filtracin. Finalmente la membrana utilizada se deposit en el medio de cultivo MC pH 1,6 con in frrico en solucin y se agit vigorosamente para traspasar la mayor cantidad de clulas desde la membrana hacia el medio. En un matraz de 250ml previamente esterilizado se colocaron 40ml de medio de cultivo MC pH 1,6 con in frrico en solucin, luego se agregaron 10ml del inculo correspondiente y finalmente 0,25g de pirita sin esterilizar. La concentracin inicial de microorganismos en solucin es de 2x108 bacterias/ml. El experimento fue programado para la toma de siete muestras en un transcurso de 600 horas. Cada muestra est conformada por un control estril y un ensayo de biolixiviacin en 14