Manivela

Portabloque
Bloque de parana

Fragmento de tejido
Cuchilla

Figura 1-1. Micrtomo para cortar los tejidos incluidos en parana o en resina. El movimiento de la manivela (en la parte derecha de
la gura) hace que el bloque que contiene el fragmento de tejido suba y baje. A cada vuelta de la manivela, el bloque avanza una determinada distancia (generalmente, 1-10 m), de manera que al pasar por la cuchilla deja un corte de tejido. (Cortesa de Microm.)

Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005

Lente ocular

Prisma

Lente
objetivo
Muestra
Platina
Condensador
Filtro de luz
Controles del movimento
de la platina
Controles de ajuste
del foco

Lmpara

Espejo

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Figura 1-2. Esquema de un microscopio ptico con sus

componentes principales y con el trayecto de la luz desde
la fuente lumnica hasta el ojo del observador. (Cortesa de
Carl Zeiss Co.)

C
Figura 1-3. Clulas de la cresta neural en cultivo estudiadas mediante
tres sistemas pticos distintos. La preparacin histolgica no ha sido
teida y en las tres imgenes fotogrcas aparecen las mismas clulas;
se pueden utilizar las dos clulas pigmentadas para la orientacin en
cada imagen. A) Microscopia ptica convencional. B) Microscopia de
contraste de fases. C) Microscopia de contraste de fases interferencial,
segn Nomarski. Gran aumento. (Cortesa de S. Rogers.)

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Figura 1-4. Microscopia de luz polarizada. La imagen corresponde

a un fragmento de mesenterio de ratn teido con el mtodo del
picrosirio, que destaca las bras de colgeno. El mesenterio se coloca sobre un portaobjetos y se observa por transparencia. Con la
luz polarizada, las bras de colgeno muestran una birrefringencia
intensa y aparecen brillantes o con coloracin amarilla. Aumento
mediano.
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Algunos planos
focales posibles
Lente

Muestra
histolgica

Detector

Obstculo
con oricio

Plano
focalizado

Figura 1-5. Principio de la microscopia confocal. La luz originada en un

plano de corte atraviesa un pequeo oricio existente en un obstculo interpuesto y llega hasta un detector; mientras tanto, el obstculo bloquea
los rayos originados en otros planos. De esta manera, en cada momento
slo se visualiza un plano muy no de la muestra estudiada.

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Fuentes
de lser

Obstculo
con oricio

Rastreo de la
iluminacin

Divisor del haz

luminoso
Detector
Lente

Plano
focalizado

Muestra

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Figura 1-6. Esquema convencional de un microscopio confocal. La

iluminacin procedente de una fuente lser alcanza la muestra y
se reeja. Un espejo dirige la luz reejada hacia un obstculo que
posee un oricio pequeo. El obstculo bloquea la luz procedente
de los planos de la muestra que quedan por delante y por detrs
del plano focalizado. El lser realiza un barrido de la muestra
para que sea posible la visualizacin de un rea mayor del corte
histolgico.

Figura 1-7. Microfotografa de clulas de rin de hmster en

cultivo, teidas con el colorante naranja de acridina. Mediante
un microscopio de uorescencia, el ADN (en el interior de los
ncleos) emite una luz amarilla, mientras que el citoplasma (con
abundante ARN) muestra una coloracin anaranjada. Gran aumento. (Cortesa de A. Geraldes y J. M. V. Costa.)
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Figura 1-8. Imagen fotogrca obtenida con el microscopio electrnico de transmisin 906E. (Cortesa de Carl Zeiss Co.)

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Ctodo
nodo
Lente condensadora

Can de
electrones

Bobina
elctrica

Rejilla de cobre con

tres cortes histolgicos

Columna

Portamuestras

Lente objetivo

Ventana
de cristal

Lente intermedia

Lentes
protectoras
Placa uorescente
Placa fotogrca
Cmara CCD

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Figura 1-9. Esquema correspondiente a un microscopio de

transmisin con sus componentes principales.

Ctodo
nodo

Can de
electrones

Lente condensadora

Bobina elctrica

Columna

Lente
Rastreador

Lente
Amplicador
de la seal

Detector de
electrones

Monitor

Muestra

Figura 1-10. Esquema correspondiente a un microscopio electrnico

de barrido con sus componentes principales.
Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005

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Figura 1-11. Autorradiografas correspondientes a las glndulas salivales

submandibulares de un ratn inyectado previamente con 3H-fucosa 8 h
antes de su sacricio. A) Con el microscopio ptico se observan grnulos
negros de plata (echas) que indican las regiones celulares que presentan
radiactividad. La mayor parte de la radiactividad se localiza en los grnulos
citoplsmicos de las clulas de los conductos glandulares. Aumento mediano. B) Tejido preparado para su estudio con el microscopio electrnico de
transmisin. Se pueden observar los grnulos de plata que aparecen como
estructuras con conguracin de ovillos (echas) localizados principalmente
sobre los grnulos citoplsmicos (G) y en la luz (L) de los tbulos. Gran
aumento. (Cortesa de T. G. Lima y A. Haddad.)

Figura 1-12. Autorradiografas de cortes histolgicos de rganos de

ratn inyectado con 3H-timidina. Las autorradiografas se expusieron
durante un tiempo prolongado, por lo que los ncleos radiactivos
aparecen fuertemente marcados y cubiertos por una gran cantidad
de granos oscuros. A) Se observan numerosas clulas epiteliales en
fase de divisin en la base de las glndulas intestinales, sin clulas en
fase de reposo en las vellosidades. B) En un corte de ganglio linftico
se puede observar que la divisin celular tiene lugar principalmente
en los centros germinales de este rgano. (Cortesa de T. M. T. Zorn,
M. Soto-Suazo, C.M. R. Pellegrini y W. E. Stumpf.)
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Figura 1-13. Microfotografa de broblastos de pollo cultivados e

infectados por Trypanosoma cruzi, que aparece en forma de pequeas partculas dispersas en el citoplasma (echas). A pesar de que
la separacin entre las clulas no es visible, los ncleos se pueden
observar fcilmente (N). Tincin de Giemsa. Aumento mediano.
(Cortesa de de S. Yoneda.)
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Clulas intactas

Clulas
disociadas

Ncleos

3
Mitocondrias
y lisosomas

4
Microsomas

Ribosomas

6
Membranas
de retculo
endoplasmtico

Figura 1-14. La tcnica de fraccionamiento celular permite el aislamiento de los componentes de la clula mediante centrifugacin diferencial.
La columna de dibujos que aparece en la parte derecha de la gura muestra los orgnulos celulares obtenidos en el fondo de cada uno de
los tubos tras la centrifugacin. La fuerza de centrifugacin se expresa en unidades g, equivalentes a una unidad de la fuerza de gravedad.
1) Un fragmento de tejido que se ha troceado con una cuchilla de afeitar o con una tijera y despus se disocia mediante un homogenizador o
mediante ultrasonidos. 2) El tejido disociado se mantiene en reposo durante aproximadamente 20 min para que precipiten los grumos que no
se han disociado as como las bras de la matriz extracelular. 3) El sobrenadante se centrifuga a 1.000 g durante 20 min; los ncleos quedan
precipitados en el fondo del tubo. 4) El sobrenadante se centrifuga a 10.000 g durante 20 min; precipitan las mitocondrias y los lisosomas. 5) El
sobrenadante se centrfuga a 105.000 g durante unos 20 min; precipitan los microsomas. 6) El sobrenadante se trata con desoxicolato sdico antes
de la centrifugacin; los microsomas se disocian y precipitan por separado como ribosomas y como membranas del retculo endoplasmtico
rugoso. (Modicado y reproducido con autorizacin de Bloom W, Fawcett DW: A Textbook of Histology. 9.a ed. Saunders, 1968.)

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Figura 1-15. Electromicrografas de tres fracciones celulares aisladas mediante centrifugacin en un gradiente de densidades. A)
Fraccin de mitocondrias, contaminada con retculo endoplasmtico. B) Fraccin de microsomas. C) Fraccin de lisosomas. Gran
aumento. (Cortesa de P. Baudhuin.)

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Figura 1-16. La microfotografa de un corte histolgico de hueso

tratado mediante una tcnica histoqumica para demostracin de
iones calcio. El precipitado oscuro indica la presencia de fosfato
clcico en el hueso y el cartlago calcicado. El tejido cartilaginoso
no calcicado (coloracin marrn) aparece en la mitad superior de
la imagen. Aumento mediano. (Microfotografa obtenida por P.
A. Abrahamsohn.)

Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005

Figura 1-17. Microfotografa de un corte de rin tratado mediante

el mtodo de Gomori para la demostracin de la enzima fosfatasa
alcalina. Las localizaciones en las que se observa la presencia de la
enzima (supercie celular) aparecen con coloracin oscura debido al
precipitado de las sales de plomo (echas). Aumento mediano.
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Figura 1-18. Deteccin de la fosfatasa cida. Electromicrografa de

una clula de un rin de ratn en la que aparecen tres lisosomas
(L) junto a un ncleo (N). El depsito oscuro en el interior de estos
orgnulos corresponde a fosfato de plomo que precipita en las zonas
en donde previamente haba fosfatasa cida. Gran aumento. (Cortesa
de E. Katchburian.)

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Figura 1-19. Microfotografa correspondiente a una vellosidad intestinal

teida con la tcnica del cido perydico de Schiff. La intensa coloracin
del borde en cepillo de la supercie celular (echas cortas) as como del
producto de secrecin de las clulas caliciformes (echas largas) se debe al
elevado contenido en polisacridos en estas estructuras. Corte histolgico
teido con hematoxilina (tincin de contraste). Gran aumento.

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Figura 1-20. Las sustancias que presentan una gran anidad

por una molcula pueden marcarse y utilizarse para la identicacin de dicha molcula. 1) La molcula A presenta una
anidad intensa y especca por una porcin de la molcula
B. 2) Si A y B se ponen en contacto, A se une a una porcin de
B que reconoce. 3) La molcula A se puede unir a un marcador
que sea visible mediante microscopia ptica o electrnica.
El marcador puede ser un compuesto uorescente, una enzima como la peroxidasa, una partcula de oro o un tomo
radiactivo. 4) La molcula B se puede detectar en los casos en
los que est presente en la clula o en la matriz extracelular
incubndola con la molcula A.

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Figura 1-21. Algunos mtodos de separacin de las protenas: ultracentrifugacin (A) y cromatografa (B). A) Una mezcla de protenas obtenidas a partir de clulas y de tejidos homogeneizados se centrifuga a alta velocidad durante varias horas. Las protenas se separan en bandas,
segn el tamao y la densidad de sus molculas. Inmediatamente, se extrae el medio en el que se ha llevado a cabo la centrifugacin y se
divide en varias fracciones que contienen las distintas protenas, para su anlisis por separado. B) Se coloca una solucin que contiene una
mezcla de protenas sobre una columna ocupada por partculas que muestran propiedades diferentes. Por ejemplo, las partculas pueden
presentar cargas electrostticas distintas (atraen las protenas segn su carga) o bien pueden presentar poros (actuando como un cedazo para
las molculas de tamaos diferentes). Durante la migracin de las protenas en la columna, su movimiento se retrasa por la interaccin con
las partculas. Cuando se ha recorrido todo el lquido de la columna, es posible recoger por separado los distintos grupos de protenas.

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A
Protena
de peso
molecular
conocido

Gel

Gel

Muestras histolgicas

Fuente de
energa

Gel

Gel

Placa de rayos X

Gel

Membrana de
nitrocelulosa

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Figura 1-22. Separacin de las protenas mediante electroforesis en gel. A) Aislamiento de las
protenas. 1. Se obtienen mezclas de protenas a partir de clulas y tejidos homogeneizados y se
tratan con un detergente (dodecil sulfato sdico) y con mercaptoetanol para separar las cadenas
y las subunidades de protenas. 2. Las muestras se colocan la porcin superior de una placa de
gel de poliacrilamida, que se somete a una corriente elctrica continua. 3. Las protenas presentan
migracin a lo largo de un gel, segn su tamao y forma. Sobre el gel tambin se coloca una mezcla
de protenas conocidas que sirve como patrn respecto a los pesos moleculares. B) Deteccin e
identicacin de las protenas. 1. Tincin. Las protenas se tien y la intensidad de la tincin es
proporcional a su concentracin. 2. Autorradiografa. Si algunas de las protenas muestran radiactividad, se pueden reconocer mediante autorradiografa. Para ello, se coloca una placa de rayos X
sobre el gel durante un cierto tiempo y despus se revela. Las protenas radiactivas se detectan
mediante la aparicin de manchas oscuras en la placa de rayos X. 3. Inmunotransferencia. Las
protenas pueden transferirse desde el gel a una membrana de nitrocelulosa. Esta membrana se
incuba con un anticuerpo que reconoce las protenas que pueden estar presentes en las muestras
tisulares.

Figura 1-23. Tcnica de inmunocitoqumica directa. 1) Molcula de

inmunoglobulina (Ig). 2) Produccin de anticuerpos policlonales.
La protena X de un ratn se inyecta en un animal de otra especie,
por ejemplo, en un conejo. El conejo elabora Ig frente a la protena
X. 3) Marcaje del anticuerpo. Las Ig del conejo se acoplan a un
marcador. 4) Reaccin de inmunocitoqumica. Las Ig marcadas
reconocen las diferentes porciones de la protena X presentes en
un corte histolgico y se unen a stas; esta unin se puede detectar
mediante el microscopio.
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Figura 1-24. Tcnica de inmunocitoqumica indirecta. 1) Produccin de un anticuerpo policlonal primario. La protena X de un
ratn se inyecta en un animal de otra especie, por ejemplo, en
un conejo. El conejo elabora diversas Ig contra la protena X. 2)
Produccin de un anticuerpo secundario. La Ig de otro conejo
(normal y no inmunizado) se asla e inyecta en un animal de una
tercera especie, por ejemplo, una cabra. Se producen Ig de cabra
contra Ig de conejo. Las Ig de la cabra se purican y se acoplan a
un marcador. 3) Primera etapa de la reaccin inmunocitoqumica.
Las Ig del conejo reconocen diversas porciones de la protena X
y se unen a stas. 4) Segunda etapa de la reaccin de inmunocitoqumica. Las Ig de cabra marcadas reconocen las Ig de conejo
y se unen a ellas, lo que indica la presencia de la protena X.

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Figura 1-25. Microfotografa de una clula decidual de ratn cultivada in vitro. La protena desmina, que constituye lamentos intermedios que forman parte del citoesqueleto, se detecta mediante una tcnica de inmunouorescencia (inmunocitoqumica) indirecta.
La mayor parte del citoplasma est ocupada por una rejilla de lamentos intermedios. El ncleo (N) aparece en azul. Gran aumento.
(Cortesa de F. G. Costa y P. A. Abrahamsohn.)

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Figura 1-26. Microfotografa de un corte de intestino delgado en el

que se ha aplicado un anticuerpo contra la enzima lisozima para
la demostracin de la presencia de lisosomas en los macrfagos
y en las clulas de Paneth. La coloracin marrn es el resultado
de la reaccin que tiene lugar para demostrar la enzima peroxidasa, que es el marcador acoplado al anticuerpo secundario. Los
ncleos aparecen teidos con hematoxilina (tincin de contraste).
Aumento mediano.
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Figura 1-27. El antgeno carcinoembrionario es una protena presente en diversos tumores malignos, principalmente mamarios
e intestinales. Esta microfotografa es una demostracin inmunocitoqumica de la presencia del antgeno carcinoembrionario
en un corte histolgico correspondiente a un adenocarcinoma
del intestino grueso. El anticuerpo est marcado con peroxidasa,
que aparece con una coloracin marrn. Tincin de contraste con
hematoxilina. Aumento mediano.
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Figura 1-28. Corte histolgico correspondiente a una clula acinar pancretica incubada con un anticuerpo frente a la amilasa e incubada de nuevo inmediatamente despus con la protena A marcada con partculas de oro. La protena A tiene una gran anidad por
las molculas del anticuerpo. Las partculas de oro aparecen en forma de pequeos puntos negros sobre los grnulos de secrecin
maduros y sobre los grnulos inmaduros en fase de formacin en el complejo de Golgi. Electromicrografa. Gran aumento. (Cortesa

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Figura 1-29. Corte histolgico correspondiente a un tumor epitelial

benigno (condiloma) estudiado mediante hibridacin in situ. Las
zonas de coloracin marrn se localizan en las reas donde existe
ADN del virus del papiloma humano tipo 2 (HPVII). Tincin de
contraste con hematoxilina. Aumento mediano. (Cortesa de J. E.
Levi.)
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Figura 1-30. Forma que adoptan diferentes estructuras tridimensionales cuando se seccionan en cortes finos. A) Diferentes
secciones en una esfera hueca y en un tubo hueco. B) Un corte a
lo largo de un nico tubo enrollado se puede observar como si
fueran cortes de varios tubos. C) Los cortes efectuados a travs
de una esfera slida y a travs de un cilindro slido pueden ser
semejantes.

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