ESPECTROFOTOMETRA UV-VISIBLE

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

1. Propiedades de la luz
2. Absorcin de luz
2.1. Fenmeno de la absorcin
2.2. Espectros de absorcin molecular
2.3. Tipos de transiciones electrnicas
3. Ley de Lambert-Beer
4. Instrumentacin
4.1. Fuente de radiacin
4.2. Selector de longitud de onda
4.3. Recipientes para muestra
4.4. Detector

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

1. Propiedades de la luz

longitud de onda ()

Onda

= c
Longitud de onda x Frecuencia = velocidad de la luz

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

1. Propiedades de la luz
ESPECTRO ELECTROMAGNTICO
Energa

Longitud de onda

Luz visible

Longitud de onda (nm)

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

2.1. Fenmeno de absorcin de radiacin

2. Absorcin de luz

ABSORCIN
DE RADIACIN (h)

EMISIN
DE RADIACIN (h)

Energa

Estados
excitados

Estado
fundamental

- Cuando una molcula absorbe luz aumenta su energa

- Cuando una molcula emite luz disminuye su energa
M Luisa Fernndez de Crdova
Universidad de Jan

Rotura de enlace
e ionizacin

e-

excitacin
electrnica

vibracin

2. Absorcin de luz

Luz visible

Longitud de onda (nm)

Energa

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

2.2. Espectros de absorcin molecular

2. Absorcin de luz

V2
Niveles rotacionales
Niveles vibracionales

V1

S1

Energa

Vo
Transiciones
electrnicas

V1
h (UV-Vis)

S0

V0
M Luisa Fernndez de Crdova
Universidad de Jan

2. Absorcin de luz
S2

S1

Transiciones electrnicas y espectros

de los tomos

Transiciones electrnicas y espectros UV-Visible

en molculas

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

2. Absorcin de luz

ESPECTRO DE ABSORCIN

A
Paracetamol

0.8

0.6

Propifenazona

0.4

0.2

c. acetilsaliclico
Cafena

0.0
200

250

300

350

Longitud de onda (nm)

M Luisa Fernndez de Crdova
Universidad de Jan

2. Absorcin de luz

*
AZUL DE BROMOFENOL (max = 614 nm)

Luz blanca

Luz azul

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

2. Absorcin de luz

Espectro de absorcin de la clorofila

en la regin visible. Obsrvese que
absorbe en las regiones del rojo y del
azul.

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

1. Propiedades de la luz
2. Absorcin de luz
2.1. Fenmeno de la absorcin
2.2. Espectros de absorcin molecular
2.3. Tipos de transiciones electrnicas
3. Ley de Lambert-Beer
4. Instrumentacin
4.1. Fuente de radiacin
4.2. Selector de longitud de onda
4.3. Recipientes para muestra
4.4. Detector

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

3. Ley de Lambert-Beer

I Io

Muestra
Fuente
de luz

Selector de longitud
de onda

Io

Detector
de luz

b
Instrumentacin para medir absorcin de luz

I0 (intensidad radiante)

I (intensidad transmitida)

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

3. Ley de Lambert-Beer

Io

b
- Transmitancia T = I / Io

(fraccin de la luz incidente que sale de la muestra)

vara entre 0 y 1

- Absorbancia A = - log T = log (Io / I)

Ley de Lambert-Beer
: coeficiente de absortividad molar (l mol-1 cm-1)
b : espesor de la clula (cm)
c : concentracin (moles/l)

A = b c

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

1. Propiedades de la luz
2. Absorcin de luz
2.1. Fenmeno de la absorcin
2.2. Espectros de absorcin molecular
2.3. Tipos de transiciones electrnicas
3. Ley de Lambert-Beer
4. Instrumentacin
4.1. Fuente de radiacin
4.2. Selector de longitud de onda
4.3. Recipientes para muestra
4.4. Detector

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

4. Instrumentacin
Espectrofotmetro

Muestra
Fuente
de luz

Selector de longitud
de onda

Io

Detector
de luz

Instrumento para medir intensidad de radiacin

Fuente de radiacin
Sistema de seleccin de longitud de onda
Recipiente para la muestra
Detector
M Luisa Fernndez de Crdova
Universidad de Jan

4. Instrumentacin

MONOCROMADOR

rendija entrada

fuente
espejos
red o prisma
detector
rendija salida
M Luisa Fernndez de Crdova
Universidad de Jan

MONOCROMADOR DE RED

4. Instrumentacin

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

4. Instrumentacin

4.3. Recipientes de muestra

UV : cuarzo
Material

Visible: cuarzo o vidrio

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

4. Instrumentacin

Clulas semi-micro

Macro-clulas

UV

Vis

UV

Vis

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

4. Instrumentacin

Esquema de un espectrofotmetro de haz simple

M Luisa Fernndez de Crdova

Universidad de Jan

4. Instrumentacin
ESPECTROFOTMETROS, FOTMETROS, COLORMETROS

Espectrofotmetro de doble haz

Espectrofotmetros porttiles
M Luisa Fernndez de Crdova
Universidad de Jan