05 AlfredoCastro

Sitio Argentino de Produccin Animal
SEMEN SEXADO
EL FUTURO HECHO
REALIDAD
Alfredo Castro
Navasota, TX
1 de 47
APLICACION COMERCIAL DEL SEMEN

SEXADO
ESPECIES:
- Bovinos
- Porcinos
- Equinos
- Exticos
TECNOLOGIAS:
- Inseminacin Artificial
- Transferencia Embriones
- Fertilizacin In Vitro
- Semen Revertido
2 de 47
ESPERMA X
ESPERMA Y
29
Diferencias en
contenido ADN
Cromosomas
Bovino = 3.8%
29
Cromosomas
Ovino = 4.1%
Monos = 4.2%
Equinos = 4.0%
Humanos = 2.8%
3 de 47
Diferencia en el contenido de ADN

entre las diferentes razas
4 de 47
MoFlo SX
5 de 47
MOFLO SX - PARTS
laser
hydraulics
optics
software
eletronics
6 de 47
MOFLO SX
DROPLET FORMATION
X Y
SEXED SEMEN
SAMPLE
7 de 47
Como Funciona?
Cromosoma X + 3.8 % ADN
8 de 47
Metodologa Actual de
Seleccin de Esperma 2006
9 de 47
PROCESO DE SEPARACION
Forward Fluorescence
Photodiode DNA Content
Nozzle
Laser beam
Drop Delay
Side
Fluorescence
Orientation
Objective
Pulse of
Charge
Applied
Last Attached Drop
Charged
Deflection
Plates
+
+
+
+
Waste Catcher
Sort Receptacle
10 de 47
Separacin por Carga Elctrica
11 de 47
203MB700
Just A Dream 95
12 de 47
Anlisis de
pureza
13 de 47
Control de Calidad
Volumen
de 6 - 7 ml.
Concentracin
mnima de 1.1
billones de clulas
por ml.
Motilidad mnima de
70%
14 de 47
Control de Calidad
Morfolgico
< 15% Problemas
primarios cabezas
< 15% Problemas
secundarios colas
< 25 - 30% Problemas
Morfolgicos totales
15 de 47
Desventajas
Se recomienda utilizarlo en Novillas
Debe ser utilizado por quienes tengan
un buen programa de IA instalado
El rebao debe tener muy buenos
controles sanitarios
programas nutricionales
programas de seleccin
16 de 47
BENEFICIOS
El valor gentico del hato ganadero
crecer mas rpidamente al poder
seleccionar las hembras de
reemplazo de un mayor numero de
hembras producidas.
Incrementa la bioseguridad al
disminuir la entrada de animales de
otros rebaos.
Disminuye problemas de parto
17 de 47
BENEFICIOS
El productor podr escoger si desea producir
hembras o machos.
Incrementa la especializacin de los
productores al orientar la produccin a
mercados especficos.
Ventajas de mercadeo por diferenciacin de
productos.
18 de 47
Recomendaciones
19 de 47
20 de 47
Resultados de Campo
21 de 47
50-55%
Semen Sexado y
efectos del usuario
14
40-50%
12
10
POR QUE SON ESTOS

MAS EFICIENTES??
8
6
4
55-60% 60-65% >65%

< 40%
2
0
<40%
40-50%
50-55%
55-60%
60-65%
CONCEPCIONES EN FINCAS DE
CALIFORNIA USA
22 de 47
>65%
Number of
HEARDS
MANEJO HACE
LA DIFERENCIA!!!!!
Resultados de campo IATF (sincronizado)

Porcentaje de preez (%)
60
50
40
55.1
48.4
46
P+
30
20
95
AI
46.4
54
P+
37.4
98
AI
37
P+
45
P+
CONCEPTION RATE
97
AI
99
AI
10
0
54H
60H
54H
CONVENTIONAL
60H
SEXED
Rev Bras Reprod Anim, Belo Horizonte, v.31, n.3 p.374-381, jul./set. 2007
Baruselli et al. Smen sexado: inseminao artificial e transferncia de
embries.
Nelore cows (Bos indicus)
2.1 millions sexed semen straws
23 de 47
Resultados de campo IATF (sincronizado)

Porcentaje de preez (%)
60
50
40
51.8
41.8
100 P+
193 AI
82 P+
196 AI
30
CONV.
SEXED
20
10
0
CONCEPTION RATE
Rev Bras Reprod Anim, Belo Horizonte, v.31, n.3 p.374-381, jul./set. 2007
Baruselli et al. Smen sexado: inseminao artificial e transferncia de
embries.
Nelore cows (Bos indicus)
2.1 millions sexed semen straws
24 de 47
25
SEXED ULTRA
NUEVA TECNOLOGIA
25 de 47
26
La causa de la disminuicion de la capacidad funccional

del semem sexado es multifactorial
Alta dilucion (up to 5000)
Impacto del flujo en el medio de
Colorante nuclear y incubacion
coleccion (80-90km/h)
Centrifugacion post separacion
Congelacion y descongelacion
post-separacion
Fuerzas mecanicas (pression)

Exposicion al Laser UV y carga
eletrica
26 de 47
27
La disminucion de la capacidad funcional del esperma

sexado es multifactorial
Biggest impact is sorting process itself
DNA fragmentation accelerated in sorted-bull sperm
Seidel and Garner (2002) Reproduction 124, 733-743.
Gosalvez et al. (2011) Therio 75, 206-211.
27 de 47
El desafio
Mejorar las tecnicas de separacion Nuevo
hardware y software.
Mejorar el proceso bioquimico involucrado en el
proceso de separacion espermatico
Identificar la causa primaria de la
reduccion de fertilidad
28 de 47
Tasa de Concepcion de Esperma Control Conv. y de

Esperma Encapsulado inseminado en novillas
cruzadas en tiempos variando de (12h a 60h)
despues de remocion del CIDR
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Pregnancy rate (%)

Control sperm
Oestrous
Pregnancy rate (%)

Encapsulated sperm
Pro-oestrous
12
24
36
48
Horas despues de remocion del CIDR
McMillan and Vishwanath 1994
29 de 47
60
Observacion:
La heterogenicidad de la poblacion de
celulas espermaticas es alterada durante
el proceso de sexaje
El esperma sexado es fertil por un tiempo
mas corto y requiere optimizacion en una
ventana corta requiriendo optimizacion
del tiempo de la inseminacion.
30 de 47
Algunos cambios recientes en el processo de

separacion del semen sexado
Bull stud
at
Location
Ejaculate
HOLD
1720C
Stain
Sort
Cool and
Concentrate
STANDARDIZATION
Temperature
Concentration
pH
Oxidative state
Freeze
PostThaw
QC
STABILIZATION
Temperature
Concentration
pH
Oxidative state
- Un Sistema que mantenga la temperatura de forma consistente por todo el processo.

- Un Sistema que mantenga constantes el pH y la concentracion del ejaculado a partir
de la disluicion y del resfriamiento
- Un sistema que reduzca el danio oxidativo durante todo el processo
- Un Sistema de buffer que estabilize y mantenga el pH durante todo el processo de
separacion del semen .
El conjunto de estos processos se llamo de SexedUltra

31 de 47
El metodo SexedULTRA mejora caracteristicas In

vitro del esperma comparado con el metodo XY
90
**
**
80
70
% of sperm
60
**
50
40
**
30
20
10
0
0hr
3hr
Motility
0hr
3hr
Prog Motility
3hr
PIA
Rojo XY method, Negro SexedULTRA method

** significantly different to XY method n = 12, P < 0.01
32 de 47
Investigaciones comparando el SexedUltra

con semen sexado congelado Select Sires
Process method
Number of
inseminations
Scanned pregnancy
rate
XY
3384
41.6%
SexedULTRA
3546
46.1%*
* Process method differs P < 0.01
33 de 47
Investigaciones a campo comparando el

SexedULTRA con el Nuevo Sexed Ultra
Tratamiento
No. de inseminaciones
prenhes (%)
New SexedULTRA
3189
52.9*
SexedULTRA
2833
50.4
*Significantl treatment effect P < 0.05

Significant bull effect P < 0.01
Significant farm effect P< 0.01
34 de 47
Conception Rates (%)
60
55,6
51,8
50
40
45,5
37,7
30
20
10
234
0
12 to 16
16 to 20
20 to 24
24 to 30
Interval between Heat and AI

Figure 1 -Timing of insemination using sexed semen on the pregnancy outcomes
(retrospective analysis; n = 638 heifers.
La parte de imagen con el identificador de relacin rId18 no se encontr en el archivo.
35 de 47
Conception Rate (%)
70
60
50
P = 0.51
49,5
45,1
44
40
30
20
234
10
0
Single Dose
Double Dose
Double Dose 12 h apart
Figure 1 - Fertility in Jersey heifers after single or double insemination doses of sexed
semen..
36 de 47
P = 0.51
234
Figure 2 - Fertility in Jersey heifers according the times in breed using sexed semen.
37 de 47
Resumo de investigaciones 2013/14

13,500 IA en Irlanda - SexUltra presento 90% de
la preez del semen convencional en vacas)

12,000 IA hechas por Select Sires tasa de
preez del Sexed Ultra fue 5.1% mas alta de la
del semen sexado tradicional - (90.5% del semen
convencional)
6,000 IA hechas por Alta Genetics tasa de
preez fue 6.4% mayor que del semen sexado
tradicional - (93% del convencional)
3,200 IA con Sexed Ultra en Neo Zelanda fue
94.5% de la del semen sexado.
38 de 47
El processo de separacion progresso en lo

ultimos anos
1990-1995
Velocidad de
separacion de 200
to 400 cells por
secondo, 83%
pureza y 70% de la
fertilidad del semen
convencional
1000 dosis
convencional =
10 sex
1995-2002
2002-2012
Velocidad de
separacion de
1000 celulas por
secondo, 85% de
pureza, 80% de
la fertilidad del
semen
convencional
Velocidad de
separacion de 5000
celulas por secondo,
85% de pureza, 80%
de la fertilidad del
semen convencional
1000 dosis
convencional =
50 sex
39 de 47
1000 dosis
convencional =
400 sex
En los dos ltimos aos

Mejoramiento de la tecnologia de
sorteo y tanbien en los metodos

de procesamiento del semen.
2012 - 2014
10,000-20,000 celulas por

segundo con >93% pureza
92% de la fertilidad del semen
convencional.
1000 dosis convencional =

1100 sex
40 de 47
AHORA - LA GENESIS II Y Gen III
41 de 47
NUEVO SexedUltra process Marca gran
ganancia en la fertilidad del semen sexado

congelado
La perdida de la fertilidad del semen sexado
primariamente se debia a la interaccion entre

las tecnicas de separacion de
criopreservacion
Por primera vez tuvimos una tasa de
concepcion comparable entre semen sexado

y semen convencional
42 de 47
43 de 47
44 de 47
45 de 47
LABORATORIOS ACTUALES Y
PERSPECTIVAS A FUTURO
46 de 47
47 de 47

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POR QUE SON ESTOS

55-60% 60-65% >65%

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Resultados de campo IATF (sincronizado)

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Resultados de campo IATF (sincronizado)

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La causa de la disminuicion de la capacidad funccional

Alta dilucion (up to 5000)

Impacto del flujo en el medio de

Colorante nuclear y incubacion

Fuerzas mecanicas (pression)

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La disminucion de la capacidad funcional del esperma

DNA fragmentation accelerated in sorted-bull sperm

Seidel and Garner (2002) Reproduction 124, 733-743.

Gosalvez et al. (2011) Therio 75, 206-211.

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proceso de separacion espermatico

Identificar la causa primaria de la

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Tasa de Concepcion de Esperma Control Conv. y de

Pregnancy rate (%)

Pregnancy rate (%)

Horas despues de remocion del CIDR

McMillan and Vishwanath 1994

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Algunos cambios recientes en el processo de

- Un Sistema que mantenga la temperatura de forma consistente por todo el processo.

El conjunto de estos processos se llamo de SexedUltra

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El metodo SexedULTRA mejora caracteristicas In

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