CROMATOGRAFA EN PAPEL

INTRODUCCIN
Los mtodos ms usados en la separacin de molculas son la ultracentrifugacin, la
electroforesis y la cromatografa (Cardella-Hernandez, n.d.). Esta tcnica incluye una
serie de mtodos analticos de separacin que tienen como caracterstica general el
de estar constituidos por una fase estacionaria y una fase mvil, entre las que se
distribuyen diferencialmente las sustancias a separar. Cuando la fase mvil, la que
arrastra a las partculas que se van a separar, es un liquido (solvente o mezcla de
solventes) se denomina cromatografa de lquidos. Si la fase mvil es un gas se
denomina cromatografa de gases (Gonzales et al, 2008).
La cromatografa en papel (cromatografa en la que la fase estacionaria es papel), es
una tcnica en la que se aplica un pequeo volumen de la muestra cerca de uno de
los extremos de una hoja de papel filtro. Este tipo de cromatografa puede ser
ascendente, en la que el papel se sujeta a la parte superior de la cmara y se
sumerge en el solvente, que se encuentra en el fondo, entonces el solvente se
mueve hacia arriba por capilaridad. Al realizarse la separacin, los solutos de la
mezcla original migran a lo largo del papel con diferentes velocidades, dependiendo
de la solubilidad en el solvente. La relacin de migracin de una sustancia (Rf) puede
expresarse de acuerdo con la siguiente frmula (Gonzales et al, 2008):
Rf =

distanciarecorrida por la muestra

distanciarecorrida por lamezcla eluyente

La cromatografa es una tcnica que permite la separacin de molculas pequeas

como lpidos, nucletidos, vitaminas, frmacos y aminocidos; debido a que cada
sustancia exhibe un valor Rf particular, es posible separar aminocidos y pptidos, ya
que estos presentan caractersticas particulares, de solubilidad, polaridad y tamao,
por la composicin qumica de sus grupos R (Koolman & Roehm, 2005).

OBJETIVO GENERAL
Determinar la presencia de un edulcorante artificial en una muestra problema
mediante su Rf, y ver sus propiedades de solubilizacion comparndolo con los Rf de
los aminocidos que los componen.
OBJETIVOS PARTICULARES
-

Separar aminocidos y pptidos mediante el uso de la cromatografa en papel.

Determinar el corrimiento cromatogrfico de un aminocido polar y uno no

polar, comparando el Rf de cada uno de ellos.

Separar e identificar, por medio de la cromatografa en papel, el aspartame
presente en un refresco diettico, comparando su Rfcon el del Canderel.

HIPTESIS
Si se utiliza la tcnica de cromatografa es posible separar las sustancias en sus
componentes esenciales.
MATERIAL Y MTODO
Primero, se recort un rectngulo de papel de whatman con medidas de 20x9cm con
guantes de ltex puestos para no contaminarlo. Enseguida se coloco encima de un
pliego de cartulina para su fcil manipulacin.
Despus, se marcaron seis puntos sobre el papel, los cuales se colocaron a un
centmetro de la base del papel y a unos

0.5 cm entre punto y punto,

aproximadamente. Posteriormente, en los espacios comprendidos entre cada punto

se pusieron las muestras de cinco sustancias diferentes: Fenilalanina, Acido Apartico,
Canderel, Refresco Normal (sin colorante) y Refresco de Dieta (sin colorante).
Estas muestras se tomaron con un capilar para cada substancia y se pusieron cinco
gotas de cada solucin entre cada espacio del papel (entre cada aplicacin de las
muestras se secaba con una secadora).
Despus se coloco dentro de la cmara para cromatografa que tena una mezcla
eluyente de Butanol, Acido Actico y agua, que se encontraba dentro de la campana

de extraccin con una parrilla magntica con una temperatura de 250C, ahi se dejo
por una hora y media aproximadamente.
Despus se marc con un lpiz hasta donde llego la fase mvil en el papel de
whatman, enseguida se dispuso a dejar secar dentro de la campana de extraccin y
con una parrilla elctrica se mantena la temperatura deseada.
En el momento en el que se seco se aplico ninhidrina con un atomizador para poder
revelar el lugar donde se encontraban las muestras, solo hasta donde se marco con
el lpiz.
RESULTADOS
En el corrimiento cromatogrfico (figura 1) se observan 5 bandas teidas de color
purpura correspondientes a las 5 muestras utilizadas, en las cuales es posible
identificar manchas de diferentes tamaos y a diferentes distancias.

Figura 1: Corrimiento cromatogrfico. De izquierda a

derecha: Fenilalanina, cido aspartico, refresco diettico
y no diettico y Canderel. Pueden observarse manchas
de diferentes tamaos y distancias recorridas diferentes,
lo que permite calcular el Rf de cada una de ellas.

De acuerdo a la relacin de migracin para las sustancias aqu utilizadas

(aminocidos, refrescos y canderel) se obtuvieron los valores de Rf para cada una de
ellas utilizando la frmula siguiente:
Rf =

distanciarecorrida por la muestra

distanciarecorrida por lamezcla eluyente

Como la distancia recorrida por la mezcla eluyente fue de 8.8 cm y las distancias
recorridas por las muestras fueron diferentes, los Rf quedan:
Tabla 1: valores de Rf para las muestras de aminocidos, refrescos y canderel
Distancia recorridas
por las muestras
7.0 cm
1.5 cm
1 cm

Rf de las
muestras
0.7955
0.1705
0.113636

3 cm

0.340909

2.5 cm

0.2840

3cm

0.340909

8 cm
R.F. de la sustancias trabajadas en el laboratorio

0.909090

Muestras
Fenilalanina
Acido asprtico
Refresco
diettico
Refresco no
diettico

Distancia recorrida
por la mezcla eluyente

8.8 cm

Canderel

ANLISIS DE RESULTADOS
Ninguna muestra estudiada present el mismo Rf, ya que la tendencia relativa de las
molculas en la mezcla (aminocidos) para asociarse con mayor fuerza a una o a
otra fase no es la misma (Murray et al, 2007).
Aunque las muestras de canderel (aspartame, compuesto formado por fenilanina y
acido apartico) y del refresco diettico no tengan precisamente el mismo Rf, estas
presentan la misma tendencia a disociarse en dos manchas, la mancha con un valor
mayor de Rf parece ser la fenilalanina y la otra el cido asprtico, tal como lo
muestran las dos primeras columnas de la imagen 1 del corrimiento cromatogrfico
para la fenilalanina y el cido asprtico, respectivamente. Puesto que los dos tipos de
refresco no presentan el mismo Rf, ni el patrn de disociacin es el mismo, queda

determinado que el aspartame est presente en el refresco diettico, no as en el

refresco normal.

CONCLUSIN
Debido a que cada sustancia exhibe un Rf caracterstico, diferente a las dems,
debido a sus propiedades de solubilizacion, es posible la separacin de aminocidos
presentes en muestras problema, como la fenilalanina y cido asprtico, en forma de
aspartame, presentes en los refrescos dietticos, mediante la tcnica de la
cromatografa en papel.
BIBLIOGRAFA
-

Cardella-Hernndez. Bioqumica mdica, tomo I: Biomolculas. n.d.

Gonzlez-Soto, E.; L. Bucio-Ortiz; P. Damin-Matzumura; F. Daz de LenSnchez; E. Corts-Barberena; L.J. Prez-Flores. (2009)

Manual de

bioqumica 1. 3 ed. Mxico.

Koolman, J. & K.H. Roehm. 2005. Color Atlas of Biochemistry. 2 edicin.

Thieme. New York. EU.

Murray, R. K.; D.K. Granner; V.W. Rodwell; P.A. Mayes (2007) Harper.
Bioqumica ilustrada. 14 ed. Mxico, Manual Moderno

ANEXO (CUESTIONARIO)
1.- que son la fase estacionaria y la fase mvil de un sistema
cromatografico?
La fase estacionaria de una cromatografa, consta de un slido o un lquido
adherido a un slido, por el cual se hace pasar un fluido.
La fase mvil de una cromatografa, consta de un lquido o un gas que es capas
de moverse a travs de la fase estacionaria, a diferentes velocidades
dependiendo de su afinidad.
Cromatografa sobre papel y capa fina.smith ivor.madrid,alambra.1979
2.- como se puede modificar la fase mvil de un sistema cromatografico?

Dependiendo del eluyente que se utilice en la cromatografa, la fase mvil debe

elegirse de forma que se eluyan todos los componentes de la muestra y no se
produzca una acumulacin en la base de la cromatografa.
Cromatografa sobre papel y capa fina.smith ivor.madrid,alambra.1979
3.- Qu es el Rf de una sustancia?
Se define Rf como el cociente entre la distancia recorrida por una sustancia
desde el origen y la distancia recorrida del eluyente.
El Rf es una cifra til porque es constante cuando se reproduce el experimento en
todas las condiciones adems de ser tan caracterstico y descriptivo de un
compuesto como puede serlo el punto de fusin. Por supuesto, el Rf de un
compuesto dado ser diferente para distintos disolventes, pero ello constituye una
ventaja, puesto que as es posible caracterizar a un compuesto ms
especficamente registrando sus Rf en varios disolventes.
Algunos factores que afectan al Rf son: el grado de pureza del adsorbente, la
concentracin del ambiente de la cmara y la temperatura.
Cromatografa sobre papel y capa fina.smith ivor.madrid,alambra.1979
4.- investigue las caractersticas de los aminocidos utilizados en esta
prctica y como se clasifican.
Aminocidos Esenciales vs. No Esenciales

No esenciales

Esenciales

Alanina

Arginina*

Asparagina

Histidina

Aspartato

Isoleucina

Cisteina

Leucina

Glutamato

Lisina

*Los aminocidos arginina, metionina y fenilalanina se consideran esenciales por

razones no directamente relacionadas por la falta de sntesis. La arginina es
sintetizada por las clulas de mamferos pero en un rango que es insuficiente
para resolver las necesidades de crecimiento del cuerpo y la mayora que es
sintetizada es procesada para formar urea. La metionina es requerida en grandes
cantidades para producir cisteina, si el ltimo aminocido no es provisto
adecuadamente en la dieta. Igualmente, la fenilalanina se necesita en grandes
cantidades para formar tirosina, si este ltimo aminocido no es adecuadamente
provisto en la dieta.
La fenilalanina: Es un aminocido esencial aromtico (junto con el triptfano y la
tirosina) cuyo grupo R contiene un anillo bencnico (Ruta 2). Uno de los aspectos
ms relevantes de su biosntesis es el mecanismo a travs del cual los anillos
aromticos se forman a partir de precursores alifticos. Tambin se le clasifica,
junto con el triptfano, como un aminocido hidrofbico con estructura cclica.
Segn los ltimos estudios sobre los aminocidos esenciales parece que en la
fenilalanina, la estructura carbonada sera su parte considerada esencial ya que
esta estructura es transaminada con rapidez por el organismo.
La mayor parte de este compuesto se transforma, por medio de hidroxilacin, en
tirosina que es otro aminocido, en este caso considerado como semiesencial.
Adems la fenilalanina es el precursor de las catecolaminas en nuestro cuerpo, si
bien acortamos el mecanismo en la sntesis de catecolaminas utilizando la
tirosina como precursor (ver Ruta 3). Tambin es un constituyente importante de
los

neuropptidos

cerebrales,

como

la

somatostatina,

vasopresina,

melanotropina, encefalina, ACTH, angiotensina, sustancia P y colecistoquinina.

Muchas drogas de las que conocemos como psicotrpicas, contienen fenilalanina.
La fuente ms importante de fenilalanina son los alimentos ricos en protenas,
como es la carne y los productos lcteos. La fenilalanina tiene utilidades en la

industria de la alimentacin, por ejemplo, en la elaboracin de edulcorantes

artificiales.
Acido asprtico: Aminocido glucognico (puede convertirse en glucosa y
glucgeno) cuyo grupo R posee carga negativa a pH 7,0. Se trata de un
compuesto muy hidroflico, y como tal se encuentra casi siempre en la superficie
externa de las protenas globulares. Es un compuesto metablicamente activo
debido a su interconversin con los cidos dicarboxlicos tetracarbonados del
ciclo de los cidos tricarboxlicos, despus de sufrir una transaminacin. Es el
precursor de la asparagina. Tambin interviene en otras reacciones como dador
de aminos en la sntesis de urea y de purinas, y como precursor de los anillos
pirimidnicos a travs de la formacin de carbamoilaspartato en el citosol. Es,
junto con el glutmico, el principal neurotransmisor excitatorio de la corteza
cerebral.
http://www.biopsicologia.net/fichas/page_592.html
http://themedicalbiochemistrypage.org/spanish/amino-acid-metabolism-sp.html
5.- investigar los Rf reportados en la literatura para los aminocidos aqu
utilizados. Anote el sistema de fase mvil y fase estacionaria utilizado para
obtenerlos.
Rf de los aminocidos de referencia

Aminocido

Rf

Lisina

0.24

cido
glutmico

0.47

Glicina

0.49

Cisteina

0.12

Serina

0.31

Metionina

0.59

Fenilalanina

0.66

Arginina

0.28

Valina

0.59

Triptfano

0.60

Histidina

0.29

Treonina

0.39

http://www.doschivos.com/display.asp?ID=625&f=135478
6.- hacer una investigacin sobre el uso actual del aspartame. Anote
posibles beneficios y perjuicios del uso de este producto.
Comunicado de la FDA sobre el Estudio Europeo de aspartame
CFSAN / Oficina de Seguridad Alimentara de aditivos
20 de abril 2007
La FDA ha concluido su examen sobre el estudio de carcinogenicidad a largo
plazo de aspartame titulado, "a largo plazo de carcinogenicidad bioensayos para
evaluar el potencial de los efectos biolgicos, en particular cancergenos, del
aspartame administrado en la alimentacin de ratas Sprague-Dawley", realizado

por el Ramazzini Europea Fundacin (ERF), con sede en Bolonia, Italia. La FDA
revis los datos del estudio puestos a su disposicin por el ERF y considera que
no es compatible con la conclusin de la ERF que el aspartame es un agente
carcingeno. Adems, estos datos no proporcionan evidencia para alterar la
conclusin de la FDA que el uso del aspartame es seguro.
El aspartame fue aprobado por primera vez en los Estados Unidos en 1981 y es
uno de los edulcorantes artificiales ms utilizados. Cuando metabolizado por el
organismo, el aspartame se descompone en dos aminocidos comunes, cido
asprtico y fenilalanina, y una tercera sustancia, el metanol. Estas tres sustancias
estn en cantidades similares o mayores al comer alimentos comunes.
Al primero de aprendizaje de los resultados del estudio ERF, la FDA pidi a los
datos de la ERF para evaluar los resultados. El 28 de febrero de 2006, la agencia
recibi slo una parte de los datos del estudio solicitado. En junio de 2006, la FDA
pidi ERF para proporcionar el resto de los datos del estudio solicitado
inicialmente y tambin se ofreci a revisar muestras de patologa del estudio. ERF
no present datos adicionales a la FDA y no est de acuerdo a la revisin de la
FDA de las muestras de patologa.

La FDA no pudo llevar a cabo una revisin completa y definitiva del estudio
porque ERF no proporcion los datos del estudio completo. Con base en los
datos disponibles, sin embargo, hemos identificado deficiencias significativas en
el diseo, realizacin, presentacin de informes, y la interpretacin de este
estudio. La FDA considera que la fiabilidad y la interpretacin de los resultados
del estudio se ve afectada por estas deficiencias y variables no controladas, tales
como la presencia de la infeccin en los animales de experimentacin.
Adems, los datos que fueron proporcionados a la FDA no parecen apoyar los
hallazgos relacionados con el aspartame informado por el ERF. Basado en
nuestra revisin, los cambios patolgicos fueron incidentales y apareci
espontneamente en el estudio, los animales, y ninguno de los cambios
histopatolgicos inform parecen estar relacionados con el tratamiento con

aspartame. La FDA considera que una visin adicional sobre los resultados del
estudio podran ser proporcionadas por una patologa a nivel internacional de
trabajo respaldado por el examen conjunto de las muestras de tejido apropiado en
el estudio.
Teniendo en cuenta los resultados de la gran cantidad de estudios sobre la
seguridad del aspartame, incluyendo cinco con anterioridad a cabo estudios
negativos carcinogenicidad crnica, un estudio recientemente la epidemiologa
grande con asociaciones negativas entre el uso de aspartame y la aparicin de
tumores, y los resultados negativos de una serie de transgnicos tres ensayos del
ratn, la FDA no encuentra ninguna razn para modificar su conclusin anterior
de que el aspartame es seguro como edulcorante de uso general en los
alimentos.