BIOLOGIA DE LOS VIRUS

Juan R. Arbiza

INTRODUCCION Hasta fines del siglo XIX se haba avanzado en la etiologa de muchas enfermedades infecciosas, sin embargo, quedaban una gran cantidad de enfermedades en el hombre, animales y plantas sin identificar el agente causal. A lo largo del siglo XX se descubrieron a los virus como causantes de enfermedades infecciosas para las cuales no se haba encontrado una bacteria, hongo o protozoario como agente responsable. Fue el desarrollo de nuevas tcnicas como los cultivos celulares, el mejoramiento en microscopa y el advenimiento a fines del siglo XX de tcnicas de Biologa Molecular, que han permitido no slo aislar e identificar agentes virales, sino adems un avance extraordinario en el conocimiento a nivel molecular en detalle de la biologa de los mismos.

obligatorios. La organizacin y composicin de las partculas virales ofrecen por si caractersticas diferenciales importantes con otros agentes.

Los virus poseen un solo tipo de cido nucleico de tamao relativamente pequeo con respecto a otros agentes biolgicos, rodeado por una cscara o cpside formada por numerosas copias de una protena o de un nmero limitado de ellas. Algunos grupos de virus presentan por fuera de la cpside una envoltura lipdica de origen celular en la que se insertan glicoprotenas. No presentan sistemas enzimticos propios, por lo que por s solos no son capaces de replicarse y requieren para su propagacin y mantenimiento de clulas animales, vegetales o bacterias para cumplir su ciclo de reproduccin, lo que define su A pesar de esto, parece ser que los parasitismo celular obligatorio. virlogos tienen un doble desafo para el futuro: por un lado controlar los agentes Adems de su estructura tan simple y virales que ya se conocen, para los cuales particular el modo de reproduccin de los no existen drogas o vacunas efectivas virus tal vez sea la caracterstica que hasta el momento, y adems, aislar, justifica que tengan un lugar propio en la identificar, caracterizar y controlar los escala biolgica. A diferencia de lo que agentes virales emergentes o sucede con las clulas, en el momento de reemergentes (HIV, Ebola, Hantavirus, su multiplicacin, los virus no aumentan de tamao para su posterior divisin, por etc.) que aparecen continuamente. el contrario, la partcula viral es desintegrada y luego sintetizada en cada uno de sus componentes para luego CARACTERISTICAS GENERALES reunirse por ensamblaje. Esta forma tan Las primeras caractersticas diferenciales peculiar de multiplicacin en la cual se de los virus con otros agentes fueron: el producen rplicas del virus progenitor es tamao estimado por su capacidad de conocida con el nombre de replicacin atravesar filtros que retienen a las viral, y diferencia claramente a este bacterias y la incapacidad para fenmeno del proceso de divisin celular reproducirse en medios biolgicos inertes utilizado por procariotas y eucariotas. (como medios de cultivos para bacterias), requiriendo para su propagacin de Se pueden citar como resumen dos animales o cultivos celulares. Hoy da se definiciones de virus: sabe que estas caractersticas no alcanzan para diferenciar a los virus de otros La primera, propuesta por Lwoff (1957), agentes biolgicos, ya que existen establece: "Entidad estrictamente celular bacterias cuyo tamao puede ser similar y potencialmente patognica con una fase al de los virus ms grandes, y que otros infecciosa y, que posee: agentes como Chlamydias y Rickettsias, tambin son parsitos intracelulares 2. un solo tipo de cido nucleico,

3.incapaz de crecer y reproducirse por

fisin binaria, 4.carente de enzimas para producir energa". La segunda definicin pertenece a Luria y Darnell (1967): "Los virus son entidades cuyo genoma son elementos de cido nucleico que se replican dentro de clulas vivas usando la maquinaria de sntesis celular, determinado la formacin de elementos especializados que permiten la transferencia del genoma viral a otras clulas". Viroides Son virus

constituidos por ARN circular de muy bajo peso molecular, sin cpside protectora. Producen enfermedades hasta el momento exclusivamente en plantas. Provirus El genoma viral se puede integrar al genoma celular por un proceso de recombinacin gentica, directamente en los virus ADN o previa transcripcin inversa en el caso de virus con ARN. El genoma viral integrado al genoma celular recibe el nombre de provirus.

extremadamente

Virus no convencionales, Priones. Ciertos agentes de afecciones simples degenerativas del sistema nervioso central del hombre han sido clasificados como

virus no convencionales, ya que no ha sido posible determinar la presencia de estructura similar a virus en el material infectante ni el tipo de cido nucleico de estos agentes. Son agentes extremadamente resistentes a sustancias que inactivan los virus comunes, y algunos han propuesto que corresponderan a viroides patgenos del hombre. Los priones han sido descriptos en los ltimos aos como causantes de muchas enfermedades del sistema nervioso comentadas anteriormente, principalmente el llamado scrapie en el ganado ovino y la encefalopata espongiforme bovina BSE o comnmente conocida como sndrome de la "vaca loca". En el hombre seran los agentes relacionados con la enfermedad de Creutzfeld-Jacob y Kuru. Estos agentes son estructuralmente ms simples que los virus aun, pues estaran formados nicamente por protenas. Cuando se descubrieron estos agentes, pareca que se poda producir una gran revolucin en el conocimiento de la Biologa ya que la idea de que una protena pudiera autorreplicarse estara en contradiccin con el dogma central de que la informacin gentica es transmitida en el sentido cido nucleico a protena. El hallazgo de los priones y el avance en el conocimiento de su biologa podrn dilucidar probablemente muchas enfermedades an sin resolver. Muchas son las investigaciones que se realizan en estos momentos y las hiptesis propuestas para explicar la Biologa y permanencia de estas protenas extremadamente resistentes a sustancias que inactivan los virus comunes. MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA DE LOS VIRUS TAMAO Y FORMA La caracterizacin de los virus que han sido estudiados ha permitido observar la gran variedad en el tamao y forma que estos poseen. Es as, que se puede observar un tamao entre 28 nm en los virus mas pequeos denominados precisamente picornavirus (pico de pequeo) hasta 300 nm en los virus ms grandes que se conocen como son los poxvirus (Fig 1). La forma es tambin muy variada entre los diferentes virus, pudindose observar formas icosahdricas o helicoidales en virus que no tiene envoltura por fuera de la cpside hasta formas esfricas, filamentosa o pleomrficas en los virus con envoltura o muy complejos como el virus de la rabia (Fig. 2 y 6). ESTRUCTURA Como ya se mencion anteriormente la estructura de un virus est basada en su simplicidad, a pesar de esto existe diversidad, lo que es utilizado para la clasificacin de los virus. Virus desnudos: La estructura de los virus ms simples est compuesta por un solo tipo de cido nucleico (ADN o ARN) rodeado de una cscara proteica que se denomina cpside (del griego capsa que significa caja) que resulta de la reunin de subunidades proteicas codificadas por el genoma viral que se ensamblan basados en principios geomtricos y pueden determinar diferentes tipos de simetras (icosahdrica o helicoidal, principalmente) (Fig. 2 y 3b). Esta estructura bsica

de cido nucleico y cpside recibe el nombre de nucleocpside y constituye en los virus desnudos la partcula viral completa o virus que se diferencia del trmino virin el cual es utilizado para aquellas partculas virales o virus potencialmente infecciosas. Cuando se observa al microscopio electrnico una cpside

viral, pueden observarse estructuras morfolgicas utilizado en la taxonoma viral, denominadas capsmeros que resultan de la unin por enlaces de las subunidades proteicas. La forma de En la Figura 6 se representa un cuadro con los principales distribucin de los capsmeros as como el nmero de ellos virus animales, en el que se puede observar que la diversidad depende de cada tipo de virus. de estructura (con envoltura o sin ella, con simetra helicoidal o icosahdrica) y composicin del cido nucleico pueden combinarse de diferentes maneras para determinar varios grupos de virus.

Virus envueltos: La estructura de las partculas virales del grupo de virus denominados envueltos, est formada adems de la MULTIPLICACION nucleocpside por una envoltura que la rodea de origen celular VIRAL (Fig. 2 y 3a), y que los virus envueltos obtienen en el proceso de liberacin por brotamiento como se esquematiza en la Figura 4. Una partcula viral puede encontrarse en dos estados: inactiva o En dicha envoltura se insertan glicoprotenas de origen viral que activa. Para demostrar el estado inactivo, basta incluir una reciben el nombre de espculas o glicoprotenas de superficie y suspensin de virus en un medio de cultivo y observar que son que tienen un importante papel de reconocimiento de receptores incapaces de cumplir actividades metablicas necesarias para su especficos de la superficie celular en el paso inicial de relacin multiplicacin. Se deduce de ello, que los virus carecen como ya con la clula husped para la mutiplicacin viral. se mencion anteriormente de maquinaria enzimtica que les Acidos nucleicos: El cido nucleico que lleva la informacin permita autorreplicarse, aun cuando se les brinde nutrientes que gentica y que constituye el genoma viral puede tener varias seran adecuados para la propagacin de las bacterias ms formas. Como ya se mencion, una partcula viral tiene en su exigentes. estructura un solo tipo de cido nucleico ADN o ARN, pero la forma de estos puede ser de doble o simple cadena, segmentado o Pero si una partcula viral es incorporada a clulas vivas no, circular, lineal (Fig.5) determinando, pues, una gran sensibles, se comporta en forma activa, y por lo tanto tomar diversidad, lo cual tambin es ampliamente

La multiplicacin de los virus animales, vegetales y reconocen receptores celulares especficos y se pueden aislar hoy bacterifagos resulta similar en sus principios pero, cada una de da esos elementos en forma de complejos virus-clula. ellas tiene particularidades; esto basado principalmente en las Luego de adsorbidos a una clula, los virus pueden ser diferencias entre las clulas que infectan. recuperados conservando sus caracteres de partcula libre, El desarrollo del conocimiento sobre la multiplicacin de los potencialmente infectante. Los poliovirus pueden ser separados virus animales ha sido posible por la utilizacin en el laboratorio de las clulas con altas concentraciones salinas o detergentes, y de varios sistemas de aislamiento de virus en los cuales se puede los mixovirus (virus de gripe) que utilizan una estructura especializada se separan de las clulas hospederas por accin de estudiar el proceso de multiplicacin viral. la neuraminidasa. En un principio fueron animales y huevos embrionados los sistemas ms comnmente usados, pero actualmente esto ha sido 2. Penetracin casi totalmente sustituido por cultivos celulares, que ha La penetracin de los virus una vez adsorbidos, puede favorecido el conocimiento de las etapas de la multiplicacin realizarse de varias maneras (Fig. 7): viral. Existe gran variedad de cultivos de clulas, ya sea en forma de cultivos primarios o como lneas celulares que pueden ser 5. Por viropexis subcultivadas indefinidamente. Estas lneas se asemejan mucho a Es un proceso de fagocitosis, por el cual se produce una clulas transformadas debido a su gran potencial de crecimiento invaginacin de la membrana plasmtica, de modo que el virus y a su aneuploida. Se las usa corrientemente para aislar virus, queda englobado en una vescula dentro del citoplasma celular. pero no se las recomienda para la produccin de vacunas virales Es el mecanismo ms comn de penetracin de los virus. humanas al menos, ya que los virus propagados en esas lneas pueden adquirir determinates genticos oncognicos. Los 6. Por penetracin cultivos primarios resultan de la dispersin de clulas diploides En algunos, la penetracin acontece por un simple cruce de de un tejido por digestin enzimtica de la sustancia intercelular, son poco recomendadas tambin para la produccin de vacunas ya que pueden tener virus latentes propios de la especie de la cual provienen. Los embriones de gallina y sus anexos siguen siendo bastante utilizados ya que ofrecen diferentes tipos celulares, a los que se puede llegar por diferentes vas (intramnitica, intralantoidea, en saco de yema, etc.). INFECCION VIRAL A un tipo de infeccin viral productiva se contrapone una forma abortiva. Esta cumple un ciclo incompleto en el cual no se forman partculas virales infecciosas. Una infeccin productiva culmina con la generacin de una progenie viral infecciosa; este proceso requiere una serie de pasos o etapas, las cuales tienen diferencias en los distintos tipos de virus. Las etapas fundamentales de la infeccin viral son: - Adsorcin - Penetracin - Denudacin - Eclipse - Replicacin - Maduracin - Liberacin 1. Adsorcin Intervienen varios factores. Hay una atraccin por fuerzas inicas. A pH 7 los virus y las clulas tiene cargas negativas de modo que es necesario la presencia de iones positivos, cumpliendo muy eficazmente este requerimiento los iones de Magnesio. Otro factor importante en esta etapa es la interaccin de sitios especficos de la partcula viral con receptores celulares especficos. Esto determina la especificidad de algunos virus para crecer en clulas de origen especfico, por ejemplo, el virus de polio slo puede crecer en clulas de origen humano y de primates. Otros virus presentan estructuras especializadas en su superficie que les permiten cumplir con esta etapa de forma muy especializada. Estas estructuras son glicoprotenas las cuales

constituirn la cpside. Otras protenas tendrn funciones la membrana plasmtica, as la partcula viral queda directamente enzimticas, de polmeros, y se introducirn en el cido nucleico incluida en el citoplasma. promoviendo la replicacin del ADN vrico. El tipo de replicacin es semiconservadora, y los intermediarios c. Por fusin replicativos, sern lineales o cclicos dependiendo de que la Otro tipo de penetracin se da por fusin de la envoltura viral con molcula de ADN sea lineal o cclica respectivamente. la membrana plasmtica. Tambin en este caso el virus es directamente incorporado al citoplasma. Como ejemplo de virus ADN podemos citar al grupo de los herpesvirus, quienes en el citoplasma pierden la cpside y 3. Denudacin y eclipse penetran al ncleo iniciando la replicacin del cido nucleico. En esta etapa se produce la desintegracin del virus, dejando Hay sntesis de ARN mensajeros inducidos por el virus, enzimas libre al cido nucleico, que comanda su propia replicacin y la de relacionadas a la sntesis y quiebra de ADN. Los pasos las protenas necesarias para integrar nuevas partculas. La forma biosintticos descritos pueden relacionarse con el desarrollo de en que un virus pierde la cpside y su envoltura, en el caso de cuerpos de inclusin nucleares y la formacin de partculas tenerla, es caracterstico de cada grupo de virus. En los poliovirus virales. parece existir una integracin con los constituyentes celulares, tales como los receptores. En otros virus, como los poxvirus y los Los virus con ARN revisten un inters especial por la diversidad reovirus el proceso es ms complejo. Los poxvirus pierden parte de formas de replicacin que existen: esto depende de que ARN de su envoltura en las vacuolas fagocticas, en tanto que un pueda actuar como mensajero y se le denomina ARNm es sintetizado por una transcriptasa lo que culmina con la convencionalmente de polaridad positiva o, por el contrario, produccin de una nueva enzima que completa la denudacin. que posea una secuencia de bases Los reovirus penetran en los lisosomas: all enzimas proteolticas eliminan la cpside y promueven la transcripcin del genoma. Los fenmenos descritos (adsorcin, penetracin y denudacin) culminan con la desintegracin de las partculas, pero no siempre el proceso progresa hasta la replicacin viral. Si interrumpimos el ciclo en esta etapa llamada eclipse, el cido nucleico liberado de sus envolturas puede recobrarse por disrupcin de la clula husped, pero necesarias para la produccin de virus. 4. Replicacin del cido nucleico La replicacin es un fenmeno muy heterogneo por cuanto existe mucha variedad en los cidos nucleicos de origen viral; se recordar que hay ADN y ARN muy diferentes, de una o dos hebras, segmentados o no, etc. En todos los casos, el genoma viral es el elemento capaz de gobernar su autorreplicacin y de trasmitir la informacin estructural y funcional a la progenie resultante de una infeccin. No obstante, la diversidad sealada, intervienen en la replicacin elementos comunes que vale la pena destacar, tales como la formacin de un ARN mensajero capaz de traducir en el ribosoma celular las protenas codificadas por el genoma viral. Adems, sea cual sea el cido nucleico, siempre se diferencian dos conjuntos de genes, los precoces y los tardos. Los primeros seran los encargados de codificar protenas necesarias para la copia de la molcula de cido nucleico, y los tardos encargados de codificar protenas estructurales y protenas para el ensamblaje. La replicacin puede producirse en el ncleo o en el citoplasma de la clula, y eso depender del tipo de cido nucleico que constituye el genoma viral. Los virus que contienen ARN se replican en el citoplasma, mientras que aquellos que tienen ADN se replican en el ncleo, excepto en el caso del grupo del virus de la viruela, que a pesar de tener ADN su replicacin se realiza en el citoplasma. Los virus ADN sintetizan un ARN mensajero por intermedio de una polimerasa que pasa al citoplasma donde se producir la sntesis proteica; de estas protenas algunas tienen funciones estructurales y formarn los capsmeros que al unirse

complementarias del mensajero y se le denomina de polaridad La liberacin en este grupo de virus depende mucho del tipo de negativa. virus y de las caractersticas de la clula husped. Los poliovirus son liberados rpidamente de las clulas HeLa o HEp-2; la Cuando consideramos un ARN con polaridad positiva, el ARN liberacin se realiza por rotura de vacuolas superficiales. acta como mensajero, entrando en el ribosoma celular e iniciando una traduccin de protenas polimerasas, necesarias En los virus ADN que maduran en el ncleo, el tiempo de para iniciar la replicacin del cido nucleico, luego actuar la liberacin es mayor que el ejemplo anterior, ya que la liberacin parte tarda del ARN traduciendo protenas para la formacin de se lleva a cabo por autlisis celular. la cpside y ensamblaje de la partcula viral. Un ejemplo de este tipo de replicacin son los poliovirus que tienen como genoma un ARN de hebra nica, con cido poliadenlico en un extremo que sirve inicialmente como molcula de ARN mensajero para la sntesis de replicasa de ARN, producindose el intermediario replicativo de ARN que sirve para la sntesis de molculas de ARN virales de los descendientes. La replicacin del ARN viral es independiente de las sntesis de ADN de la clula hospedadora. En el caso de ARN con polaridad negativa, por el contrario, la molcula no tiene funcin mensajera, de modo que sintetiza una molcula complementaria de la original para poder esta copia entrar en el ribosoma con funcin mensajera. En este grupo de virus, aparece un nuevo concepto en la estructura viral, ya que para sintetizarse la copia se necesita una ARN transcritasa ARN dependiente que no se encuentra en las clulas y, por consiguiente, vemos que en estos virus adems de su genoma y protenas estructurales son sintetizadas otras protenas que luego son incorporadas a la partcula viral. 5. Maduracin y liberacin Hay virus cuya nica cubierta es la cpside, son virus desnudos, en contraposicin a aquellos que poseen envoltura por fuera de la cpside que son los virus envueltos. Es conveniente considerarlos por separado en este punto que significa la culminacin en la formacin de una progenie viral. con la cpside, el virus debe rodearse de la envoltura. Luego de haberse formado la cspide, la partcula se aproxima a la membrana plasmtica, producindose la evaginacin de la membrana con el posterior desprendimiento del brote. El brotamiento puede ser explicado por una relacin entre las protenas de la membrana plasmtica y la nucleocpside. Por lo general, la liberacin de la partcula se da al culminar el brotamiento de la membrana celular. ALTERACIONES CELULARES PRODUCIDAS POR INFECCION VIRAL Las clulas pueden responder de varias formas frente a una infeccin viral: 7. no se observa ninguna alteracin aparente, 8. efecto citoptico, es decir muerte de la clula por lisis celular, hiperplasia, seguida de muerte, como en el caso de los poxviurs, 9. solamente hiperplasia como la tranformacin viral para clulas malignas.

10.Efecto citoptico

El efecto citoptico consiste en alteraciones morfolgicas de las clulas teniendo como resultado la muerte celular. El efecto citoptico es muy diferente debido al tipo de virus. En cultivos infectados con adenovirus, las clulas se redondean y se agrupan como un racimo de uvas, los poliovirus tambin se redondean pero se retraen y se lisan, liberando mucha cantidad de virus. El Para los virus desnudos, el fenmeno de maduracin consiste virus respiratorio sincicial, produce la fusin de membranas simplemente en la unin de los capsmeros para formar la celulares dando como resultado grandes sincicios. cpside y la posterior unin de esta con el genoma. Parece existir una diferencia en la maduracin de este grupo de virus 11.Cuerpos de inclusin dependiendo de que el cido nucleico sea ADN o ARN. Los cuerpos de inclusin son acmulos intracelualres de material nuevo. Algunos se producen por acumulacin de viriones o de Para los que tiene ADN, la sntesis del ADN se realiza con subunidades virales no reunidas. Esos cuerpos de inclusin anticipacin a la aparicin de elementos estructurales, mientras pueden romper la estructura celular o cambiar la funcin de tal que para los virus ARN se ha demostrado con aminocidos modo que produce la muerte celular. Otros corpsculos pueden radioactivos que las cadenas polipeptdicas son reunidas muy desarrollarse en sitios de antiguas sntesis virales pero no pronto en capsmeros y rpidamente estas en cpsides, y que contienen viriones detectables, son ejemplos los corpsculos existe concordancia con la sntesis de la molcula de ARN. eosinfilos intranucleares en clulas infectadas por virus del En los virus que poseen envoltura, la maduracin es ms herpes simple. compleja (Fig. 4), ya que adems de la unin del cido nucleico

3. Transformacin celular Una alteracin resultante de ciertos virus es la produccin de tumores o de leucemia. Dichos virus pueden presentar varios efectos sobre las clulas: estimulacin de sntesis de ADN celular (virus del polioma), alteraciones de superficie que pueden ser evidenciadas por nuevas especificidades antignicas (distintas de aquellas pertenecientes a las subunidades de los viriones); aberraciones cromosmicas, y alteraciones de las propiedades de crecimiento de las clulas. El cambio de una clula normal a una clula maligna ha sido llamado transformacin. Los esquemas y figuras de este trabajo fueron diseados por el autor o extrados y modificados de libros consultados que se detallan a continuacin:
BLIOGRAFIA CONSULTADA

Celia Coto y Ramn A. de Torres. NATURALEZA Y ESTRUCTURA DE LOS VIRUS ANIMALES. Serie Virologa. Edigem S.A. Argentina. S.E. Luria, J.E. Darnell, D. Baltimore and A. Campbell. GENERAL VIROLOGY. John Wiley-Sons. New York. Bernard Davis, Renato Dulbecco, Harold Ginsberg. MICROBIOLOGIA DE DAVIS. Volumen VIROLOGIA. Harper and Row. San Pablo, Brasil. Robert G. Webster, Alan Granoff. ENCYCLOPEDIA OF VIROLOGY. Volmenes 1, 2 y 3. Academic Press. Bernard Fields, David Knipe. VIROLOGY. Volmenes 1 y 2. Raven Press. New York. W. Joklik, H. Willett, B. Amos, C. Wilfert. ZINSSER MICROBIOLOGIA. Ed. Mdica Panamericana. Buenos Aires, Argentina.