TOMA DE MUESTRA PARA ANÁLISIS

En Medicina se emplea el concepto normal para describir los hallazgos que sé objetivizan de ordinario, en los
pacientes sanos. Por ello, es sorprendente y perturbador que de tal filosofía, incluso utilizando técnicas idénticas,
se obtengan en parte valores muy divergentes. Una porción de esas discrepancias se debe al distinto esmero con
el cual se llevan a cabo los procesos para realizar las determinaciones. Y nos encontramos que en la cadena de
elaboración de un determinado análisis, existen puntos críticos en los que debemos ser exigentes con nosotros
mismos. El primer eslabón del proceso es la toma y recogida de muestras.
Todo el intento para evitar errores preanalíticos dará como resultado fiabilidad, calidad y por supuesto análisis
interpretables.

I. TOMA Y ENVIO DE UNA MUESTRA PARA REALIZAR ESTUDIO HEMATOLOGIA

La hematología es una especialidad médica que tiene una gran dependencia de los métodos de laboratorio en
general y de las técnicas citológicas en particular, recordemos que esta última resuelve la problemática
diagnóstica en un 80% de las hemopatías.
Para realizar un correcto análisis hematológico, la sangre tiene que seguir conservando sus características físico-
químicas para que no existan alteraciones o artefactos en la muestra extraída y que pudieran dar lugar a
resultados erróneos.
Las muestras de sangre deben recogerse en animales que han estado en ayunas. El período de ayuno debe ser al
menos de 8 horas y preferiblemente de 12 horas.
La primera premisa a respetar para realizar un análisis hemocitológico es que la sangre obtenida y transferida a
un tubo con anticoagulante no tenga coágulo.
La segunda premisa es conservar siempre la proporción entre sangre y anticoagulante.

EL EDTA
Es el anticoagulante de elección para hematología, se utiliza a una concentración 1 mg por 1
c.c. de sangre o 0.5 mls de solución al 1 % para 5 mls de sangre, o 0.1 mls de solución al 1% para 1 mls de
sangre.
Una excesiva prolongación con el anticoagulante hace que se altere las células sanguíneas. Se
recomienda realizar un frotis sanguíneo si el envío se prolonga más de 24 horas.
También es el anticoagulante de elección para Test de Coombs y para realizar tinciones
citoquímicas.

LA HEPARINA
No es el anticoagulante de elección en hematología.
Se utiliza a una concentración de 0.2 c.c. de heparina saturada por cada 1 c.c. de sangre.
Las alteraciones que se producen son: degeneración nuclear de los neutrófilos, deg
No es APTA par estudios de inmunohematología: Test de Coombs.
No se utiliza para las tinciones citoquímicas.

El resumen de la toma de muestras y envío en hematología sería:

1- Emplear sangre con EDTA, manteniendo siempre la proporción sangre/anticoagulante.
2- Envío de la muestra refrigerada, NUNCA congelar o situar la muestra junto a la pared del
acumulador térmico.
3- Si es posible enviar frotis SOLO FIJADO SIN TEÑIR.
4- Empleo de tubos de un solo uso y estériles.

No se pueden realizar contajes celulares en sangres de más de 3 días de antigüedad.

 TOMA Y ENVIO DE UNA MUESTRA PARA REALIZAR ESTUDIO DE
HEMOSTASIA O PRUEBAS DE COAGULACIÓN

El citrato sódico al 3.8% es el anticoagulante de elección para los estudios de coagulación. Se

utiliza a una concentración de un parte de citrato sódico 0.11 M por nueve partes de sangre total. Es totalmente
necesario e imprescindible mantener la relación anticoagulante/ sangre para realizar las pruebas de coagulación,
los valores obtenidos sin esta relación no tienen ningún valor diagnóstico. Ejemplo: para conseguir un volumen
total de muestra de 3 cc se deben poner en la jeringa 0,3 cc de citrato y extraer 2,7 cc de sangre (0,3 x 9).
Una vez obtenida la muestra, se mezcla y se deja a temperatura ambiente durante 5-7 minutos.
Se centrifuga la muestra a 2500-3500 rpm durante 15 minutos y se separa el plasma por
pipeteado a otro tubo de plástico dentro de los 30 primeros minutos post-extracción.
Refrigerar en caso de envío rápido.
Congelar a –28 º C en caso de envío retardado (> de 4 horas hasta 15 días como máximo) La
congelación o descongelación pueden producir la crioprecipitación de algunos factores de coagulación.

TOMA Y ENVIO DE UNA MUESTRA PARA REALIZAR ESTUDIO DE BIOQUÍMICA Y

ELECTROFORESIS.

Se puede emplear plasma y/o suero para la bioquímica y suero para la electroforesis.

SEPARACION DEL PLASMA

El tubo que contiene sangre más anticoagulante se debe centrifugar a 1.500-2.000 r.p.m. durante 10-15 minutos.
El plasma que es la capa más externa se puede extraer entonces empleando una pipeta Pasteur o un cuentagotas y
se transfiere a un tubo de almacenamiento estéril y conservarlo en refrigeración o congelación.

SEPARACION DEL SUERO

Se deja que la sangre -transferida a un tubo sin anticoagulante- coagule completamente en el tubo.
Cuanto más tiempo se deje el tubo a temperatura ambiente, alrededor de dos horas, mayor cantidad de suero se
obtendrá y más pruebas diagnósticas se podrán realizar.
A temperatura ambiente entre 20-25 C la sangre transferida al tubo se debe dejar un mínimo de media hora y
preferiblemente de 1-2 horas, la coagulación y la retracción se pueden producir mucho más rápidamente si se
incuba el tubo a 37º C. durante 30 minutos y en ambos casos el tubo con la sangre se pone después en
refrigeración durante 30-60 minutos.
Una vez obtenida la retracción del coágulo se centrifuga igual que si de plasma se tratase.
Normalmente por cada 1 cc de sangre entera se pueden obtener 0.3 cc de suero.

La separación del coágulo es perfecta si se emplean tubos de vidrio o de poliestireno tratados, los tubos de
plástico o de poliestireno sin tratar no son aconsejables porque la retracción del coágulo es menor, el coágulo se
adhiere a las paredes, e incluso se puede alojar en la parte superior del tubo, haciendo que la separación del
coágulo sea más difícil y a la hora de intentar separar el coágulo se produzca hemólisis, que es el enemigo de la
mayoría de las pruebas bioquímicas, hormonales y de electroforesis.
Lo que nunca se debe hacer es centrifugar la sangre antes de que se complete la coagulación, en estas situaciones
se formarán cadenas de fibrina que retendrán en su arquitectura, enzimas (ALT, AST, lipasa...), substratos
(calcio, fósforo, colesterol...), iones (sodio, potasio, cloro...), proteínas (anticuerpos, globulinas...), hormonas y
metabolitos y, los resultados obtenidos de estos sueros siempre serán menores -y por consiguiente inexactos- a
los obtenidos de sueros normalmente procesados. También es importante resaltar que no se deben poner los
tubos con sangre sin anticoagulantes inmediatamente a la temperatura de 4º C ya que tampoco se obtendrá la
retracción del coágulo.
Si la extracción de sangre se realiza a última hora de la tarde, es preferible dejarla en reposo a
20-25º C. durante toda la noche y a la mañana siguiente ponerla en refrigeración a 4º C durante 30 minutos y
separar el suero.
Si la muestra ha de ser enviada al Laboratorio ésta debería estar separada del coágulo ya que los
golpes sufridos por las células en el coágulo, durante el viaje, puede originar su rotura y que se produzca
hemólisis, que afectará negativamente a la mayoría de las pruebas.
 En resumen para la correcta realización y envío de muestras para realizar pruebas bioquímicas
y electroforesis se debe emplear suero o plasma separado en tubos de poliestireno estériles y refrigerados a 4ºC
y si está congelado mucho mejor.

En la siguiente tabla se expone la interferencia de los diferentes anticoagulantes utilizados, influencia de factores
externos y estabilidad de las pruebas comúnmente utilizadas en Medicina Veterinaria.

HORMONAS
Excepto algunas hormonas que requieren unas condiciones de manejo especiales, se deben seguir exactamente
los pasos explicados en el apartado separación del suero.
Se aconseja siempre suero y en segundo lugar plasma de con heparina.
Para la determinación de hormonas tiroideas no se debe utilizar sangre+edta..
Para la determinación de ACTH se debe emplear sangre+edta.
ESTABILIDAD E INTERFERENCIAS DE LAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS.

Hemólisis quiere decir que por lo menos hay 5 gr/l de Hemoglobina.

Ictericia: quiere decir que por lo menos hay 10 mg/dl de Bilirrubina.
Lipemia: quiere decir que por lo menos hay 500 mg/dl de Lípidos.

ANTICOAGULANTE Estabilidad 2-8 º C INTERFERENCIAS

ACIDOS BILIARES Suero o plasma 7 días La hemólisis interfiere
ACIDO URICO Suero, plasma 7 días Hemólisis: Interfiere
Lipemia: Interfiere
ALBÚMINA Suero o plasma 1 mes No hay interferencias
NO EDTA significativas
ALFA AMILASA Suero, plasma 30 días La hemólisis interfiere
ALT/ GPT Suero, plasma 7 días La lipemia puede interferir
AST/GOT Suero, plasma con EDTA o 7 días La hemólisis y lipemia puede
heparina interferir los resultados.
BILIRRUBINAS Suero, plasma con 2 días La hemólisis interfiere
Luz interfiere
CALCIO Suero o plasma con 2 días La hemólisis y lipemia
heparina. NO USAR EDTA interfiere
COBRE Suero 14 días La hemólisis interfiere
COLESTEROL Suero o plasma 7 días No hay interferencias
significativas
COLINESTERASA Suero o plasma 3 días No hay interferencias
significativas
CLORO Suero o plasma c 2 días Hemólisis interfiere
CREATININA Suero o plasma 3 días Le hemólisis, ictericia no
interfiere. La lipemia puede
interferir
CK CREANTINQUINASA Suero 7 días La hemólisis, ictericia no
interfiere. La lipemia
interfiere.
FACTOR REUMATOIDE Suero 2 días Hemólisis interfiere
FOSFATASA ALCALINA Suero y Heparina No 7 días Hemólisis interfiere
EDTA
FOSFORO Suero o plasma con 7 días No hay interferencias
heparina. No EDTA
FRUCTOSAMINA Solo suero. No EDTA 7 días Libre de hemólisis
GGT Solo suero. No EDTA 5 días Hemólisis, hemoglobina y
lipemia interfieren
GLUCOSA Suero o plasma 5 días No hay interferencias
GlDH Suero o plasma 1 día Interfiere hemólisis, lipemia e
ictericia
HIERRO Suero o plasma heparina 7 días Hemólisis y lipemia
interfieren
LDH Suero o plasma Separación 24 horas Hemólisis y separación tardía
rápida
LIPASA Suero o plasma No EDTA 5 días Hemólisis interfiere
MAGNESIO Suero o plasma. No EDTA 10 días Hemólisis interfiere
PLOMO SANGRE+EDTA 2 días Hemólisis interfiere
POTASIO Suero o plasma heparina 2 días Hemólisis y lipemia interfiere
SODIO Suero o plasma heparina 2 días Hemólisis y lipemia interfiere
TRIGLICERIDOS Suero o plasma 5 días Ictericia interfiere
UREA Suero o plasma 7 días Hemólisis y amonio interfiere
ZINC Suero o plasma NO EDTA 1 semana
ESTABILIDAD SEGÚN LA TEMPERATURA DE ALMACENAMIENTO

Estabilidad a 20-25 ºC Estabilidad a + 4ºC Estabilidad a -20-25ºC

Ácidos biliares 8 horas 1 mes Varios meses
Albúmina 6 días 6 días Varios meses
Amilasa 7 días 6 días Varios meses
ALT /GPT 1 día 7 días 1 mes
AST/GOT 1 días 7 días 1 mes
Amoniaco: Inestable 2 horas en EDTA Inestable
Calcio 10 días 10 días 8 meses
Cloro 2 días 7 días 7 días
Cobre 2 días 4 días 8 meses
Colinesterasa 7 días 7 días 3 meses
Creatinina 24 horas 2 días Varios meses
CK activada 2 días 7 días 1 mes
Fosfatasa activada Perdida de un 10% sin 7 días 1 mes
separar
Fósforo 2 días 7 días Varios meses
GGT 5 días 10 días 1 mes
Glucosa 8 horas 7 días -
Hierro total 4 días 7 días 1 mes
Lactato 3 horas 1 día 1 mes
LDH 2 días 1-3 días No congelar
Lipasa 1 días 7 días 1 mes
Magnesio 7 días 7 días -
Potasio Aumento de un 10% 2 semanas
Proteínas totales 7 días 1 mes Varios meses
SDH Inestable 1 día 2 días
Sodio 2 semanas 2 semanas -
Triglicéridos Disminución 20% sin 3 días 4 meses
separar el suero
Urea 24 horas 3 días 6 meses
Zinc 2 días a 1 semana
ESTABILIDAD E INTERFERENCIAS DE LAS PRUEBAS HORMONALES

HORMONA TIPO DE MUESTRA ESTABILIDAD FACTORES COMENTARIO

Adrenocorticotropica Solo debe utilizarse Refrigeración: 1 hora Lipemia y hemólisis No utilizar tubos de vidrio
(ACTH) sangre con EDTA Congelación: 30 días. no silanizados
Envío congelado
Aldosterona Suero o plasma heparina, Estable 7 días a 2-8ºC Plasma con EDTA
edta Envío refrigerado resultados mas elevados.
B12 Vitamina Suero o plasma con 3 días a 2-8º C Evitar exposición
heparina, no utilizar 6-8 semanas a -20º C directa de luz
EDTA Envío refrigerado
Cortisol Suero o plasma con 7 días a 2-8ª C Lipemia y hemólisis Se degrada en 72 horas a >
heparina 3 meses a -20ªC 20ªC.
Envío refrigerado Plasma con EDTA
resultados elevados
Digoxina Suero 7 días a 2-8º C Lipemia No usar tubos con gel
2 meses a -20º C
Envío refrigerado
Estradiol Solo suero 2 días a 2-8º C Hemólisis
2 meses a -20º C
Fenobarbital Suero o plasma con Dos días a 2-8ªC
heparina. NO EDTA 1mes a -20º C
Envío refrigerado o
congelado
Fólico acido Suero o plasma con 24 horas 2-8ºC Hemólisis
heparina , no utilizar 6-8 semanas a -25 ºC
EDTA
Gastrina Solo suero Estable SOLO 4 horas a 2- Lipemia y hemólisis
8ºC 30 días a -20ºC
Envío congelado
Insulina Suero o plasma heparina, 3 días a 2-8º C Lipemia y hemólisis Grave degradación a las
EDTA 3 meses a -20º C 72 horas a 4º C
Envío refrigerado
IGF-1 Solo suero 24 horas 2-8ºC Hemólisis
12 meses -25 ºC
Envío refrigerado o
congelado
Osteocalcina Plasma heparina 2horas a 2-8 ºC
30 días a -20ºC
Envío congelado
PTH Suero o plasma con 8 horas a 2-8ºC Hemólisis y lipemia Mantener exactamente la
EDTA 2 meses a -20ºC proporción del EDTA
Envío congelado
Progesterona Suero o plasma heparina, 48-72 horas a 2-8ºC Hemólisis lipemia e -
EDTA Varios meses a -20ºC ictericia
Envío refrigerado
T3 libre Suero o plasma con 2 días a 2-8ºC Hemólisis
heparina. NO EDTA 2 meses a -20ºC
Envío refrigerado o
congelado
T3 total Suero o plasma heparina. 24 horas a 2-8ºC
NO EDTA
T4 libre (diálisis o SOLO Suero Envío refrigerado Lipemia
quicio)
T4 total Suero o plasma con 7 días a 2-8º C Lipemia
heparina, no utilizar 30 días a -20º C
EDTA Envío refrigerado
NOTAS MUY IMPORTANTES :
Hormonas que requieren EDTA como anticoagulante: ACTH, Vasopresina, Hormona paratiroidea
relacionada con proteína, Actividad de renina.

Hormonas y metabolitos que NO requieren EDTA como anticoagulante: Acido fólico, Cortisol,
Fenobarbital.,Testosterona, Todas las hormonas tiroideas, Troponina I, Vitamina B12.

Las muestras recogidas con anticoagulante, deben centrifugarse inmediatamente

Las muestras recogidas en tubos con separadores o activadores de coágulo, deben centrifugarse tras la
formación del mismo, NUNCA ANTES.

El envío ha de realizarse con el plasma o suero separado, refrigerado o congelado