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HB A1 C
HB A1 C
Glicosilacin de las
Protenas Sanguneas
SaludAnimal
GLICOSILACINDELASPROTENASSANGUNEAS
I.Presentacin
II.HemoglobinaGlicosilada
Eldiagnsticoclsicodediabetesmellituse
insulinomaenperrossebasaenlossignosclnicosy
enlaevaluacindelasconcentracionesdeglucosa
sangunea.A pesar queel diagnstico de estas
enfermedadesesrelativamentesencillo,existenotros
procesosquepuedencursarconsignosclnicos
similares.Adems,hayquetenerencuentaquela
glucemiaencondicionesnormalessufregrandes
variacionesalolargodelda,debidoalejercicio,
estrs, alimentacin o tratamiento con algunos
frmacos.Porlotanto,unnicoanlisisdeglucosa
reflejalaconcentracindeglucemiaquetieneel
animalenelmomentoenqueseharecogidola
muestra, pudiendo no ser suficiente para el
diagnstico y sobre todo para el control del
tratamiento.
Sehadeterminadoqueenlassemanasque
siguen a un control ptimo de la diabetes esta
hemoglobina glicosilada tiende a disminuir
lentamente,mientrasqueaumentaalempeorarel
controldelaenfermedad.Enbaseaestehecho,la
determinacindelahemoglobinaglicosiladaha
llegadoaconvertirseenelestndardeoropara
Desde hace algn tiempo se sabe que lavaloracindelcontrolmetablicodurantelas
diversasprotenassanguneassoncapacesdeunirse semanas precedentes (Gabbay et al., 1977
alaglucosadandolugaralaformacindeunos Shamoon etal., 1986).
compuestosglicados(fructosaminayhemoglobina
glicosilada),cuyaevaluacinnospermiteconocer
Lahemoglobinaglicosilada(HbA1c)esel
losnivelesdeglucosaamslargoplazo(Armbruster, productodeunareaccinlenta,noenzimticae
1987). Se ha comprobado que hiperglucemias irreversibleyestdirectamenterelacionadaconlas
agudas y transitorias no producen cambios concentracionesdeglucosasanguneaylavidamedia
significativosenlasconcentracionesdefructosamina deloseritrocitos(120das).Lafraccinglicosilada
yhemoglobinaglicosiladaenperrossanos(Marca msimportantedelahemoglobinaeslahemoglobina
MC etal, 2000).
A1c(Yue etal., 1982).Encondicionesnormales,
lahemoglobinaglicosiladareflejalaglucemiamedia
quehatenidoelanimaldurantelos2a3meses
anterioresalanlisis(Dennis,1989).
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Laformacindehemoglobinaglicosilada
tienelugarmedianteunprocesodeglicosilacinno
enzimtica(Brownlee etal.,1984).Laglicosilacin
noenzimticadelasprotenasocurreenlosgrupos
aminoterminalesyenlosgrupospsilonaminode
los aminocidos intracatenarios (por ejemplo,
lisina).Seformaporlaadicindeglucosaala
protenamedianteunareaccincontinuaylentaque
esfuncindeltiempodecontactoentrelosreactantes
ydelaconcentracindeglucosaintegradadurante
dichoperiododecontacto(Calle,1992).
Lahemoglobinaglicosiladamsabundante
eslaHbAlc,queseformaporlaadicindeglucosa
alosgruposvalinaterminalesdelascadenasbeta
delahemoglobina.Enestacondensacin,elgrupo
aldehdodelaglucosaformaunauninreversible
baseSchiff,oaldimina,conelNterminaldela
cadenabeta.Acontinuacin,estasbasesdeSchiff
sufrenunareestructuracindeldobleenlacedeltipo
Amadori(enhonordelqumicoquedescribien
primerlugarestetipodereajuste),formndoseuna
cetoaminaestable.Losnivelesdeequilibriodelos
productostipoAmadoriybaseSchiffsealcanzan
ensemanasyhoras,respectivamente(Brownlee et
al.,1984).Estareaccin,comohemosdicho,no
es enzimtica y es dependiente del tiempo de
contactoydelaconcentracindeglucosaalaque
estaexpuestoeleritrocito).Comolavidamediadel
glbulorojoesde120das,laconcentracindela
cetoaminareflejarlaglucemiaalaquehaestado
expuestoduranteestetiempoyaque,sinserun
productototalmenteestable,lareversibilidadse
produceaunavelocidadtalquenoesapreciable
durantelacortavidamediadelhemate(Bunn,
1981).
incluimostambinalaaldiminalbil,lapreAlc.
Otrashemoglobinasglicosiladasdemenorentidad
incluyenalaHbAlaylaHbAlb,formadasporla
adicindefosfatosdeazcaralavalinaterminalde
lascadenasbetadelahemoglobinaAoporuna
modificacinulteriordelaHbAlc.Enconjunto,
estoscomponentesseconocencomoHbA1(que
puedeserestableototal,dependiendodesiseha
eliminadoonolafraccinlbil).Adems,existen
lashemoglobinasglicosiladasnoI7IbA1,formadas
mediantelaadicindeglucosaalaminocidoN
terminaldelacadenaalfaoalosgrupospsilonde
losresiduosdelisina.Estoscomponentespueden
interferir en ensayos qumicos, pero no en la
cromatografadeintercambiocatinicooenla
electroforesis(Calle,1992).
Determinacin
Cromatografa
Losmtodoscromatogrficossonlosms
comnmente utilizados. Incluyen grandes
macrocolumnas para determinar HbAlc y
microcolumnasque,habitualmentemidenHbAl,as
como cromatografa lquida de alta resolucin
(HPLC)quedeterminaHbAlc.Contodosestos
mtodossenecesitaeliminarpreviamentelabase
Schifflbilyaque,encasocontrario,seestar
midiendo una cantidad de preAlc que ser
proporcionalalaconcentracindeglucosaenel
momentodetomarlamuestradesangre(Calle,
1992).
Hayquetenerencuentaqueestaspruebas
pueden estar interferidas por una serie de
circunstancias:enlauremia(seformahemoglobina
LaHbAlcestableserefieretansloala carbamilada) y alcoholismo (se forma HbAA.
cetoamina,mientrasquecuandohablamosdetotal producida por la adicin de acetaldehdo a la
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hemoglobina)seproducecoelucinconlaHbAla+b,
mientrasqueenelembarazo,talasemiayotras
hemoglobinopatasseformahemoglobinafetal,que
coeluye con la HbAlc. Esto puede producir
determinaciones de hemoglobina glicosilada
falsamenteelevadas.Porelcontrario,encasosde
hemoglobinasqueemigranlentamente(comoenla
anemiadeclulasfalciformesHbSyHbC),aunque
se glucosiden no son medidas por tcnicas
cromatogrficas,dandovaloresfalsamentebajos.
Tambinlaaspirinayplasmaslechosospueden
interferirenlatcnica(Calle,1992).
Electrofor sis
Estemtodoincluyeenfoqueisoelctricoen
gelesdepoliacrilamida(daampliaseparacinde
loscomponentesdelahemoglobina)yelectroforesis
engelagar(midesloHbAlyrequierepersonal
especializadoyundensitmetroexacto).Tambin
requierenseparacinpreviadelafraccinlbily,a
pesardesuprecisin,noseempleanmuchoporlo
complicadosqueson.
Qumicos
Estosmtodoscomprendenlastcnicas
colorimtricas,fluoromtricasydecromatografade
afinidad.Todassonespecficasparalacetoamina
estable,noprecisandosepararanteslafraccinlbil.
Midenlahemoglobinaglicosiladatotal,incluyendo
losresiduosglicoenlosgrupospsilonaminoyen
losaminoterminalesdelascadenasalfaybeta.
Nosontcnicascaras,perosdifcilesde
estandarizar,relativamentelargasyquepuedendar
valoresespreamenteelevadosporformacinde
novo deHbAlcduranteelensayo.Porelcontrario,
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acumulndoseenelcolgenoyotrasprotenas
tisularesestablesalolargodelosaosdeevolucin
deladiabetes,demodoquesuconcentracinno
guardacorrelacinconlapresencianilaseveridad
delascomplicacionesdeladiabetes(Vishwanath
etal.,1986).Anas,estetemaescontrovertidoy
sehanpublicadodatoscontradictorios(Ezcurraet
al.,1990).Pareceserquelosresponsablesnoseran
estosproductosdeglicosilacinprecocesperse
sinootrosqueseformanmslentamente.Enefecto,
losproductosdelosquesehahabladoalcanzanun
equilibriotrasvariassemanasynoseproducems
acumulacinposteriormente.Perohayreacciones
deAmadorisubsiguientesquedanlugarlentamente
aproductosfinalesdeglucosilacinavanzados,que
no estn en equilibrio y que se acumulan
indefinidamenteenmolculasdevidamslarga,
producindosedeestemodounnexodeuninentre
lahiperglucemiacrnica(y,portanto,lascifrasde
hemoglobinaglicosiladaelevadas)ylosprocesos
patofisiolgicosqueconducirnalascomplicaciones
tardas de la diabetes (Brownlee et al., 1984
SteffesyMauer,1991).
sostenanlocontrario,perostosadolecandeuna
seleccindesujetosinadecuada(obesos,sometidos
aestrscrnicooconunadietaconuncontenido
enhidratosdecarbonoincorrecto).Larsen etal.
(1990)comprobaronqueelhechodeconocerel
valordelahemoglobinaglicosiladasetraducaen
uncontrolmetablicosignificativamentemejor,con
unmenornmerodehospitalizacionesporhipoo
hiperglucemia, cuando se comparaba con los
resultadosobtenidosengruposenlosquenose
dabaaconocerestedato.
Sinembargo,lahemoglobinaglicosiladano
estilparaeldiagnsticodeladiabetes,porsu
menor sensibilidad y por la ausencia de
estandarizacin.Asimismo,enpacientesdiabticos
tipo2muyestableslautilidaddisminuye,porexistir
endichospacientesbuenacorrelacinentrecontrol
metablico global y glucemias basales. (Calle,
1992).
FrecuenciadelaDeterminacin
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secorrelacionaconlaglucemiaenayunasenese alternativoalclculodelaprotenaglicosilada.La
momento, lo que no sucede con el estable denominacinensesequvoca,yaqueparece
(Compagnucci etal.,1981).
implicar incorrectamente que el monosacrido
fructosadesempeaunpapelesencialenlareaccin
Si se trata de la HbAlc total (lbil ms (Calle,1992).
estable)puedenproducirsecambiosdel12%tras
aumentosodisminucionesagudasdelascifrasde
A pesar que la fructosamina refleja la
glucemia(Compagnucci etal.,1981Johnson et glucosilacintotaldelasprotenassricas,el90%
al.,1983).
desuvalorcorrespondealaalbminaglicosilada
(Baker etal., 1985).Lafructosaminamidetambin
III.Fructosamina
unsustratonoidentificado,apartedelasprotenas
sricas glicosiladas (Schleicher et al. , 1988).
Lafructosaminaesunaprotenaglicosilada Aunquesehapropuestoajustarlosresultadosdela
queseproducecontinuamenteenelcuerpoproducto fructosaminaalcontenidodealbminaoprotenas
deunareaccinnoenzimticaeirreversibleentrela totalesensuero(McCance etal.,1987),estono
glucosa y el grupo amino de las protenas parecesernecesarioenpacientesquenopadezcan
plasmticas. La concentracin plasmtica de enfermedad aguda o nefropata severa, ya que
fructosaminadependeprincipalmentedelosniveles aumentaloscostosenreactivos,equipoytcnica
deglucosaydelavidamediadelasprotenas. sinaportarunbeneficioclnicamenteapreciable
(ReuschyHaberer,2001).Lavidamediadeesta (Howey etal.,1989BrownyGrunberger,1991).
protenaglicosiladaenperrosygatosesdeunaa
dossemanas(Kaneko etal.,1992Jensen,1995
Sehadichoquelaalbminaolasprotenas
ReuschyHaberer,2001).SegnLosteyMarca glicosiladascorrelacionanmejorquelafructosamina
(2001),lafructosamina,alserunreflejodelos conlaHbAlc,loqueseexplicaporque,comohemos
nivelesplasmticosdeglucosaeneltiempo,esde dicho, la fructosamina mide, adems de la
utilidadalmomentodediagnosticarycontrolaral glucosilacindelasprotenassricas,unsustrato
pacientediabtico.
noidentificado,introduciendounfactordeerror
potencial(Schleicher eta.,1988Winocar etal.,
Johnson, el ao 1982, ide un mtodo 1989).Perootrosestudiosnoencuentranestos
simple,rpido,baratoyprecisoparalamedicin inconvenientesalafructosamina,contandostacon
deprotenasplasmticasglicosiladas(Johnson et la ventaja adicional de consistir en un ensayo
al.,1983)que,ligeramentemodificadoporBaker automatizado,conunautilidadclnicasimilaralade
(Baker et al, 1985), se sigue utilizando en la la hemoglobina o la albmina glicosiladas y
actualidad.Estemtodoseconocecomoeldela considerablementemseconmicoyrpidoquelos
fructosaminaysebasaenlacapacidaddelresiduo anteriores(Winocour etal., 1989SobelyAbbassi,
cetoamina,enpHalcalino,parareducirlassalesde 1991).
tetrazlium(nitroazultetrazliumoNBT).La
pruebadelafructosaminanomidenadanuevosino
Adems,apesardedetectarcambiosenel
que apenas representa un enfoque analtico control glucmico a ms corto plazo que la
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Diabetesinestable.
Nodependedelpaciente,delahoradeldao
Evaluacin de cambios en los regmenes de
delascomidas.
tratamiento.
Sirve como control de calidad de las
Enelembarazo,dondeelcontrolmetablicoes
determinacionesdeglucemia,detectandodatos
especialmenteestrictoyserealizanajustescon
fraudulentos o errneos e indicando la
periodicidadmuypequea.Hayqueteneren
necesidadderevisarelprogramadetratamiento
cuentalainfluenciadelahemodilucinquecon
y educacin del propietario de la mascota
frecuenciasepresentaenlasgestantes(humanos).
diabtica
En trastornos hematolgicos como
hemoglobinopatasoanemias.
Desventajas
Enlainsuficienciarenallafructosaminasufre
muchos menos cambios que la hemoglobina Documentansielcontrolmetablicoesbueno
glicosilada.
omalo,peronodicenquhayquehacerpara
Encasosdeetilismo(humanos).
mejorarlo.
Cifras buenas pueden ocultar oscilaciones
Entrelosdefectosdelafructosaminahayquedecir
inaceptablesy,especialmente,hipoglucemias
queadolecedeestandarizacin(Maugendre etal.,
asintomticas.
1990).Comosehavenidodiciendodelahemoglobina Tienenpocosignificadoparalospacientes.
glicosilada,tambinenlafructosamina,comodeotras Losdasinmediatosalatomadelamuestra
protenassricasglicosiladas,tienenmspesolos
influyenmsenelvalortotalquelapartealcuota
ltimos das, especialmente si se ha producido
quelescorrespondera(sobretodoporloque
hiperglucemia(AlgraveyCockrill,1988Winocour
respectaalahiperglucemia).
etal.,1989).Elusoconjuntodelafructosaminayde Requierenunatecnologaavanzadaycostosa
lahemoglobinaglicosiladapermitedetectaraalgunos
ypersonalespecializado.Esteinconvenientese
pacientes manipuladores, que intentan mejorar
minimizaenelcasodelafructosamina.
notablementesucontroljustoantesdeacudirarevisin
(en este caso, veriamos una fructosamina
Comoyahemoscomentado,elusotanto
desproporcionadamente buena con respecto a la delahemoglobinaglicosiladacomodelasprotenas
hemoglobinaglicosilada).
sricas glicosiladas o de la fruct osamina
(especialmente de esta ltima, por razones de
IV.Ventajasydesventajasdeladeterminacin viabilidadeconmica,sencillez,precisinyrapidez,
delasprotenasglicosiladas
an a costa de cierta menor sensibilidad) se
enriqueceporreportarinformacionesdistintasy
Ventajas
complementarias.Leutenegger(1991)haideadouna
frmulaquerelacionalafructosaminaylaHbAlc:
Conunsolotestabarcamosunperiodode
variassemanas.
R=[fructosamina(micromol/l)x2.2]/HbAlc(%)
Esobjetivo.
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Lonormalesqueestecocienteseaiguala
V.LiteraturaCitada
100. Por encima revelara una descompensacin
recientedelaenfermedad,mientrasquepordebajo 1. AlgraveJ, CockrillBL.1988. Fructosamine
indicaraqueseestproduciendounamejora.Hay
orglycatedhaemoglobinasameasureofdiabetic
quesealarquecifrassuperioresa150oinferioresa
control?ArchDisChid63:41822.
60 hacen pensar en interferencias y no son 2. ArmbrusterDA.1987. Fructosamine:structure,
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2163.
Sihubieraqueelegirentreambosmtodosese
escogeralahemoglobinaglicosilada,sinembargo,la
adicindeladeterminacindelafructosaminaslo
ocasionaunincrementodel10al15%delcostodela
hemoglobinaglicosilada(AlgraveyCockrill,1988),
porloqueseraunahorronojustificadoentrminos
de costo/beneficio. El binomio hemoglobina
glicosiladafructosaminacomplementara,asuvez,la
informacinsuministradaporelautocontroldela
glucemia.Todoello,enconjunto,contribuyeyesparte
indispensableenelempeodelograrunaoptimizacin
delcontrolmetablicoenladiabetes.(Calle,1992).
Diversosautoreshanestudiadolosnivelesde
fructosaminayhemoglobinaglicosiladaenperros
diabticos.Todoselloscoincidenenlaimportanciade
la determinacin de ambos compuestos para el
diagnsticoycontroldeltratamientoenanimalescon
diabetesmellitus.
Como conclusin, podemos decir que el
anlisisdefructosaminayhemoglobinaglicosiladaen
perros es de gran utilidad en el diagnstico y
seguimientodeltratamientoenperroscondiabetes
mellitusoinsulinomasibienesimportanteconocerel
historialclnico,ascomoelperfilhematolgicoy
bioqumicodelanimal.Laeleccindeanalizarla
fructosaminaolahemoglobinaglicosiladaestaren
funcindelascaractersticasyposibilidades analticas
dellaboratorio,ascomodelnmerodemuestrasa
analizar.
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linkageofthecarbohydrateinhemoglobinAlc.
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