10 Activacin de Linfocitos T

E.Muoz y J.Pea
La activacin de los linfocitos T se produce tras el reconocimiento por parte del
TCR/CD3 de la molcula HLA y el pptido presentado por la misma junto con otros procesos,
como son la activacin de ciertas molculas accesorias presentes en su membrana. Tambin
en este proceso de activacin se hace mas eficiente si los linfocitos reciben el estimulo de
ciertas citocinas mediante su unin a los receptores especficos presentes tambin en la
membrana de estos linfocitos.
Una vez activados los linfocitos T, estos prioritariamente producirn citocinas o factores
citotxicos, segn se trate de linfocitos T CD4+ o CD8+. De esta manera se desarrollar la
respuesta inmune. Los linfocitos T CD4+ colaborarn en la posterior activacin de otras clulas,
tales como NK, T CD8+, linfocitos B o macrfagos. A su vez los linfocitos T CD8+ tras su
activacin ejercern su funcin citotxica destruyendo clulas blanco (Figura 10.1).
Fig.:10.1

Fenmenos de interaccin celular

En muchos casos la unin del antgeno con el TCR no es suficiente para dar lugar a
una respuesta inmune eficaz. Para que esta respuesta se lleve a cabo se requiere la
participacin de una serie de molculas conocidas globalmente como accesorias, y cuya
funcin es precisamente la de contribuir al desarrollo de una respuesta inmune efectiva
facilitando la interaccin entre
Fig.:10.2
las distintas clulas. Se forma
as lo que se viene en
denominar
sinapsis
entre
linfocitosT y clula presentadora
de antgeno (Figura 10.2)
Las
principales
molculas implicadas en este
fenmeno de reconocimiento son
el CD4, CD8, CD2, CD45 y
CD28 y sus ligandos respectivos.
Todas estas molculas de
adhesin tambin juegan un
importante
papel
en
la

transduccin de seales y activacin de la clula T. En la Figura 10.3 se recoge un esquema

de las distintas posibilidades de activacin de los linfocitos T segn las molculas que
intervienen en los procesos de reconocimiento y adhesin intercelular.
Fig.:10.3

Molculas CD4 y CD8.

Las molculas CD4 y CD8 son glicoprotenas cuyos ligandos naturales son las
molculas del MHC de clase II y de clase I respectivamente. La molcula CD4 pertenece a la
superfamilia de las inmunoglobulinas y esta formada por una sola cadena. La molcula CD8
pertenece tambin a la superfamilia de las Igs, pero su estructura difiere considerablemente de la
anterior, al estar formada por dos cadenas homlogas, alfa y beta, que pueden formar
heterodmeros o, en menor proporcin, homodmeros (alfa/alfa).
Las interacciones de estas molculas con el HLA, juegan un papel esencial en la
maduracin tmica de los linfocitos. De hecho, el fenotipo CD4/CD8 de un determinado linfocito
T determina su funcin efectora. As, mientras el CD4 se expresa en la mayora de los linfocitos
T cooperadores, la molcula CD8 se presenta, principalmente, en aquellos linfocitos T con
funcin citotxica. Es lgico que las clulas T con fenotipo CD8+ reconozcan antgenos en el
contexto de molculas MHC de clase I, ya que stas tienen una distribucin tisular universal,
pudindose realizar as la funcin citotxica, reconocimiento y lisis, de cualquier clula del
organismo que se encuentre infectada por virus.
Molculas CD2
Las molculas CD2 junto con el CD11a/CD18 (LFA-1) son las molculas de adhesin
primaria que contribuyen a potenciar la afinidad de unin del linfocito T a la clula
presentadora. Sus ligandos naturales que son el CD58 (LFA-3) y CD54 (ICAM-1)
respectivamente, se expresan en la superficie de todas las clulas que realizan la funcin de
APC. El CD2 es una glicoprotena presente en la superficie de timocitos y linfocitos T, organizada
en dos dominios globulares extracitoplasmticos, una regin transmembrana y una larga regin
intracitoplasmtica. Esta molcula es la primera molcula que se expresa en el linaje T durante
su diferenciacin y se encuentra en todos los timocitos y clulas T maduras. Adems de su
papel en la interaccin entre clulas, est implicado en una va alternativa de activacin T
antgeno-independiente. Otras molculas de membrana que intervienen en el proceso de
adhesin son CD5 y CD40, cuyos ligandos en la APC son, respectivamente, CD72 y CD40L.

Molculas CD28
Las molculas CD28 son tambin de especial importancia en los mecanismos de
adhesin celular. El CD28 se expresa en todos los linfocitos CD4 y aproximadamente en el
50% de los linfocitos CD8, sus ligandos naturales pertenecen a la familia B7 (B7-1, CD80; B72, CD86). CD28, adems de su papel en el proceso de adhesin, tambin participa en el
mecanismo de transduccin de seal y activacin de la clula T ya que el CD28 induce la
denominada segunda seal de activacin celular (la primera est generada por el TCR/CD3).
En ausencia de esta segunda seal, los linfocitos T pueden anergizarse por la primera seal de
activacin dependiente TCR/CD3. Esta segunda seal parece ser regulada negativamente por
la molcula CTLA-4 (Cytotoxic T Lymphocyte Antigen 4).
Solo un nmero muy pequeo de molculas MHC con el pptido apropiado estn
presente en un rea dada del contacto clula-clula establecido con el proceso de adhesin.
Gracias a la habilidad del TCR/CD3 de formar estructuras ordenadas, los complejos MHC con
el pptido correcto migran dentro de la interfase. Esto provoca una alta densidad local de
complejos TCR/CD3 cooperando en la unin antignica.
Transmisin de seales
Todas las clulas eucariotas incluidos los linfocitos T, B y NK poseen mecanismos a
travs de los cuales los estmulos externos son procesados y enviados al ncleo a travs de una
serie de cambios bioqumicos que conocemos genricamente como seales de activacin
intracelulares o de transduccin de seales. Estos mecanismos implican la formacin de los
denominados segundos mensajeros que son capaces de regular la transcripcin especfica de un
amplio nmero de genes, los cuales participan en los procesos de crecimiento, divisin y
diferenciacin celular. En la activacin de esta cadena de segundos mensajeros intervienen
seales procedentes tanto del TCR/CD3 como de las molculas accesorias y receptores de
citocinas presentes en la membrana de los linfocitos (Figura 10.4).
Fig.10.4

Un mecanismo fundamental en la regulacin de la actividad y la funcin de numerosas

protenas en las clulas eucariticas son los ciclos de fosforilacin y defosforilacin mediados por
cinasas y fosfatasas. Bsicamente existen dos tipos de cinasas, dependiendo de su actividad
fosfotransferasa la cual se manifiesta fosforilando protenas en aminocidos serina y treonina
(serina/treonina/cinasas) o bien en aminocidos tirosina (tirosina cinasas). Igualmente hay
fosfatasas que defosforilan especficamente protenas fosforiladas bien en serina/treonina o en
tirosina.

Una propiedad general de los linfocitos es la necesidad de generar dos seales

distintas para inducir la proliferacin hacia clulas efectoras. Como se ha comentado
anteriormente la primera seal la proporciona la unin del complejo pptido-MHC al TCR (y a
los co-receptores CD4 y CD8), esta seal est potenciada por molculas de adhesin (CD2, el
LFA-1, el CD26, etc.). La segunda seal es suministrada por molculas co-estimuladoras del
tipo CD28, que de alguna manera complementan las seales de activacin inducidas por el
TCR permitiendo una activacin celular completa (Figura 10.5). Estas seales coestimuladoras
son necesarias para la activacin del linfocito, ya que en su ausencia la seal mediada por el
TCR puede conducir al linfocito a la muerte celular o a un estado de anergia (en la que el
linfocito no responde a nuevas estimulaciones).
Fig.10.5

Despus de la ocupacin de los receptores T por el antgeno, se produce la activacin de

los linfocitos y la iniciacin de eventos tempranos de traduccin de seales que finalmente
conducen a la reprogramacin gnica y a la adquisicin de funciones efectoras. Para que el
linfocito T pueda llevar a cabo estas funciones se requiere un complejo sistema responsable de la
transmisin de seales de activacin desde la superficie al interior de la clula. En esta ltima
dcada se est realizando un gran esfuerzo para identificar los componentes celulares y
moleculares que estn involucrados en dicha activacin celular y determinar la secuencia de
eventos bioqumicos que ocurren despus del reconocimiento del antgeno.
ESTMULOS INICIADOS POR EL TCR.
Uno de los primeros eventos bioqumicos que ocurren en linfocitos T despus de la
interaccin Ag-TCR, es el incremento de fosforilacin en tirosina de las cadenas no polimrficas
del CD3. Estas cadenas poseen en sus dominios intracitoplasmticos unas regiones
denominadas ITAM (Immunoreceptor Tyrosine-based Activation Motifs) que se fosforilan por la
accin de las tirosina cinasas c-lck o c-fyn.
La tirosina cinasa c-lck se encuentra localizada en la parte intracelular de la membrana
plasmtica unida a la bicapa lipdica por un proceso de miristilacin de su regin aminoterminal
(Figura 10.6). La asociacin fsica y funcional del CD4 y del CD8 con el TCR/CD3, hace que la
c-lck asociada a estas molculas se aproxime a la porcin citoplsmica de las protenas del
complejo CD3, donde puede fosforilar en tirosina a sus regiones ITAM. Adems del CD3 esta
cinasa puede tambin fosforilar otros substratos como es el caso de PLC-gamma-1 (fosfolipasa
C-gamma-1) que participa en la regulacin del sistema inositol fosfato que se describir ms
adelante. C-fyn, al igual que c-lck es otra tirosina cinasa que pertenece a la familia de cinasas
Src. Tambin est anclada a la cara interna de la membrana celular por miristilacin de su
porcin aminoterminal. Esta cinasa est fsicamente asociada al TCR y su actividad est
regulada por la ocupacin y activacin del mismo.

Una vez que los ITAM son fosforilados en residuos tirosinas, se convierten en sitios
especficos de acoplamiento que se unen a protenas citoplsmicas con dominios SH2. La
funcin de los dominios SH2 es interactuar con algunas protenas que se encuentran
fosforiladas en residuos tirosina, as su funcin esta regulada por procesos fosforilacindesfosforilacin de estos aminocidos. Por este motivo, un dominio SH2 puede interactuar con
una fosfotirosina adyacente en la misma o en otra molcula. Cuando es sobre la misma
molcula contribuye al control de su propia actividad enzimtica. En otras ocasiones, la enzima
con el dominio SH2 interacciona a travs de dicho motivo con otras protenas previamente
fosforiladas en tirosina por otra cinasa. Esta interaccin es responsable de su activacin y de la
de otros substratos. Este es el caso de la enzima ZAP-70 que se activa cuando a travs de sus
dominios SH2 se une a las cadenas que han sido previamente fosforiladas por c-fyn o c-lck.
ZAP-70 desempea un papel crtico en el mantenimiento de la cascada de seales que se
pone en marcha tras el reconocimiento del antgeno por el TCR. En este sentido, esta enzima
es un acoplador de seales desde la superficie celular al ncleo por fosforilacin de los
adaptadores Lat y SLP-76. Lat es una protena transmembrana cuya funcin, una vez
fosforilada, es organizar complejos multimoleculares en determinados subdominios lipdicos de
la membrana plasmtica. Estos complejos contienen protenas claves en la sealizacin al
interior de la clula como son la PLC-gamma1 (fosfolipasa C), el Grb-2 (growth factor binding
protein), SLP-76, la PI3K y Vav-1
Fig.:10.6

FOSFATASA CD45
El CD45, LCA (Antgeno comn leucocitario) o T200 es una de las glicoprotenas ms
abundantemente expresadas en la superficie de clulas hematopoyticas, pudindose detectar
hasta un milln de molculas por clula El CD45 presenta una larga regin citoplasmtica que
contiene dos dominios catalticos con actividad fosfatasa, una regin intra-membrana y una regin
aminoterminal extracelular que se encuentra glicosilada y que vara en su estructura. Esta
variedad ha sido explicada despus del clonaje e identificacin del gen que, codificada dicha
protena, el cual gracias a que puede transcribir de forma alternativa los tres exones (A, B y C) que
codifican la porcin aminoterminal de la protena. Esta transcripcin alternativa puede generar
hasta ocho diferentes ARN mensajeros que traducen al menos seis diferentes isoformas del CD45
en la membrana celular (Figura 10.7).

Fig.:10.7

El ligando del CD45

no se conoce y la existencia
de estas diferentes isoformas pueden indicar que
los ligandos del CD45 sean
mltiples y medien diferentes
funciones
en
diferentes
subpoblaciones de linfocitos
T.

Diferentes sistemas
experimentales han demostrado que el CD45 juega un
papel predo-minante en los
procesos
de
activacin
celular mediados por la ocupacin del TCR. Aunque terica, la funcin que ms frecuentemente se
atribuye al CD45 es la de defosforilar la tirosina de regulacin negativa de c-lck y c-fyn, con lo que
estas cinasas se activaran autofosforilndose y fosforilando con toda probabilidad otros substratos
prximos (como la cadena del CD3).
No obstante, el CD45 podra defosforilar tambin a la tirosina de c-lck y c-fyn previamente
autofosforilada conduciendo a una inhibicin de estas cinasas. Aunque estos modelos son
hipotticos, se acumulan continuamente evidencias de que el CD45 pude regular positiva o
negativamente los procesos de activacin celular. En este ltimo caso es importante destacar que
la regin citoplasmtica del CD45 puede ser fosforilada va Protena Cinasa C (PKC) en residuos
serina y como se ver a continuacin en el tiempo es posterior a los procesos de fosforilacin en
tirosina descritos anteriormente por lo que es posible que esta fosforilacin de CD45 sea necesaria
para inducir su actividad fosfatasa de regulacin negativa. En la Figura 10.8 se muestra la
estructura de una tirosin cinasa p56.
Fig.:10.8

PLC-gamma-1
Despus del reconocimiento antignico por parte del TCR esta PLC-gamma-1, se fosforila
en tirosina y se activa dentro de los complejos multimoleculares lipdicos de la membrana
plasmtica donde induce la hidrlisis de su substrato especfico, el fosfatidilinositol bifosfato
(PIP2), generndose los metabolitos inositol trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG) (Figura 10.9). El
IP3 se une a un receptor especfico (IP3R) localizado en unas estructuras especficas del retculo
endoplsmico facilitando la liberacin del calcio intracelular de sus compartimentos y aumentando
la concentracin de estos iones en el espacio libre intracelular. El IP3, posiblemente en conjuncin
con su metabolito, el IP4, puede regular los canales de calcio de la membrana plasmtica
permitiendo la entrada de calcio del exterior al interior celular.

El calcio intracelular puede estimular la enzima calmodulina, que es una serina/treonina

cinasa que puede activar a su vez a la fosfatasa calcineurina. Adems de la activacin del sistema
calmodulina/calcineurina, los niveles altos de calcio intracelular tambin ayudan a la activacin de
otras cinasas como son algunas isoenzimas de las protena cinasas C (PKC) y posiblemente
algunas cinasas activadas por mitgenos (MAPKs). El otro metabolito de la hidrlisis del PIP2, el
diacilglicerol es el principal responsable de la activacin de las enzimas protena cinasas C.
PROTEINA CINASAS C
Las protena cinasas C (PKCs) son una familia de isoenzimas que estn ampliamente
distribuida en tejidos y rganos de mamferos. Esta familia de serina/treonina protena cinasas
est constituida por varias subfamilias que engloban distintas isoformas. Hasta el momento, se
conocen 11 isoenzimas de PKC diferentes, clasificadas segn su estructura y necesidad de
cofactores para su activacin. Aunque todas las isoformas de PKC se activan mediante
fosfolpidos, estas isoenzimas en particular se diferencian marcadamente en su sensibilidad
hacia el calcio. Teniendo en cuenta este factor, podemos clasificar estos 11 genes de PKC de
mamferos conocidos hasta ahora en las siguientes subfamilias:
1. PKC convencionales (cPKC): su activacin es dependiente de Ca++ y
diacilglicerol (DAG). Esta subfamilia engloba las siguientes isoformas:
alfa, beta (1 y 2) y gamma.
2. PKC novel (nPKC): su activacin es dependiente de diacilglicerol e
independiente de Ca++. Esta subfamilia engloba distintas isoformas:
delta, epsilon, etc.
3. PKC atpica (aPKC): pertenecen estructuralmente a esta familia de
enzimas, pero no se activan mediante steres de forbol o diacilglicerol.
Esta subfamilia engloba varias isoformas.
Las PKCs en condiciones de reposo celular se encuentra localizada en el citosol donde es
inactiva, una vez que recibe el estmulo del DAG conjuntamente con iones Ca++ (dependiendo del
isotipo enzimtico) se transloca a la membrana celular donde en presencia de fosfolpidos
(fundamentalmente fosfatidilserina) ejerce su funcin de cinasa de protenas en aminocidos
serina y treonina. La implicacin de las PKCs en el transcurso de activacin de clulas T ha sido
bien establecida desde finales de los aos 70. As, las clulas T expresan mltiples isotipos de
PKC, incluyendo PKC-alfa,-beta1 y otros; sin embargo, el papel de los diferentes isotipos de
PKC en la regulacin de la sealizacin celular y la transcripcin gnica no est an
establecido definitivamente. La activacin de linfocitos T implica una compleja cascada de
respuestas celulares, que incluye la entrada en el ciclo celular y la liberacin de citocinas. La
estimulacin de clulas T resulta en la transcripcin de varios genes y en la expresin de una
determinada variedad de molculas, incluyendo las citocinas y sus receptores especficos
(como es el caso de IL-2 y su receptor). Las PKCs regulan la activacin de genes de clulas T
mediante el control de varios factores de transcripcin.
GAP-RAS
La familia de los proto-oncogenes Ras comprende al menos tres genes que codifican
otras tantas protenas denominadas Ha-, Ki- y N-Ras, que juegan un papel crtico en el control de la
proliferacin celular.
Las tirosinas cinasas activadas por la ocupacin del TCR no solamente inducen la
hidrlisis de fosfolpidos, sino que tambin activan vas de sealizacin a travs de Ras y
mediadas por Lat. Este adaptador fosforilado por ZAP-70 se une a otro adaptador intermediario
(Grb-2) que contiene dominios SH2 y SH3. Este ltimo se une a protenas especficas
fosforiladas en tirosina a travs de su dominio SH2 y a una protena de intercambio de
nucletidos de guanina (Sos) mediante su dominio SH3. La protena de intercambio acta
entonces sobre la forma inactiva de Ras (ras-GDP) convirtindola en su forma activa (Ras-

GTP), el cual se une y retiene a c-Raf cerca de la membrana plasmtica. Esta accin mediada
por Ras, hace que Raf se active y acte como una cinasa de MAPK (MAPKK) que a su vez
activa y fosforila una o ms MAPKs, incluyendo a ERK-1 y ERK-2, las cuales tras dicha
activacin migran al ncleo donde regulan por fosforilacin a determinados factores de
transcripcin involucrados en la proliferacin y diferenciacin celular. La inactivacin de Ras
(Ras-GTP) se debe a la accin de la protena p120GAP o protena activadora de GTPasa que es la
responsable de hidrolizar el GTP unido a Ras y convertirlo en GDP (Ras-GDP) por lo que se la
puede considerar como un regulador negativo de Ras. Esta cascada de sealizacin termina con
la fosforilacin de determinados factores de transcripcin que participan en la activacin y
funcionalidad de los linfocitos T (Figura 10.9).
FOSFATIDILINOSITOL-3' CINASA (PI3K).
Adems de la PLCgamma1, otras enzimas presentes en las clulas T que participa en el
metabolismo de fosfolpidos son las denominadas fosfatidilinositol-3' cinasas (PI3Ks), que
fosforilan el PIP2 generando cuatro especies de inositoles especficos que son; i) el fosfatidilinositol
3-fosfato; ii) el fosfatidilinositol 3,4-bifosfato; iii) el fosfatidilinositol 3,5-bifosfato y iv) el
fosfatidilinositol 3, 4,5-trifosfato. Una de las dianas mejor caracterizadas de la accin de estos
lpidos fosforilados es la protena cinasa B. En respuesta a estmulos externos, la Akt citoslica
(inactiva) se transloca a la mebrana plasmtica por los estos inositoles fosfatos y se fosforila y
activa. Una vez que Akt est activa es capaz de fosforilar y activar a su vez una gran variedad de
substratos (BAD, CREB, factores de transcripcin de la familia forhead, la cinasa IkB, la
procaspasa-9, etc.), explicando el por qu de la importancia de esta cinasa como elemento clave
en los procesos de proliferacin y diferenciacin celular.

PROTEINA CINASA ACTIVADA POR MITOGENOS (MAP-CINASAS).

En los ltimos aos se ha identificado y caracterizado parcialmente un sistema de
transmisin de seales crucial no solo para la activacin de clulas T sino tambin para todas las
clulas eucariotas. Este sistema de traduccin de seales est regulado por las MAPKs (mitogen
activated protein kinases) que de alguna manera actan como puente entre tirosinas cinasas
prximas a la membrana con otras cinasas que fosforilan en aminocidos serina/treonina una serie
de factores de transcripcin regulando as su actividad transactivadora. Estas MAPKs engloban a
una familia de serina/treonina cinasas, que son activadas cuando a su vez se fosforilan en
serina/treonina o tirosina. Al menos tres subfamilias de MAPKs han sido bien identificadas, i) las
ERK1 y 2 (Extracellular Regulated Kinases), 2) la subfamilia de c-Jun cinasas, JNK1, JNK2 y JNK3
(tambin llamadas SAPK), y 3) la subfamilia p38 (p38, p38b, p38g, y p38d). Las ERKs activadas
migran al ncleo donde regulan la transcripcin de c-fos, que forma dmeros con c-jun para formar
el complejo AP-1, que es fosforilado por las JNK en la subunidad c-jun, regulando su actividad
transcripcional. La p38 tambin participa en la activacin de AP-1 y recientemente se ha descrito
que en linfocitos T acta como limitador de la regulacin transcripcional mediada por el factor de
transcripcin NF-AT.
Las MAPKs son reguladas a su vez por otras cinasas denominadas MAPKK, y estas a s
vez por otro grupo de cinasas que por inercia han sido llamadas MAPKKK (ej, Raf). Estas ltimas
actuaran como integradores de las seales inducidas por la ocupacin de receptores de
activacin (ej. el TCR), fosforilando a las MAPKK, y estas a su vez fosforilando a las MAPKs en
residuos treonina y tirosina.

FACTORES DE TRANSCRIPCION.
Tras la activacin de las clulas T se transcriben alrededor de 100 genes (conocidos). La
activacin de esta pltora de genes ocurre de una manera secuencial, de manera que alguno de
ellos se transcribe inmediatamente despus del reconocimiento antignico y otros incluso das
despus. Por este motivo se pueden clasificar de manera didctica en genes inmediatos (su
transcripcin ocurre entre diez y treinta minutos despus de la activacin), tempranos (transcritos
entre treinta minutos y dos das) y tardos (transcripcin entre dos das e incluso hasta dos
semanas). Entre los primeros tenemos los genes c-fos, c-jun, c-myc, NF-KB/rel, etc., entre los
segundos estn la mayora de las interleucinas producidas por clulas T as como alguno de sus
receptores y entre los terceros podemos destacar molculas como el CTLA-4 y los genes VLA
(very late antigen) (Figura 10.9).
Fig.:10.9

En general, la transcripcin de genes inmediatos ocurre en ausencia de sntesis de novo

de protenas, lo cual indica que estos genes son activados por factores de transcripcin
preexistentes en la clula. Estos factores despus de la cascada activacin de cinasas y
fosfatasas originada por el reconocimiento antignico son fosforilados o defosforilados y de esta
manera activados. En este estado se unen a regiones reguladoras de la transcripcin situadas
generalmente en los promotores de determinados genes permitiendo su transcripcin o a veces
incluso su represin.
As, la primera etapa de su respuesta celular culmina con la expresin en el ncleo de
protenas trans-activadoras que regulan la transcripcin de una serie de genes involucrados en los
procesos de proliferacin, diferenciacin y adquisicin de funciones en los linfocitos T.
Una de las funciones ms importantes de los linfocitos T es la produccin de linfocinas, las
cuales, en ltima instancia, junto a los procesos de interaccin e celulares, van a modular el tipo de
respuesta inmune producida. Los mejores ejemplos de regulacin gentica de linfocinas lo
encontramos en la regulacin de la IL-2, as como de su receptor (principalmente la cadena alfa).
En la parte 5' del gen de la IL-2 se encuentra una regin de aproximadamente trescientos pares de
bases (entre las bases -319 y -52) que contiene los sitios de unin para factores como, NF-B, NFAT, factores octamricos, AP-1 y adems un sitio de unin conocido como CD28RE (CD28
responsive element). Estudios moleculares han demostrado que la accin conjunta de estos
factores es necesaria para conseguir una activacin completa del gen de la IL-2. La expresin de

alguno de estos factores est restringida a determinados tipos celulares, como es el caso de NFAT, mientras que otros como AP-1 y NF-B estn expresados en una gran variedad de tipos
celulares.
Factor nuclear de la cadena K de clulas B (NF-B/rel).
NF-B (factor nuclear de la cadena Kappa en clulas B) fue caracterizado por primera vez,
en 1986, como un factor especfico de clulas B y que se una a una secuencia localizada en el
promotor de la cadena ligera de las inmunoglobulinas. NF-kB se encuentra fundamentalmente en
todos los tipos celulares y est implicado en la activacin de multitud de genes en respuesta a
inflamacin, infeccin y otras situaciones de stress que requieren una rpida reprogramacin
de la expresin gnica..
Este factor de transcripcin est formado por una familia de protenas que presentan una
alta homologa entre ellas y que est compuesta principalmente por las protenas p50, p52, p65,
RelB, y c-rel. Estas protenas pueden estar formando distintos complejos entre ellas siendo los
ms comunes p50/p50 y p50/p65. Los distintos complejos tienen distintas afinidades por los sitios
de unin al DNA y posiblemente tengan diferentes actividades transactivadoras. Esto se puede
entender por el hecho de que la regin de DNA que se una a NF-kB es GGGRNNYYCC, este
decmero palindrmico no es exactamente igual en todos los genes que contienen una regin NFkB y as, estas pequeas diferencias pueden ser las responsables de las diferentes afinidades de
los complejos NF-kB/rel por el DNA.
Los complejos de NF-B se encuentran retenidos en el citoplasma por molculas
llamadas inhibidores de NF-B o IB. Dos de las ms estudiadas en linfocitos T son IB-a e IB-b
que en condiciones de reposo estn unidas a los dmeros de NF-kB enmascarando as su
seal de localizacin nuclear (NLS), previniendo de esta forma el desplazamiento de NF-kB al
ncleo La activacin de linfocitos T va TCR/CD3, IL-1 o TNF entre otros estmulos extracelulares
inducen una cascada de cinasas y proteasas que median la degradacin de IB por un proceso
combinado de fosforilacin, ubiquitinacin y proteolisis, como consecuencia del cual se producen
la liberacin de NF-B/rel y su translocacin al ncleo (Figura 10.9).
Adems de participar en la transcripcin de la IL-2 y de su receptor se ha demostrado que
NF-B puede trans-activar tambin un amplio nmero de genes en linfocitos T como son la cadena
beta del TCR, genes HLA de clase I y clase II, beta-2-microglobulina, molculas de adhesin como
ICAM-1, otras linfocinas como IL-6, IL-8 y el G-CSF, proto-oncogenes como c-myc y tambin se
une a las regiones promotoras (LTR) de virus como el HIV y HTLV-1.
La activacin de NF-kB representa el paradigma del control de protenas mediante un
proceso de ubiquitinacin y degradacin en el proteasoma integrado a la cascada de
fosforilaciones. Recientemente, ha habido un gran progreso en lo que concierne a la ruta de
seales de NF-kB, especialmente las relacionadas con las citocinas proinflamatorias, IL-1 y
tumor necrosis factor alfa.
Activador de protena 1 (AP-1)
A diferencia de NF-KB, AP-1 (Activador protein 1) es un factor de transcripcin
exclusivamente nuclear que se activa por fosforilacin mediada por determinadas cinasas que se
translocan al ncleo e inducen en este factor una modificacin postranslacional que le hace activo.
El factor de transcripcin AP-1 (Activator Protein 1) est formado por protenas ubicuas
pertenecientes a las familias Jun (c-Jun, v-Jun, JunB y JunD), Fos (c-Fos, FosB, Fra1 y Fra2) o
ATF (ATF2 y ATF3) capaces de unirse a una secuencia consenso de ADN denominada TRE
(TPA response element, TGACTCA) regulando la transcripcin de alto nmero de genes que
incluye genes de citokinas proinflamatorias entre otros. Los miembros de las familias Jun o ATF
forman homodmeros o heterodmeros con los miembros de las otras dos familias, pero en el
caso de las protenas Fos, stas solo forman heterodmeros. La integracin de las seales
transmitidas por las distintas MAPKs (ERK, p38, JNK) activadas tras la activacin del receptor

TCR provoca la unin de determinados factores de transcripcin (TCF, SRF) a los genes que
codifican para Fos y Jun, aumentando su presencia en el ncleo. Posteriormente, Fos y Jun
son fosforilados por FRK y JNK respectivamente (cinasas reguladoras de Fos y Jun). De este
modo, ambos factores de transcripcin activados, dimerizan y se unen a regiones especficas
de los promotores de genes como la IL-2 y otros genes que participan en la respuesta inmune
e inflamatoria (Figura 10.9).
Factor nuclear de clulas T activadas (NF-AT).
La familia de protenas NF-AT (Nuclear Factor of Activated T cells) est constituida al
menos por cuatro miembros NF-AT1/p, NF-AT2/c, NF-AT3, y NF-AT4/x, presentando cada uno
de ellos, excepto NF-AT3, varias isoformas probablemente derivadas de splicing (corte y
empalme) alternativo del mismo gen. Todas las isoformas presentan dos regiones de
secuencia homlogas entre ellas, el dominio de unin al ADN (DBD) y la regin homloga para
NF-AT (NHR). El DBD, comprendido aproximadamente entre los aminocidos 400 y 700, es la
zona ms conservada entre los miembros de la familia NFAT. La regin NHR constituye el
dominio principal de transactivacin de la protena y es el sitio de anclaje donde se une la
fosfatasa calcineurina, que cuando se activa defosforila mltiples residuos fosforilados de esta
zona, controlando as la translocacin nuclear de NF-AT. En un principio NF-AT se identific en
clulas T como un complejo rpidamente inducible que se una al elemento distal de respuesta
a antgeno en el promotor del gen de la IL-2. Su induccin requiere la sealizacin por calcio y
se inhibe con drogas inmunosupresoras como CsA y FK506, que inhiben la actividad fosfatasa
de la calcineurina. El complejo NF-AT activo unido al ADN est formado por un componente
citoslico presente en clulas T y por un componente nuclear ubicuo. El componente citoslico
est constituido por los miembros de la familia NF-AT mientras que el componente nuclear est
formado por miembros de la familia Fos y Jun que constituyen el factor de transcripcin AP-1.
En los ltimos aos se ha identificado la existencia de miembros de la familia NF-AT en otras
clulas del sistema inmune distintas a los linfocitos T y donde tambin regulan la expresin de
numerosos genes de citocinas (IL-4, TNFalfa y GM-CSF) y de receptores de superficie (FasL,
CD40L). La expresin de NF-AT3 y NF-AT4 tambin ha sido descrita en clulas fuera del
sistema inmune, lo que explicara en parte los efectos secundarios de la CsA fuera del sistema
inmune.
Como se ha comentado anteriormente, la activacin fisiolgica del TCR da lugar a la
movilizacin de Ca++ y con ello la activacin de la fosfatasa calcineurina que defosforila a
NFAT, altamente fosforilado en clulas T en reposo. La translocacin al ncleo, el aumento de
afinidad para unirse al ADN y la induccin de la actividad transcripcional de NF-AT estn
regulados por esta defosforilacin. La asociacin fsica entre la calcineurina y NFAT sigue
incluso en el ncleo donde la calcineurina sigue defosforilando al factor mientras los niveles de
calcio intracelulares sigan altos. En gran parte las secuencias de reconocimiento para NF-AT
necesitan de la cooperacin de protenas AP-1 para transactivar dichos genes. Adems, esta
interaccin entre AP-1 y NFAT con el ADN, confiere al complejo NFAT/AP1: ADN una
estabilidad 20 veces superior a la que presentan los complejos NFAT: ADN. Por tanto las rutas
de sealizacin que convergen en la activacin de AP-1 van a afectar la actividad
transcripcional mediada por los complejos NFAT/AP-1
INMUNOPATOLOGIA
Se han descrito alteraciones de muchas de la cinasas que intervienen en la activacin
de los linfocitos T. As, se ha descrito el dficit de Zap-70 en individuos que tenan en comn
valores muy bajos o ausentes de linfocitos T CD8+ en sangre perifrica. Los linfocitos de los
pacientes no proliferan en respuesta a lectinas, a anticuerpos monoclonales anti-CD3, a
antgenos o a clulas alognicas. Los anlisis de laboratorio revelaron la ausencia de Zap 70
en los linfocitos T de los pacientes.

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