Expresin de hormonas proteicas en levaduras.

Una vez que los genes han sido incorporados en el nuevo organismo (bacteria, levadura, clula de mamfero, etc), es necesario evaluar la expresin de la protena codificante del gen insertado. Adems de poder evaluar la presencia de la protena de inters, con el anlisis de geles es posible determinar el peso molecular de la misma as como su abundancia relativa. En esta prctica se evaluar un gel de expresin de HGH en Pichia pastoris en el programa Gel-Pro Analyzer. Anlisis de geles de Poliacrilamida: 1. Abrir el .exe de la carpeta Gel Pro31 2. En la ventana EXPERIMENT seleccionar el tipo de anlisis : Function Type = Protein analysis. Click en OK 3. En File abrir la imagen que deseamos analizar (HGH para anlisis). La imagen se abre en colores. 4. En Edit convertir la imagen a escala de grises Convert To = Gray Scale. 5. En el programa aparece tambin, un recuadro que lleva como nombre 1D Gel seleccionar Lanes / Bands. Aqu aparece otro cuadro que dice Lanes, seleccionar Find Lanes e inmediatamente el programa selecciona los carriles donde aparecen los carriles. Asegurarse que las columnas cubren lo ancho y alto del gel. 6. El programa hace una bsqueda automtica de bandas, si deseamos agregar o quitar bandas se seleccionan los recuadros Add Bands Delete Bands 7. Agregar los pesos moleculares del marcador de peso molecular (MPM) en el cuadro 1D-Gel M.W. Standard Seleccionar el carril del peso molecular en Select/Unselect y aparecen seleccionados los pesos moleculares. Si es un nuevo marcador de peso molecular, agregar bandas correspondientes, si es el mismo marcador que se estar usando posicionar las bandas correctamente en el marcador en Auto Locate. Al final del proceso poner OK y aparecer en aqua el color del carril que corresponde al MPM 8. Al momento de agregar o quitar bandas aparece una ventana que indica el perfil densitomtrico de cada carril Lane Profile debajo muestra los picos

correspondientes a cada banda seleccionada (en corchetes). Se cierran los corchetes manualmente para que cada banda se ajuste al cuadro de lectura del programa. Esto es para que el programa tome en cuenta slo el rea correspondiente a la banda para hacer un aproximado de la densidad de la banda. 9. Para obtener los resultados de los pesos moleculares y las abundancias relativas: En el cuadro 1D-Gel clicar Mass/IOD. Aparece una ventana con los resultados. Salvar los resultados exportando a Excel (File DDE to Excel