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Medios de Cultivos
Medios de Cultivos
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar al ttulo de
Microbiloga Industrial
APROBADO
Jurado
APROBADO
AGRADECIMIENTOS
TABLA DE CONTENIDO
Pag.
1. INTRODUCCIN
2. MARCO TERICO
2.1.1 Validacin
2.1.5.1 Especificidad
10
2.1.5.3 Linealidad
10
2.1.5.4 Precisin
10
2.1.5.5 Repetibilidad
10
2.1.5.6 Reproducibilidad
10
2.1.5.7 Robustez
11
2.1.5.8 Selectividad
11
2.1.5.9 Sensibilidad
11
11
11
14
16
17
18
18
18
20
22
4. OBJETIVOS
24
24
24
5. MATERIALES Y METODOS
25
26
26
26
5.1.3 Control de pH
27
27
30
30
30
31
32
32
33
33
34
34
34
6.1.4 Control de pH
41
42
42
43
47
47
50
50
53
56
56
57
57
57
59
59
60
60
62
63
63
65
65
66
68
68
68
69
69
70
70
70
70
72
7. CONCLUSIONES
75
8. RECOMENDACIONES
77
9. REFERENCIAS
78
10. ANEXOS
81
LISTA DE TABLAS.
Pag.
Tabla 1. Mtodo ecomtrico de Medio cromognico
36
38
41
46
47
47
48
48
48
Tabla 10. Resultado Recuento en placa profunda Coliformes Totales para una
muestra de ensalada ensayo de reproducibilidad 1
49
50
50
51
Tabla 14. Resultado Recuento en placa profunda Coliformes Totales para una
muestra de ensalada ensayo de reproducibilidad 2
52
53
53
53
10
54
54
55
56
56
58
59
59
59
61
61
61
Tabla 30. Resultados NMP Coliformes Totales para una muestra de ensalada
ensayo de repetibilidad
62
63
Tabla 32. Resultados NMP Coliformes Totales para una muestra de ensalada
ensayo de reproducibilidad 1
64
Tabla 33. Resultado NMP Coliformes Totales para una muestra de ensalada
Ensayo de reproducibilidad 2
64
66
Tabla 35. Resultados NMP Coliformes Totales para una muestra de arroz,
ensayo de repetibilidad
66
Tabla 36. Resultados NMP Coliformes Totales para una muestra de arroz,
ensayo de reproducibilidad 1
67
11
Tabla 37. Resultado NMP Coliformes Totales para una muestra de arroz,
Ensayo de reproducibilidad 2
68
68
69
70
70
Tabla 42. Resultado NMP Coliformes Termotolerantes para una muestra de ensalada 71
Tabla 43. Anlisis de varianza Descriptivos Prueba de reproducibilidad
2 Nmero Ms probable de Coliformes termotolerantes en ensalada
71
71
12
LISTA DE FIGURAS
Pag.
Figura 1. Mtodo ecomtrico para Medio cromognico de Coliformes
Totales y termotolerantes de Oxoid CM0956
28
36
36
37
39
39
40
40
46
46
49
51
52
55
59
60
62
63
65
65
65
67
69
70
72
13
LISTA DE ANEXOS.
Pag.
Anexo 1. Fichas tcnicas y certificados de anlisis medios de cultivo utilizados
80
14
85
RESUMEN
evidencia que pruebe que el mtodo va a cumplir las funciones para el cual
fue creado. Por su parte la validacin secundaria busca que dichas
condiciones iniciales obtenidas con la validacin inicial puedan ser
desarrolladas por el laboratorio en el que se vaya a desarrollar la tcnica de
igual forma, garantizando la confiabilidad de los resultados que arrojen dicho
mtodos.
15
16
1. INTRODUCCIN
microbiolgico para
17
18
2. MARCO TERICO
contacto con el producto, as como las materias primas a utilizar, los sitios de
almacenamiento de estas, entre otros (Decreto 3075, 1997).
La presencia de microorganismos en la mayora de los casos, est
relacionada con los niveles de calidad que el producto pueda tener. Esto
depender del tipo de microorganismo presente ya que alguno de estos son
aceptados
19
de
aseguramiento
de
que
un
proceso
especfico
producir
* Calificacin de la instalacin:
La calificacin de la instalacin se deber realizar en caso de Instalaciones,
sistemas y equipos nuevos o modificados.
La calificacin de la instalacin incluir, entre otras cosas, lo siguiente:
20
21
(b) Ensayos que incluyan una situacin o un conjunto de ellas que abarquen
los lmites mximos y mnimos de funcionamiento (Comisin europea, 2001).
2.1.2 Validacin Primaria:
La validacin primaria es un proceso exploratorio que tiene la meta de
establecer los lmites operacionales y caractersticas de desempeo de un
mtodo nuevo, modificado o caracterizado en forma inadecuada. Debe dar
origen a especificaciones numricas y descriptivas para el desempeo e
incluir una descripcin detallada y precisa del objeto de inters.
Caractersticamente, la validacin primaria procede mediante el uso de
esquemas de ensayo especialmente diseados.
Los laboratorios que desarrollan un mtodo en casa o una variante de una
norma existente debe realizar los pasos de la validacin primaria (GTC 84,
2003).
2.1.3 Validacin secundaria:
Demostracin por experimento que un mtodo establecido funciona de
cuerdo con las especificaciones en las manos del usuario. Suele llamarse
Verificacin y es la confirmacin, mediante el aporte de pruebas objetivas, de
que se han cumplido los requisitos establecidos (ISO 9000:2000).
La validacin secundaria tiene lugar cuando un laboratorio procede a
implementar un mtodo desarrollado en otra parte. Se centra en la reunin
de evidencia acerca de que el laboratorio est en capacidad de cumplir las
especificaciones establecidas en la validacin primaria.
Normalmente, la validacin secundaria emplea formas seleccionadas y
simplificadas
22
23
24
Especificidad:
inequvocamente
un
Capacidad
de
analito/parmetro
un
en
mtodo
de
determinar
presencia
de
los
otros
25
26
27
La
relacin
entre
un
indicador,
su
naturaleza
28
29
30
31
32
33
34
Agar Chromocult
Agar Colistant
Agar medio cromognico, etc.
Siembra:
Sembrar por duplicado 1 ml de la muestra lquida o 1 ml de la dilucin madre
en placas de petri estriles.
Repetir esta operacin con cada una de las diluciones decimales preparadas
Verter 15 ml de agar VRBL a 45 C +/- 2
Mezclar y dejar solidificar
Preparar de la misma manera una placa testigo, para controlar la esterilidad
del medio, cubrirla con 4 ml del mismo medio a 45 C +/- 2
Dejar solidificar e incubar a 30 C +/- 1 durante 24 a 48 horas.
Recuento:
Contar las colonias de coliformes (de dimetro mayor o igual de 0.5 mm, de
color rojo violeta y a veces rodeada de un halo de precipitacin) en las placas
que contengan 150 colonias caractersticas o 30 a 300 colonias (Allaert,
2002).
35
termotolerantes:
Medio de cultivo:
Caldo de triptona laurl sulfato
Caldo lactosado con bilis y verde brillante
36
Siembra:
Sembrar 1 ml de la muestra lquida de dilucin 10-1 en tres tubos de caldo.
Repetir esta operacin con diluciones 10-2 y 10-3.
Incubar a 30 C +/- 1 durante 48 horas.
Confirmacin:
Retener los tubos que presentan formacin de gas y turbidez en el medio.
A partir de cada tubo con gas, sembrar con asa en VGBL
Incubar a 30 C +/- 1 durante 24 horas
Se considera la reaccin positiva si se presenta desprendimiento de gas.
Confirmacin:
A partir de cada tubo con formacin de gas, sembrar con asa en caldo EC y
en agua de triptona.
Incubar a 45 C +/- 5 durante 48 horas.
Recuento:
Aadir 0.5 ml de reactivo de kovacs a los tubos que contienen agua de
triptona.
Mezclar y examinar al cabo de 1 minuto
Una coloracin roja en la fase alcohlica indica reaccin positiva.
La formacin de gas en la campana de durham indica reaccin positiva
(caldo EC) (Allaert, 2002).
37
38
por su
39
4. OBJETIVOS
4.1 Objetivo General:
40
5. MATERIALES Y METODOS
en Ensalada y Arroz
Cocido:
41
Evaluacin de la repetibilidad:
Evaluacin de Reproducibilidad:
42
salina
se
lleg
una
43
Microorganismo blanco:
E. col
Microorganismo interferente:
Pseudomonas aeruginosa
Medio de control:
Temperatura de incubacin:
35 C +/- 2
Tiempo:
48 horas
44
Prueba
Interferente
Control
Medio Cromognico
E. coli
Medio Cromognico
P. aeruginosa
TSA
P. aeruginosa
a partir de esta
45
Microorganismo blanco:
E. coli
Microorganismo interferente:
S. aureus
Temperatura de incubacin:
35 C +/- 2
Tiempo:
48 horas
46
de
Coliformes
Totales
- Luego de realizar las diluciones (10-1, 10-2 y 10-3 para ensalada) y (10-1y 10-2
para arroz cocido), se tom 1 ml de cada dilucin y se llev a cajas de petri
estriles, realizando este procedimiento por duplicado, 3 repeticiones, en
cualquiera de los 3 casos expuestos a estudiar.
47
48
49
Por esta razn, se le confiere una gran importancia y est considerado como
uno de los puntos crticos de control en el anlisis microbiolgico, del cual
depende la seguridad de los resultados que emiten los laboratorios de
ensayo.
6.1.1 Control macroscpico:
Se llev a cabo la preparacin de los respectivos medios de cultivo, en los
cuales se identificaron las principales caractersticas de los medios, se
observ el color, la transparencia, humedad, aparicin de precipitados y
presencia de gases en campana durham en el caso del caldo Laurl sulfato +
Mug, las caractersticas de los medios preparados estuvieron acorde a las
caractersticas de cada medio de cultivo (Anexo 1).
6.1.2 Control de esterilidad:
nutricionales
bsicos
para
el
crecimiento
de
los
50
de
eliminar
excluir
microorganismos
acompaantes
51
52
Cromognico
Interferente
Cromognico
Control
TSA
Microorganismo
Escherichia coli
ATCC 25922
Pseudomonas
aeruginosa ATCC
27853
Pseudomonas
aeruginosa ATCC
27853
ICA
ICR
4.8
4
0.96
53
54
Medio de
cultivo
Microorganismo
UFC / ml
Lauril Sulfato +
Escherichia coli
> 1100
Mug
ATCC 25922
Lauril Sulfato +
S. aureus ATCC
<3
Mug
25923
Caldo Tripticasa
Escherichia coli
> 1100
de soya
ATCC 25922
Caldo tripticasa
S. aureus ATCC
> 1100
de soya
25923
Tabla 2. Anlisis de Productividad y selectividad
Caldo laurl sulfato + Mug
P=
P=1
55
S=
< 3 UFC / ml
> 1100 UFC / ml
S= 0.0027
56
57
que el medio no se vea alterado y por ende pueda influir de forma negativa
en el desarrollo y /o crecimiento de los microorganismos.
Para realizar el control de pH, se procedi a preparar el medio y luego al
estar a
Hongos y levaduras
UFC / exposicin
Prueba 2 reproducibilidad
8:00 a.m.
12:00 p.m.
4:00 p.m.
Prueba
Control de calidad medios
de cultivo
Prueba 1 repetibilidad
Prueba 3 reproducibilidad
0
(analistas)
Tabla 3. Recuento control de ambientes
58
1 (L)
3 (L)
0
de
mtodos
microbiolgicos,
llevar
cabo
el
debido
59
la
selectividad,
exactitud,
precisin,
especificidad,
repetibilidad,
60
61
perfecta; por el contrario, una elevada suma de cuadrados entre las dos
mediciones revela una discordancia entre los resultados obtenidos con las
dos mediciones. Pero este tipo de anlisis estadstico no se puede realizar
en este caso porque se contempla ms de dos repeticiones y ms de dos
analistas.
C
V [ (n1+0.1*n2)*d]
62
Repeticin
1/10
1/10
Promedio
1/100
1/100
Promedio
Recuento
123
129
126
33
39
36
1472.72
15*102
125
122
124
34
31
33
1418.18
14*102
129
124
127
36
30
33
1450
15*102
NTC4092
63
UFC / g-ml
1480
1460
1440
1420
1400
0
N de repeticiones
123
129
126
33
39
36
1472
125
122
124
34
31
33
1418
129
124
127
36
30
33
1450
DS
Segn
CV NTC4092
15*102
14*102
15*102
64
N
Repetic
in
1,00
2,00
3,00
Total
Media
2
2
2
6
Desviacin
tpica
126,0000
123,5000
126,5000
125,3333
Error
tpico
4,24264
2,12132
3,53553
3,01109
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Lmite
inferior
87,8814
104,4407
94,7345
122,1734
3,00000
1,50000
2,50000
1,22927
Mnimo
Lmite
superior
164,1186
142,5593
158,2655
128,4933
Mximo
123,00
122,00
124,00
122,00
129,00
125,00
129,00
129,00
Suma de
cuadrados
Intergrupos
Intragrupos
Total
Media
cuadrtica
Gl
10,333
5,167
35,000
11,667
45,333
Valor critico
para F
Sig.
,443
,678
9.55
Rep.
1,00
2,00
3,00
Total
Media
2
2
2
6
Desviacin
tpica
36,0000
32,5000
33,0000
33,8333
Error
tpico
4,24264
2,12132
4,24264
3,31160
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Lmite
Lmite
inferior
superior
3,00000
1,50000
3,00000
1,35195
-2,1186
13,4407
-5,1186
30,3580
Mnimo
74,1186
51,5593
71,1186
37,3086
33,00
31,00
30,00
30,00
Mximo
39,00
34,00
36,00
39,00
Suma de
cuadrados
Media
cuadrtica
gl
Inter-grupos
14,333
7,167
Intra-grupos
40,500
13,500
Total
54,833
,531
Sig.
,635
65
Valor crtico
para F
9.55
Tiempo
1/100
1/100
Promedio
1/1000
1/1000
Promedio
Recuento
8:00 a.m.
225
241
233
71
78
75
27954.54
28*103
8:00 a.m.
231
236
234
83
73
78
28318.18
28*103
8:00 a.m.
224
229
227
75
79
77
27590.90
28*103
12:00 p.m.
242
231
237
91
86
89
29545.45
30*103
12:00 p.m.
236
233
235
79
83
81
28727.27
29*103
12:00 p.m.
239
233
236
78
76
77
28454.54
28*103
4:00 p.m.
226
231
229
73
76
75
27545.45
28*103
4:00 p.m.
222
237
230
90
86
88
28863.63
29*103
4:00 p.m.
224
236
230
81
87
84
28545.45
29*103
4092
Tabla 10. Resultado Recuento en placa profunda Coliformes Totales para una
muestra de ensalada ensayo de reproducibilidad 1.
66
DS
CV
Segn
4092
27954
132496
364
1,3
28*10
28*10
28*10
30*10
29*10
28*10
28*10
29*10
29*10
28909
28318
322322
473041
568
688
2,0
2,4
67
Tiem
po
8:00
AM
12:00
PM
4:00
PM
Total
Desviacin
tpica
Error
tpico
Media
27954,5400
363,64000
209,94765
27051,2082
28857,8718
28909,0867
567,72716
327,77743
27498,7742
30319,3991
28318,1767
687,85137
397,13117
26609,4591
30026,8942
28393,9344
637,17550
212,39183
27904,1580
28883,7109
Mnimo
27590,9
0
28454,5
4
27545,4
5
27545,4
5
Mximo
28318,18
29545,45
28863,63
29545,45
Suma de
cuadrados
Inter-grupos
Intra-grupos
Total
1392565,59
2
1855375,37
2
3247940,96
4
Media
cuadrtica
696282,796
2,252
309229,229
gl
Sig.
,186
Valor crtico
para F
5.14
68
30000.00
RECUENTO
29500.00
29000.00
28500.00
28000.00
27500.00
8:00 AM
12:00 PM
4:00 PM
TIEMPO
Analista
1/100
1/100
Promedio
1/1000
1/1000
Promedio
Recuento
250
260
255
62
71
67
29227.27
29*103
259
261
260
63
70
67
29681.81
30*103
264
258
261
62
69
66
29681.81
30*103
247
245
246
64
69
67
28409.09
28*103
261
251
256
63
64
64
29045.45
29*103
69
4092
256
253
255
59
58
59
28454.54
28*103
240
253
247
65
68
67
28454.54
28*103
256
249
253
57
63
60
28409.09
28*103
263
250
257
60
69
65
29181.81
29*103
Tabla 14. Resultado Recuento en placa profunda Coliformes Totales para una
muestra de ensalada ensayo de reproducibilidad 2.
DS
CV
Segn
4092
29530
45913
214
0,7
29*10
250
260
255
62
71
67
29227.27
259
261
260
63
70
67
29681.81
30*10
264
258
261
62
69
66
29681.81
30*10
247
245
246
64
69
67
28409.09
28*10
261
251
256
63
64
64
29045.45
29*10
256
253
255
59
58
59
28454.54
28*10
240
253
247
65
68
67
28454.54
28*10
256
249
253
57
63
60
28409.09
28*10
263
250
257
60
69
65
29181.81
29*10
28636
28682
84022
125342
290
354
1,0
1,2
reproducibilidad del
70
N
Analis
ta
1,00
2,00
3,00
Total
Media
6
6
6
18
258,6667
252,1667
251,8333
254,2222
Desviacin
tpica
Error
tpico
4,71876
5,87934
7,67898
6,67353
Intervalo de confianza
para la media al 95%
1,92642
2,40023
3,13493
1,57297
Lmite
inferior
253,7146
245,9967
243,7747
250,9036
Mnimo
Lmite
superior
263,6187
258,3367
259,8919
257,5409
250,00
245,00
240,00
240,00
Mximo
264,00
261,00
263,00
264,00
Suma de
cuadrados
Intergrupos
Intragrupos
Total
Valor crtico
para F
Media
cuadrtica
gl
178,111
89,056
579,000
15
38,600
757,111
17
Sig.
2,307
,134
3.68
N
1,00
2,00
3,00
Total
Media
6
6
6
18
66,1667
62,8333
63,6667
64,2222
Desviacin
tpica
4,26224
3,97073
4,63321
4,29165
Error
tpico
1,74005
1,62104
1,89150
1,01155
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Lmite
Lmite
inferior
superior
61,6937
70,6396
58,6663
67,0004
58,8044
68,5289
62,0880
66,3564
Mnimo
62,00
58,00
57,00
57,00
Mximo
71,00
69,00
69,00
71,00
Suma de
cuadrados
Media
cuadrtica
gl
Inter-grupos
36,111
18,056
Intra-grupos
277,000
15
18,467
Total
313,111
17
Sig.
,978
,399
71
Valor
crtico para
F
3.68
Repeticin
1/10
1/10
Promedio
1/100
1/100
Promedio
Recuento
< 10
< 10
< 10
NTC4092
Tabla 20. Resultados recuento en placa profunda Coliformes Totales para una
muestra de arroz ensayo de repetibilidad.
72
Tiempo
1/10
1/10
Promedio
1/100
1/100
Promedio
Recuento
8:00 a.m.
< 10
8:00 a.m.
< 10
8:00 a.m.
< 10
12:00 p.m.
< 10
12:00 p.m.
< 10
12:00 p.m.
< 10
4:00 p.m.
< 10
4:00 p.m.
< 10
4:00 p.m.
< 10
4092
Tabla 21. Resultado Recuento en placa profunda Coliformes Totales para una
muestra de arroz ensayo de reproducibilidad 1.
Analista
1/10
1/10
Promedio
1/100
1/100
Promedio
Recuento
< 10
< 10
< 10
73
4092
< 10
< 10
< 10
< 10
< 10
< 10
Tabla 22. Resultado Recuento en placa profunda Coliformes Totales para una
muestra de arroz ensayo de reproducibilidad 2.
74
Repeticin
1/10
1/10
Promedio
1/100
1/100
Promedio
Recuento
< 10
< 10
< 10
NTC4092
Tabla 23. Resultados recuento en placa profunda Coliformes Termotolerantes para una
muestra de ensalada ensayo de repetibilidad.
75
Tiempo
1/10
1/10
Promedio
1/100
1/100
Promedio
Recuento
8:00 a.m.
36.36
36
8:00 a.m.
13.63
14
8:00 a.m.
< 10
12:00 p.m.
36.36
36
12:00 p.m.
13.63
14
12:00 p.m.
27.27
27
4:00 p.m.
31.81
32
4:00 p.m.
< 10
4:00 p.m.
< 10
4092
Tabla 24. Resultado Recuento en placa profunda Coliformes Termotolerantes para una
muestra de ensalada ensayo de reproducibilidad 1.
76
Tiempo
8:00 AM
12:00
PM
4:00 PM
Total
Media
Desviacin
tpica
16,6633
18,36881
25,7533
11,44065
3
9
10,6033
17,6733
18,36551
15,65272
Error
tpico
10,60524
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Lmite
Lmite
inferior
superior
Mnimo
Mximo
-28,9673
62,2940
,00
36,36
6,60526
-2,6668
54,1735
13,63
36,36
10,60333
5,21757
-35,0191
5,6416
56,2258
29,7051
,00
,00
31,81
36,36
Suma de
cuadrados
Media
cuadrtica
Gl
Inter-grupos
348,874
174,437
Intra-grupos
1611,187
268,531
Total
1960,062
Sig.
,650
,555
40.00
RECUENTO
30.00
20.00
10.00
0.00
8:00 AM
12:00 PM
4:00 PM
TIEMPO
77
Valor
crtico para
F
5.14
Analista
1/10
1/10
Promedio
1/100
1/100
Promedio
Recuento
18.18
18
13.63
14
< 10
13.63
14
13.63
14
13.63
14
22.72
23
18.18
18
< 10
4092
Tabla 27. Resultado Recuento en placa profunda Coliformes Termotolerantes para una
muestra de ensalada, ensayo de reproducibilidad 2.
78
Intervalo de confianza
para la media al 95%
N
1,00
6
6
6
18
2,00
3,00
Total
Desviacin
tpica
Media
1,1667
1,5000
1,5000
1,3889
Error
tpico
1,47196
1,04881
1,37840
1,24328
Lmite
inferior
,60093
,42817
,56273
,29304
Lmite
superior
-,3781
,3993
,0535
,7706
Mnimo
2,7114
2,6007
2,9465
2,0072
Mximo
,00
,00
,00
,00
3,00
3,00
3,00
3,00
Suma de
cuadrados
Media
cuadrtica
gl
Inter-grupos
,444
,222
Intra-grupos
25,833
15
1,722
Total
26,278
17
Valor crtico
para F
Sig.
,129
,880
3.68
Repeticin
10
-1
10
-2
10
-3
NMP
10
UFC/
79
-1
10
-2
10
-3
NMP
UFC/ml
Promedio
ml
1
240
240
240
>1100
1100
>1100
>1100
1100
>1100
NMP UFC/ml
1200
1000
800
600
400
200
0
0
REPETICION
80
10
10
10
-3
NMP
UFC/
ml
10
-1
240
240
240
2,38
>1100
1100
>1100
3,04
>1100
1100
>1100
3,04
10
-2
10
-3
NMP
UFC/ml Promedio
Repeticin
Log
2,82 0,0968
DS
CV
0,31
11
10
-2
10
-3
NMP
10
-2
10
-3
NMP
10
8: 00 a.m.
> 1100
> 1100
> 1100
8: 00 a.m.
> 1100
> 1100
> 1100
8: 00 a.m.
> 1100
> 1100
> 1100
12:00 p.m.
> 1100
> 1100
> 1100
12:00 p.m.
> 1100
> 1100
> 1100
12:00 p.m.
> 1100
> 1100
> 1100
4:00 p.m.
> 1100
> 1100
> 1100
4:00 p.m.
> 1100
> 1100
> 1100
4:00 p.m.
> 1100
> 1100
> 1100
UFC/ ml
10
-1
Tiempo
UFC/ml
Promedio
Tabla 32. Resultados NMP Coliformes Totales para una muestra de ensalada
ensayo de reproducibilidad 1.
Los resultados presentados fueron iguales en todos los casos entre las
repeticiones de cada hora y entre estas mismas por lo cual se hace
81
10
-2
10
-3
NMP
10
-2
10
-3
NMP
10
1100
1100
1100
> 1100
1100
> 1100
> 1100
460
780
460
460
460
240
460
350
240
460
350
1100
460
780
1100
1100
1100
1100
> 1100
> 1100
UFC/ ml
10
-1
Analista
UFC/ml
Promedio
Tabla 33. Resultado NMP Coliformes Totales para una muestra de ensalada
Ensayo de reproducibilidad 2.
82
-1
10
-2
10
-3
NMP
UFC/
ml
-1
NMP
UFC/ml Promedio
Log
DS
CV
1100
1100
3,04
2,99
0,005
0,07
2,34
1100
> 1100
3,04
460
780
2,89
460
460
460
2,66
240
460
350
2,54
240
460
350
2,54
1100
460
780
2,89
1100
1100
1100
3,04
1100
> 1100
> 1100
3,04
2
3
10
-3
10
-2
1100
>
1100
>
1100
10
2,99
0,005
0,07
2,34
83
10
-2
10
-3
UFC/
10
-1
10
-2
10
-3
NMP
Repeticin
10
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
ml
84
UFC/ml
Promedio
-1
10
-2
10
NMP
-3
10
-2
10
-3
NMP
10
8: 00 a.m.
<3
<3
<3
8: 00 a.m.
<3
<3
<3
8: 00 a.m.
<3
<3
<3
12:00 p.m.
<3
<3
<3
12:00 p.m.
<3
<3
<3
12:00 p.m.
<3
<3
<3
4:00 p.m.
<3
<3
<3
4:00 p.m.
<3
<3
<3
4:00 p.m.
<3
<3
<3
UFC/ ml
10
-1
Tiempo
UFC/ml
Promedio
Tabla 36. Resultados NMP Coliformes Totales para una muestra de arroz,
ensayo de reproducibilidad 1.
10
-2
10
-3
NMP
10
-2
10
-3
NMP
10
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
UFC/ ml
10
-1
Analista
UFC/ml
Tabla 37. Resultado NMP Coliformes Totales para una muestra de arroz,
Ensayo de reproducibilidad 2.
85
Promedio
10
-2
10
-3
UFC/
10
-1
10
-2
10
-3
NMP
Repeticin
10
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
ml
UFC/ml
Promedio
Tabla 38. Resultados NMP Coliformes Termotolerantes para una Muestra de ensalada,
ensayo de repetibilidad.
-1
10
-2
10
-3
NMP
10
-3
NMP
8: 00 a.m.
3.6
3.6
3.6
8: 00 a.m.
7.3
7.3
7.3
8: 00 a.m.
3.6
<3
3.3
12:00 p.m.
15
12
86
10
-2
10
UFC/ ml
10
-1
Tiempo
UFC/ml
Promedio
12:00 p.m.
7.3
7.3
7.3
12:00 p.m.
3.6
3.6
3.6
4:00 p.m.
4:00 p.m.
3.6
<3
3.3
4:00 p.m.
3.6
6.3
Tabla 39. Resultados NMP Coliformes Termotolerantes para una muestra de ensalada,
ensayo de reproducibilidad 1.
N
8 AM
12 PM
4 PM
Total
Media
3
3
3
9
4,7333
7,6333
6,2000
6,1889
Desviacin
tpica
2,22785
4,20991
2,85132
3,04649
Error
tpico
1,28625
2,43059
1,64621
1,01550
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Lmite
Lmite
inferior
superior
-,8010
-2,8247
-,8831
3,8471
Mnimo
10,2676
18,0913
13,2831
8,5306
3,30
3,60
3,30
3,30
Mximo
7,30
12,00
9,00
12,00
Suma de
cuadrados
Media
cuadrtica
gl
Inter-grupos
12,616
6,308
Intra-grupos
61,633
10,272
Total
74,249
Sig.
,614
Valor crtico
para F
,572
87
5.14
12.00
10.00
RESP
8.00
6.00
4.00
2.00
8 AM
12 PM
4 PM
TRAT
10
-2
10
NMP
-3
10
-1
10
-3
NMP
10
3.6
3.6
3.6
<3
<3
<3
15
12
15
15
15
3.6
6.3
3.6
3.6
3.6
3.6
3.6
3.6
3.6
3.6
3.6
3.6
6.3
UFC/ ml
10
-2
Analista
UFC/ml
Promedio
Tabla 42. Resultado NMP Coliformes Termotolerantes para una muestra de ensalada,
Media
Desviacin
tpica
Error
tpico
88
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Mnimo
Mximo
Lmite
inferior
1,00
2,00
3,00
Total
3
3
3
9
6,2000
8,3000
4,5000
6,3333
5,03190
5,95735
1,55885
4,30436
2,90517
3,43948
,90000
1,43479
-6,2999
-6,4989
,6276
3,0247
Lmite
superior
18,6999
23,0989
8,3724
9,6420
3,00
3,60
3,60
3,00
12,00
15,00
6,30
15,00
Suma de
cuadrados
Media
cuadrtica
gl
Inter-grupos
21,740
10,870
Intra-grupos
126,480
21,080
148,220
Total
Sig.
,516
,621
5.14
15.00
12.50
RESP
10.00
7.50
5.00
2.50
1,00
2,00
3,00
ANALISTA
89
90
7. CONCLUSIONES
- Se realiz la validacin de las tcnicas de Recuento en placa profunda y
nmero ms probable para coliformes totales y termotolerantes mediante el
anlisis de parmetros de repetibilidad y reproducibilidad de los mtodos.
de los
91
92
8. RECOMENDACIONES
- Para posteriores anlisis de coliformes totales y fecales en alimentos es
importante implementar un medio de cultivo selectivo que no genere
interferentes y dudas en la identificacin de coliformes como lo es el nuevo
medio selectivo cromognico para Coliformes totales y fecales CM1049 de
oxoid.
- Realizar otro tipo de pruebas que permitan evaluar lmites de deteccin,
incertidumbre, y otros parmetros que permitan generar mayor confiabilidad
de las tcnicas utilizadas en el laboratorio y por ende contribuyan con el
proceso de acreditacin que el laboratorio sigue.
- Mediante el desarrollo de la validacin secundaria dar confiabilidad a otro
tipo de tcnicas utilizadas a diario en el laboratorio como son: Recuento en
placa de S.aureus, Ausencia Presencia de S. aureus, recuento en placa de
B. cereus, filtracin por membrana de Mesfilos aerobios y coliformes, entre
otras.
- Llevar a cabo un procedimiento que permita evaluar continuamente los
diferentes equipos utilizados en el desarrollo de las tcnicas que se llevan
acabo en el laboratorio.
93
9. REFERENCIAS
* Allaert, C. Escola, M. 2002. Mtodos de anlisis microbiolgicos de
alimentos. Editorial Daz de Santos. S.A. Madrid Espaa.
* Comisin Europea. Direccin General de Empresa Grupo de trabajo
sobre control e inspeccin de los medicamentos. CALIFICACIN Y
VALIDACIN. Versin final del anexo 15 de la gua comunitaria de Normas
de
correcta
fabricacin.
Septiembre
2001.
En:
http://pharmacos.eudra.org/F2/eudralex/vol-4/pdfs-m/v4_an15_es.pdf
de
Farmacia.
Barcelona,
Espaa.
166
pags.
En:
http://www.tdx.cesca.es/TESIS_UB/AVAILABLE/TDX-0618102102213//TOL82A.pdf
* Gmez, M. Vsquez, M. Pea, P. 1999. Determinacin y diferenciacin de
Escherichia
col
Coliformes
Totales
usando
un
mismo
sustrato
* GTC GUA TCNICA COLOMBIANA 84. 2003. Calidad del agua. Gua
para la orientacin acerca de la validacin de mtodos de anlisis
microbiolgicos. Editado ICONTEC Instituto Colombiano de Normas Tcnicas
y Cientficas.
94
Anlisis microbiolgico de
Poltica de
en:
http://www.pda.org/pdf/Anx%2015%20PDA%20Comments%20Final.pdf
96
Introduccin
Los
laboratorios
de
anlisis
microbiolgico
deben:
- Desarrollar
procedimientos
altamente confiables.
-Control de calidad interno
del laboratorio
Control de medios de
cultivo
Equipos
Personal
Estandarizacin
Documentacin de
estos procesos
Objetivo General
Realizar la validacin secundaria de los
mtodos de Recuento en placa profunda y
nmero
ms
probable
para
la
identificacin y recuento de Coliformes
Totales y Fecales, en muestras de
ensalada y arroz cocido.
Objetivos especficos:
Evaluar la calidad de los medios de cultivo a utilizar en el
anlisis, por medio de pruebas de esterilidad, pruebas de
selectividad y productividad, control de pH, entre otros.
Verificar y calibrar los diferentes equipos a utilizar para la
realizacin de los mtodos.
Evaluar la repetibilidad de las tcnicas de Recuento en
placa profunda y nmero ms probable en muestras de
ensalada y arroz cocido mediante 3 repeticiones sucesivas
realizadas en las mismas condiciones de medicin.
Evaluar la reproducibilidad de las tcnicas de Recuento en
placa profunda y nmero ms probable en muestras de
ensalada y arroz cocido mediante 3 repeticiones sucesivas
realizadas en diferentes condiciones de medicin.
Realizar el anlisis estadstico de los resultados obtenidos
durante el estudio.
Hiptesis
Hiptesis nula 1 (Ho 1): Se presenta repetibilidad en el
mtodo de recuento en placa profunda y NMP para
coliformes totales y fecales.
Hiptesis alterna 1 (Hi1): No se presenta repetibilidad en
el mtodo de recuento en placa profunda y NMP para
coliformes totales y fecales.
Hiptesis nula 2 (Ho2): Se presenta reproducibilidad en
el mtodo de recuento en placa profunda y NMP para
coliformes totales y fecales.
Hiptesis alterna 2 (Hi2): No se presenta
reproducibilidad en el mtodo de recuento en placa y
NMP profunda para coliformes totales y fecales.
Validacin
Es un proceso que ofrece evidencia de que un
mtodo es capaz de servir para su propsito
planeado, es decir, para detectar o cuantificar un
grupo microbiano o microbio especificado con
adecuada presin y exactitud
Validacin Primaria:
La validacin primaria es un proceso exploratorio que tiene
la meta de
establecer los lmites operacionales y
caractersticas de desempeo de un mtodo nuevo,
modificado o caracterizado en forma inadecuada.
Mtodos de validacin
Validacin Prospectiva
Validacin
retrospectiva
Validacin
Concurrente
Revalidacin
Validacin Secundaria
Demostracin
por
experimento
que
un
mtodo
establecido
funciona de cuerdo con las
especificaciones
en
las
manos del usuario.
El laboratorio procede a
implementar un mtodo
desarrollado en otra parte.
Parmetros de Evaluacin
Especificidad
Exactitud o veracidad
Linealidad
Precisin
Repetibilidad
Reproducibilidad
Robustez
Selectividad
Sensibilidad
Anlisis microbiolgico de
alimentos
Es una inspeccin que
permite
valorar
la
variada
carga
microbiana, presente en
un alimento, ya sea
materia prima, producto
en proceso o producto
terminado.
el
alimento
cumpla
con
las
normas
Coliformes Totales
Indicadores de higiene en
alimentos
Ampliamente difundido en
el agua y suelo
Algunos
de
los
microorganismos de este
grupo
suelen
ser
habitantes
del tracto
intestinal
Coliformes fecales
Su presencia en alimentos
indica contaminacin de tipo
fecal.
Son un grupo reducido
dentro de los que se
encuentra
principalmente
E.coli (de origen gastro
intestinal)
En
menor
cantidad
Citrobacter
freundii,
Klebsiella pneumoniae y
Enterobacter
aerogenes
(origen
vegetativo)
generalmente.
Recuento en Placa
Se basa en colocar en un medio de cultivo adecuado un
volumen determinado de muestra. Cada una de las clulas
aisladas dar lugar, despus de la incubacin correspondiente,
a una colonia de forma que el nmero de estas nos permitir
estimar el nmero de UFC presentes en la muestra sembrada.
Control de ambientes
Control a equipos
Mtodo ecomtrico
MEDIO DE CULTIVO
Prueba ecomtrico
Medio de cultivo
Prueba
Cromognico
Interferente
Cromognico
Control
TSA
Microorganismo
Escherichia coli
ATCC 25922
Pseudomonas
aeruginosa ATCC
27853
Pseudomonas
aeruginosa ATCC
27853
ICA
ICR
4.8
4
0.96
En ensalada
Ensayo de Repetibilidad
Se gn
Re pe ticin
1/10
1/10
Promedio
1/100
1/100
Promedio
Re cue nto
123
129
126
33
39
36
1472.72
15*10
125
122
124
34
31
33
1418.18
14*10
129
124
127
36
30
33
1450
15*10
NTC4092
UFC / g-ml
1480
1460
1440
1420
1400
0
N de repeticiones
123
129
126
33
39
36
1472
125
122
124
34
31
33
1418
129
124
127
36
30
33
1450
DS
Segn
CV NTC4092
15*10
2
14*10
2
15*10
Anlisis de varianza
N
Repetic
in
1,00
2,00
3,00
Total
Media
2
2
2
6
126,0000
123,5000
126,5000
125,3333
Suma de
cuadrados
Intergrupos
Intragrupos
Total
Desviacin
tpica
4,24264
2,12132
3,53553
3,01109
Error
tpico
3,00000
1,50000
2,50000
1,22927
Media
cuadrtica
Gl
10,333
5,167
35,000
11,667
45,333
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Lmite
inferior
87,8814
104,4407
94,7345
122,1734
Lmite
superior
164,1186
142,5593
158,2655
128,4933
Sig.
,443
,678
Mnimo
123,00
122,00
124,00
122,00
Mximo
129,00
125,00
129,00
129,00
Valor critico
para F
9.55
Ensayo de reproducibilidad
Prueba de tiempo
Tiempo
1/100
1/100
Promedio
1/1000
1/1000
Promedio
Recuento
DS
CV
Segn
4092
08:00 a.m.
225
241
233
71
78
75
27954
27954
132496
364
1,3
28*103
08:00 a.m.
231
236
234
83
73
78
28318
28*103
08:00 a.m.
224
229
227
75
79
77
27590
28*103
12:00 p.m.
242
231
237
91
86
89
29545
12:00 p.m.
236
233
235
79
83
81
28727
29*103
12:00 p.m.
239
233
236
78
76
77
28454
28*103
04:00 p.m.
226
231
229
73
76
75
27545
04:00 p.m.
222
237
230
90
86
88
28863
29*103
04:00 p.m.
224
236
230
81
87
84
28545
29*103
Tiem
po
8:00
AM
12:00
PM
4:00
PM
Total
28909
28318
Media
Desviacin
tpica
Error
tpico
27954,5400
363,64000
209,94765
27051,2082
28857,8718
28909,0867
567,72716
327,77743
27498,7742
30319,3991
28318,1767
687,85137
397,13117
26609,4591
30026,8942
28393,9344
637,17550
212,39183
27904,1580
28883,7109
322322
473041
Mnimo
27590,9
0
28454,5
4
27545,4
5
27545,4
5
568
688
Mximo
28318,18
29545,45
28863,63
29545,45
2,0
2,4
30*103
28*103
Suma de
cuadrados
Intra-grupos
Total
gl
1392565,59
2
1855375,37
2
3247940,96
4
696282,796
309229,229
2,252
30000.00
29500.00
RECUENTO
Inter-grupos
Media
cuadrtica
29000.00
28500.00
28000.00
27500.00
8:00 AM
12:00 PM
TIEMPO
4:00 PM
Sig.
,186
Valor crtico
para F
5.14
Prueba de analistas
Anali
sta
1/100
1/100
Promedio
1/1000
1/1000
Promedio
Recuento
DS
CV
Segn
4092
250
260
255
62
71
67
29227.27
29530
45913
214
0,7
29*103
259
261
260
63
70
67
29681.81
30*103
264
258
261
62
69
66
29681.81
30*103
247
245
246
64
69
67
28409.09
261
251
256
63
64
64
29045.45
29*103
256
253
255
59
58
59
28454.54
28*103
240
253
247
65
68
67
28454.54
256
249
253
57
63
60
28409.09
28*103
263
250
257
60
69
65
29181.81
29*103
28636
84022
28682
125342
Media
6
6
6
18
258,6667
252,1667
251,8333
254,2222
Desviacin
tpica
4,71876
5,87934
7,67898
6,67353
Error
tpico
1,92642
2,40023
3,13493
1,57297
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Lmite
inferior
253,7146
245,9967
243,7747
250,9036
Lmite
superior
263,6187
258,3367
259,8919
257,5409
Mnimo
250,00
245,00
240,00
240,00
Mximo
264,00
261,00
263,00
264,00
290
354
1,0
1,2
28*103
28*103
Suma de
cuadrados
Intergrupos
Intragrupos
Total
Valor crtico
para F
M edia
cuadrtica
gl
178,111
89,056
579,000
15
38,600
757,111
17
Sig.
2,307
,134
3.68
N
1,00
2,00
3,00
Total
Media
6
6
6
18
Suma de
cuadrados
Desviacin
tpica
66,1667
62,8333
63,6667
64,2222
4,26224
3,97073
4,63321
4,29165
Error
tpico
1,74005
1,62104
1,89150
1,01155
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Lmite
Lmite
inferior
superior
61,6937
70,6396
58,6663
67,0004
58,8044
68,5289
62,0880
66,3564
Media
cuadrtica
gl
Inter-grupos
36,111
18,056
Intra-grupos
277,000
15
18,467
Total
313,111
17
Mnimo
Mximo
62,00
58,00
57,00
57,00
Sig.
,978
,399
71,00
69,00
69,00
71,00
Valor
crtico para
F
3.68
En arroz cocido
Ensayo de repetibilidad
Repeticin
1/10
1/10
Promedio
1/100
1/100
Promedio
Recuento
Segn NTC402
< 10
< 10
< 10
Ensayo de Reproducibilidad
Prueba de de Analistas
Prueba de tiempo
1/1
0
1/1
0
Prom
edio
1/1
00
1/1
00
Prom
edio
Recue
nto
Segn
4092
8:00
a.m.
< 10
8:00
a.m.
< 10
8:00
a.m.
< 10
12:00
p.m.
< 10
12:00
p.m.
< 10
12:00
p.m.
4:00
p.m.
< 10
4:00
p.m.
< 10
4:00
p.m.
< 10
Tiempo
Anal
ista
1/10
1/10
Prom
edio
1/100
1/100
Prom
edio
Recu
ento
Seg
n
4092
< 10
< 10
< 10
< 10
< 10
< 10
< 10
< 10
< 10
< 10
En ensalada
Ensayo de Repetibilidad
1/10
1/10
Promedio
1/100
1/100
Promedio
Recuento
Segn
NTC4092
< 10
< 10
< 10
Repeticin
Ensayo de Reproducibilidad
Prueba de tiempo
Tiempo
1/10
1/10
Promedio
1/100
1/100
Promedio
Recuento
Segn 4092
8:00 a.m.
36.36
36
8:00 a.m.
13.63
14
8:00 a.m.
< 10
12:00 p.m.
36.36
36
12:00 p.m.
13.63
14
12:00 p.m.
27.27
27
4:00 p.m.
31.81
32
4:00 p.m.
< 10
4:00 p.m.
< 10
Tiempo
8:00 AM
12:00
PM
4:00 PM
Total
Media
Desviacin
tpica
Error
tpico
16,6633
18,36881 10,60524
25,7533
11,44065
3
9
10,6033
17,6733
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Lm ite
Lm ite
inferior
superior
Mnimo
Mximo
-28,9673
62,2940
,00
36,36
6,60526
-2,6668
54,1735
13,63
36,36
18,36551 10,60333
15,65272 5,21757
-35,0191
5,6416
56,2258
29,7051
,00
,00
31,81
36,36
Sum a de
cuadrados
Media
cuadrtica
Gl
Inter-grupos
348,874
174,437
Intra-grupos
1611,187
268,531
Total
1960,062
,650
40.00
RECUENTO
30.00
20.00
10.00
0.00
8:00 AM
12:00 PM
TIEMPO
Sig.
4:00 PM
,555
Valor
crtico para
F
5.14
Prueba de analistas
Analista
1/10
1/10
Promedio
1/100
1/100
Promedio
Recuento
Segn 4092
18.18
18
13.63
14
< 10
13.63
14
13.63
14
13.63
14
22.72
23
18.18
18
< 10
Anlisis de varianza
In ter valo de co nfianz a
p ar a la m ed ia al 95%
N
1,00
Med ia
6
6
6
18
2,00
3,00
T otal
De s viacin
tp ica
1,1667
1,5000
1,5000
1,3889
1,47196
1,04881
1,37840
1,24328
Sum a de
cuadrados
Inter-grupos
Intra-grupos
Total
Er r or
tp ico
,444
25,833
26,278
Lm ite
infer ior
,60093
,42817
,56273
,29304
Media
cuadrtica
gl
2
15
17
,222
1,722
L m ite
su per ior
-,3781
,3993
,0535
,7706
2,7114
2,6007
2,9465
2,0072
Sig.
,129
,880
M nim o
,00
,00
,00
,00
Valor crtico
para F
3.68
M xim o
3,00
3,00
3,00
3,00
Nmero Ms Probable
Mtodo alterno de recuento de
clulas
viables.
Es
de
uso
fundamental en el recuento de grupos
especiales de microorganismos como
el grupo de Coliformes al igual que
microorganismos como S. aureus,
Enterococcus y Clostridium. Es un
mtodo basado en probabilidades
estadsticas
en la
clulas
9 Disponibilidad de medios de
cultivo a utilizar altamente
selectivos
permite
la
recuperacin
de
microorganismos a partir
de muestras heterogneas.
9 Bajo
riesgo
de
contaminacin,
por
hermeticidad
de
tubos
utilizados en las pruebas.
Control de ambientes
Control a equipos
Medio de
cultivo
Microorganism
o
UFC / ml
Lauril Sulfato +
Mug
Escherichia coli
ATCC 25922
> 1100
Lauril Sulfato +
Mug
S. aureus ATCC
25923
<3
Caldo Tripticasa
de soya
Escherichia coli
ATCC 25922
> 1100
Caldo tripticasa
de soya
S. aureus ATCC
25923
> 1100
(Caldo
En ensalada
Ensayo de repetibilidad
Repeticin
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/ ml
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/ml
Promedio
240
240
240
>1100
1100
>1100
>1100
1100
>1100
NMP UFC/m l
1200
1000
800
600
400
200
0
0
REPETICION
NMP
UFC/
ml
10-
10
10
-2
-3
240
>1100
>1100
10
10
10-
Repeticin
-1
-2
NMP
UFC/ml
Promedi
o
Log
DS
C
V
240
240
2,38
2,8
2
0,096
8
0,3
1
11
1100
>1100
3,04
1100
>1100
3,04
Ensayo de reproducibilidad
Prueba de tiempo
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/ml
Promedio
> 1100
> 1100
> 1100
> 1100
> 1100
> 1100
> 1100
> 1100
> 1100
> 1100
> 1100
> 1100
12:00 p.m.
> 1100
> 1100
> 1100
12:00 p.m.
> 1100
> 1100
> 1100
4:00 p.m.
> 1100
> 1100
> 1100
4:00 p.m.
> 1100
> 1100
> 1100
4:00 p.m.
> 1100
> 1100
> 1100
Tiempo
10-1
10-2
10-3
8: 00 a.m.
8: 00 a.m.
8: 00 a.m.
12:00 p.m.
NMP
UFC/
ml
Prueba de analistas
Analista
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/ ml
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/ml
Promedio
Log
DS
CV
1100
1100
1100
3,04
2,99
0,005
0,07
2,34
> 1100
1100
> 1100
3,04
> 1100
460
780
2,89
460
460
460
2,66
2,58
0,0032
0,056
2,17
240
460
350
2,54
240
460
350
2,54
1100
460
780
2,89
2,99
0,005
0,07
2,34
1100
1100
1100
3,04
1100
> 1100
> 1100
3,04
En arroz
Ensayo de repetibilidad
Repetici
n
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/
ml
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/m
l
Promedi
o
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
Ensayo de reproducibilidad
Prueba de Analistas
Prueba de tiempo
NMP
UFC
/ ml
10-1
NMP
UFC
/ml
Prom
edio
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
12:00
p.m.
<3
<3
<3
12:00
p.m.
<3
<3
<3
12:00
p.m.
<3
<3
<3
4:00
p.m.
<3
<3
<3
4:00
p.m.
<3
<3
<3
4:00
p.m.
<3
<3
<3
Tiemp
o
10-1
8: 00
a.m.
8: 00
a.m.
8: 00
a.m.
10-2
10-3
10-2
10-3
Analist
a
10-1
10-2
10-3
NM
P
UF
C/
ml
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/
ml
Prom
edio
En ensalada
Ensayo de repetibilidad
Repeticin
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/ ml
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/ml
Promedio
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
<3
Ensayo de reproducibilidad
Prueba de tiempo
Tiempo
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/ ml
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/ml
Promedio
8: 00 a.m.
3.6
3.6
3.6
8: 00 a.m.
7.3
7.3
7.3
8: 00 a.m.
3.6
<3
3.3
12:00 p.m.
15
12
12:00 p.m.
7.3
7.3
7.3
12:00 p.m.
3.6
3.6
3.6
4:00 p.m.
4:00 p.m.
3.6
<3
3.3
4:00 p.m.
3.6
6.3
Anlisis de varianza
N
8 AM
12 PM
4 PM
Total
Media
3
3
3
9
4,7333
7,6333
6,2000
6,1889
Desviacin
tpica
2,22785
4,20991
2,85132
3,04649
Error
tpico
1,28625
2,43059
1,64621
1,01550
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Lm ite
Lm ite
inferior
superior
-,8010
-2,8247
-,8831
3,8471
10,2676
18,0913
13,2831
8,5306
Mnimo
3,30
3,60
3,30
3,30
Mximo
7,30
12,00
9,00
12,00
Suma de
cuadrados
Inter-grupos
Media
cuadrtica
gl
12,616
6,308
61,633
10,272
74,249
,614
Intra-grupos
Total
12.00
10.00
RESP
8.00
6.00
4.00
2.00
8 AM
12 PM
TRAT
4 PM
Sig.
,572
5.14
Prueba de analistas
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/ml
Promedio
3.6
3.6
3.6
<3
<3
<3
15
12
15
15
15
3.6
6.3
3.6
3.6
3.6
3.6
3.6
3.6
3.6
3.6
3.6
3.6
6.3
Analista
10-1
10-2
10-3
NMP
UFC/
ml
Anlisis de varianza
N
1,00
2,00
3,00
Total
Media
3
3
3
9
6,2000
8,3000
4,5000
6,3333
Desviacin
tpica
5,03190
5,95735
1,55885
4,30436
Error
tpico
2,90517
3,43948
,90000
1,43479
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Lm ite
Lm ite
inferior
superior
-6,2999
-6,4989
,6276
3,0247
18,6999
23,0989
8,3724
9,6420
Mnimo
3,00
3,60
3,60
3,00
Mximo
12,00
15,00
6,30
15,00
Media
cuadrtica
gl
21,740
10,870
126,480
21,080
148,220
,516
Intra-grupos
Total
15.00
12.50
RESP
10.00
7.50
5.00
2.50
1,00
2,00
ANALISTA
Sig.
3,00
,621
5.14
Conclusiones
Para un laboratorio de anlisis microbiolgico, es
importante desarrollar tcnicas que generen confiabilidad
de resultados, esto es logrado a travs de la validacin
secundaria de dichos mtodos.
Para llevar a cabo un proceso de validacin secundaria, es
fundamental llevar a cabo la evaluacin de ciertos
parmetros que verifiquen la confiabilidad del mtodo
validado como lo son repetibilidad y reproducibilidad intra e
inter grupos de la tcnica.
Se encontr evidencia estadstica mediante el anlisis de
datos hallados en las respectivas pruebas, demostrando
que tanto la tcnica de Recuento en placa profunda como
de Nmero Ms Probable para anlisis de Coliformes totales
y termotolerantes son repetibles y reproducibles.
Recomendaciones
Agradecimientos
-
Al grupo de trabajo de Biotrends Laboratorios por el gran apoyo que he recibido para la
realizacin del presente trabajo.
A Fernando Murcia por su gran apoyo, conocimiento y confianza que me ha brindado y ah sido
de gran ayuda en mi camino hacia mi desarrollo profesional.
A Kirvis Torres, gracias por la tan amplia colaboracin recibida en la realizacin de este trabajo,
por sus sabios consejos y sus criticas constructivas.
A Janeth Arias y Maria Clara Mndez, por su disposin y colaboracin en la evaluacin de dicho
proyecto.
A mis papas por el apoyo que he recibido de ellos durante toda mi vida, por la dedicacin, amor y
comprensin que me han dado.