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Bacteriologa
Unidad Temtica I
Segundo ao 2012-2013
FACULTAD DE MEDICINA
Dr. Enrique Graue Wiechers Dra. Rosalinda Guevara Guzmn Dr. Pelayo Vilar Puig Dr. Leobardo Ruz Prez Dra. Irene Durante Montiel Dr. Melchor Snchez Mendiola Dr. Ricardo Valdivieso Caldern Dr. Guillermo Robles Daz Dra. Teresa Fortoul van der Goes Dr. Arturo Ruiz Ruisnchez Lic. Graciela Zuiga Gonzlez Lic. Ral A. Aguilar Tamayo Dra. Ma. Eugenia Ponce De Len Castaeda
Director Secretario General Jefe de la Divisin de Estudios de Posgrado E Investigacin Secretaria de Enseanza Clnica, Internado Y Servicio Social Secretaria Tcnica del H. Consejo Tcnico Secretario de Educacin Mdica Secretario de Servicios Escolares Coordinador de Investigacin Coordinadora de Ciencias Bsicas Coordinador de Servicios a la Comunidad Secretaria Administrativa Secretario Jurdico y de Control Administrativo Coordinacin De Modificacin Del Plan De Estudios
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA Dra. Patricia M. Tato Zaldivar Q.F.B. Yolanda Garca Yez Dr. Javier R. Ambrosio Hernndez Jefa Del Departamento Coordinadora De Enseanza Coordinador De Investigacin
ACTUALIZACIN Y REVISIN DE LOS GUIONES Dra. Ma. del Rosario Morales Espinosa Dra. Albina Martnez Prez Dr. Rafael Garca Gonzlez Profesora Titular De Bacteriologa
Profesora Titular De Bacteriologa y Parasitologa
Lunes 06 de agosto Viernes 12 de octubre Lunes 15 de octubre Viernes 23 de noviembre Lunes 26 de noviembre Viernes 25 de enero de 2013 Lunes 28 de enero Viernes 19 de abril
EXAMEN EXTRAORDINARIO Mircoles 12 de junio 10:00 a 12:00 h VACACIONES Del 17 de diciembre de 2012 al 07 de enero de 2013. Semana Santa del 25 al 29 de marzo de 2013. Del 01 al 19 de julio de 2013.
EXMENES PARCIALES Primero: Mircoles 24 de octubre Bacteriologa 11:00 a 13:00 h Segundo: Lunes 3 de diciembre Virologa 11:00 a 13:00 h Tercero: Martes 05 de febrero Micologa 11:00 a 13:00 h Cuarto: Mircoles 24 de abril Parasitologa 11:00 a 13:00 h
OBJETIVOS DEL REA DE BACTERIOLOGA MDICA 1. Sealar los microorganismos mas frecuentes asociados a enfermedades infecciosas de los diferentes aparatos y sistemas 2. Explicar los mecanismos moleculares y factores de virulencia que ejercen las bacterias para producir enfermedad 3. Describir los mecanismos moleculares desencadenados en el husped para defenderse de los microorganismos responsables de enfermedad 4. Sealar el tratamiento antimicrobiano especfico para las enfermedades bacterianas ms frecuentes, el mecanismo de accin de los mismos 5. Informar de los mtodos diagnsticos utilizados, para la identificacin del agente etiolgico de una enfermedad infecciosa bacteriana. 6. Establecer diagnsticos clnicos y etiolgicos diferenciales en una enfermedad infecciosa.
Libros 1. Champoux JJ, Neidhardt FC, Drew L, Plorde JJ. Microbiologa mdica. 4a. ed. Mxico: McGraw-Hill Interamericana Editores; 2004. 2. Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA, Brooks GF, Butel JS, Ornston LN. Microbiologa mdica. 18a. ed. Mxico: Editorial El Manual Moderno; 2005. 3. Kenneth J, Rayan C, George R Sherris. Microbiologia Mdica. 5a. ed. Mxico: Mc GrawHill; 2011. 80 ejemplares 4. Molina J., Manjarrez ME., Tay J. Microbiologa, Bacteriologa y Virologa. Primera ed. Mxico: Mndez Editores; 2010. 80 ejemplares 5. Murray P, Rosenthal K, Kobayashi G, Pfaller M. Microbiologa mdica. 6a. ed. Espaa: Editorial Elsevier Mosby; 2010. 6. Tay Zavala J, Gutirrez Quiroz M, Lpez Martnez R, Manjarrez Z ME, Molina L J. Microbiologa y parasitologa mdicas. 3a. ed. Mxico: Mndez Cervantes Editores; 2003.
CALENDARIO DE ACTIVIDADES: CALENDARIO SUGERIDO PARA CUBRIR LAS ACTIVIDADES DE LA SEGUNDA UNIDAD TEMTICA (Bacteriologa)
EL CALENDARIO SE ENCUENTRA EN LA PAGINA WEB DEL DEPARTAMENTO COMO ARCHIVO INDEPENDIENTE
PRESENTACIN
EL PROPSITO FUNDAMENTAL DEL CURSO de bacteriologa para los estudiantes de segundo ao de la carrera de Mdico Cirujano de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional Autnoma de Mxico es el de proporcionar al estudiante, la informacin necesaria para entender el comportamiento de la bacteria como organismo vivo y su relacin con el ambiente que le rodea. Para este fin, se abordarn temas de bacteriologa bsica, que incluirn; estructura bacteriana, funcin de los componentes y celulares, de gentica, resistencia metabolismo mecanismos
Aunque resulte reiterativo, es importante mencionar que este curso no debe ser considerado terminal, ya que tanto el estudiante como el mdico deben mantenerse constantemente actualizados, debido a los constantes cambios que se dan en Microbiologa, de la que forma parte la bacteriologa. El presente edicin del Manual presenta una organizacin temtica, en la que incluye once guiones; tres guiones de bacteriologa bsica y siete en la que se abordan las diferentes bacterias organizadas en base al aparato o sistema que se ven afectados por ellas y finalizamos con un guin sobre los procesos infecciosos adquiridos a nivel hospitalario. Se incluye adems, referencias especficas sobre el rea en estudio y una lista de referencias de Internet que contienen informacin sobre bacteriologa mdica, con el fin de orientar al estudiante.
bacteriana. As como el conocimiento de las bases biolgicas de la interaccin del patgeno con el husped diversos a travs de la respuesta inmune. de Constituyendo la base para el entendimiento de los agentes bacterianos productores enfermedades infecciosas en diferentes sitios del cuerpo humano., as como su diagnstico etiolgico y medidas de prevencin y tratamiento.
GUIONES DE BACTERIOLOGA
Guin GUIONES QUE COMPRENDE EL MODULO DE BACTERIOLOGA 1. Introduccin a la Bacteriologa 2. Interaccin hospedero-patgeno 3. Bacterias causantes de enfermedades del Tracto Respiratorio 4. Bacterias causantes de enfermedades de los tejidos superficiales y profundos 5. Bacterias causantes de enfermedades del Tracto Gastrointestinal 6. Bacterias causantes de enfermedades Sistmicas 7. Bacterias causantes de enfermedades del Tracto Urinario 8. Bacterias causantes de enfermedades de Transmisin Sexual 9. Bacterias causantes de enfermedades del Sistema Nervioso Central I 10. Bacterias causantes de enfermedades del Sistema Nervioso Central II: Anaerobios esporulados 11. Bacterias causantes de enfermedades transmitidas por vectores
1. INTRODUCCIN A LA BACTERIOLOGA
Es indudable que el conocimiento de la bacteria desde el punto gentico, metablico y estructural, constituye un elemento fundamental para el alumno, con el fin de poder realizar una clasificacin de utilidad en la prctica mdica, as como comprender la participacin de la expresin de los factores de patogenicidad en la relacin hospedero bacteria y la adquisicin de material gentico extracromosomal en la sntesis de protenas que le confieren ventajas de adaptacin en un nicho ecolgico. 1. Antecedentes histrico de la Bacteriologa 2. Formas bacterianas, estructura y funcin de sus componentes celulares 2.1 Cocos, bacilos y espirilos 2.2 Cpsula 2.3 Pared celular: protoplastos, esferoplastos y formas L 2.4 Membrana externa y membrana plasmtica 2.5 Pili, fimbrias, flagelos 2.6 Citoplasma (ribosomas, cuerpos de inclusin) 2.7 Cromosoma, elementos extracromosomales 2.8 Esporas 3. Clasificacin. Esta deber ser hecha de acuerdo a criterios tiles para el mdico, que le permita hacer una pronta y correcta identificacin del microorganismo. 3.1 Morfologa 3.2 Agrupacin 3.3 Tipo de tincin 3.4 Serolgica 3.5 Bioqumica 3.6 Gentica 4. Gentica bacteriana 4.1 Replicacin del cromosoma 4.2 Informacin gentica: genes (estructura y funcin: transcripcin, traduccin). 4.3 Mecanismos de intercambio de informacin gentica entre las bacterias conjugacin, transformacin, por transduccin. 4.4 Alteracin de la informacin gentica: ventajas y desventajas en las bacterias 4.5 Rearreglos cromosmicos, por transferencia horizontal de genes transposones, secuencias de insercin y eventos de recombinacin 4.6 Tipos de mutaciones, factores fsicos y qumicos que intervienen en la tasa natural de mutacin 5. Metabolismo Auttrofos Hetertrofos Quimiottrofos Littrofos Aerobios Anaerobios Facultativos Microaeroflicos Metabolismo fermentativo y oxidativo Serolgica Bioqumica Gentica 6. Antimicrobianos 6.1 Efectos de los antimicrobianos sobre las bacterias: bacteriostticos y bactericidas 6.2 Mecanismos de accin en las diferentes estructuras de las bacterias. Antimicrobianos que actan a nivel de: 6.2.1 Sntesis de pared celular 6.2.2 Membrana citoplasmtica 6.2.3 Sntesis de protenas 6.2.4 Sntesis de cidos nucleicos 6.2.5 Metabolismo del folato 6.3 Mecanismos de resistencia bacteriana 6.3.1 Elementos genticos que intervienen en la resistencia 6.3.1.1 Mediada por cromosomas 6.3.1.2 Mediada por plsmidos 6.3.1.3 Mediada por transposones 6.3.2 Tipos de resistencia 6.3.2.1 Alteracin de receptores 6.3.2.2 Enzimas que degradan el antibitico 6.3.2.3 Bombas de expulsin 6.3.2.4 Enzimas que modifican el antibitico 6.3.2.5 Alteracin en la permeabilidad del antibitico 6.3.2.6 Mecanismo de Bypass 6.4 Uso racional de los antibticos 6.5 Infecciones Intrahospitalarias
de
1.10 Estrategias de Tratamiento 1.10.1 Antimicrobiano 1.10.2 Diferencias del tratamiento en casos de fiebre reumtica y enfermedad reumtica del corazn 1.11 Prevencin y Control 1.11.1 Identificacin de portadores 1.11.2 Bacterias potencialmente reemergentes 1.11.3 Uso de vacunas 2. Corynebacterium diphtheriae 2.1 Caractersticas generales del microorganismo 2.1.1 Caractersticas de pared 2.1.2 Morfologa (forma pleomrfica, presencia de grnulos metacromticos) 2.1.3 Caractersticas tintoriales (bacilo que se tie irregularmente) 2.1.4 Agrupacin (algunos autores refieren que su agrupacin es en forma de caracteres chinos) 2.1.5 Cultivo, requerimientos nutricionales 2.2 Factores de virulencia 2.2.1 Bacterifago lisognico -Toxina diftrica (tipoA-B) 2.2.1.1 Mecanismo de accin de la toxina 2.3 Epidemiologa 2.3.1 Distribucin 2.3.2 Portadores asintomticos 2.3.3 Transmisin 2.3.4 Reservorio 2.3.5 Grupo susceptible de infeccin 2.3.6 Morbilidad y Mortalidad 2.4 Patogenia 2.4.1 Cuadro clnico (desarrollo de signos y sntomas) 2.4.2 Difteria respiratoria (Tracto respiratorio superior 2.4.3 Seudomembrana en faringe y regiones aledaas) 2.4.4 Difteria cutnea 2.5. Participacin de la respuesta inmune en el control de las enfermedades
2.6 Complicaciones 2.6.1 Obstruccin respiratoria 2.6.2 Arritmia cardiaca 2.6.3 Coma 2.7 Diagnostico diferencial Streptococcus pyogenes Haemophilus influenzae B 2.8 Diagnstico de laboratorio 2.8.1 Cultivo 2.8.2 Identificacin microscpica y macroscpica a partir de aislamiento en Medio Lffler y Agar cisteina-telurito 2.8.3 Caracterizacin bioqumica: catalasa y nitrato positivo, fermentacin de glucosa y maltosa 2.8.4 Pruebas de toxinogenicidad in vivo e in vitro 2.9 Estrategias del tratamiento 2.9.1 Antitoxina diftrica 2.9.2 Antimicrobianos; penicilina y eritromicina 2.10 Prevencin y control 2.10.1 Vacunacin con toxoide diftrico (DPT) 2.10.2 Prueba de Schick 2.10.3 Profilaxis con antimicro-bianos
3. Bordetella pertussis 3.1 Caractersticas generales microorganismo 3.1.1 Morfologa y tincin 3.1.2 Cultivo 3.1.3 Caractersticas antignicas 3.2 Epidemiologa 3.2.1 Distribucin de la enfermedad 3.2.2 Morbilidad y Mortalidad 3.2.3 Reservorio 3.2.4 Factores de riesgo para desarrollar la enfermedad 3.2.5 Poblacin de riesgo 3.2.6 Transmisin 3.3 Factores de virulencia 3.3.1 Adhesinas 3.3.2 Hemaglutinina filamentosa 3.3.3 Pili 3.3.4 Pertactin 3.3.5 Toxina pertussis 3.3.6 Toxina Adenilato ciclasa 3.3.7 Toxina dermonecrtica 3.3.8 Citotoxina traqueal 3.3.9 Lipopolisacarido. 3.4 Patogenia 3.4.1 Cuadro clnico (desarrollo de signos y sntomas) 3.4.2 Tos ferina 3.5 Participacin de la respuesta inmune en el control de la enfermedad 3.6 Complicaciones 3.6.1 Anoxia del SNC 3.6.2 Agotamiento 3.6.3 Neumona secundaria por invasin por otros patgenos de la va respiratoria daada 3.7 Diagnstico diferencial Haemophilus influenzae Streptococcus pneumoniae Mycoplasma pneumoniae 3.8 Diagnstico de laboratorio 3.8.1 Indicaciones en la toma de la muestra (aspirado de nasofaringe) con aplicadores de fibras sintticas. 3.8.2 Cultivo, requerimiento, condiciones de incubacin 3.8.3 Microscopia con anticuerpos fluorescentes del
3.8.4
Pruebas serolgicas (deteccin de IgG e IgA contra la hemaglutinina filamentosa, IgG contra la toxina pertussis)
3.9 Estrategias de Tratamiento 3.9.1 Medidas de apoyo contra los sntomas 3.9.2 Eritromicina 3.10 Prevencin y control 3.10.1 Vacuna multivalente DPT triple En algunos pases se esta usando una vacuna hecha con antgenos especficos como la hemaglutinina filamentosa o la toxina pertussis, aglutininas fimbriales y pertactina) 3.10.2 Debido a que B. pertussis es altamente contagiosa en poblaciones susceptibles, la eritromicina es usada sobre todo en las familias donde existe un paciente con la enfermedad 4. Streptococcus pneumoniae 4.1. Antecedentes histricos 4.2 Caractersticas generales del microorganismo 4.2.1 Morfologa, agrupacin y tincin. Diplococos, Gram positivos, alfa hemolticos 4.2.2 Serogrupos. Existen ms de 80 serotipos capsulares...etc) 4.2.3 Diferencias especficas con estreptococos del grupo viridans 4.3 Factores de virulencia 4.3.1 Cpsula 4.3.2 Pared celular 4.3.3 Autolisina 4.3.4.Neumolisina 4.3.5.Factor purprico 4.3.6 Neuraminidasa 4.3.7 Amidasa. 4.3.8 Protenas de unin a colina 4.3.9 Peroxidasa, 4.3.10 Proteasa de IgA 4.4 Epidemiologa 4.4.1 Frecuencia 4.4.2 Transmisin 4.4.3 Factores predisponentes del husped (edad susceptible) 4.4.4 Portadores sanos
4.5 Patogenia 4.5.1 Cuadro clnico: Desarrollo de signos y sntomas 4.5.2 Neumona 4.5.3 Bronquitis aguda Bronquitis crnica 4.5.4 Complicaciones: derrame pleural, bacteriemia 4.6 Participacin de la respuesta inmune en contra de la infeccin 4.7 Diagnstico diferencial Haemophilus influenzae Chlamydia pneumoniae Mycoplasma pneumoniae 4.8 Diagnstico de laboratorio 4.8.1 Microscopa 4.8.2 Inmunolgico. Reaccin de Qellung, coaglutinacin 4.8.3 Cultivo y condiciones de incubacin 4.8.4 Susceptibilidad a optoquina y sales biliares. 4.9 Tratamiento 4.9.1 Antimicrobiano de eleccin Penicilina.eritromicina y cefalosporinas. 4.10 Prevencin y control 4.10.1 Vacuna 7-valente es indicada en inmunizacin pasiva en lactantes y nios pequeos de 6 semanas a 9 aos de edad en contra de enfermedad invasiva. Vacuna 23-valente en pacientes con riesgo especial de enfermedad Neumoccica por ejemplo, asplenia, drepanocitosis neoplasias hematolgicas, inmunocomprometidos, nios pequeos y ancianos. 4.11 Otras enfermedades producidas por S. pneumoniae 5 Mycoplasma pneumoniae pneumoniae y Chlamydia
5.2 Factores de virulencia 5.3 Epidemiologa 5.3.1. Transmisin y factores predisponentes 5.4 Patogenia 5.5 Participacin de la respuesta inmune en el control de estas infecciones 5.6 Diagnstico etiolgico diferencial Streptococcus pneumoniae Haemphilus influenzae Chlamydia pneumoniae Mycoplasma pneumoniae 5.7 Diagnstico de laboratorio 5.7.1 Cultivo 5.7.2 Serolgico. 5.8 Tratamiento 5.8.1 Tetracilinas, eritromicina 5.9 Control y prevencin
6. Mycobacterium tuberculosis 6.1 Antecedentes histricos 6.2 Caractersticas generales del microorganismo 6.2.1 Envoltura celular, morfologa y metabolismo 6.2.2 Tincin 6.2.3 Cultivo, crecimiento y requerimiento nutricionales 6.2.4 Ambiente intracelular 6.2.5 Componentes antignicos 6.2.6 Resistencia a productos qumicos y fsicos 6.3 Factores de virulencia 6.3.1 Factor cordn 6.3.2 Supervivencia en macrfagos 6.3.3 Componentes que intervienen en la activacin de macrfagos 6.3.4 Destruccin de tejido por respuesta inmune celular 6.3.5 Resistencia a drogas antituberculosas 6.4 Epidemiologa 6.4.1 Frecuencia 6.4.2 Incidencia nacional y mundial 6.4.3 Infeccin emergente (huspedes inmunocomprometidos) 6.4.4 Transmisin
5.1 Caractersticas generales de los microorganismos 5.1.1 Envoltura celular 5.1.2 Requerimientos nutricionales 5.1.3 Parsitos intracelulares obligados 5.1.4 Caractersticas de cultivo
I. BACTERIOLOGA SEGUNDO AO, 2012-2013 6.5 Patogenia 6.5.1 Formas clnicas y complicaciones 6.5.2 Primoinfeccin 6.5.3 Tuberculosis primaria 6.5.4 Tuberculosis secundaria 6.5.5 Tuberculosis menngoencefalitis 6.5.6 Tuberculosis diseminada 6.6 Participacin de la respuesta inmune en el control de la infeccin 6.7 Diagnstico diferencial 6.7.1 Otras micobacterias M. bovis, M. avium-intracellulare 6.7.2 Destacar la importancia de estas micobacterias no tuberculosas en pacientes inmunodeprimidos (SIDA) y drogas inmunosupresoras 6.7.3 Cancer pulmonar 6.8 Diagnstico de laboratorio y de gabinete 6.8.1 Baciloscopa 6.8.2 Cultivo 6.8.3 Mtodos moleculares 6.8.4 Valoracin del PPD 6.8.5 Radiografa de trax 6.8.6 Otras tcnicas de gabinete 6.9 Estrategia de tratamiento 6.9.1 Esquema de tratamiento antifmicos en base a la norma mexicana para el tratamiento de la tuberculosis pulmonar 6.10 Control y prevencin 6.10.1Vacuna 6.10.2 Otras medidas de prevencin
I. BACTERIOLOGA SEGUNDO AO, 2012-2013 1.8 Otras Enfermedades Asociadas S. aureus y C. perfringens 1.8.1 Staphylococcus aureus Osteomielitis Intoxicacin alimentara. Infecciones en pacientes inmunocomprometidos o con factores de riesgo agregado (infecciones intrahospitalarias) 1.8.2 Clostridium perfringes Intoxicacin alimentaria Colitis ulcerativa Endometritis 1.9 Diagnstico de laboratorio 1.9.1 Frotis y tincin 1.9.2 Medios de cultivo especficos para aislamiento y condiciones de incubacin 1.9.3 Pruebas bioqumicas especficas y diferenciales para establecer gnero y especie 1.9.3 Pruebas bioqumicas especficas y diferenciales para establecer gnero y especie. 1.9.4 Pruebas de sensibilidad a antimicrobianos 1.10 Estrategias de Tratamiento 1.10.1 Antimicrobianos 1.10.2 Medidas de apoyo 2. Mycobacterium leprae 2.1 Antecedentes histricos de la lepra 2.2 Caractersticas del microorganismo 2.2.1 Morfologa y metabolismo 2.2.2 Envoltura celular y tincin 2.2.3 Estructuras antignicas de superficie 2.2.4 Desarrollo en modelo animal 2.3 Factores de virulencia 2.3.1 Tropismo por clulas especficas 2.3.2 Sobrevivencia y multiplicacin intracelular 2.3.3 Estructuras de superficie en el microorganismo responsables de activar la respuesta inmune humoral y celular 2.3.4 Mecanismos por los cuales se produce el dao en los tejidos 2.4 Epidemiologa 2.4.1 Morbilidad y mortalidad de la lepra en Mxico y otros pases 2.4.2 Transmisin 2.4.3 Reservorio natural 2.4.4 Distribucin geogrfica 2.4.5 Factores de riesgo del individuo ante la exposicin (exposicin prolongada con pacientes lepromatosos) 2.5 Patogenia 2.5.1 Invasin de nervios sensitivos perifricos produciendo anestesia. 2.5.2 Respuesta inmune hacia el bacilo. Factores de resistencia del husped ante la infeccin: especficos (inmunidad) e inespecficos (HLA-DR3). 2.5.3 Formas y manifestaciones clnicas. Lepra lepromatosa. Lepra tuberculoide Lepra indeterminada 2.5.4 Relacin de cada una de las formas de lepra con la respuesta inmune celular. 2.5.5 Afeccin ocular en la lepra. 2.5.6 Discapacidades fsicas 2.6 Participacin de la respuesta inmune en la evolucin de la enfermedad 2.7 Diagnstico Clnico diferencial de las formas de lepra 2.7.1 Clasificacin bacilar de la lepra 2 8 Diagnstico de Laboratorio y Gabinete 2.8.1 Laboratorio: bsqueda de bacilos en muestras obtenidas de raspado de lesiones (en particular mucosa nasal y orejas). 2.8.2 Estudio histopatolgico de biopsias cutneas. 2.8.3 Pruebas serolgicas con PGL-1. 2.8.4 Pruebas cutneas: Lepromina 2.8.5 Valor diagnstico de la reaccin de Mitsuda y reaccin de Fernndez 2.9 Estrategias del Tratamiento. 2.9.1 Norma Mexicana tratamiento de la lepra para el
2.10 Prevencin y control 2.10.1 Profilaxis en contactos con enfermos de lepra. Otras micobacterias que producen infecciones en piel y tejido subcutaneo: M. marinum M. ulcerans M. tuberculosis Otros microorganismos Nocardia brasiliensis Nocardia otitidiscaviarum Nocardia asteroides
Escherichia coli enterotoxigenica Escherichia coli enteroagregativa Escherichia coli enteropatogena Vibrio cholerae 2.1 Caractersticas de los microorganismos 2.1.1 Morfologa colonial y microscpica 2.1.2 Metabolismo y medios de cultivo diferenciales para su crecimiento 2.1.3 Caracterstica bioqumicas diferenciales 2.1.4 Estructuras antignicas base de su clasificacin serolgica 2.1.5 Variacin antignica 2.2 Factores de virulencia 2.2.1. Escherichia coli enterotoxignica Plsmido que codifica para la produccin de toxinas - Toxinas termoestables (STa y STb) - Toxinas termolbiles (LT1 y LT-2) Adhesinas CFA/I, /II, /III 2.2.2. Escherichia coli enteroagregativa Plsmido que codifica para la expresin de una fimbria (GVVPQ) que media la unin con la mucosa intestinal.
Patrn de adherencia (formando agregados) Toxina EAST (parecida a la LT) Hemolisina (formadora de poros en la membrana de las clulas husped 2.2.3. Escherichia coli enteropatgena Plsmido EAF que codifica para una adhesina Bfp (pili) al parecer media la interaccin bacteria-bacteria. Protena de membrana externa llamada intimina codificada por el gen eae que favorece la unin intima entre la bacteria y la clula. Produce el fenmeno llamado unin y esfacelacin de las microvellocidades Isla de patogenicidad LEE. 2.2.4 Vibrio cholerae Toxina colrica Pili Tcp 2.3 Epidemiologa 2.3.1 Va de transmisin 2.3.2 Poblacin susceptible 2.3.3 Distribucin mundial 2.3.4 Grupos de edad afectados 2.4 Participacin de la respuesta inmune en el control de estas infecciones 2.5 Patogenia 2.5.1 Diarrea del viajero y diarrea infantil 2.5.2 Diarrea acuosa persistente 2.5.3 Diarrea grave. 2.6 Complicaciones 2.5.1 Deshidratacin 2.5.2 Desnutricin 2.5.3 Muerte 2.7 Diagnstico de laboratorio 2.7.1 Aislamiento del microorganismo a partir de heces en medios de cultivos selectivos 2.7.2 Pruebas bioqumicas y serolgicas 2.7.3 Microscopia de campo oscuro 2.8 Estrategias de Tratamiento 2.8.1 Tratamiento de apoyo: atender el desequilibrio hidroelectroltico 2.8.2 Tratamiento antimicrobiano para clera.
Escherichia coli enteroinvasiva Escherichia coli enterohemorrgica Campylobacter spp. Shigella spp. Salmonella enteritidis. Clostridium difficile 3.1 Caractersticas de los microorganismos 3.1.1 Morfologa colonial y microscpica 3.1.2 Metabolismo y medios de cultivo diferenciales para su crecimiento 3.1.3 Caracterstica bioqumicas diferenciales 3.1.4 Estructuras antignicas (antgeno K, O y H) 3.1.5 Variacin antignica 3.2 Factores de virulencia 3.2.1 Escherichia coli enteroinvasiva Caractersticas genticas que le confieren el fenotipo de invasin Mecanismo de invasin las clulas del coln Distribucin lateralmente a clulas adyacentes 3.2.2 Escherichia coli enterohemorrgica Serotipos representativo importante Intimina Toxina Shiga-like(SLT) 3.2.3 Campylobacter jejuni Enterotoxina, toxinas citopticas, adhesinas, y movilidad. 3.2.4 Shigella dysenteriae Toxina Shiga Protenas que participan en la adhesin, invasin y proliferacin: IpaD Adherencia IpaB,C Invasin y escape de la vescula fagoctica Protenas Mxi Excrecin de IpaA-D IcsA, B intracelular Diseminacin
I. BACTERIOLOGA SEGUNDO AO, 2012-2013 Olm Movimiento a lo largo de los filamentos de actina Antgeno O de LPS Inflamacin VacC Regula la expresin de genes Ipa VacB Control postranscripcional de la expresin de ipa y icsA KcpA Regula la expresin de icsA Fur Regula expresin de stxA/stxB y de los genes de adquisicin de hierro VirF Regulacin de la expresin de virB VirR Protena parecida a histona, regulacin de la expresin de virF 3.2.5 Salmonella enteritidis Protenas A-H Enzimas: catalasa, superxido dismutasa, Antigeno Vi, LPS 3.2.6 Clostridium difficile Citotoxina Enterotoxina 3.3 Epidemiologa 3.3.1 Enfermedades frecuentes pases no industrializados 3.3.2 Vas de transmisin 3.3.3 Reservorios animales 3.4 Patogenia 3.4.1 Disentera 3.4.2 Colitis ulcerosa 3.5 Participacin de la respuesta inmune en el control de estas infecciones 3.6 Complicaciones 3.6.1 Sndrome Urmico Hemoltico (SUH) 3.6.2 Colitis pseudomembranosa 3.6.3 Sndrome de Guillain-Barr 3.6.4 Artritis reactiva 3.7 Diagnstico de laboratorio 3.7.1 Aislamiento del microorganismo a partir de heces en medios de cultivos selectivos en 3.7.2 Pruebas bioqumicas 3.7.3 Pruebas serolgicas 3.8 Estrategia de Tratamiento 3.8.1 Antimicrobiano de eleccin 3.9 Prevencin y Control OTROS MICROORGANISMOS, DE DIARREA POR PRODUCTORES INTOXICACIN ALIMENTICIA 4 Clostridium botulinum 4.1 Caractersticas del microorganismo 4.2. Factores de virulencia 4.3 Epidemiologa de las diarreas por C. botulinum 4.3.1 Va de transmisin endgena o exgena 4.3.2 Grupos de edad afectados 4.3.3 Fuentes de contaminacin 4.3.4 Distribucin 4.4 Patogenia Cuadro clnico caracterstico de este tipo de diarreas 4.5 Participacin de la respuesta inmune en el control de la infeccin 4.6 Diagnstico 4.7 Estrategias de Tratamiento 4.7.1 Hidratacin 4.7.2 Anticuerpos anti-toxinas 5. Microorganismos Gram positivos 5.1 No productores de esporas Staphylococcus aureus, 5.2 Productores de esporas Bacillus cereus
1.5 Participacin de la respuesta inmune en el control de la infeccin 1.6 Otros cuadros clnicos 1.6.1 Artritis, Osteomielitis, meningitis, nefritis, cistitis, orquiepididimitis, endocarditis, hiperesplenismo.
portador
I. BACTERIOLOGA SEGUNDO AO, 2012-2013 2.4 Patogenia 2.4.1 Fiebre tifoidea. Cuadro clnico 2.5 Participacin de la respuesta inmune en el control de la infeccin 2.6 Otras infecciones producidas por S. typhi 2.6.1 Septicemia 2.6.2 Infeccin urinaria 2.6.3 Osteomielitis 2.7 Complicaciones 2.7.1 Megacoln 2.7.2 Perforacin intestinal con abdomen agudo 2.8 Diagnstico diferencial 2.8.1 Brucelosis 2.8.2 Faringoamigdalitis estreptocccica 2.8.3 Tifo 2.9 Diagnostico de Laboratorio 2.9.1 Cultivos dependiendo del tiempo de evolucin 2.9.2 Pruebas serolgicas 2.10 Estrategias de Tratamiento Cloranfenicol y ampicilina 2.11 Prevencin y control Vacuna 3. Rickettsia prowasekii 3.1 Caracterisiticas del microorganismo 3.1.1 Estructura y morfologa 3.1.2 Parsito intracelular 3.2 Factores de virulencia 3.3 Epidemiologa 3.3.1 Enfermedade re-emergente. 3.3.2 Distribucin geogrfica a nivel mundial y en Mxico 3.3.3 Estacion del ao 3.3.4 Condiciones favorables para su transmisin 3.3.5 Reservorio y vector 3.3.6 Poblacin susceptible 3.3.7 Vas de transmisin 3.3.8 Vas de entrada 3.4 Patogenia 3.4.1 Ciclo de vida 3.4.2 Cuadro clnico 3.4.2.1 Tifo epidmico 3.4.2.2 Enfermedad de BrillZinsser 3.5 Participacin de la respuesta inmune en el control de la enfermedad. 3.6 Complicaciones 3.7 Diagnostico diferencial Brucelosis Fiebre tifoidea 3.8 Diagnstico de laboratorio 3.8.1 Cultivo 3.8.2 Pruebas serolgicas 3.8.3 Pruebas moleculares 3.9 Estrategias de tratamiento 3.10 Prevencin y control 4. Leptospira interrogans 4.1 Caractersticas del microorganismo 4.1.1 Estructura, morfologa, antgenos serotipos de Leptospira interrogans y serovares. 4.2 Factores de virulencia 4.3 Epidemiologa 4.4 Participacin de la respuesta inmune en el control de la enfermedad 4.5 Patogenia 4.5.1 Leptospirosis anictrica e icterica. 4.6 Diagnstico diferencial. Hepatitis 4.7 Diagnstico de laboratorio 4.7.1 Microscopa. Tincin con Giemsa o Wright. 4.7.2 Cultivo. 4.7.3 Serologa. Tomar en cuenta las bacterias y enfermedades asociadas con reacciones cruzadas de las pruebas serolgicas. 4.7.4 Prueba de ELISA (deteccin de antgeno) y Western blot (prueba confirmatoria). 4.7.5 Microscopia de campo oscuro 4.8 Estrategias de Tratamiento 4.9 Prevencin y control
2.2.6 Pacientes hospitalizados 2.2.7 Instalacin de sondas de Foley 2.2.8 Pacientes inmunocomprometidos 2.2.9 Diabetes 2.2.10 Mal formaciones congnitas 2.2.11 Embarazo 3. Participacin de la respuesta inmune en el control de las infecciones. 4 Patogenia. 4.1 Infeccin de vas urinarias bajas - Cistitis, - Uretritis (en esta entidad clnica hay que hacer diagnstico etiolgico diferencial con Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis [serotipos D-K], Ureaplasma urealyticum) En mujeres, se hace una distincin entre cistitis, uretritis y vaginitis, pero el tracto genitourinario es continuo y los sntomas se superponen a menudo. 4.2 Infeccin de vas urinarias altas (fiebre, dolor en alguno de los flancos, sntomas generales y de infeccin de vas urinarias bajas) - Pielonefritis - Pielitis, - Salpingitis. 5. Diagnstico de laboratorio. 5.1 Toma adecuada de la muestra 5.1.1 Chorro medio 5.1.2 Aspiracin suprapbica 5.1.3 A travs de la sonda 5.2 Urocultivo. Interpretacin de urocultivo Criterio de nmero de colonias que confirman la infeccin de vas urinarias 1000 colonias por cultivo, mas sintomatologa de vas urinarias 100, 000 colonias por cultivo En pacientes que se sospeche de infeccin de vas urinarias y los urocultivos repetidos resulten negativos, debe de sospecharse de micobacterias. 6. Diagnstico de gabinete. En infecciones recurrentes es aconsejable una urografa excretora para descartar malformaciones congnitas de tracto urinario o litiasis.
7. Estrategias de tratamiento 7.1 Criterios Sntomas agudos y aparatosos (inicio emprico de antimicrobianos) Sntomas leves se puede esperar el resultado de urocultivo con pruebas de susceptibilidad antimicrobianos 7.2 Antimicrobianos de eleccin 3.7 Prevencin y control
1.10 Estrategias de tratamiento 1.11 Prevencin y control 1.11.1 Terapia preventiva con antimicrobianos 1.11.2 Control de las personas infectadas 2. Neisseria gonorrhoeae. 2.1 Antecedentes Histricos. 2.2 Caractersticas generales 2.2.1 Morfologa, tincin, agrupacin, estructura antignica variacin antignica 2.2.2 Condiciones de crecimiento, metabolismo, y produccin de enzimas (oxidasa, IgA-proteasa y betalactamasas) 2.3 Factores de virulencia 2.3.1. Estructuras involucradas en la adherencia e invasibilidad: cpsula, LOS y protenas de superficie (Opa, Por, Rmp, sideroforos) 2.4 Epidemiologa 2.4.1 Gonorrea como problema de salud pblica 2.4.2 El hombre como nico hospedero natural 2.4.3 Factores de riesgo 2.4.4 Distribucin geogrfica. 2.5 Patogenia 2.5.1 Infecciones localizadas: En la mujer: endometritis, salpingitis, cervicitis, vulvovaginitis, enfermedad plvica inflamatoria, gonorrea ano-rectal en la mujer. En el hombre: Uretritis, epididimitis, y gonorrea ano-rectal. Conjuntivitis purulenta en el recin nacido 2.5.2 Infecciones sistmicas: Meningitis, Endocarditis Artritis sptica Dermatitis 2.5.3 Otras enfermedades Infeccin de vas urinarias Faringoamigdalitis
2.6 Participacin de la respuesta inmune en el control de la infeccin. 2.7. Diagnstico diferencial Chlamydia trachomatis 2.8. Diagnstico de laboratorio 2.8.1 Frotis y tincin de Gram de exudado uretral o de otro tipo 2.8.2 Cultivo 2.9. Estrategias de tratamiento 2.9.1 Antimicrobiano de eleccin 2.10 Prevencin y control 2.10.1 Control en personas con vida sexual activa (principalmente en sexo-servidores) 2.10.2 Terapia preventiva con antimicrobianos 3. Treponema pallidum. 3.1 Antecedentes Histricos. 3.2 Caractersticas del microorganismo 3.2.1 Morfologa envoltura celular, endoflagelo (movilidad), protenas externas 3.3 Factores de virulencia 3.3.1 Capacidad de adherencia a fibronectina soluble y de los tejidos 3.3.2 Movilidad (endoflagelo) y diseminacin (enzima metaloproteinasa-1) 3.3.3 Estimulacin de la respuesta inflamatoria (protenas TpN17 y TpN47 estimulan la expresin de molculas de adhesin ICAM-1, VCAM-1 y selectina-E sobre las clulas endoteliales de los capilales). 3.4 Epidemiologa 3.4.1 La sfilis como un problema de salud pblica. 3.4.2 Frecuencia en las ltimas dcadas. 3.4.3 El hombre como nico hospedero natural. 3.4.4 Va de transmisin. 3.4.5 Factores de riesgo.
3.5 Patogenia 3.5.1 Cuadro clnico Sfilis primaria Sfilis secundaria Sfilis latente Sfilis terciaria Neurosifilis Sfilis congnita Sndromes sifilticos 3.6 Participacin de la respuesta inmune en el control de la infeccin. 3.7 Complicaciones Glomerulonefritis Sndrome nefrtico
4.3.3 Factores predisponentes para adquirir la infeccin 4.4 Participacin de la respuesta inmune en el control de la infeccin. 4.5 Patogenia 4.5.1 Chancro blando 4.6 Diagnstico de laboratorio 4.6.1 Cultivo 4.6.2 Pruebas moleculares 4.6.3 Pruebas serolgicas 4.7 Diagnstico diferencial Sfilis primaria o secundaria Ulcera por herpes 4.8 Estrategias de tratamiento 4.9 Prevencin y control 5. Ureaplasma urealyticum Mycoplasma. 5.1 Caractersticas de los microorganismos 5.1.1 Morfologa, envoltura celular, actividad enzimtica 5.1.2 Medio de cultivo y condiciones de desarrollo 5.2 Factores de virulencia 5.2.1 Protenas de superficie 5.2.2 Induccin de citocinas proinflamatorias a travs de macrfagos 5.3 Epidemiologa 5.3.1 Incidencia y distribucin 5.3.2 Poblacin de riesgo. 5.4 Patogenia 5.4.2. Uretritis no gonoccica 5.4.3. Enfermedad plvica inflamatoria 5.5 Participacin de la respuesta inmune en el control de la infeccin. 5.6 Complicaciones 5.6.1 Ruptura prematura de membranas 5.6.2 Parto prematuro 5.6.3 Neonatos con bajo peso al nacer 5.6.4 Infertilidad
3.8 Diagnstico de laboratorio 3.8.1 Microscoscopa de campo oscuro. 3.8.2 Pruebas serolgicas inespecficas (no treponemicas): VDRL (Venereal Disease Reserch Laboratory) y prueba rpida de la reagina en plasma (RPR) 3.8.3 Pruebas serolgicas especficas (treponemicas): prueba de absorcin de anticuerpos fluorescentes treponemicos (FTAABS) y prueba de partculas de aglutinacin T. pallidum, (TP-PA) 3.9 Estrategias de tratamiento 3.10 Prevencin y control 3.10.1 Control en personas con vida sexual activa (principalmente en sexo-servidores): 3.10.2 Terapia preventiva con antimicrobianos. 4. Haemophylus ducreyi 4.1 Caractersticas del microorganismo 4.1.1 Morfologa, tincin, agrupacin 4.1.2 Condiciones de crecimiento y metabolismo 4.2 Factores de virulencia 4.2.1 Protenas de superficie involucradas en la adherencia a clulas epiteliales y matriz extracelular 4.2.2 Enzimas y toxinas que intervienen en el dao celular 4.3 Epidemiologa 4.3 1 Prevalencia y distribucin 4.3.2 Poblacin en riesgo
5.7 Diagnstico 5.7.1 Cultivo 5.7.2 Pruebas moleculares: PCR 5.8 Diagnstico diferencial 5.9 Estrategias de tratamiento 5.10 Prevencin y control 6. Gardnerella vaginalis. 6.1 Caractersticas del microorganismo 6.1.1 Morfologa, tincin, envoltura celular 6.2 Factores de virulencia 6.3 Epidemiologa 6.3.1 Incidencia y distribucin 6.4 Patogenia. 6.4.1 Vaginosis bacteriana 6.4.2 Infeccin de vas urinarias 6.5 Participacin de la respuesta inmune en el control de la infeccin 6.6 Diagnstico de laboratorio Examen en fresco-clulas clave, Prueba de KOH Cultivo 6.7 Diagnstico diferencial 6.7.1 Vaginosis; candidiasis tricomoniasis. 6.7.2 Vaginitis atrfica 6.8 Estrategias de tratamiento 6.9 Prevencin y control
positivos:
1.5.2 Otras infecciones asociadas al microorganismo Sepsis, epiglotitis Haemophilus influenzae no capsulado: Sinusitis, otitis media y neumona. 1.6 Participacin de la inmunidad en el control de la infeccin 1.7 Complicaciones 1.7.1 Edema cerebral 1.7.2 Alteraciones en la excitabilidad neuronal 1.7.3 Secuelas neurolgicas graves: hidrocefalia, sordera y retraso mental 1.7.4 Prpura trombocitopenica 1.8 Diagnstico diferencial Neisseria meningitidis Streptococcus pneumoniae 1.9 Diagnstico de laboratorio 1.9.1 Frotis y Tincin de Gram 1.9.2 Cultivo de LCR 1.9.3 Anlisis citoqumico del LCR 1.9.4 Pruebas serolgicas 1.9.5 Pruebas moleculares: PCR 1.10 Estrategias de Tratamiento
1.11 Prevencin y control 1.11.1 Vacuna 2. Neisseria meningitidis 2.1 Caractersticas del microorganismo 2.2 Factores de Virulencia 2.1.1 Tipo IV, protena Opa, porinas LPS, peptidoglicano, Induccin de mediadores inflamatorios por las leptomeninges 2.1.2 Polisacrido capsular, IgA proteasa, variacin de fase el gen siaD que codifica para la cpsula, variacin antignica de Pili. 2.3 Epidemiologa 2.3.1 Mortalidad y morbilidad 2.3.2 Incidencia 2.3.3 Poblacin en riesgo 2.3.4 Portador asintomtico 2.3.5 Mecanismo de transmisin 2.4 Patogena 2.4.1 Meningoencefalitis 2.5 Participacin de la respuesta inmune en el control de la infeccin 2.6 Diagnstico diferencial Haemophilus influenzae serotipo b y Streptococcus pneumoniae 2.7 Diagnstico de laboratorio 2.7.1 Frotis y Tincin de Gram 2.7.2 Cultivo de LCR 2.7.3 Anlisis citoqumico del LCR 2.7.4 Pruebas serolgicas 2.7.5 Pruebas moleculares: PCR 2.8 Estrategias de Tratamiento 2.9 Prevencin y Control 3. Otros microorganismos que producen infeccin del sistema nervioso central 3.1 Streptococcus pneumoniae 3.2 Mycobacterium tuberculosis
Mencionar las diferencias sobresalientes (con los otros agentes etiolgicos) que orienten al diagnstico clnico por este microorganismo
2.10.2 Eliminacin del microorganismo (Antimicrobianos) 2.10.3 Inmunizacin pasiva con antitoxina botulnica trivalente (contra las toxinas A, B y E) 2.11 Prevencin y control.
MICROORGANISMOS CAUSANTES DE ENFERMEDADES DEL TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR. Streptococcus pneumoniae, H. influenzae Mycoplasma pneumoniae S. pneumoniae, H. influenzae, Chlamydia trachomatis (neonatos) Bordetella pertussis M. pneumoniae, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci Mycobacterium tuberculosis S. aureus Bacteroides spp. Fusobacterium spp. S. aureus, H. influenzae, Pseudomonas aeruginosa S. pneumoniae, H. influenzae Enfermedades agudas Bronquitis aguda (secundaria a infeccin viral) Neumona Tos ferina Neumonas atpicas Enfermedades crnicas Tuberculosis Empiema y derrame pleural Abscesos pulmonares Infecciones en fibrosis quistica Bronquitis crnica
BACTERIAS CAUSALES DE ENFERMEDADES DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR. Agente causal Enfermedad Streptococcus pyogenes, Corynebacterium Faringitis y amigdalitis diphtheriae, Haemophilus influenzae, Borrelia vincenti. Streptococcus pneumoniae, H. influenzae, S. pyogenes, Staphylococcus aureus H. influenzae S. aureus, Proteus spp. Pseudomonas aeruginosa Corynebacterium diphtheriae Otitis media aguda Sinusitis aguda Epiglotitis Otitis externa Difteria
OTROS AGENTES PRODUCTORES DE ENFERMEDAD PULMONAR Nocardia, Rhodococcus Enfermedad pulmonar Nocardia asteroides (inmunodeprimidos, SIDA o Enfermedad sistmica pacientes que han recibido transplantes de rganos)
PRODUCTORAS
DE
INFECCIONES
EN
PIEL
TEJIDO
Micetoma, infeccin linfocutanea, abscesos superficiales, celulitis. Diseminacin hematgena frecuente en pacientes inmunocomprometidos. Micetoma
Intestino grueso
Diarrea disenteriforme
Chlamydia trachomatis
Haemophilus ducreyi
MICROORGANISMOS ASOCIADOS A MENINGITIS BACTERIANA POR GRUPO DE EDAD Grupo de edad Recin nacido (0 a 4 semanas) Principales patgenos bacterianos Bacterias gramnegativas Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis Enterobacter sp. Pseudomonas sp. Salmonella sp. Acinetobacter sp. Citrobacter sp. Bacterias grampositivas Streptococcus agalactiae Streptococcus pneumoniae Staphylococcus aureus Staphylococcus coagulasa-negativa De 4 a 12 semanas de edad Haemophilus influenzae tipo B Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidis Mycobacterium tuberculosis Todos los referidos en el grupo anterior Haemophilus influenzae tipo B Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidis Mycobacterium tuberculosis Haemophilus influenzae Mycobacterium tuberculosis Streptococcus pneumoniae Neisseria meningitidis tipo B Haemophilus influenzae tipo b Neisseria meningitidis Listeria monocytogenes
Enterococos
De ms de 3 a36 meses
De ms de 3 aos
Microorganismos crnicas
causantes
de
meningitis
Treponema
ANAEROBIOS ESPORULADOS CAUSANTES DE ALTERACIONES DEL SISTEMA NERVIOSO Bacterias esporuladas Padecimiento Clostridium tetani Clostridium botulinum Ttanos Botulismo
BACTERIAS CAUSANTES DE ENFERMEDADES TRANSMITIDAS POR VECTORES Microorganismos Vector Enfermedad Ixodes spp Borrelia burgdorferi Enfermedad de Lyme Borrrelia garinii Borrelia afzelli Borrelia recurrentis Pediculus humanus Fiebre recurrente epidmica Borrelia hispanica Ornithodorus maraccanus Borrelia mazzotti Ornitodorus talaje Borrelia turicatae Ornitodorus turicata
PRCTICAS
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Normas a seguir en el laboratorio. 1. 2. 3. 4. Limpie la superficie de su mesa con una solucin germicida, al principio y al final de cada sesin de laboratorio. Mantenga la mesa libre de todo lo que no sea esencial y al final de la sesin djela limpia y libre de material y equipo. Ponga todo el material slido en las .canastilla para este fin y el material de vidrio en las gradillas. Debido a que algunos de los microorganismos con que se va a trabajar son patgenos en potencia, es necesario desarrollar tcnicas de asepsia al manejarlos y transferirlos. Evite contacto de la boca con las manos, comer o humedecer las etiquetas con la lengua.
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6. Informe inmediatamente al instructor de cualquier accidente tal como cortaduras, quemaduras o derrame de cultivos. 7. Tome todas las precauciones posibles para evitar estos accidentes. Precauciones sistemticas de seguridad. Agujas y material de vidrio. 1. 2. 3. Desechar todo material de vidrio que est quebrado o rajado, y colocarlo en recipientes adecuados. Recoger los vidrios rotos con escobilln y pala; no hacerlo con la mano. Los artculos de vidrio no deben ser arrojados a la pileta ni arrojarlos sueltos a un cesto de desperdicios en el que se arrojan artculos de papel. Las agujas y lancetas usadas deben colocarse en recipientes adecuados para agujas usadas, que se elimina de manera adecuada. Evitar, siempre que sea posible, quitar o intercambiar las agujas de las jeringas. La prctica de cambiar las agujas antes de descartar la sangre extrada de la vena dentro de la botella de cultivo ha sido abandonada por la mayora de los hospitales.
sangre o suero. Utilizando guantes, toallas de papel o gasa para absorber e lquido, y luego realice un lavado minucioso con agua. Guarde en una bolsa todo el material empleado contaminado, para eliminarlo como material infeccioso. Manipulacin de desperdicios. 1. Reserve algunas de las piletas del laboratorio para eliminar muestras de sangre y orina. No permitir el lavado de manos en estas piletas. 2. Eliminar en recipientes adecuados y rotulados; tubos con sangre, pipetas, puntas, agujas. 3. El material de vidrio o cortante debe ser eliminado en recipientes adecuados de paredes slidas. 4. Llevar estos recipientes al rea de desecho con la frecuencia necesaria para evitar su acumulo. 5. Sumerja el material de vidrio contaminado en solucin desinfectante. Enjuague minuciosamente con agua y esterilizarlo antes de usarlo otra vez. NOTA: Recuerde que las medidas de seguridad estn dirigidas al manejo adecuado de productos Corrosivo, Reactivos. Explosivos, Txico, Inflamables, Biolgicos-infecciosos (CRETIB) y Radioactivos con el fin de evitar riesgos.
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Manejo de muestras y derrames. 1. Las muestras se deben de recolectar en recipientes slidos, con cierres adecuados para evitar derrames y prdidas. Todas las muestras deben ser consideradas potencialmente peligrosas. Las cortaduras en las manos debern ser adecuadamente protegidas con tela adhesiva. Si la actividad laborar implica en manejo de sangre, suero, plasma u otras muestras, se debe de usar guantes desechables. Si una muestra presenta evidencia de rotura, derrame o suciedad dentro del recipiente, ponerse guantes. Las muestras contaminadas con sangre deben ser rechazadas. Manipularlas solo con guantes. Notificar este hecho como peligroso para la salud. Lavarse las manos minuciosamente con agua y jabn varias veces al da, en particular despus de manipular las muestras y antes de retirarse. Inunde con solucin desinfectante cualquier rea donde haya ocurrido un derrame de
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5. No dejar el portaobjeto puesto, cuando no se est usando el microscopio. 6. Al terminar la observacin con el objetivo de inmersin debe retirarse el aceite utilizando papel seda o un lienzo suave, limpio y seco, porque de no hacerlo se reseca, dificultando su limpieza y causando deterioro del lente. 7. 8. Si los objetivos de poco aumento se manchan con aceite, limpiarlos inmediatamente con papel seda. Si el aceite se ha secado o endurecido en las lentes, se puede limpiar con papel humedecido con xilol. Precauciones; un exceso de xilol puede disolver el cemento que une las lentes. Las lentes de los objetivos, el condensador y los oculares han sido cuidadosamente ajustados en la fbrica de origen, por lo tanto, no deben ser desarmados por el observador. Recuerde que el poder de resolucin del microscopio, depende de que todas las lentes estn centradas y a la distancia correcta unas de otras. Los objetivos, el condensador y los oculares, pueden limpiarse con agua destilada; la lente de inmersin y la parte superior del condensador con xilol, pero con poca cantidad, humedeciendo ligeramente un lienzo y pasndolo suavemente por la superficie del lente. NO se debe de usar este solvente en exceso, porque las lentes vienen montadas con blsamo de Canad, el cual puede disolverse. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarla con un pao. Si se mancha con aceite, limpiarla con un pao humedecido con xilol. La superficie del microscopio se puede limpiar con un lienzo humedecido con agua. La cremallera del tornillo macromtrico debe limpiarse ocasionalmente con una pequea cantidad de aceite o grasa delgada. El tornillo micromtrico no necesita aceite.
II.- Introduccin. El microscopio es un instrumento de gran utilidad en el estudio de la Microbiologa. El microscopio puede ser simple, cuando su sistema se basa en una lente biconvexa, en tanto que el microcopio compuesto utiliza dos sistemas de lentes que se encuentran separados, consiguiendo con ello un mayor aumento. Entre estos el ms usado es el microscopio de luz, el cual emplea fotones de luz visible para formar imgenes. Sin embargo, el tipo de luz empleada y como se manipula la luz puede variar. Los tipos de microscopios de luz ms comunes son; el de campo brillante, campo oscuro, contraste de fase y microcopio de fluorescencia. El microscopio de luz brillante, se encuentra constituido por tres sistemas: 1.- Sistema ptico. 2.- Sistema mecnico. 3.- Sistema de iluminacin. III.- Cuidados que hay que tener con microscopio. el
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1. El microscopio debe guardarse protegido de la humedad y el polvo. 2. Al trasladarlo, debe sujetarse de su brazo y del soporte o base. 3. Antes de usarlo, debe cerciorarse de que las lentes accesibles (objetivos, oculares y condensador) estn limpias, de no ser as, hay que limpiarlas con papel seda especial para evitar su deterioro. 4. No tocar nunca las lentes.
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13. No inclinar el microscopio cuando se est trabajando con aceite de inmersin. Este puede caer al sistema mecnico de la platina de donde es difcil limpiarlo, o puede gotear al condensador y all solidificarse. 14. Cuando no se usa el microcopio, guardarlo cubierto y en su caja. Para evitar rotura del microscopio: 1. No forzarlo nunca. 2. Las lentes objetivo no deben tocar nunca los portaobjetos. 3. No bajar el tubo del microscopio con el tornillo de enfoque macromtrico mientras se est mirando por el ocular. 4. No intercambiar los objetivos o los oculares de microscopios distintos, y bajo ninguna circunstancia, se deben separar las lentes frontales de los objetivos. IV.- Material. 1. Microscopios compuestos. 2. Preparaciones fijas de bacterias, protozoos, hongos y artrpodos de importancia mdica. 3. Preparaciones en fresco (cultivo de paja). 4. Portaobjetos. 5. Cubreobjetos. 6. Aceite de inmersin. 7. Papel seda. 8. Diapositivas.
Recoleccin de esputo de un paciente con tuberculosis, importancia del nmero de muestras a examinar para evitar falsos negativos, recoleccin de lavado bronquial o de esputo de un paciente con neumona. Recoleccin de materia fecal de un, neonato, lactante adulto o viejo. Recoleccin de muestra clnica para cultivo de nasofaringe o faringe. III.- Explicar las diferentes tcnicas de cultivo y aislamiento en la siembra de muestras clnicas, en medios de cultivo slidos y lquidos. El profesor Sealar la importancia de obtener cultivos puros o colonias perfectamente aisladas que permitan la identificacin del microorganismo asociado a una enfermedad infecciosa bacteriana. a) Condiciones de transporte de la muestra al laboratorio b) Considerar el tiempo mximo permitido que tolera una muestra clnica, antes de su procesamiento en el laboratorio. c) Explicar los tipos de inoculacin en los medios de cultivo; sembrado con el asa bacteriolgica (perfectamente estril) por estra, dividiendo la placa de agar en cuatro cuadrantes, con la finalidad de obtener colonias aisladas en el ltimo cuadrante. Sembrado masivo con el asa bacteriolgica, a travs de toda la superficie del agar (explicar en que tipo de muestra se utiliza esta tcnica). Sembrado por picadura, en medios de cultivo slidos, semislidos o lquidos. d) Explicar la importancia de manejar la muestra clnica en condiciones de esterilidad: desde su recoleccin, almacenamiento y procesamiento. Respetar el radio de trabajo que da la zona de esterilidad del mechero. e) Mencionar en que muestras clnicas especficas se requiere hacer diluciones para obtener un cultivo cuantitativo, o que muestras clnicas requieren un procedimiento de descontaminacin antes de ser sembradas. IV.- Informar al alumno de los tipos de medios de cultivo que se utilizan en el crecimiento y aislamiento de los diferentes microorganismos involucrados con las enfermedades infecciosas. Sealar las diferencias y especificaciones de cada uno de los medios de cultivo utilizados en la recuperacin, crecimiento y aislamiento de los diferentes microorganismos
a) b) c) d) e)
Medios de transporte Medios primarios, Medios enriquecidos, Medios selectivos, Medios diferenciales.
En el laboratorio de bacteriologa, el xito de la identificacin del microorganismo y el reporte del resultado depende principalmente de la toma correcta de la muestra clnica y de su transporte al laboratorio. El objetivo es garantizar la viabilidad de la bacteria responsable de la enfermedad infecciosa y de su recuperacin en el laboratorio, para una correcta identificacin. La forma ms eficaz de garantizar la supervivencia del agente infeccioso en la muestra clnica recolectada, es utilizar un medio de transporte adecuado, donde ser depositado el material clnico de estudio para llevarse lo antes posible al laboratorio de bacteriologa para su cultivo. En casos de muestras de heridas y abscesos, es importante transportarlas en medios para microorganismos anaerobios y microaerfilos, que aseguren el aislamiento de este tipo de bacterias. V.- Mencionar las condiciones especficas de incubacin y el tiempo que necesitan los diferentes microorganismos para su crecimiento. Los profesores del curso darn ejemplos de bacterias anaerobias, aerobias y microaerofilicas, as como microorganismos de crecimiento lento y rpido. Los medios de cultivo pueden ser: incubados en atmsfera de aerobiosis, anaerobiosis o con concentraciones especficas de CO2 (microaerofilia), dependiendo del microorganismo que se sospeche. VI.- Informar de otras tcnicas de laboratorio, que apoyen en la identificacin correcta del microorganismo. a) Examen en fresco (mencionar en que casos es til y cul es su diferencia con un frotis). b) Frotis y tincin de Gram, tincin con azul de metileno (LOEFFLER), tincin de ZIEHL- NEELSEN, tincin con lugol (especificar su utilizacin y el fundamento de cada una de ellas). c) Microscopia ptica, campo oscuro, fluorescencia, etctera. d) Pruebas bioqumicas e) Pruebas de susceptibilidad a antimicrobianos: dilucin en agar, pruebas de difusin en disco.
f) Pruebas serolgicas o inmunolgicas g) Pruebas de biologa molecular VII.- Criterios de interpretacin de resultados: Hacer nfasis en las distintas formas que utiliza el laboratorio para hacer su reporte, por ejemplo; estreptococo beta hemoltico grupo A, EGA Streptococcus pyogenes. Streptococcus pneumoniae neumococo,etctera. Observar que en algunos casos los criterios de interpretacin de un cultivo son variables, dependiendo de diferentes factores. Urocultivo (en relacin a la tcnica de recoleccin de orina o la sintomatologa del paciente) Crecimiento 1-100 UFC 10 000 colonias 100 000 colonias Explicar cual es el criterio de susceptibilidad, susceptibilidad intermedia y resistencia antimicrobiana de un microorganismo Criterios para descartar contaminacin establecer infeccin polimicrobiana. VIII.- Material 1. Se proporcionar material demostrativo para su observacin: 2. Medios de transporte 3. Medios primarios 4. Medios enriquecidos 5. Medios selectivos 6. Medios diferenciales 7. Cultivos bacterianos (Problema 1 y 2) 8. Asa bacteriolgica 9. Mechero 10. Agar nutritivo IX.- Metodologa 1. Manejo del asa bacteriolgica 2. El profesor demostrar el manejo adecuado del asa y explicar las precauciones que se debe tener en la toma del inoculo (esterilizar y dejar enfriar para evitar quemar las bacterias.
4. El material ser incubado a 35 por el C laboratorio 5 para ser utilizado en la prctica siguiente.
3. Aislamiento bacteriolgico a partir de medios de cultivo sembrados, mediante el mtodo de estras en placa.
III. Metodologa Se emplearn los medios de cultivo slidos y lquidos sembrados para realizar frotes y tincin de Gram para su observacin. Preparacin de frotes 1. Trabajar en un rea de aproximadamente 10 cm de distancia de la flama del mechero (zona de esterilidad). 2. Esterilizar el asa, flamearla y enfriarla. 3. Tomar una pequea porcin de una colonia aislada con el asa estril.
4. Resuspender el material del asa en una gota de agua destilada, colocada previamente en un portaobjeto, mezclar y extender la suspensin en un rea no mayor de 2 cm de dimetro. 5. Secar la preparacin al aire libre. 6. Fijar la preparacin con el calor del mechero, evitando el calentamiento excesivo. 7. Marcar cada preparacin con un marcador indeleble. 8. Colocar el frote sobre el puente de tincin. Tincin de Gram 1. Cubrir los frotes con cristal violeta, durante un minuto. 2. Lavar con agua corriente ligeramente. 3. Cubrir con lugol bacteriolgico durante un minuto. 4. Lavar con agua corriente ligeramente. 5. Decolorar el frote con un a mezcla de alcohol-acetona (5 a 7 gotas). 6. Lavar con agua corriente ligeramente. 7. Cubrir con safranina durante 30 segundos. 8. Lavar con agua corriente. 9. Secar al aire libre. 10. Observar al microscopio. Interpretacin Las bacterias que retienen el colorante inicial y se tien de color violeta son Gram positivas y las que se decoloran y se tien con el colorante de contraste son Gram negativas.
II.- Introduccin. Entre los microorganismos involucrados en procesos infecciosos de VRS se encuentra; Streptococcus pyogenes tambin llamado Estreptococo beta hemoltico del grupo A de Lancefield. As como estreptococos del grupo, Arcano bacterium haemolyticum, Staphylococcus aureus, Neisseria gonorrhoeae, Coryne bacterium diphtheriae, Haemophilus influenzae tipo B, Bordetella pertussis, Borrelia Vincenti, Fusobacterium sp. Es importante mencionar que en caso de pacientes inmunocomprometidos pueden participar Klebsiella pneumoniae y Pseudomonas aeruginosa. Entre los virus tenemos una alta participacin de Adenovirus, Epstein-Barr, Coxsackie A, Herpes simple 1 y 2, Virus de la Influenza A y B, Parainfluenza, Coronavirus y Citomegalovirus. Las muestras que se pueden obtener de VRS incluyen, exudado farngeo, exudado nasal, exudado nasofarngeo, lavado nasal y aspirado sinusal entre otras. En el caso del exudado farngeo, su indicacin se encuentra dada con el fin de realizar la deteccin del microorganismo involucrado en el proceso infeccioso de la regin. Sin embargo, debemos considerar que siendo una regin altamente colonizada por microorganismos que forman parte de la flora habitual, la realizacin de la toma de muestras debe ser la adecuada para la
Segunda sesin (Identificacin macroscpica y microscpica). 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Cultivos demostrativos. Cultivos de la prctica anterior Equipo de Tincin de Gram Laminillas Cubreobjetos Asas bacteriolgicas Mecheros Microscopio Aceite de inmersin Papel para la limpieza del microscopio
Pruebas Bioqumicas demostrativas 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Determinacin de hemlisis Prueba de CAMP Manitol salagar Plasma Bacitracina Optoquina Realizar determinacin serolgica en caso de probable Streptococcus pyogenes
IV. Mtodo 1. Para realizar el aislamiento de las bacterias del exudado farngeo, se marcan las zonas de inoculacin en cada medio de cultivo. 2. Toma de muestra: se le pide al paciente que abra bien la boca, se hace descender suavemente la lengua con el abatelengua y se introduce un isopo estril hacia la farnge posterior. Pasar suave y rpidamente el isopo con movimientos hacia arriba y abajo, por detrs de la uvla y entre los pilares tonsilares. 3. Rotar el isopo en la zona nmero 1 de la placa de gelosa sangre, agar chocolate y agar salmanitol. Adems frotarlo en la superficie del medio de BIggy y finalmente hacer un frote en una laminilla. 4. Continuar con la distribucin de la muestra empleando el asa bacteriolgica previamente esterilizada con el fin de lograr el aislamiento deseado. 5. Incubar los cultivos a 37 durante 24 a 48 C horas. 6. Fijar y teir el frote con el mtodo de Gram 7. Observar al microscopio Interpretacin macr y microscpica 1. Gelosa sangre: Observar la morfologa colonial, determinar el tipo de hemlisis (Alfa, Beta o Gamma) 2. Agar salmanitol: Medio que permite observar la capacidad de fermentacin del manitol por parte de Staphylococcus aureus. El indicador har un vire en el medio de cultivo hacia el color amarillo en caso positivo. Si no hay cambio en la coloracin lo consideramos negativo. 3. Medio de Biggy: Las colonias que se observen de color caf obscuro o negro, corresponden a Candida. 4. Plasma: En el caso de Staphylococcus aureus la prueba de coagulasa ser positiva. 5. El halo de inhibicin de bacitracina ser positivo para estreptococo del grupo A. 6. Prueba de CAMP: Permite diferenciar estreptococo beta hemoltico. Es negativa para Streptococcus pyogenes y positiva en el caso de Streptococcus agalactiae. Prueba de aglutinacin para identificacin de Estreptococo Beta Hemoltico del grupo A
Es importante su realizacin con el fin de orientar el tratamiento y pronstico de infecciones producidas por Streptococcus pyogenes. 1. Colocar una gota de una suspensin de colonias aisladas de una placa. 2. Aadir igual cantidad de antisuero SBGA. 3. Mezclar y leer a lops dos minutos contra un fondo obscuro. 4. En otro pozo de la placa de aglutinacin realizar la prueba de control negativo. 5. Comparar resultados. Interpretacin: La presencia de grumos indica SBGA. Esta prueba puede hacerse directamente del exudado farngeo, lo que permite realizar el diagnstico rpido. Sin embargo los resultados negativos deben ser comprobados por el cultivo.
II.- Material 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. Hisopo estril Placas de agar sangre. Placa de agar Mac Conckey Placa de manitol sal agar Tubo con agua destilado o solucin salina isotnica (SSI) Asa para siembra. Marcador. Mechero. Equipo para tincin de Gram. Portaobjetos. Aceite de inmersin. Microscopio.
III. Mtodo Primera sesin. 1. Manos sin lavar. 2. Humedecer el hisopo estril con el agua o SSI estril. 3. Con el hisopo humedecido, tomar la muestra bacteriolgica de los pliegues interdigitales, dorso y palmas. 4. Sembrar con el hisopo en un extremo de la placa con agar sangre, agar manitol y agar Mac Conkey. 5. Realizar el sembrado para obtener colonias aisladas. 6. Rotular la caja de petri. 7. Incubar a 35-37 durante 24-48 horas. C, 2.- Manos lavadas. 1. Realizar el aseo de manos con agua y jabn de manera tradicional. 2. Frotar las manos enjabonadas durante 30 segundos. 3. Humedecer el hisopo estril con agua o SSI estril. 4. Tomar la muestra de los espacios interdigitales, del dorso y palmas.
5. Sembrar en la placa con agar sangre para aislamiento de colonias. 6. Rotular la caja de petri. 7. Incubar a 35-37 durante 24 horas. C, 8. 3.- Limpieza de manos con empleo de gel desinfectante. 9. Realizar el aseo de manos con el alcoholgel. 10. Frotar las manos con al alcohol-gel. 11. Dejar secar durante 40 segundos. NO REALIZAR SECADO. 12. Humedecer el hisopo estril con agua o SSI estril. 13. Tomar la muestra de los espacios interdigitales, del dorso y palmas. 14. Sembrar en las placas con agar sangre, para aislamiento de colonias. 15. Rotular la caja de petri. 16. Incubar a 35-37 durante 24 horas. C, Segunda sesin: 1. Cuantificar el nmero de Unidades Formadoras de Colonias. 2. Dibujar el los crculos los resultados. 3. Realizar Tincin de Gram. 4. Observar al microscopio. 5. Realizar el reporte de la prctica.
SIN LAVAR
Para realizar con xito este mtodo se recomienda: Que el paciente no se encuentre en tratamiento antimicrobiano, antes de recolectar la muestra. Que el recipiente para la muestra sea un frasco de vidrio con tapn de rosca, absolutamente limpio, estril y exento de desinfectantes, detergentes o jabones. En pacientes peditricos, si la muestra no puede obtenerse naturalmente, debe introducirse un hisopo hasta rebasar el esfnter anal y rotarlo suavemente. Cuando sea posible recurrir a la proctoscopa o la sigmoidoscopa, para obtener la muestra procedente de la regin afectada. Es conveniente analizar y sembrar la muestra en cuanto sea recolectada, ya que la flora intestinal puede continuar la fermentacin de los carbohidratos, disminuyendo el pH y con ello, afectando la viabilidad de algunos patgenos delicados. Del mismo modo, las temperaturas de refrigeracin suelen resultar perjudiciales para algunas cepas de Shigella sp. Cuando la muestra no pueda analizarse inmediatamente despus de haberse obtenido, es oportuno el empleo de medios de transporte, tales como el Cary Blair, que carece de nutrimentos y cuyo contenido en sales y tioglicolato preserva la viabilidad de los microorganismos patgenos, sin que ocurra un crecimiento considerable de ellos ni de los miembros de la flora intestinal.
Si la evacuacin es slida, antes de la siembra debe colocarse en solucin salina isotnica buscando que quede en una proporcin de 1:8 a 1:10 aproximadamente. Cuando la muestra presenta moco y/o sangre, estos materiales son los que se siembran. Los medios mas empleados en el coprocultivo para el aislamiento e identificacin de bacterias, se clasifican como selectivos y diferenciales, puesto que contienen inhibidores para bacterias Gram positivas y permiten diferenciar entre las colonias lactosa positivo y lactosa negativo, debido a que su formulacin incluye lactosa y un indicador que detecta los cambios de pH. Considerar que el pH de los medios mencionados anteriormente es neutro, por lo tanto, su coloracin inicial ser la de sus respectivos indicadores. Una vez sembrados, las observaciones deben realizarse 24 horas despus ya que el indicador del medio habr virado de acuerdo a la acidez o alcalinidad formada. Las pruebas bioqumicas son otro medio para poder identificar a las enterobacterias. III. Material Primera sesin 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Placa de eosina azul de metileno (EMB) Placa de Salmonella-Shigella (SS) Placa de Verde Brillante (VB) Tubo de citrato de Simmons Tubo de agar hierro triple azcar (TSI) Tubo de agar hierro lisina (LIA) Tubo de agar movilidad ndol ornitina (MIO) Asas bacteriolgicas Problemas 1, 2 y 3
2.
3.
4. 5.
pequea porcin con un hisopo estril, de preferencia de los sitios con moco y sangre. Con el hisopo, inocular las siguientes medios: EMB, SS y VB, seguir el procedimiento por estras en placa para el aislamiento de colonias Con el mismo hisopo inocular el caldo de tetrationato, al que previamente se le agregan tres gotas de solucin de yodo y dejar el hisopo dentro. Incubar a 37 durante 24 horas C Sembrar en los tubos de citrato, TSI, LIA y MIO, la bacteria problema, como lo indique el profesor, incubar a 37 C durante 24 horas, identificar al o los microorganismos De a las pruebas bioqumicas.
Nota: En la prctica mdica, el coprocultivo se realiza como se indica en el diagrama 1, por lo que el resultado se obtiene de tres a cinco das. Segunda sesin: 1. Observar la morfologa colonial en las placas sembradas 2. Comparar la morfologa de las cajas demostrativas que se proporcionaron 3. Hacer la lectura de las pruebas bioqumicas demostrativas que se proporcionaron 4. Interpretar e identificar la bacteria sembrada en el juego de pruebas bioqumicas (auxiliarse con las tablas y diagramas anexos) Interpretacin de bioqumicas. Agar citrato de Simmons: Prueba empleada para diferenciar aquellas bacterias que emplean el citrato como nica fuente de carbono y energa. Tiene como indicador, al colorante azul de bromotimol, que se alcaliniza al emplear las sales de amonio, que hace que el medio vire a un color azul, cuando es positivo. TSI (Agar triple azucar-hierro).Prueba que permite observar la fermentacin de glucosa, lactosa y sacarosa as como la produccin de gas, cido sulfhdrico.
Segunda sesin: 1. Cultivos demostrativos. 2. Pruebas bioqumicas demostrativas. 3. Cultivos de la practica anterior 4. Reactivo de Kovac IV. Mtodo Primera sesin: 1. Obtener una muestra de material fecal en un frasco estril y de aqu tomar una
inoculadas
La fermentacin acidifica el medio, haciendo que el indicador (rojo de fenol) vire a amarillo. En tanto que el tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno que reacciona con sales de hierro, proporcionando sulfuro de hiero de color negro. LIA (Agar hierro lisina). Prueba basada en la descarboxilacin y desaminacin de lisina, as como en la produccin de cido sulfhdrico. Descarboxilacin de la lisina positiva; Pico violeta/fondo violeta. Prueba negativa: Pico violeta/ fondo amarillo. Desaminacin de la lisina; Pico rojizo/fondo amarillo, se presenta en Proteus, Providencia y Morganella sp Produccin de cido sulfhdrico: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite entre el pico y el fondo. MIO (Agar hierro ornitina). Prueba que permite detectar la movilidad del microorganismo, produccin de indol y descarboxilacin de ornitina. La fermentacin de la dextrosa hace que el medio vire a un color amarillo. La descarboxilacin de la ornitina alcaliniza el medio dando un vire a color prpura.
La produccin de indol a partir del triptfano se manifiesta al agregar el reactivo de Kovac o de Erlich.
ANOTAR RESULTADOS:
PRCTICA Nm. 8
UROCULTIVO.
I.- Objetivos: 1. Conocer las principales enfermedades que afectan al tracto urinario y los agentes etiolgicos ms relevantes. 2. Conocer las diferentes tcnicas mediante las cuales se obtienen adecuadamente las muestras a analizar, sealando sus respectivas ventajas y desventajas. 3. Describir las metodologas y los fundamentos asociados al diagnstico del laboratorio de los padecimientos urinarios ocasionados por bacterias. 4. Interpretar y reportar convenientemente los resultados que se obtienen en los estudios microbiolgicos relacionados con afecciones del tracto urinario. II. Introduccin: Las infecciones urinarias son de las ms importantes en el ser humano, afectan con mayor frecuencia a las mujeres, se adquiere con mayor regularidad por va ascendente o exgena que por la endgena, previa septicemia y se asocia principalmente a la falta de higiene, malformaciones, uropata obstructiva, alteraciones neurognicas de vejiga, cateterismo uretral, diabetes mellitus, embarazo, hipertensin arterial, neoplasias, alteraciones de los mecanismos de defensa especficos e inespecficos. Uno de los riesgos ms serios de las infecciones urinarias radica en que, cualquiera de las zonas afectadas del tracto, constituye un importante foco a partir del cual los microorganismos responsables pueden diseminarse hasta el rin e inclusive migrar de ste hacia la sangre, comprometiendo en ambos casos, la vida del enfermo. En la mujer, la uretrocistitis es la entidad clnica ms frecuente y generalmente cursa en forma aguda. En el hombre, esta afeccin y la prostatitits son las ms comunes, aunque la segunda se distingue por el hecho de que puede manifestarse como aguda o crnica, resultando difcil de curar y siendo causa constante de recadas, adems de ser ocasionada hasta en 10 % de los casos por dos o ms microorganismos. Sin embargo, la pielonefritis representa en ambos sexos la entidad de mayor gravedad y se debe en un 10 % de los casos a ms de una especie, sobre todo cuando se trata de pacientes sometidos a cateterismo
lesiones
Los agentes etiolgicos de infecciones del tracto urinario estn limitados a unos cuantos microorganismos de crecimiento rpido. Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter sp, Proteus sp estafilococos coagulasa negativa, destacando la especie S. saprophyticus, Pseudomonas sp. y Candida albicans, representan los principales aislamientos tanto de pacientes hospitalizados como externos. Las muestras de orina son remitidas para urocultivo a partir de pacientes con sntomas de infecciones del tracto urinario y de pacientes asintomticos con alto riesgo de infeccin y si no es colectada apropiadamente, sta puede contaminarse con microorganismos de la flora normal del perin,la prstata, la uretra o la vagina. La recoleccin de las mismas se realiza mediante varios mtodos, entre los que destacan el de la media miccin, el cateterismo, la puncin suprapbica, la habilitacin de los catteres permanentes y el empleo de colectores peditricos. Coleccin de la muestra 1. El mtodo que se realiza regularmente es el de la media miccin, debido a que no representa mayores problemas para el paciente. 2. Se recomienda que el paciente realice la limpieza adecuada de las zonas cercanas a la uretra. Una vez efectuada la limpieza, se descarta en el inodoro la primera parte de la miccin y, sin que esta se suspenda, se recogen los 20 a 30 ml siguientes en un recipiente de boca amplia, con tapn de rosca, estril, sin trazas de detergente o desinfectantes. 3. Cateterismo vesical. Esta tcnica aumenta el riesgo de infecciones del tracto urinario ya que, con frecuencia acta como vehculo para que los microorganismos, presentes en la sonda o en la porcin externa de la uretra, alcancen vejiga, ureteros y rin, agravando la condicin de los enfermos, por lo tanto, este procedimiento no es recomendado de rutina.
4. Orina colectada por puncin (aspiracin) suprapbico de la vejiga. Evita la contaminacin asociada con la coleccin de orina emitida espontneamente. Este mtodo es el mtodo preferido para pacientes en estado de coma o cuando los resultados obtenidos con otras tcnicas sean confusos, ya que la muestra se obtiene directamente de la vejiga y, bajo estas condiciones, no se contamina con microorganismos provenientes de otros sitios (siempre que la asepsia previa se haya realizado cuidadosamente). 5. Orina colectada de un asa ileal, despus de la remocin del dispositivo externo y la insercin de un catter despus de limpiar la toma 6. Las puntas de sondas (catter) de Foley no son aceptables para cultivos. 7. Finalmente, la utilizacin de bolsas colectoras peditricas es adecuada en los nios en quienes, debido a su corta edad, no se puede emplear el mtodo de la media miccin; dichos colectores se fijan a los genitales sin resultar incmodos, dado que el material con el que se confeccionan es blando y plegable. Momento de la coleccin de la muestra 1. Obtener la primera orina de la maana, debido al elevado nmero de bacterias despus de un cultivo durante toda la noche de incubacin en la vejiga. 2. No forzar la ingesta de lquidos, ya que diluir la orina y puede disminuir la cuenta de colonias a menos de cien mil UFC/ml 3. Colectar tres muestras consecutivas de orina temprano en la maana para pacientes asintomticos. Transporte de muestras 1. Transportar la muestra al laboratorio tan pronto como sea posible despus de la coleccin. 2. Cultivar las muestras dentro de las dos horas posteriores a la coleccin, o refrigerar la muestra y cultivarla dentro de las siguientes 8 horas cuando sea necesario. 3. Las muestras de orina refrigeradas pueden ser conservadas 24 horas o menos , debido a que las cuentas bacterianas a menudo permanecen estables durante 24 h a 4C
4. Se requiere repetir una muestra de orina cuando no hay evidencia de refrigeracin y la muestra tiene mas de 2 horas de haber sido obtenida. 5. Se requiere repetir la muestra cuando el tiempo y mtodo de coleccin no han sido observados 6. Si se trata de una muestra colectada, transportada y manejada de manera inadecuada y no puede ser reemplazada, se documenta en el reporte final que la calidad de la muestra no es la adecuada. 7. La refrigeracin no es necesaria si la muestra de orina es colectada en tubos de transporte con preservativos 8. Colocar cuando menos 3 ml de orina en un tubo de transporte conteniendo un preservativo para evitar un efecto inhibitorio o diluyente en los microorganismos. Anlisis de las muestras. Los mtodos para el anlisis de las muestras son cuantitativos debido a la elevada frecuencia con la que las muestras se contaminan durante su obtencin, excepto para los escasos especmenes recolectados mediante punciones suprapbicas, ya que para stas solo se necesita efectuar anlisis cualitativos. DETECCION DE BACTERIURIA Tincin de Gram El mtodo de tincin de Gram puede detectar la presencia tanto de bacterias como leucocitos en muestras de orina Mtodo: 1. Colocar 10 microlitros de orina no centrifugada y bien mezclada sobre un portaobjetos de vidrio y dejar secar al aire sin extender 2. Fijar, teir e identificar al microorganismo. 3. Determinar el nmero de microorganismos por campo de inmersin
Interpretacin: 1. Reportar el nmero de microorganismos por campo de inmersin 2. La presencia de uno o ms microorganismos por campo de inmersin 5 correlaciona con una cuenta > 0 = a 10 UFC/ml 3. La presencia de muchas clulas epiteliales escamosas y diferentes morfotipos microbianos indica contaminacin y requiere repeticin de la muestra.
denominados criterios de Kass, adems de la historia clnica, la sintomatologa o la edad avanzada del paciente, entre algunos otros factores que apunten hacia la firme posibilidad de una patologa urinaria, debido a que algunas bacterias se pueden presentar como contaminantes de la muestra o se presentan casos en los que no llegan a alcanzar las cifras reconocidas como significativas (segn Kass) Los criterios de Kass establecen lo siguiente: No de UFC/ ml INTERPRETACION 100,000 o mas Infeccin activa Alrededor de Dudosa* 10,000 Contaminacin de la muestra 1000 o menos *Debe analizarse otra muestra del paciente.
METODOS DE CULTIVO 1. Mtodo de estriado en superficie (asa calibrada) Las asas calibradas presentan caractersticas especficas que las habilitan para recoger, si solo se introduce a la muestra la parte circular, un volumen conocido de orina. La siembra se realiza descargando su contenido en toda la superficie del medio seleccionado. Cabe sealar que la eleccin de los medios es importante. No debe faltar una gelosa sangre u otro medio en el que pueda desarrollar el agente etiolgico, aunque este sea exigente en cuanto a sus requerimientos nutricionales, y algunos otros medios con caractersticas diferenciales y/o selectivas, que permitan el desarrollo de los patgenos, inhibiendo a los contaminantes. Las placas sembradas se incuban a 35 C en atmosfera normal de aerobiosis y durante 24 a 48 horas. Transcurrido el tiempo, se analizan las caractersticas macroscpicas obtenidas, poniendo especial cuidado en detectar si estn presentes uno o ms microorganismos diferentes y en realizar el recuento correspondiente. Como las asas comerciales ms utilizadas son las que recogen un volumen de 0.001 ml de orina, el nmero de colonias de cada caja deber multiplicarse por 1000 para conocer la cantidad de microorganismos o de UFC que la muestra contiene por mililitro. Adicionalmente, deben someterse a pruebas de identificacin, tomando en cuenta que las infecciones urinarias son causadas, en el 85 a 90 % de los casos, por una sola especie. Para la interpretacin de resultados es importante considerar de manera conjunta, la identidad de los microorganismos obtenidos en mayor cantidad y los
El paciente se encuentra bajo tratamiento antimicrobiano poco antes o durante la recoleccin de la muestra: El causante del cuadro en incapaz de desarrollar en los medios utilizados o bajo las condiciones de incubacin que se seleccionaron La muestra analizada no fue la primera de la maana El depsito en el que se recoge el espcimen contiene restos de detergente o desinfectante El enfermo se encontraba recibiendo lquidos intravenosos La calidad y/o la preparacin de los medios no es la adecuada El asa calibrada recoga volmenes menores a los esperados La muestra no se homogeniz antes de introducir el asa La alcuota descargada en la superficie del medio no se distribuy adecuadamente.
-Los falsos positivos pueden ocurrir cuando: El paciente no efecta la limpieza previa en forma adecuada El espcimen se siembra despus de haber permanecido una hora o ms a temperatura ambiente
El depsito en el que se recoge la muestra se encuentra contaminado El asa calibrada recoge mayores cantidades que las esperadas La paciente suspendi la miccin para recolectar la parte media El catter se encontraba contaminado
4. Realizar cultivos en anaerobiosis solo en aspirados por puncin suprapbica cuando sean requeridos Durante la practica se realizar un urocultivo, se requiere colectar la primera orina de la maana mediante la tcnica de chorro medio, el paciente se debe lavar la regin periuretral y el perin con agua jabonosa y enjuagar muy bien con solucin salina estril o agua destilada. Durante la recoleccin se desecha la primera porcin de la orina para eliminar por arrastre mecnico las bacterias residentes en la uretra distal, recolectndose nicamente la porcin media de la orina en un recipiente estril, desechando la porcin final. Si la orina no es procesada de inmediato, se debe refrigerar. Material Primera sesin: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Placa de eosina azul de metileno (EMB) Placa de gelosa sangre Placa de gelosa sal-manitol. Asa calibrada de 0.001 ml Orina No 1 Orina No 2 Orina No 3
2. Procedimientos de medio mnimo: Mtodo de las diluciones Este se considera ms confiable que el del asa calibrada, Se realiza preparando diluciones 1:10, 1:100 y 1:1000 a partir de la muestra, emplendose SSI estril como diluyente, y, posteriormente, se coloca 1 ml de la ltima dilucin en una o mas cajas petri estriles, a las que despus se le vierten 20 ml de los medios seleccionados cuando estos se han esterilizado y se encuentran a una temperatura de 45 o 50 C. Las cajas se mezclan, de manera que la alcuota se distribuya uniformemente; finalmente, se permite que los medios solidifiquen y la placa se incuba a 35 C en aerobiosis, durante 24 a 48 h. El procedimiento y la interpretacin de resultados es similar al descrito para el mtodo del asa calibrada. Considerando en este caso, la posibilidad de falsos negativos cuando los medios se vierten a temperaturas mayores a las sealadas, y la de falsos positivos cuando las diluciones se preparan con una misma pipeta o sin condiciones aspticas.
Segunda sesin: 1. Cultivos demostrativos 2. Cultivos de la practica anterior Mtodo Estriado en superficie de agar (asa calibrada)
Consideraciones especiales: 1. No cultivar lo siguiente: a)Puntas de catter de Foley b)Orina en medio lquido c)Sedimento de orina 2. El criterio de > 10 UFC/ml puede ser aplicado a la mayora de las muestras remitidas para cultivo
5
1.
2. 3. 4. 5.
3. Las cuentas de colonias mayor o igual a 5 10 UFC en muestras emitidas espontneamente con disuria y sntomas de infeccin del tracto urinario puede ser importante.
Homogenice la orina agitando el frasco por rotacin con el asa calibrada estril, tome asada y descargue en lnea recta en el centro de la placa de agar EMB y estre masivamente (en forma cruzada a la primera descarga) Repetir el procedimiento en la placa de gelosa sangre Incubar las cajas a 37 durante 24 a 48 C horas Contar el nmero de colonias que desarrollaron en las cajas Si de acuerdo con el criterio de Kass y Stanford, el nmero de bacterias es mayor de 100 000 UFC/ml, se procede a identificar l o los microorganismos por los mtodos usuales.
I.- Objetivos:
Por laboratorio. 1. Hisopos estriles. 2. Pinzas (el alumno traer la suya) 3. Marcador. III.- Mtodo: 1. A partir de un cultivo en placa, tomar con un asa bacteriolgica estril, cuatro o cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfolgico e inocularlas en un tubo que contenga 3 a 5 mL de solucin isotnica o caldo Meller Hinton. Incubar a 35 hasta que aparezca una C turbidez visible (2 5 horas) que se ajusta, con caldo o solucin salina, por comparacin visual hasta obtener una turbidez de la mitad del estndar 1 de Mac Farland (tubo 0.5). Otra alternativa para preparar el inculo es resuspender un cultivo de toda la noche en solucin salina y ajustar su densidad con el tubo 0.5 de Mac Farland. La suspensin ajustada del inculo, no debe permanecer ms de 15 a 20 minutos antes de proceder a sembrarla en la placa de gelosa Meller Hinton. Para inocular la placa, utilizar un hisopo estril, el cual se moja en la suspensin bacteriana, quitando el exceso de lquido al presionar el hisopo contra las paredes del tubo, sembrar con el hisopo la caja de agar en tres direcciones. Dejar secar unos 5 minutos la placa antes de depositar los discos. Depositar los discos con unas pinzas estriles y apretarlos ligeramente contra el agar. Esperar 5 10 minutos, invertir la placa e incubarla a 35C durante 16 a 18 horas. Medir con un vernier o la plantilla diseada para este propsito o con una regla, los dimetros de las zonas de inhibicin completas. Comparar los resultados obtenidos con los de la tabla proporcionada por el manual para determinar la sensibilidad del microorganismo. Reportar los resultados obtenidos.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Cultivo Farngeo
Med ios de cultivo Incubacin a 35 C Microaero f ilia y aero bio sis p or 24 a 48 horas Tincin Gram Prueb as Bioq umicas y serol gicas Pruebas de susceptib ilidad
Streptococcus pyogenes Streptococcus grupo A Streptococcus pneumoniae Staphylococcus aureus metl resist
Agar sangre Mo rf ologa co lonial Hemolisis Satelitismo Agar chocolate neg ativo positivo Haemophilus influenzae Neisseria meningitidis Branhamella catarrhalis
Staphylococcus aureus Morf o log a - cocos - b acilos Agrupacin - Cadenas -En p ares -En racimo s -Palizadas
Ag ar Sal manito l
Staphylococcus aureus
Ag ar Sal manito l
Escherichia coli Klebsiella spp. Proteus spp. Otras enterobacterias Muestra de flora bacteriana de man o
Agar Mac Co nkey
Urocultivo
Agar sangre
Escherichia coli Klebsiella spp. Proteus spp. Otras enterobacterias Muestra de orin a
Agar Mac Conkey
Neisseriae gonorrhoeae
4. Desarrollar en el mismo formato prcticas 4.-de pruebas bioqumicas, 5.- Interpretacin de resultados. 6.- Susceptibilidad a antimicrobiana. 7.- Identificacin del microorganismo.
Antibiograma
A).- Preparacin del inculo. Mtodo estndar (Fase Log) Tomar 4 5 colonias Caldo Mueller Hinton Incubar 2 a 8 hrs McFarland 0.5
Mtodo de suspensin directa de colonias Tomar varias colonias de agar no selectivo Solucin salina segundos. (18 a 24 hrs de incubacin) o Caldo MH
Agitar por 15 a 20
Hisopo Caldo o SSI Sembrado en estras cerradas Incubacin (35 37C/24 hrs.
Colocar sensidiscos