Pruebas Rpidas para la

Deteccin de Antgenos
Microbianos
Lic. TM Luis Alvarado Rios

Antgenos
Un antgeno es una molcula de
superficie celular, que puede
inducir la formacin de
anticuerpos.
Eptopo, es la zona del antgeno
donde se une el anticuerpo.
Cada eptopo est definido por
su anticuerpo, los cuales
interactan por
complementariedad espacial.
Las protenas son las
principales molculas
antignicas

Anticuerpos
Los anticuerpos son molculas
proteicas secretadas por un
tipo celular del sistema
inmune, los anticuerpos tienen
una altsima afinidad por sus
antgenos correspondientes.
Anticuerpos:
Defensa natural
Utilidad teraputica
Utilidad Diagnstica
Marcador de Infeccin o
exposicin.
Deteccin de antgenos

Diagnstico
Microbiolgico
Conjunto de procedimientos empleados para
establecer la etiologa del agente responsable de
una enfermedad infecciosa.
Diagnstico Microbiolgico Directo. Implica la
demostracin del agente, sus metabolitos o
componentes antignicos en los fluidos orgnicos.
Diagnstico Microbiolgico Indirecto. Implica la
demostracin de la huella que el agente ha dejado
en su contacto con el sistema inmune.

Mtodos en el Diagnstico
Microbiolgico
Directo:
Tinciones
Cultivos
Mtodos Inmunolgicos
Mtodos Moleculares
Indirecto
Deteccin de
Anticuerpos

Mtodos Inmunolgicos en el
Dx. Microbiolgico

Aglutinacin
Precipitacin
ELISA
Inmunofluorescencia
Inmunocromatografa-Lateral
Flow.

Pruebas Rpidas en el
Diagnstico Microbiolgico
El diagnstico microbiolgico requiere ser oportuno
y confiable.
La microbiologa convencional suele requerir un
tiempo prolongado para obtener el diagnstico.
Las pruebas inmunolgicas permiten acortar el
tiempo requerido para el diagnstico.
No recuperan el agente etiolgico, solamente
detectan su presencia.
No requieren equipos sofisticados en su
procedimiento.
Su principal desventaja la lectura subjetiva, la
disponibilidad en el mercado y el costo.

Pruebas Rpidas en el
Diagnstico Microbiolgico
Una prueba rpida ideal es aquella que brinda
resultados en corto tiempo, no requiere mayor
entrenamiento para su realizacin e interpretacin,
no requiere instrumentacin, de fcil conservacin,
de bajo costo y disponibilidad en el mercado.
Debe tener un rendimiento adecuado en cuanto a
sensibilidad y especificidad.

 Sensibilidad
Es la probabilidad de clasificar correctamente a un
individuo enfermo.
Es la probabilidad de que para un sujeto enfermo se
obtenga en la prueba un resultado positivo.
La sensibilidad es, la capacidad del test para
detectar la enfermedad.

 Especificidad
Es la probabilidad de clasificar correctamente a un
individuo sano.
Es la probabilidad de que para un sujeto sano se
obtenga un resultado negativo.
Se puede definir la especificidad como la capacidad
del test para detectar a los sujetos sanos.

Mtodos Inmunolgicos en el
Dx. Microbiolgico

Aglutinacin
Reaccin Ag-Ac donde el antgeno esta formando
parte de clulas, bacterias o se encuentra unido a
partculas inertes.
La reaccin Ag-Ac se puede detectar y cuantificar
por el aglutinado celular o bacteriano formado.
Serotipificacin bacteriana.
Ltex. Partculas de poliestireno de 0.25 0.8 m
de dimetro.
Coaglutinacin. Staphylococcus aureus COWAN
I, proteina A.
Hemaglutinacin.

Aglutinacin de Ltex
Rotavirus.
Meningitis. Antgenos bacterianos.
Antgeno capsular de Cryptococcus.

Rotavirus
Pertenece a la familia de los reovirus, se clasifican
en serogrupos de la A a la G.
Rotavirus grupo A es una de las principales causas
de diarrea infantil severa en nios de 6 a 24 meses.
Pruebas diagnsticas:
Ltex
Elisa
Inmunocromatografa

Rotavirus Ltex

Rotavirus Ltex
Test Rpido para la deteccin de rotavirus grupo A
en heces
Ac. Polivalentes de conejo contra Rotavirus Grupo
A, ligados a partculas de ltex
Sensibilidad frente a PCR 97.2%
Especificidad frente a PCR 97.1%
Periodo: Enero Marzo - Nios menores 2 aos
2006

2007

2008

12%

4%

2%

Meningitis. Antgenos
Bacterianos
Test Ltex para deteccin de polisacridos
capsulares solubles en LCR, suero y orina.
Anticuerpos policlonales de conejo y monoclonales
de ratn.
Tratamiento previo de la muestra con calor. BM
100C.
Especificidad entre 97% y 100%

Meningitis. Antgenos
Bacterianos
Deteccin de los siguientes agente etiolgicos
Haemophilus influeza b
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus grupo B
Neisseria meningitidis (A, B, C, Y, W135)
Escherichia coli K1

Meningitis. Antgenos
Bacterianos

Cryptococcus neoformans

Hongo levaduriforme capsulado

Hbitat ambiental, excretas de aves
Ingreso por vas respiratorias
Diseminacin en inmunosuprimidos
Infeccin frecuente en pacientes HIV

Antgeno de Cryptococcus
Deteccin del antgeno polisacrido capsular
glucuronoxilomanano (GXM).
Sensibilidad y especificidad 100%
Tratamiento previo de las muestras. BM 100C.
Muestras de suero tratamiento con la enzima
pronasa.
Efecto de prozona
Enero Marzo 2008
55 pruebas
6 positivos (aprox 10%)

Cryptococcus neoformans

Precipitacin
Participan Ag y Ac solubles que van a formar
inmunocomplejos que precipitan cuando estn en
proporcin equivalente.
La precipitacin es mxima donde la proporcin
entre ambos es ptima (parte central de la curva),
pero va disminuyendo a medida que predomine el
Ac o el Ag (izquierda y derecha de la curva
respectivamente)

Inmunodifusin doble
Utilizada para detectar Anticuerpos
generados en micosis invasivas
Aspergillus
Coccidioides
Histoplasma
Candida

ELISA

ELISA:
competitivo no competitivo

Indirecto
deteccin de anticuerpos

Sndwich o de Captura
deteccin de antgenos

Campylobacter
Es uno de los principales agentes causales de
diarrea en nios.
El Dx. de laboratorio se puede realizar con un frotis
coloreado.
til en pacientes que han iniciado el tratamiento
antibitico, pacientes con baja carga bacteriana.
Elisa de captura.
Anticuerpo policlonal de conejo contra antgeno especfico
de Campylobacter jejuni

Sensibilidad 100%
Especificidad 99%

Campylobacter ELISA

Clostridium difficile toxinas

AyB
Elisa de captura de antgenos de toxina de A y B de
C. difficile a partir de muestras de heces.

Imunocromatografa-Lateral Flow

Pruebas de gran desarrollo en los ltimos aos.

Posibles de implementar en estaciones de campo.
No requieren mayor entrenamiento ni equipamiento.
Resultados rpidos ( 10 60 minutos)
tiles para detectar antgenos y anticuerpos

TCNICA DE
INMUNOCROMATOGRAFA
C

ESQUEMA DE INMUNOCROMATOGRAFA
PARA DETECCIN DE ANTGENOS
Anticuerpos de detecci
deteccin
marcados con
Oro Coloidal
Ant
Antgeno en muestra

TIRA NITROCELULOSA
Anticuerpo de Captura
contra anticuerpo
de detecci
deteccin

Anticuerpo de Captura
contra ant
antgeno
espec
especfico

www.biogenix.com.co/internas/libreria/documentos/ICT.ppt

Estreptococo -hemoltico
grupo A
Los estreptococos del grupo A son la principal
causa de Faringitis bacteriana.
Un diagnstico oportuno pueden evitar las
enfermedades post estreptoccicas: fiebre
reumtica, glomerulonefritis.
Las pruebas diagnsticas:
Cultivo
Inmunocromatografa

Estreptococo -hemoltico
grupo A
Inmunoensayo, deteccin de polisacridos de grupo
A con anticuerpo policlonales de conejo.
Extraccin del antgeno: tratamiento del hisopado
con nitrito de sodio y cido actico.
Deteccin 1x105 UFC/test

Estreptococo -hemoltico
grupo A
Enero - marzo 2008
74 pruebas
7 positivos (10%)

Virus Respiratorios
Las infecciones virales son las responsables de la
mayora de infecciones respiratorias altas.
Virus de la Influenza, Adenovirus, Virus Respiratorio
Sincicial. Importantes por su patogenicidad y
capacidad de causar brotes y epidemias.
Pruebas diagnsticas.
Cultivo.
Inmunofluorescencia
Inmunocromatografa

Influenza A
Test inmunocromatogrfico, con anticuerpos
monoclonales de pollo frente a la nucleoproteina del
virus Influenza A.
Buffer de extraccin con EDTA y nitrito de sodio.
Importante. Coleccin de muestra nasofarngea
Detectabilidad 7.2 x 106 pv/mL
Sensibilidad especificidad
76.6 % 100% frente RT-PCR
96.9 % 100% frente IFI

Influenza A
Enero - marzo 2008
93 pruebas
15 positivos (16%)

Toxina A de Clostrium difficile

C. difficile es una causa importante de diarrea
asociada a antibiticos.
Puede causar una colitis pseudomembranosa.
Toxinas de C. difficile
Toxina A: Enterotoxina.
Toxina B: Citotoxina in vitro.

Pruebas Diagnsticas
Aglutinacion Ltex. Detecta antgenos de C. difficile no de
la toxina
Citotoxicidad en cultivo celular
Inmunocromatografa
Elisa

Toxina A de Clostrium difficile

Toxina A de Clostrium difficile

Lmite de deteccin:
Sensibilidad 90%
Especificidad 99%

1.38 ng/mL

Gracias por su atencin