MBITO FARMACUTICO

GENTICA

Terapia gnica. Vectores de expresin

JUANA ROZALNa, VALENTN CEAb Y JOAQUN JORDNc
Licenciada en Qumicas. Catedrtico de Farmacologa en la UCLM. c Profesor titular de Farmacologa en la UCLM. Centro Regional de Investigaciones Biomdicas. Universidad de Castilla-La Mancha (joaquin.jordan@uclm.es).
b a

En las ltimas dcadas se ha producido el desarrollo de una de las ramas ms fascinantes de la biologa: la tecnologa del ADN recombinante, que permite la manipulacin del genoma de un individuo, con aplicaciones tanto desde el punto de vista teraputico como comercial, al ofrecernos no slo el desarrollo de nuevos mtodos de diagnstico, sino tambin la transferencia de informacin gentica.

unque la mayor parte de los avances que ha hecho posible el desarrollo de la tecnologa del ADN recombinante son resultado de investigaciones realizadas en las cuatro o cinco ltimas dcadas (tabla 1), la historia realmente se inici cuando los babilinios y egipcios produjeron frutos por fecundacin artificial y aunque Scrates (420 a.C.) hipotetiz que los padres no se parecan a los hijos, los hijos de grandes hombres de estado generalmente son perezosos o bue102 OFFARM

nos para nada, ya Hipcrates (400 a.C.) afirm que el hombre transmite las caractersticas hereditarias en el semen (semilla) y que debe haber otro fluido en la mujer, siendo el aporte aproximadamente igual. Ms tarde, los hindes observaron que ciertas enfermedades aparecan en las familias y Man (100-300 d.C.) nos dijo que el hombre no puede escapar a sus orgenes. Aunque no fue hasta mediados del siglo XIX , con las investigaciones independientes de

Charles Darwin y Gregor Mendel, cuando realmente comenz el concepto actual de gentica. Charles Darwin (1809-1882), conocido como padre de la biologa moderna, fue el primero en describir que las especies no eran fijas e inalterables, sino capaces de evolucionar durante el tiempo, y que slo los individuos cuyos rasgos favorecieran la supervivencia y la reproduccin se mantendran y se propagaran. De forma casi simultnea, Gregor Mendel (1823-1884)
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estableci los fundamentos de la gentica moderna, realizando experimentos con plantas y estudiando las leyes bsicas que controlan la herencia, llegando a la conclusin de que los rasgos o caractersticas hereditarias son transportados y transmitidos a los descendientes como unidades discretas, originando el concepto de gen, aunque el trmino propiamente dicho no se utilizara hasta comienzos del siglo XX. Quizs, debido a que Mendel slo describi el comportamiento esencial de los genes sin revelar su naturaleza qumica, ni identificar el material gentico, el punto de inflexin de la sucesin imparable de descubrimientos fue la descripcin de la estructura del ADN por Watson y Crick (1953). De esta forma, comenz el conocimiento y la comprensin de la estructura y funciones del ADN hacia la segunda mitad del siglo XX, desarrollndose el concepto de cido nucleico como macromolcula bsica que contiene la informacin gentica o interviene en su descodificacin y describindose dos clases, el cido desoxirribonucleico (ADN) y el cido ribonucleico (ARN). Estos avances permitieron a los cientficos, en la dcada de los setenta, el desarrollo de tcnicas capaces de combinar segmentos y transferir porciones de ADN de un organismo a otro, dando lugar a la aparicin de la Gentica Molecular. Esta ciencia abarca desde la replicacin del ADN, pasando por la trascripcin, o copia del ADN a ARN, hasta la traduccin o sntesis de protenas que son en realidad las efectoras de la funcin codificada en el ADN. El perfeccionamiento de estas tcnicas ha permitido conocer que el origen de numerosas enfermedades es el resultado de alteraciones en la expresin y funcionalidad de protenas, por lo que hoy da se utilizan para el diagnstico de enfermedades que presentan desrdenes genticos. La transduccin de genes forneos en organismos vivos comenz con la observacin de que el ADN aislado poda ser introducido en clulas en cultivo y ste se integraba al genoma y sintetizaba la protena correspondiente en la clula receptora.
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Durante este trabajo revisaremos los avances que han tenido lugar en las tcnicas y vectores utilizados en la aplicacin teraputica, dejando para un segundo artculo las aplicaciones que se estn llevando a cabo en este campo. La terapia gnica presenta tres componentes indisociables y necesarios: el primero, un gen de inters del cual se espera que la expresin en una clula normal se acompae de un efecto teraputico. El segundo lo constituye la clula blanco, sobre la cual hay que realizar la modificacin y el tercero es el vector, vehculo que transporta el material gentico y permite su introduccin en la clula blanco.

dimiento se utiliza cuando las clulas diana son clulas o tejidos que presentan la capacidad de renovarse a partir de clulas precursoras, como es el caso de la piel, los endotelios, el hgado o los mioblastos musculares. Ejemplos de esta estrategia estn representados por la modificacin de linfocitos T en el tratamiento de la deficiencia en adenosina desaminasa de hepatocitos en la hipercolesterolemia familiar y de linfocitos infiltradores de tumores en algunas enfermedades neoplsicas. La tercera y ltima estrategia la constituye la terapia gnica in situ o somtica que consiste en la introduccin de las modificaciones genticas en las clulas somticas de un organismo sin modificar las clulas germinales. Vectores

Entendemos por vectores a los sistemas que utilizamos como ayuda en el proceso de transferencia de un gen exgeno al interior de la clula. Ellos facilitan la entrada y biodisponibilidad intracelular del material gentico a transducir y, por consiguiente, su funcionamiento correcto. Se ha utilizado una gran variedad de vectores con fines experimentales y de forma Los diferentes modelos experi- genrica los podemos clasificar en: mentales sobre los que se lleva a vectores no virales y vectores viracabo la manipulacin gentica se les (tabla 2). clasifican, en in vivo, ex vivo e in situ, dependiendo del tipo de Vectores no virales muestra y del mtodo utilizado. Los vectores no virales engloban En el procedimiento in vivo se ino- aquellas tcnicas de transduccin cula al paciente directamente con donde el material gentico es introel vector y los genes a transducir ducido utilizando tanto mtodos alcanzan las clulas diana a travs qumicos (fosfato clcico, liposodel torrente circulatorio, utilizn- mas) como fsicos (biobalstica, dose este mtodo para el trata- electroporacin, microinyeccin). miento de enfermedades tales Los vectores qumicos fueron los como la fibrosis qustica y algunas primeros en utilizarse, alguno de neoplasias. En el proceso ex vivo se ellos, como el fosfato de calcio y realiza la correccin del defecto los liposomas, en la dcada de los gentico en clulas extradas del sesenta y setenta del siglo pasado propio paciente que son cultivadas aunque no se lograron buenas efiy modificadas genticamente en el ciencias en la transduccin hasta laboratorio y que, al dividirse, mediados de los ochenta. La utilitransmiten el transgn a sus clu- zacin del fosfato de calcio se basa las hijas, devolvindose al paciente en la capacidad que presentan los slo aquellas poblaciones celulares iones calcio para precipitar el en las que se ha comprobado la ADN provocando que la clula, integracin y funcionamiento mediante endocitosis, introduzca correcto del transgn. Este proce- el ADN en su interior. No es una
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Entendemos por vectores a los sistemas que utilizamos como ayuda en el proceso de transferencia de un gen exgeno al interior de la clula

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Tabla 1. Hitos de la biotecnologa y de la tecnologa del ADN recombinante

1859 1865 1869 1902 1939 1941 1944 1946 1948 1950 1953 1970 Darwin publica El origen de las especies Mendel demuestra que las caractersticas heredadas son llevadas en unidades discretas que se reparten por separado en cada generacin Miescher descubre los cidos nucleicos De Vries denomina mutaciones a los cambios hereditarios repentinos Se crea la expresin biologa molecular Se demuestra que los genes controlan la sntesis de enzimas Se descubre que el ADN es material gentico Se sabe que Escherichia coli transfiere material gentico de un organismo a otro Los investigadores descubren que el cdigo gentico determina el tipo de protena a ser sintetizada Se da con la composicin qumica de los cidos nucleicos Descubrimiento de la estructura de la doble hlice Se sintetiza in vitro un gen completo Descubrimiento de la primera endonucleasa de restriccin especfica de secuencia y de la enzima transcriptasa inversa Se consiguen las primeras molculas de ADN recombinante Se comienzan a utilizar los vectores plasmdicos para la donacin de genes Primer diagnstico prenatal utilizando una sonda especfica de gen Se desarrollan los mtodos de secuenciacin rpida del ADN Se construye la primera genoteca humana Se sintetiza la insulina utilizando ADN recombinante Clonacin del primer antgeno viral humano (hepatitis B) Produccin comercial por E. coli de insulina humana Se utilizan plsmidos Ti diseados mediante ingeniera gentica para transformar plantas Se desarrolla la tcnica de la reaccin en cadena de la polimerasa La insercin de un gen funcional en un vulo de ratn fertilizado cura la enfermedad por mutacin de Shiverer Primera produccin de un cultivo de soja Primer maz frtil transformado con un gen forneo Se inicia el Proyecto Genoma Humano Primeros cerdos y cabras transgnicos capaces de fabricar protenas como la hemoglobina humana Primera prueba de terapia gnica en pacientes humanos con cncer Tomate Flavr Savr es el primer alimento completo elaborado mediante ingeniera gentica aprobado para la venta Produccin de anticuerpos monoclonales totalmente humanos en ratones diseados mediante ingeniera gentica Se descubre la secuencia del genoma de Haemophilus influenzae Ensayos clnicos con frmacos antisentido y vacunas de ADN Clonacin del primer mamfero (oveja Dolly) Secuenciacin del genoma de C. elegans Primer borrador del genoma humano Secuenciacin del genoma de Drosophila Muere la oveja Dolly Reprogramacin de las clulas adultas con las tcnicas de clonacin

1972 1973 1976 1977 1978 1979 1982 1983 1985 1987 1988 1990 1991

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tcnica que provoque toxicidad en las clulas, pero la expresin del transgn es transitoria y con una eficacia de transfeccin cercana al 10%. Su utilizacin se ve reducida a cultivos celulares en aplicaciones ex vivo. Los liposomas constituyen bolsas rodeadas de una membrana lipdica, a semejanza de una clula eucariota animal, capaces de introducir ADN en la clula diana. Los liposomas catinicos interaccionan tanto con el material gentico a transferir como con las membranas celulares que deben atravesar, debido a la presencia de cargas netas negativas originadas por los
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grupos fosfato en el ADN y por residuos del cido silico de la superficie celular. As, los lpidos catinicos condensan el ADN y, ya en forma de complejos transfectantes, se unen a las protenas azucaradas de la membrana plasmtica mediante enlaces electrostticos. Los complejos transfectantes con carga neta positiva utilizan las protenas azucaradas de la membrana plasmtica para fijarse en la clula. Los lpidos catinicos interaccionan con las cargas negativas del ADN condensndolo, mientras que los transportadores catinicos interaccionan con las cargas negativas que

presenta la membrana celular gracias al exceso de cargas positivas, mediante enlaces electrostticos. Una condensacin controlada del ADN permite la formacin de partculas, con un dimetro de 50-150 nanmetros, que contienen una sola molcula de ADN, hecho que facilita notablemente la penetracin en las clulas y posteriormente en el ncleo. Se produce la captura del 100% de los complejos estables de polinucletidos por atraccin de cargas y los lpidos se absorben a la membrana celular debido a propiedades de fusin, liberando el cido nucleico directamente dentro del citoplasma. De esta manera se evita la degradacin lisosomal. Este vector no plantea problemas en modelos in vitro, sin embargo, in vivo su eficacia se encuentra disminuida, llegando incluso en algunas ocasiones a una eficacia nula. Entre ellos destacan el DMRIE (dimiristiloxi-propil-3dimetil-hidroxietilamonio/DOPE), o las combinaciones DMRIE/DOPE y DC-chol/DOPE. En cultivos de clulas eucariotas se utiliza con frecuencia la lipofectamina, un liposoma de formulacin 3:1 (w/w) del lpido policatinico 2,3-dioleiloxiN-[2(sperminecarboxamido)etil]N,N-dimetil-1-propanaminio trifluoroacetato (DOSPA) y el lpido neutro dioleoil fosfatidil etanolamina (DOPE) en agua. La buena eficiencia en el reparto de ADN in vivo de liposomas policatinicos aunque presentan una baja eficiencia de transfeccin, constituye una alternativa atractiva a los mtodos de transferencia viral al no presentar limitaciones en el tamao del ADN a transducir y tener una baja inmunogenicidad. Los liposomas suelen ser administrados por va intravenosa, con la ayuda de catteres, presentando muy buenos resultados en las clulas de pulmn e hgado, quizs debido a que los complejos transfectantes se unen a partculas de gran tamao, lo que impide que puedan abandonar eficazmente el sistema vascular, siendo retenidas mecnicamente por filtros naturales, como los pulmones y el hgado. Como ltimo ejemplo de los vectores qumicos, citaremos la transferencia de genes mediante receptores. La insercin de molVOL 22 NM 8 SEPTIEMBRE 2003

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culas, que sern reconocidas por receptores presentes en el tipo celular elegido al vector del material gnico, hace de esta tcnica un mtodo direccionable, al ser posible establecer una interaccin vector/clula muy especfica. La naturaleza de los ligandos es muy variada y comprende azcares, pptidos y hormonas. Hoy da, se utilizan ligandos capaces de desestabilizar las membranas de los endosomas slo a pH cidos, con lo que se evita la degradacin de los vectores por los complejos enzimticos del lisosoma. El primero de los vectores fsicos que vamos a estudiar se conoce como disparo de partculas, biolstica o bombardeo de microproyectiles. En l, el plsmido de ADN a transferir es situado sobre la superficie de pequeas gotas de 1 a 3 micras de dimetro de oro o tungsteno que posteriormente son aceleradas, disparadas bien mediante una descarga elctrica o por un pulso de gas, hacia la clula diana. La fuerza fsica del impacto supera la barrera de la membrana celular. An as, la capacidad de penetracin es limitada y se utilizan con frecuencia en cultivos de lneas celulares, epidermis, msculo e hgado. Los microproyectiles constituyen un mtodo efectivo de transferir genes en modelos tanto in vitro como in vivo. Entre las ventajas que presenta este mtodo, y que le confieren un potencial de aplicabilidad general, destacan su fcil manejo y que un nico disparo puede producir integraciones mltiples. Sin embargo, presenta algunas desventajas, como que en la zona de descarga se produce muerte celular; adems, dependiendo de la rigidez de los tejidos, la procedencia del ADN extrao y la capacidad de transcripcin intrnseca aparecen grandes variaciones en la

eficiencia de la expresin de los genes. As, la expresin conseguida suele ser transitoria y con una frecuencia relativamente baja, cercana a 10 4, tan slo se logra la integracin efectiva en el genoma 10-8 de las clulas expuestas, lo que hace que se requieran grandes dosis para alcanzar el xito. Este hecho limita la biobalstica en la aplicacin de la terapia gnica. Sin embargo, ensayos con animales muestran que podra ser aplicado de forma directa como parte de protocolos de vacunacin. Adems, presenta una utilizacin potencial en la transformacin de clulas vegetales, en la creacin de plantas transgnicas tanto monocotiledneas (maz, arroz, trigo, avena y caa de azcar) como en dicotiledneas (soja, tabaco y algodn).

Cuando se lleva a cabo la inyeccin directa de la parte codificadora a un tejido se conoce como tcnica ADN desnudo

Otro mtodo fsico es la microinyeccin, en el que el ADN es introducido por inyeccin directamente en el ncleo de las clulas gracias a la ayuda de un micromanipulador, evitando de este modo la degradacin citoplasmtica y lisosomal. Las clulas que sobreviven este dao y han insertado el material gentico presentan una alta eficacia de su expresin. Esta tcnica es muy laboriosa y necesita clulas aisladas para su realizacin.

Tabla 2. Vectores utilizados en terapia gnica Vectores no virales Qumicos Vectores virales
Fosfato clcico Liposomas Receptores Retrovirus Adenovirus Virus asociados a adenovirus Herpes simples

Fsicos
Biobalstica Electroporacin Microinyeccin

Se suele utilizar con frecuencia en estudios ex vivo, aunque tambin en la terapia gnica germinal, un mtodo in vivo donde se lleva a cabo la microinyeccin directa de ADN desnudo en los proncleos del vulo recin fecundado o en el citoplasma. En vertebrados inferiores e invertebrados es la tcnica de transferencia de genes ms utilizada y en mamferos ha resultado exitosa. Los embriones suelen tolerar la microinyeccin de genes para, posteriormente, ser cultivados in vitro hasta un estado de desarrollo ms avanzado, blastocito, y ser transferidos en las hembras adoptivas. Aunque los primeros individuos transgnicos obtenidos mediante este mtodo fueron ratones, se realiza con xito en vacunos, ovejas, cabras, conejos y cerdos. La eficiencia inicial de integracin gnica obtenida fue tan slo de un 2%, aunque hoy da se alcanzan niveles cercanos al 30% del total de embriones tratados. Cuando se lleva a cabo la inyeccin directa de la parte codificadora a un tejido se conoce como tcnica ADN desnudo. En ella, el ADN es vehiculizado en una solucin salina o srica y normalmente administrado mediante inyeccin intramuscular. El mecanismo por el que entra en la clula diana permanece siendo un enigma. Esta tcnica presenta un porcentaje bajo de transfeccin y no se logra la integracin en el genoma. Se utiliza en la terapia gnica in vivo, aunque los calores y persistencia de la expresin de genes son probablemente demasiado cortos (das). Entre sus ventajas destacan el ser un mtodo directo, simple, econmico y con una baja toxicidad. El ADN desnudo est siendo utilizado como procedimiento de vacunacin, ya que aunque el valor de expresin de los genes es bajo, resulta suficiente para alcanzar una respuesta inmunolgica. Como ltimo ejemplo de vector fsico citaremos la electroporacin. La aplicacin de una corriente elctrica a clulas es capaz de abrir poros en la membrana celular que permiten la entrada del gen en su interior. Entre sus ventajas se encuentran que las clulas pueden ser aisladas del organismo y sometidas a un control de calidad en el que
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Tabla 3. Ventajas e inconvenientes de los vectores virales Vector

Retrovirus

Ventajas

Inconvenientes
Bajo ttulo Posible mutacin insercional Extincin del transgn in vivo Requieren proliferacin celular Respuesta inmune e inflamatoria Direccionabilidad difcil Difcil manejo Poca longitud del transgn Difciles de producir en gran cantidad No parecen transducir a todo tipo de clulas in vivo Posible mutacin insercional Patogenicidad Difcil manejo

Integracin estable Fcil manejo No provocan respuesta inmune Transduccin eficiente Adenovirus Clulas en reposo o replicacin Episomales Estables in vivo Ttulos altos Adenoasociados Clulas en reposo o replicacin Posible integracin especfica Poco inmunognicos Ttulos altos No son patgenos en humanos Herpes virus Clulas en reposo Episomales Adecuados para el sistema nervioso

se realiza una seleccin de las mejores clulas que son cultivadas en el laboratorio antes de ser implantadas en el paciente. Entre sus desventajas est el hecho de que muchas clulas mueren al no soportar el choque elctrico, por lo que no es la forma ms indicada en algunos tipos celulares, aunque s en clulas con una alta tasa de proliferacin. Vectores virales Hasta hace unos aos, cuando pensbamos en los virus nos imaginbamos un agente infeccioso responsable de numerosas enfermedades o unas partculas extremadamente pequeas que slo pueden observarse gracias al microscopio electrnico y que, aunque presentan material gentico propio, son incapaces de replicarse por s mismos. Sin embargo, hoy da este concepto empieza a cambiar y los virus empiezan a ser considerados como herramientas de trabajo, vectores, que sirven para introducir material gentico con fines teraputicos en las clulas diana. En la tabla 3 se resumen las ventajas y desventajas presentadas por los vectores virales utilizados en terapia gnica entre los que destacaremos los retrovirus, adenovirus y el herpes simple. Los virus no pueden ser utilizados directamente como se encuentran en la naturaleza, necesitan ser modificados para poder ser utilizados como vectores. Es necesario convertirlos en entes deficientes en
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replicacin en el interior de la clula diana. Se trata, por tanto, de producir una anulacin parcial del genoma viral. Frecuentemente se retiran regiones codificadoras de algunas protenas estructurales como gag, pol y env en los vectores retrovirales, o de los elementos E1 en adenovirus, que son remplazadas por el gen o genes de inters. Estas partculas son incapaces de

Los vectores retrovirales fueron la estrategia pionera en la terapia gentica, en las tcnicas ex vivo

replicarse, pero mantienen la capacidad de infectar. As, el vector viral slo podr multiplicarse o crecer en cultivos de lneas celulares modificadas genticamente que sobreexpresan la parte genoma viral que ha sido delecionado; a estas clulas se las conoce como clulas de empaquetamiento. La cantidad de ADN que puede ser insertado en un vector viral vara dependiendo del tipo. Con todo, los vectores virales presentan el inconveniente de que, junto a la

informacin gentica que pretendemos transducir, se encuentra el material gentico propio del virus y que, en algunos casos, al igual que los adenovirus, pueden resultar inmunogenticas. De forma muy breve revisaremos algunas de las caractersticas ms interesantes de los vectores virales ms utilizados. En la tabla 3 se muestra una relacin de esas ventajas e inconvenientes. Los vectores retrovirales fueron la estrategia pionera en la terapia gentica, en las tcnicas ex vivo. Sin embargo, los niveles de expresin en una variedad de tipos celulares eran considerablemente mayores en cultivo que despus de ser trasplantados, presentando adems una expresin transitoria en las clulas transducidas in vivo. Las formas deficientes en replicacin de estos vectores se obtienen remplazando las regiones codificadoras para las protenas estructurales gag, pol y env por el gen o genes de inters, lo que permite la incorporacin de cADN de hasta 8 kb. El uso de vectores retrovirales presenta entre sus principales ventajas su eficaz transduccin, su integracin genmica y la expresin persistente. Cabe resaltar que estos vectores presentan como desventajas la derivacin oncognica, rara insercin y dependencia de la divisin celular. Los vectores adenovirales son virus no envueltos de doble cadena de ADN. Son deficientes en replicacin y requieren de un sistema de complementacin que es la lnea celular HEK293 (Human Embryonic Kidney 293) modificada para que produzca constitutivamente los elementos E1 virales, que son suprimidos en el vector adenoviral. Entre las ventajas de este vector viral destacamos que pueden insertar hasta 20 kb de gen, adems de transducir clulas con gran nmero de partculas virales y de infectar clulas tanto en reposo como en divisin. Sin embargo, presentan el inconveniente de expresar varias protenas virales que resultan inmunogenticas, lo que conduce a una separacin ms rpida del vector y las clulas transducidas. Adems, la transduccin repetida no es satisfactoria normalmente, a menos que la exposicin inicial est acompaada de una
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modulacin inmunolgica para suprimir la respuesta inicial a las protenas de la cpsula adenoviral. Debido a la falta de integracin del vector, la expresin de los niveles disminuye en el curso de pocas semanas hasta varios meses, haciendo necesaria la administracin reiterada de vectores adenovirales en algn momento que puede resultar en respuestas inmunes e inactivacin del vector.

Una transferencia eficaz en las clulas diana. La estabilidad de los genes introducidos, que deben integrarse, preferiblemente, en un lugar especfico del genoma de la clula blanco. La consecucin de una expresin estable y apropiada de la informacin gentica introducida. A pesar de los avances obtenidos en el diseo de los diferentes tipos de vectores, hasta el momento ningn sistema vectorial cumple con todas las condiciones para convertirlo en ideal. Los vectores no virales resultan ms econmicos y ms fciles de producir que los virales; adems, su falta de antigenicidad hace posible que puedan ser administrados repetidamente y con menores riesgos patolgicos que los vectores virales. Con todo, los sistemas virales resultan ms eficientes y presentan niveles de expresin ms altos y duraderos en el tiempo. Los vectores retrovirales son los ms utilizados, por lo que debido a su eficiencia y seguridad se han iniciado ya los primeros ensayos clnicos. s
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Los vectores no virales resultan ms econmicos y ms fciles de producir que los virales
Hoy da, disponemos de virus asociados a los adenovirus que son capaces de integrar de forma especfica en el cromosoma 19 humano. Sin embargo, stos se han visto relegados a un plano ms discreto cuando se observ que esta integracin especfica no ocurra con los vectores derivados de estos virus, el tamao del gen a transducir es bastante limitado (menos de 4 kb), y slo transduciran clulas en presencia de un adenovirus. Actualmente se estn construyendo vectores VAA adenovirales hbridos, que presentan la habilidad de los vectores VAA de integrar con la ventaja de poder acomodar grandes fragmentos de ADN. Como ltimo ejemplo de vector viral estudiaremos aquellos que derivan del herpes virus, que resultan interesantes debido a su tropismo especfico por el sistema nervioso central, el tamao del gen que pueden vectorizar y su alto ttulo. Sin embargo, es un sistema que apenas est desarrollado; los producidos hasta el momento slo permiten expresin transitoria del gen de inters y su eficiencia de transduccin es baja. Conclusiones El xito de la terapia gnica se fundamenta en los siguientes requisitos:
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