Facultad Dr. Enrique Ortega Moreira de Ciencias Medicas Escuela de Medicina Ctedra de Bioqumica Nombres: Nelly Alvarado; Ma.

Victoria Meja; Carlos Proao. Fecha: 28-01-13 Titulo: Identificacin de aminocidos y enlaces peptdicos

Objetivos: Conocer las tcnicas de laboratorios que permiten identificar la presencia de aminocidos y de enlaces peptdicos.

Marco Terico:

Reactivo de Ninhidrina

La ninhidrina (agente oxidante poderoso) es un reactivo muy til para detectar aminocidos, es el hidrato de una tricetona cclica que cuando reacciona con un aminocido forma un colorante violeta. Solamente el tomo de nitrgeno del colorante violeta proviene del aminocido. El resto del aminocido se convierte en un aldehdo y dixido de carbono. Por lo tanto, todos los alfa aminocidos con un grupo amino primario producen el mismo colorante violeta y la intensidad del color es directamente proporcional a la concentracin del aminocido. Los aminocidos tratados con ninhidrina dan un color azul intenso, excepto la prolina, que da un color amarillo porque contiene un grupo amino secundario.

Reactivo de Biuret

El reactivo de Biuret es una solucin alcalina de cobre que forma un complejo de color azul prpura, con los enlaces peptdicos de las protenas. Los pptidos (a partir de los tripeptidos) y las protenas reaccionan con el reactivo de Biuret.

Reacciones de color de los aminocidos

Todos los aminocidos tienen varias reacciones en comn. Son aquellas que se llevan a cabo en el grupo amino, o en el grupo carboxilo o en ambos. Adems, aquellos aminocidos que contienen cadena lateral con un grupo reactivo, podrn sobrellevar reacciones especficas para ese grupo particular. Tales reacciones son de inters, primero porque permiten la deteccin y estimulacin de algunos aminocidos en particular, y segundo porque esas reacciones permiten modificar a las protenas qumicamente. En general, los aminocidos son fcilmente solubles en agua, algo solubles o insolubles en alcohol y totalmente insolubles en ter. Existen varios tipos de reacciones para aminocidos como: Prueba Xantoproteica Prueba de Millon Reaccin de Biuret Reaccin de Ninhidrina Prueba del aldehdo para el triptfano

Reactivos: Ninhidrina al 0,5 % Reactivo de Biuret Solucin de Leucina al 1% Solucin de Valina al 1%

Muestras biolgicas: Albumina de huevo Materiales: Vasos de precipitacin de 50 ml. Vasos de precipitacin de 250 ml Tubos de ensayo. Esptula. Pipetas.

Equipos: Reverbero

Procedimiento: Solucin de albumina de huevo al 2%: 1. Pesar 1 gr de clara de huevo 2. Agregar 50 ml de agua destilada 3. Mezclar Prueba de Ninhidrina 1. Numerar 4 tubos de ensayo 2. En el tubo 1 colocar 1 ml de agua destilada (blanco)

3. En el tubo 2 colocar 1 ml de Leucina al 1% 4. En el tubo 3 colocar 1 ml de valina al 1% 5. En el tubo 4 colocar 1 ml de solucin de albumina de huevo 6. Agregar 10 gotas de solucin de Ninhidrina a cada tubo. 7. Mezclar y colocarlos en el bao de agua caliente por 5 minutos. 8. Observar los resultados Prueba de Biuret 1. Numerar 4 tubos de ensayo 2. En el tubo 1 colocar 1 ml de agua destilada (blanco) 3. En el tubo 2 colocar 1 ml de Leucina al 1% 4. En el tubo 3 colocar 1 ml de valina al 1% 5. En el tubo 4 colocar 1 ml de solucin de albumina de huevo 6. Aadir a todos los tubos 2 ml de reactivo de Biuret 7. Mezclar y observar los resultados Observaciones: Con Reactivo de Ninhidrina la aparicin de un color azul intenso a violeta es prueba positiva para aminocidos alfa y el color amarillo para aminas secundarias. Con Reactivo de Biuret, el cambio de color azul a violeta es prueba positiva para enlaces peptdicos.

Resultados: Reaccin de ninhidrina Agua Leucina Valina Albumina + + + Agua Leucina Valina Albumina Reaccin de Biuret +

Conclusiones: Nelly Alvarado La identificacin de protenas y sus unidades bsicas (aminocidos) en compuestos como albumina etc., son de fcil realizacin y con resultados fiables. Existen varias tcnicas para realizar dicha identificacin como Prueba Xantoproteica, Prueba de Millon, Reaccin de Biuret, Reaccin de Ninhidrina, Prueba del aldehdo para el triptfano, etc. En este laboratorio hicimos uso de dos de estas tcnicas: Reactivo de Biuret y Reaccin de Ninhidrina. Para la primera reaccin (de Biuret) obtuvimos que el tubo de ensayo que contena la solucin de albumina de huevo al 2% cambio de un color celeste a color violeta, el tubo que contena la leucina tuvo una accin de efervescencia mientras que la valina no tuvo reaccin alguna al igual que el tubo que contena agua. El reactivo de biuret contiene iones cpricos que producen un color violeta al reaccionar con los nitrgenos de los enlaces pepiticos, solo ocurre la reaccin si hay al menos dos enlaces pepiticos es por esto que con aminocidos libres no reacciona, esto fue demostrado en el experimento. Con respecto a la reaccin de ninhidrina, todos los aminocidos reaccionan cuando son calentados cuando se calientan con ella. En la prctica los tubos que contenan la leucina, valina y la solucin de albumina de huevo al 2% se tornaron de un color morado oscuro (purpura de Ruheman) indicando la presencia de aminocidos en esas tres soluciones. El tubo de ensayo que contena agua no tuvo reaccin alguna con ninguno de los dos mtodos usados, ya que el agua no posee aminocidos y por ende tampoco enlaces pepiticos, las dos reacciones son entonces negativas para el agua. Ma. Victoria Meja F. En esta prctica pudimos conocer los diferentes tipos de procedimientos que podemos utilizar para identificar aminocidos como Prueba Xantoproteica, Prueba de Millon, Reaccin de Biuret, Reaccin de Ninhidrina, Prueba del aldehdo para el triptfano. Para esta prctica utilizamos la reaccin de Biuret y de Ninhidrina.

En la reaccin de Biuret la cual es especfica para compuestos que contengan dos o ms enlaces peptdicos, la reaccin fue positiva solo para la albumina de huevo mientras que para la leucina, valina y agua el resultado fue negativo. En la reaccin de Ninhidrina fue positiva para la valina, leucina y la albumina de huevo pero en el tubo de ensayo con agua no causo ninguna reaccin.

Carlos Proao Durante el experimento en el que utilizamos el reactivo de Ninhidrina pudimos observar que los contenidos en los tubos de ensayo cambiaban su color a uno violeta debido a que estos son alfa-aminocidos.

Anexos:

Bibliografa
Aderson, G. Experimentos de Qumica Orgnica. Armenia: Ediciones Elizcome. Berg, M. J. (2007). Bioquimica. Barcelona: Editorial Revert S.A. Donnersberger, B. A. (2002). Libro de Laboratorio de Anatoma y Fisiologa. Barcelona: Editorial Paidortibo. Rogelio, O. (2008). Curso prctico de qumica orgnica. Enfocado a biologa y alimentos. Universidad de Caldas. Segal, A. C. (2005). Manual de practicas. Biologa Molecular de la Clula I. Mexico: Facultad de Ciencias de la UNAN. Vjar, E. (2005). Prcticas de Bioqumica Descriptiva. Mexico: Editorial Unison.