Normas generales de uso del laboratorio

Para el desarrollo de las prcticas es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales que deben ser observadas con toda escrupulosidad. 1. Antes de realizar una prctica, debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y tcnica. Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas se conozcan. 2. El orden y la limpieza deben presidir todas las experiencias de laboratorio. En consecuencia, al terminar cada prctica se proceder a limpiar cuidadosamente el material que se ha utilizado. 3. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material. 4. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulacin. 5. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con el profesor. 6. No tacar con las manos y menos con la boca los productos qumicos. 7. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos. 8. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se har al bao Mara, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. 9. Cuando se manejan productos corrosivos (cidos, lcalis, etc.) deber hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se vertern bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarn resbalar suavemente por su pared. 10. Cuando se quiera diluir un cido, nunca se debe echar agua sobre ellos; siempre al contrario: cido sobre agua. 11. Cuando se vierta un producto lquido, el frasco que lo contiene se inclinar de forma que la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre lquido se deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del frasco. 12. No pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio que se disponga en el Centro. 13. Las pipetas se cogern de forma que sea el dedo ndice el que tape su extremo superior para regular la cada de lquido. 14. Al enrasar un lquido con una determinada divisin de escala graduada debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la visual al enrase sea horizontal. 15. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen lquidos debe evitarse la ebullicin violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras.

El tubo de ensayo se acercar a la llama inclinado y procurando que sta acte sobre la mitad superior del contenido y, cuando se observe que se inicia la ebullicin rpida, se retirar, acercndolo nuevamente a los pocos segundos y retirndolo otra vez al producirse una nueva ebullicin, realizando as un calentamiento intermitente. En cualquier caso, se evitar dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona. 16. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo despus de haberlos calentado con el fin de evitar roturas. 17. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se engrasen. Microbiologa Microscopa Preparacin de un frotis bacteriano Epidermis de cebolla Observacin de bacterias Estomas en epidermis de puerro Tincin Gram Cromoplastos en pulpa de tomate Tincin c-alcohol resistente (ZiehlObservacin de clulas sanguneas Neelsen) Mitosis en clulas de raz de Tincin de esporas (Wirtz-Conklin) cebolla Pruebas bioqumicas Observacin de tejido adiposo Gemacin de levaduras Observacin microscpica de hongos Botnica Estudio de la flor Bioqumica Reconocimiento de glcidos Reconocimiento de lpidos Zoologa Reconocimiento de prtidos Diseccin de un pez Separacin de pigmentos vegetales Diseccin de un mejilln Aislamiento de casena y lactosa de la leche Extraccin de ADN Purificacin de ADN (protocolo) Gentica Estudio del cariotipo humano

El Microscopio ptico compuesto

PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO

Sistema ptico o OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo. o OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta. o CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. o DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. o FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Sistema mecnico o SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin. o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, .. o REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que consigue el enfoque correcto.

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO 1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones. 2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas. 3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias. 4. Para realizar el enfoque:

a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos. b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino. 5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin. 6. Empleo del objetivo de inmersin: . Bajar totalmente la platina. a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite. b. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de x40. c. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz. d. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin. e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. f. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. g. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso 3. h. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin. i. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES 1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en

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posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina, revlver y condensador). El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

Preparacin de colorantes
1. Acido-Alcohol: (decolorante para tincin Ziehl-Neelsen) o cido clorhdrico concentrado ..........................................................3 ml o Etanol 95% ....................................................................................97 ml 2. Azul de metileno: Colorante de contraste para tincin de flagelos. o Azul de metileno................................................................................1 g o Agua destilada...............................................................................100 ml 3. Azul de metileno de Loeffler: Tinciones simples. o Solucin de hidrxido potsico al 1%.................................................1 ml o Azul de metileno, sol. saturada en etanol al 95%...............................30 ml o Agua destilada...............................................................................100 ml

4. Colorante para esporas: o Solucin acuosa saturada de verde malaquita 5. Colorante para flagelos de Leifson: o Solucin A Fucsina bsica .........................................................................1,2 g Etanol 95%.............................................................................100 ml o Solucin B cido tnico................................................................................3 g Agua destilada.........................................................................100 ml o Solucin C Cloruro sdico..........................................................................1,5 g Agua destilada.........................................................................100 ml Para preparar la solucin de uso, se mezclan cantidades iguales de las soluciones A, B y C y se guarda en frasco cerrado hermticamente en la nevera donde es estable durante varias semanas. 6. Cristal violeta: Para tincin Gram y tincin simple. o Cristal violeta (violeta de genciana)....................................................0,5 g o Agua destilada.................................................................................100 ml 7. Eosina: Para observacin de clulas sanguneas. o Eosina...............................................................................................0,3 g o cido actico glacial......................................................................0,025 ml o Agua destilada...................................................................................100 ml 8. Fucsina diluida: Para tincin Gram y tincin simple. o Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen......................................................10 ml o Agua destilada.................................................................................100 ml 9. Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen: Para tincin cido-alcohol resistente. o Fucsina bsica......................................................................................1 g o Etanol 95%........................................................................................10 ml o Fenol 5% en solucin acuosa............................................................100 ml 10. Hematoxilina: Para observacin de clulas sanguneas. o Hematoxilina.........................................................................................2 g o Agua destilada......................................................................................1 l 11. Lactofenol: Para preparaciones microscpicas en fresco de mohos. o cido lctico.....................................................................................100 ml o Fenol................................................................................................100 g o Glicerol.............................................................................................200 ml o Agua.................................................................................................100 ml 12. Lactofenol al Azul Algodn: Para preparaciones en fresco y tinciones de mohos. o Solucin de azul algodn Sol. saturada de azul algodn (azul anilina soluble)......................10 ml Glicerol.....................................................................................10 ml Agua.........................................................................................80 ml Mezclar esta solucin con lactofenol a partes iguales 13. Lugol: Solucin de yodo para tincin Gram. o Yodo...................................................................................................1 g

Yoduro potsico..................................................................................2 g Agua destilada.................................................................................300 ml 14. Orcena A: Tincin de cromosomas. o Orcena................................................................................................2 g o cido actico.....................................................................................45,8 ml o cido clorhdrico 1 mol/l......................................................................8,3 ml o Agua..................................................................................................45,8 ml 15. Orcena B: Tincin de cromosomas. o Orcena................................................................................................2 g o cido actico.....................................................................................55 ml o Agua..................................................................................................55 ml 16. Safranina: Colorante de contraste para tincin Gram (preferible a la fucsina) y esporas. o Safranina.........................................................................................0,25 g o Agua destilada..................................................................................100 m 17. Sudn III: Tincin especfica de grasas. o Alcohol etlico...................................................................................100 ml o Sudn III...................................................................................hasta saturacin 18. Verde de metilo actico: Igual composicin que la eosina (num. 7)

o o

MICROBIOLOGA

Preparacin de un frotis bacteriano

Se denomina frotis a la extensin que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo ms posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparacin es muy difcil obtener una imagen clara y ntida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los mtodos habituales de tincin que permiten la observacin al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijacin de una extensin bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfologa y bacteriana y las posibles agrupaciones de clulas que pudiera haber.

REALIZACIN DEL FROTIS 1. Colocar una pequea gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra,

ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mnima gota de agua, que resulta suficiente. 2. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea cantidad del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensin homognea que quede bastante extendida para facilitar su secado. Si la muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensin bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos. 3. Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaucin de no calentar demasiado el porta pues las clulas pueden deformarse o romperse. FIJACIN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS 4. Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejar enfriar el porta entre los pases. 5. Con metanol (para bacterias procedentes de medio lquido). Aadir unas gotas de metanol sobre la extensin completamente seca. Golpear el portaobjetos por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol. Esperar a que el metanol se evapore completamente. Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser observadas al microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con el proceso de tincin. TINCIN DEL FROTIS BACTERIANO 6. Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que indique el protocolo de cada tincin concreta. Suele oscilar entre 1 y 5 minutos. En ocasiones el colorante tie slo en caliente, por lo que el tiempo que dure su actuacin se deber sostener el portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del mechero para que humee el colorante, pero teniendo mucho cuidado de que no llegue a hervir ya que se producira la destruccin de las clulas. 7. Lavar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Esta operacin se realiza inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte superior de manera que resbale sobre el frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre l, pues podra arrastrar parte del frotis consigo. Eliminar la mxima cantidad de agua de los portaobjetos golpendolos por su canto con cuidado contra la superficie de la mesa de trabajo. 8. Secar el porta presionando entre dos papeles de filtro, pero en ningn caso se debe frotar el porta. 9. Observar la preparacin al microscopio llegando hasta el mximo aumento. Si se quiere montar de forma definitiva no se debe usar ahora el aceite de inmersin. MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIN

La tcnica siguiente es de aplicacin para cualquier preparacin microscpica que se desee montar de forma definitiva. Se anotar en un extremo del portaobjetos el contenido de la preparacin, la fecha y, en su caso, el nombre del alumno. 10. Pasar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones mantenindolos un mnimo de 5 minutos en cada bao. La serie de alcoholes puede modificarse en funcin de la disponibilidad de los reactivos, pero el objetivo es que la preparacin quede totalmente deshidratada. Escurrir bien el reactivo antes de introducirlo en el siguiente bao. a. Alcohol de 70 b. Alcohol de 95 c. Acetona pura d. Acetona-xilol (1:1) e. Xilol 11. Montar la preparacin. Emplear blsamo de Canad, euparal o algn medio de montaje sinttico. Utilizar preferiblemente cubreobjetos de 22x22 mm.

Observacin de bacterias
OBJETIVOS 1. Realizar una tincin simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales. 2. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qu casos se recomienda una u otra. 3. Observar la morfologa bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen. 4. Practicar con el microscopio al mximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersin. MATERIAL

Mechero Bunsen o de alcohol Asa de siembra o aguja enmangada Pinzas Portaobjetos Muestras bacterianas de origen natural: yogur, vinagre, sarro dental, suelo, etc.

Colorantes para tincin: a) Solucin de cristal violeta al 1% b) Solucin de safranina al 0,5% c) Azul de metileno al 1% Microscopio y aceite de inmersin

BACTERIAS DEL YOGUR El yogur es un producto lcteo producido por la fermentacin natural de la leche. A escala industrial se realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociacin de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Adems, el tamao del lactobacilo (unos 30m de longitud) facilita la observacin aunque no se tenga mucha prctica con el enfoque del microscopio. 1. Realizar el frotis disolviendo una mnima porcin de yogur en una pequea gota de agua. 2. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa. 3. Teir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 minutos. 4. Observar al mximo aumento del microscopio. BACTERIAS DEL VINAGRE El vinagre es una solucin acuosa rica en cido actico resultante de la fermentacin espontnea del vino o de bebidas alcohlicas de baja graduacin. La acetificacin del vino es producida por bacterias aerbicas del cido actico, principalmente Acetobacter aceti, aunque tambin Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares. 1. Tomar con una aguja enmangada una pequea porcin de madre de vinagre natural o de la telilla que se forma sobre la superficie de los vinos agriado. 2. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis. 3. Dejar secar y fijar con calor. 4. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar. BACTERIAS DEL SARRO DENTAL El sarro dental es un depsito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Est constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos metablicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la preparacin, pero suelen abundar bacterias saprfitas, pudindose observar gran variedad de morfologas: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos. 1. Con una aguja enmangada tomar una pequea porcin de sarro dental y disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos. 2. Dejar secar y fijar con calor. 3. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar. BACTERIAS DEL SUELO

La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de suelo es prcticamente infinita, muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y algunas, incluso, desconocidas para los microbilogos. Para recoger la muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardn. Despus de varios das, las bacterias se habrn adherido al vidrio y slo habr que fijarlas por calor y teirlas con un colorante cualquiera. Previamente hay que limpiar los bordes del portaobjetos, as como la parte que no se va a teir.

Tincin Gram

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Asa de siembra Cubeta de tincin Cultivo bacteriano Pinzas

Frasco lavador Mechero de alcohol Papel de filtro Cristal violeta Lugol Alcohol-acetona Safranina

REALIZACIN 1. 2. 3. 4. 5. 6. Preparar los frotis bacterianos. Teir con cristal violeta 1min. Lavar con abundante agua el exceso de colorante. Cubrir con Lugol 1min. Lavar con agua el exceso de Lugol. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la

preparacin deje de perder color (30seg) 7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente. 8. Teir con safranina 1min. 9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste. 10. Secar la preparacin. 11. Examinar al microscopio fijndose sobre todo en el color de cada preparacin. Los tiempos de exposicin a los colorantes son orientativos. Cada vez que se prepara la batera de colorantes para realizar la tincin Gram presentan algunas diferencias respecto a los preparados en otro momento, por lo que puede ser necesario ajustar los tiempos. En un laboratorio de Microbiologa, cada vez que se preparan los colorantes, se suelen hacer pruebas con cultivos patrn de los dos tipos (Gram+ y Gram-) para ajustar as los tiempos y tener la certeza de que el resultado de todas las tinciones que se hagan mientras duren esos colorantes son fiables. Otra posibilidad es adquirir el equipo completo de colorantes ya preparados, pero es mucho ms caro.

Observacin de epidermis de cebolla

MATERIAL

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cubeta Agujas enmangadas

Pinzas Escalpelo Verde de metilo actico o azul de metileno Cuentagotas Cebolla

TCNICA 1. Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la tenue membrana que est adherida por su cara inferior cncava. 2. Depositar el fragmento de membrana en un porta con unas gotas de agua. Pon el porta sobre la cubeta de tincin para que caiga en ella el agua y los colorantes. Si es preciso, estirar el trozo de epidermis con ayuda de dos agujas enmangadas. 3. Escurrir el agua, aadir una gotas de verde de metilo actico (o azul de metileno) sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. No debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporacin del mismo! 4. Con el cuentagotas baar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante.

5. Colocar sobre la preparacin un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarla al microscopio. 6. Observa la preparacin a distintos aumentos, empezando por el ms bajo. Identifica las distintas clulas del tejido epidrmico y las de las hojas del bulbo de cebolla. RESULTADOS El resultado de esta prctica debe ser semejante a lo que muestran las siguientes fotos obtenidas con microscopio ptico:

Aspecto general de la epidermi: o Epidermis de cebolla en fresco x150

o o

Epidermis de cebolla azul de metileno x150

Tambin se pueden llegar a ver determinadas partes de las clulas o Nucleo x600

o o

Nucleo x1500

Mitosis en clulas de raz de cebolla

MATERIALES

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Lanceta estril Cubeta de tincin Aguja enmangada Pinzas Palillos

Frasco lavador Mechero de alcohol Tijeras Papel de filtro Vaso de precipitados Vidrio de reloj Orcena A Orcena B

TCNICA
1. Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un bulbo de cebolla sujeto con dos o

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tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua. Al cabo de 3-4 das aparecern numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm de longitud. Cortar con las tijeras unos 2-3 mm del extremos de las raicillas y depositarlo en un vidrio de reloj en el que se han vertido 2-3 ml de orcena A. Calentar suavemente el vidrio de reloj a la llama del mechero durante unos 8 minutos, evitando la ebullicin, hasta la emisin de vapores tenues. Con las pinzas tomar uno de los pices o extremos de las raicillas y colocarla sobre un portaobjetos, aadir una gota de orcena B y dejar actuar durante 1 minuto. Colocar el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raz. Con el mango de una aguja enmangada dar unos golpecitos sobre el cubre sin romperlo de modo que la raz quede extendida. Sobre la preparacin colocar unas tiras de papel de filtro, 5 o 6. Poner el dedo pulgar sobre el papel de filtro en la zona del cubreobjetos y hacer una suave presin, evitando que el cubre resbale. Si la preparacin est bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presin que se realice. Observar al microscopio.

OBSERVACIN MICROSCPICA (foto x150 / x600) Se realizar a fuertes aumentos. La orcena A reblandece las membranas celulares y la B completa el proceso de tincin. Con la presin sobre el porta de la preparacin se logra una extensin y difusin de las clulas del meristemo de la cebolla. La preparacin presenta el aspecto de una dispersin de clulas por todo el campo que abarca el microscopio. Se observan clulas en diversas fases o estados de divisin celular. Se ven los cromosomas teidos de morado por la orcena. El aspecto reticulado as como el mayor tamao de algunos ncleos corresponde a las clulas que se encontraban en los procesos iniciales de la divisin mittica.

Observacin de clulas sanguneas

MATERIALES

Microscopio Portaobjetos Mechero de alcohol Lanceta estril Cubeta de tincin

Frasco lavador Alcohol absoluto Hematoxilina Eosina

TCNICA
1. Con la lanceta estril realizar una puncin en un pulgar. 2. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos. 3. Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina pelcula de sangre.

4. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tincin y aadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparacin. 5. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecacin del colorante agregando ms lquido. 6. Lavar la preparacin y aadir unas gotas de eosina dejndola actuar 1 minuto. 7. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante. 8. Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero. 9. Observar al microscopio. OBSERVACIN MICROSCPICA

Al microscopio se vern con un dominio predominante los glbulos rojos, hemates o eritrocitos

teidos de color rojo por la eosina No tienen ncleo y son ms delgados por el centro que por los bordes. Los glbulos blancos o leucocitos se identifican fcilmente por la presencia de ncleo, teido de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos:

1. Linfocitos de tamao aproximado al de los glbulos rojos, tienen un solo ncleo que ocupa casi todo el glbulo. 2. Monocitos: son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, ncleo grande, redondo, son los ms mviles y su funcin principal es la fagocitosis.

3. Polimorfonucleares ncleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser eosinfilos, con abundantes granulaciones

teidas de rojo por la eosina, neutrfilos y basfilos. Las plaquetas no son visibles ya que precisan una tcnica especial de tincin.

Observacin de pulpa de tomate

MATERIAL

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos

Escalpelo Pinzas Tomate

TCNICA
1. Utilizando un escalpelo, corta en dos mitades el tomate. 2. Obtn, ayudndote de unas pinzas, un trozo de pulpa de tomate de unos 2mm de grosor. 3. Depostalo en el centro de un portaobjetos sin poner agua. 4. Coloca encima un cubreobjetos y comprime suavemente con los dedos hasta obtener un completo aplastamiento del fragmento de pulpa de tomate. 5. Lleva la preparacin a la platina del microscopio y realiza una observacin con pequeos aumentos. Selecciona el mejor grupo de clulas y pasa a mayores aumentos. 6. Identifica los distintos orgnulos celulares visibles y dibuja lo que observes en el apartado observaciones.

RESULTADOS El resultado de esta prctica debe ser semejante a lo que muestran las siguientes fotos obtenidas con microscopio ptico:

Clulas de la pulpa del tomate x150

Cromoplasto de clula de tomate x600

MATERIAL

Flores Pinzas Tijeras Cartulina

Pegamento Papel absorbente Prensa

TCNICA 1. Escoge flores dialiptalas (ptalos separados). No cojas flores del tipo de la margarita ya que son inflorescencias, es decir, estn constituidas por un gran nmero de flores. 2. Coge la flor y desgaja cuidadosamente los spalos, colocndolos sobre una cartulina de manera que formen un crculo y se hallen en una posicin igual a la que tenan en la flor. 3. Haz lo mismo con los ptalos, que colocars en la misma cartulina, pero en un crculo interior al anterior. 4. Corta los estambres y sitalos en un tercer crculo interior. 5. Por ltimo, pon en el centro los pistilos.

6. Coloca sobre el conjunto una hoja porosa (puede utilizarse papel de peridico) y prnsalo. Una vez que estn secos estos componentes florales, pgalos en la cartulina indicando nombre y caractersticas de cada una de las partes de esta flor.

Diseccin de un pez
MATERIAL

Tijeras Escalpelo Cubeta de diseccin

Pez seo (trucha) Aguja enmangada Pinzas

TCNICA 1. Introduce el pez en la cubeta de diseccin y obsrvalo detenidamente tratando de reconocer las partes ms importantes de su anatoma externa. Realiza un dibujo en el apartado de observaciones. 2. Corta el oprculo y observa en el interior las branquias. 3. Haz un corte rectangular en un lado; empieza cortando la aleta pectoral . Desde el arranque de dicha aleta y siguiendo una lnea recta, corta hasta la altura del ano (situado delante de la la aleta anal). Realiza ahora un corte vertical hasta llegar al ano. Corta despus desde el ano paralelamente al primer corte hasta llegar a la altura de la base de la aleta pectoral. Termina realizando un corte vertical. Retira el trozo de musculatura y quedarn a la vista las vsceras del pez. Realiza un segundo dibujo.

Diseccin de un mejilln
MATERIAL

Tijeras Escalpelo Plancha de diseccin Vaso de precipitados Mechero

Mejillones frescos Aguja enmangada Pinzas Alfileres Trpode y rejilla

TCNICA 1. Introduce el mejilln en un vaso de precipitados con agua caliente durante unos

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minutos hasta que las valvas se abran. Extrae el animal y depostalo en la plancha de diseccin. Observa la concha, su forma, el nmero de valvas, las lneas concntricas que presentan y que indican las etapas de crecimiento del animal. Localiza el pice y la charnela (bisagra de unin de las valvas). Observa tambin si la charnela presenta dientes. Anota todas estas observaciones. Separa la concha del resto del animal cortando con el escalpelo o la tijera los msculos aductores, observa su tamao y la impresin que dejan en el interior de la concha. Deposita lateralmente el mejilln sobre la plancha de diseccin y observa el manto (repliegue carnoso exterior), los msculos aductores anterior y posterior y el hepatopncreas de color verdoso. Extiende el borde del manto y sujtalo con alfileres. Localiza la boca, los palpos labiales, las branquias, el pie, la glndula del biso con los filamentos que segrega y que sirven para adherirse a los objetos y la joroba de polichinela que contiene los rganos reproductores.

CUESTIONES 1. Qu significa bivalvo? 2. Cmo se denominan tambin los moluscos con dos valvas?Por qu? 3. Has podido reconocer el sexo del mejilln examinado?

Observacin de epidermis de puerro

MATERIAL

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cuentagotas con agua

Agujas enmangadas Pinzas Escalpelo Un puerro

TCNICA
1. Retira una parte pequea de la epidermis de la hoja de puerro y llvala sobre un porta en el que habrs colocado dos o tres gotas de agua. Ten la precaucin de que sea una capa incolora y de que est perfectamente extendida. 2. Pon el cubre y examina la preparacin al microscopio.

3. Identifica en tu preparacin la estructura de las clulas que aparecen en el esquema.

RESULTADOS El resultado de esta prctica debe ser semejante a lo que muestran las siguientes fotos obtenidas con microscopio ptico:

Aspecto general de la epidermis teida con azul de metileno: o Epidermis de puerro con estomas x150

o o

Epidermis de puerro con estomas x600

Tambin se pueden ver con detalle los estomas, sus clulas oclusivas y su estructura: o Estoma cerrado, clulas oclusivas x1500

o o

Estoma abierto, clulas oclusivas x1500

Aqu tienes un esquema de lo que se puede observar

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