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1. Duplicacin del ADN (Replicacin) y Sntesis de Protenas 2. 1- La duplicacin del ADN.

Necesidad Si lleva la informacin gentica es necesario que se duplique para poder repartirla a las clulas hijas. Desde principios del S. XX, se sabe que los cromosomas llevan la informacin gentica, cmo se sabe?: El espermatozoide slo pasa su ncleo al vulo, en el ncleo estn los cromosomas. Si los cromosomas estn formados por protenas y ADN , quin de los dos lleva la informacin gentica? Una experiencia que ayud a resolver esta incgnita, fue la experiencia realizada por Griffith (1928) y explicada por Avery, MacLeod y McCarthy en 1952: 3. Explicacin: Las bacterias R, se transforman en S y producen la muerte del ratn. Cmo? Al calentar se destruyen las protenas pero no el ADN por lo que fragmentos de ADN de las S pueden entrar en las R y las transforman en S el ADN lleva la informacin gentica. 4. 2- Primeras hiptesis sobre la duplicacin del ADN Semiconservativa Conservativa Dispersiva 5. 3- Experimento de Meselson y Sthal Para demostrar la hiptesis correcta, Meselson y Sthal en 1957 , trabajaron con bacterias Escherichia coli (E. coli). - Cultivaron las bacterias en un medio con N 15 o pesado durante un tiempo por lo que las bacterias que se van obteniendo tendrn ADN pesado; al hacer la centrifugacin se obtendra lo siguiente: 6. - Pasaron unas bacterias del medio pesado a medio ligero (con N 14 ), durante media hora (tiempo de una duplicacin), hicieron la centrifugacin y obtuvieron lo siguiente Se obtuvieron ADNs semiligeros; con este resultado se descarta la hiptesis conservativa . - Repitieron la experiencia, pero durante una hora (tiempo de dos duplicaciones) obtuvieron la siguiente imagen Se obtuvieron ADNs semiligeros y ligeros; con este resultado se descarta la hiptesis dispersiva . 7. 8. trifosfato + hebra patrn no se unan nucletidos complementarios. - ADN polimerasa + Mg +2 + nucletidos trifosfato + hebra patrn + un cebador (fragmento complementario) se unan nucletidos complementarios a la hebra patrn, pero siempre siguiendo la direccin de crecimiento 5 3. 2-SENTIDO DEL CRECIMIENTO DE LAS NUEVAS HEBRAS 1- La sntesis del ADN in vitro Kornberg (discpulo de Ochoa), en 1956, aisl la enzima ADN-polimerasa (enzima capaz de unir nucletidos de ADN in vitro ), realiz la siguiente experiencia: - ADN polimerasa + Mg +2 + nucletidos 9. 2. Problema de la direccin en la duplicacin del ADN in vivo Conclusin: La ADN polimerasa : necesita un cebador para continuar la copia complementaria. - siempre une nucletidos siguiendo el crecimiento de la hebra en direccin 5 3. Cairns en 1963: E. coli en un medio con timina marcada con tritio (H 3 ), que emite partculas que son captadas por pelcula fotogrfica. 10. Cada 2 3 depositaba el cultivo sobre la placa fotogrfica. Observndose las siguientes imgenes: Las imgenes que se ven son las hebras complementarias que se estn formando.

11. - Confirma la hiptesis semiconservativa sobre la duplicacin. - La duplicacin empieza en un punto y se dirige hacia los extremos (es bidireccional) Existen dos problemas: - La ADN polimerasa necesita cebador. - No hay ninguna ADNp, que produzca el crecimiento de la hebra en direccin 3 5. 12. Okazaki en 1968 descubri unos fragmentos de cido nucleico formados por unos 50 nucletidos de ARN seguidos de unos 1000 2000 nucletidos de ADN (Fragmentos de OKazaki). Primero actuara una ARNp que no necesita cebador , uniendo los nucletidos de ARN, que servirn de cebador para que pueda continuar la ADNp. (siempre en direccin 5 3). Por detrs, ir ocurriendo lo mismo pero a fragmentos. Cada fragmento crece de 5 3). 13. 3-Mecanismo de la duplicacin del ADN El proceso es distinto en procariotas (bacterias) y eucariotas. En bacterias: Empieza en una seal de inicio (secuencia determinada de nucletidos). Actan enzimas, que abren, sujetan la hlice y producen cortes en ella para evitar superespiralizaciones (helicasas, girasas). 14. En ambas hebras, a partir del p de inicio y en direccin 5 3, se van uniendo, por la accin de la ARNp, unos 40 nucletidos de ARN (cebador), unindose a continuacin nucletidos de ADN por la accin de la ADNp, formndose la hebra continua o conductora . 15. Por detrs de cada hebra continua y a una distancia de 1000 2000 nucletidos, se irn uniendo unos 50 nucletidos de ARN complementarios por la accin de la ARNp, despus actuar una ADNp, que ir uniendo desoxirribonucletidos (fragmentos de Okazaki). Este proceso se ir repitiendo formndose as la hebra discontinua o retardada . La ADNp corta los segmentos de ARN, y une nucletidos cubriendo los huecos. Una ADN ligasa unir los fragmentos. 16. En eucariotas: ADN ms largo y unido a histonas, el proceso sera muy lento. Varios ojos o burbujas de replicacin o replicones. 17. 1-Teora un gen un enzima: Garrod en 1901, estudi la alcaptonuria (ennegrecimiento de cartlagos y de la orina), producida por la falta de un enzima. Se transmita dentro de una familia (enfermedad hereditaria), por lo tanto era debida a la informacin gentica. En esa poca se empiezan a conocer los genes, y ms adelante ya se saba que los genes son ADN. Se deduce: La sntesis de los enzimas (protenas) depende del ADN. SNTESIS DE PROTENAS 18. Beadle y Tatum en 1948, realizaron unas experiencias irradiando con UV un hongo. UV protenas, no las altera UV ADN lo altera Al irradiar con UV el hongo, no sintetiza determinados enzimas (protenas) Se deduce: si los UV no destruyen a las protenas, pero alteran al ADN y al alterarlo no se han sintetizado las protenas, est clara la relacin entre ADN y protenas . (gen enzima) 19. 2- La expresin del mensaje gentico Beadle y Tatum: paralelismo gen-enzima. Watson y Crick teora colinearidad : hay una correspondencia entre el orden de los nucletidos de un gen y la secuencia de los aas de la protena que codifica ese gen. El proceso se realiza en dos etapas: Transcripcin: paso del mensaje del ADN, formndose un ARNm complementario al ADN (en el

ncleo en las eucariotas). Traduccin: formacin de la protena siguiendo el mensaje del ARNm (en los ribosomas). transcripcin traduccin ADN ARNm protenas 20. 1- El mecanismo de la transcripcin Proceso de obtencin de cualquier ARN con la informacin del ADN. En la sntesis de protenas se obtiene el ARNm. Intervienen: ADN Ribonucletidos tri-P de A, G, C, y U ARN polimerasas cofactores El proceso es distinto en procariotas y eucariotas. 21. 22. Proceso en procariotas: Iniciacin: Marcada por unas determinadas secuencias ( secuencia de consenso) La ARNp se une a la hebra de ADN Se coloca el primer ribonucletido complementario al ADN. 23. Elongacin: Sigue creciendo la cadena en direccin 5 3 con la actuacin de la ARNp. (40 nucletidos por seg.) ADN 3 TACGCTACGGCCACT 5 ARNm 5 AUGCGAUGCCGGUGA 3 Finalizacin: Marcada por determinadas secuencias, el ARNm y la ARNp se desprenden del ADN. 24. Proceso en eucariotas: Iniciacin. Igual que en procariotas Alargamiento o elongacin. Cuando se han unido unos 30 nucletidos, en el extremo 5 se aade la metil guanosn trifosfato (caperuza) Finalizacin. Marcada por una secuencia, a continuacin en el extremo 3 se aaden unos 200 nucletidos de Adenina (cola poliA); se ha formado un pre-ARNm. Maduracin. 25. Maduracin: Como el ADN de eucariotas, tiene segmentos sin informacin, estos tambin se han copiado, distinguindose en el pre-ARNm fragmentos con informacin (exones) y fragmentos sin informacin (intrones). - Una vez que se tiene la informacin en el ARNm, se tiene que producir la traduccin, pero para ello es necesario conocer la relacin existente entre nucletidos y aminocidos, es la CLAVE GENTICA o CDIGO GENTICO En la maduracin hay enzimas que cortan y separan los intrones, y otros (ARNligasas) que unen los exones. 26. 3.La Clave Gentica Se consigui encontrar gracias a los siguientes descubrimientos: Severo Ochoa y otros (1955) aislaron la polinucletido fosforilasa (enzima capaz de unir nucletidos sin hebra patrn): Niremberg (1961), utilizando molculas de poliU, realiz la siguiente experiencia: Dedujo: hay colinearidad entre Uracilo y Fenilalanina. - Si repeta la experiencia con poliC, slo se unan los aminocidos en el tubo de la Prolina, por lo tanto hay colinearidad Citosina y Prolina. formaron un poliU (UUUUUUUU). Cdigo que establece la relacin entre nucletidos y aminocidos 27. Si la clave gentica fuera de pares de nucletidos: 4 2 , slo se podran codificar 16 aas. Si la clave fuera de trios (tripletes) 4 3 =64, por lo tanto es n suficiente. Caractersticas del cdigo o clave gentica: Es de tripletes: cada aa es codificado por tripletes de nucletidos. Si la colinearidad fuera: cada nucletido codifica a un aminocido Slo se podran codificar 4 aa, y son 20. Problema? -Es universal: el mismo para todos los seres vivos. -Es degenerado: varios tripletes codifican a un mismo aa. -Hay tripletes que no codifican a ningn aa (tripletes sin sentido)

28. 4.La traduccin o biosntesis de las protenas En la biosntesis de protenas se distinguen tres etapas: Activacin de los aas. Unin de los aa especfico a su ARNt (depender del triplete anticodn del ARNt), por la accin de la enzima aminoacil-ARNtsintetasa Traduccin: Iniciacin de la sntesis Alargamiento Finalizacin Asociacin de varias cadenas 29. Proceso de la traduccin o biosntesis de las protenas. 30. Traduccin: Iniciacin de la sntesis: se une el ARNm a la subunidad menor del ribosoma. se desplaza all el 1 er aminoacil-ARNt complementario al 1 er triplete codn del mensajero, que siempre es AUG, unindose a continuacin la subunidad mayor del ribosoma (el primer aminoacilARNt queda colocado en el centro P del ribosoma) 31. Elongacin o alargamiento: A continuacin se coloca el 2 aminoacil-ARNt enfrente del 2 codn del mensajero, quedando colocado en el centro A del ribosoma Entre los dos aas se establece el enlace peptdico Se libera el 1 er ARNt Se produce la translocacin ribosomal, el ribosoma se desplaza un codn sobre el mensajero, con lo que el dipeptidil-ARNt queda situado en el centro P (peptidil), quedando libre el centro A (aceptor) 32. A continuacin llegar al centro A el siguiente aminoacil-ARNt complementario al 3er codn. Se establecer el enlace peptdico entre el dipeptidil-ARNt y el aminoacil-ARNt Se liberar el 2 ARNt, siguiente translocacin, y seguir el proceso hasta Finalizacin: Se producir cuando aparezca un triplete sin sentido. Se liberarn la cadena peptdica, las subunidades del ribosoma y el ARNm 33. - Asociacin de varias cadenas: Al tiempo que se van uniendo los aas, la cadena peptdica va adoptando su estructura: 2 aria , 3 aria , o 4 aria (en algunos casos se unirn varias cadenas). Como la mayora de los ARNm son muy largos, en su traduccin pueden intervenir varios ribosomas al tiempo, el conjunto de esos recibe el nombre de POLISOMAS O POLIRRIBOSOMAS. 34. Necesaria una regulacin. En bacterias: regulacin por opern y AMPc Modelo del opern: Monod 1947: E. coli con lactosa, si se aade glucosa baja el nivel de galactosidasa. Jacob y Monod, aos ms tarde: comprueban que bajan los niveles no slo de galactosidasa sino de todos los enzimas que intervienen en la degradacin de la lactosa. 5.Regulacin de la expresin gnica 35. En 1961 propusieron el modelo del opern : Supone que el ADN que codifica la formacin de los enzimas necesarios para la degradacin de la galactosa contiene: dos tipos de genes: Estructurales (z, y, a): Codifican protenas estructurales y enzimticas Reguladores (i): Codifican protenas que regulan a los genes estructurales zona promotor (p) : zona operador (o) : lugar al que se une la ARNp. debe estar libre para que pueda actuar la ARNp 36. En condiciones normales, el gen i sintetiza un ARNm que codifica la sntesis de una protena reguladora o represor que se fija al operador e impide la accin de la ARNp. Al aadir lactosa, esta se une al represor, lo desprende del operador y la ARNp ser capaz de avanzar, producindose la transcripcin y despus la traduccin de los genes estructurales, formndose los enzimas correspondientes.

37. Por qu al aadir glucosa dejan de sintetizarse los enzimas? Se ha comprobado que para que la ARNp se fije, es necesaria la presencia del AMPc. Se ha demostrado que al aadir glucosa o al obtener suficiente, la cantidad de AMPc va bajando, como consecuencia la ARNp se desprender del ADN y se cortar la transcripcin y traduccin, por lo que se acaba la sntesis de los enzimas (galactosidasa). Realizado por Reme Rufino, utilizando como base el texto de Santillana para 2 de Bachillerato