MICROBIOLOGA CLNICA

Curso 2004 - 2005 (grupo 1)

Tema 7.- Esterilizacin, desinfeccin y asepsia. Esterilizacin, desinfeccin,

descontaminacin y antisepsis. Desinfectantes y antispticos. Evaluacin de la actividad
germicida. Desinfectantes de alta, media y baja actividad. Desinfeccin de endoscopios.
Esterilizacin por calor. Esterilizacin por xido de etileno.
1.- ESTERILIZACIN,
ANTISEPSIS.

DESINFECCIN,

DESCONTAMINACIN

En todos los ambientes abiertos y en muchos lugares del cuerpo se puede encontrar
una gran cantidad de microorganismos (principalmente bacterias y virus). Estos
microorganismos, si tienen a su disposicin nutrientes y condiciones ambientales
adecuadas pueden crecer y multiplicarse produciendo en su caso enfermedades
infecciosas.
En los ambientes naturales hay mezclas complejas de muchos tipos de
microorganismos que forman poblaciones que comparten el mismo ambiente. Con
objeto de evitar los efectos nocivos de los microorganismos, es necesario disponer de
mtodos que permitan eliminarlos de manera que podamos conseguir ambientes limpios
sin contaminacin microbiana.
Se dice que un ambiente es estril cuando se han eliminado todos los
microorganismos del mismo. La esterilidad se puede alcanzar usando procedimientos
fsicos (calor, radiaciones), qumicos o mecnicos (filtracin). Sin embargo, los
procedimientos de esterilizacin son costosos y, en ciertas ocasiones, desaconsejables.
Por ejemplo, la esterilizacin completa de ciertos alimentos no es posible sin destruir
sus caractersticas nutritivas. Por su parte, la antisepsis es la tcnica que permite
eliminar los microorganismos de la piel o de los tejidos vivos.
En la prctica es imposible afirmar la ausencia absoluta de microorganismos en una
muestra determinada. En este sentido, se considera que un producto est estril desde el
punto de vista clnico cuando existe menos de una posibilidad ente un milln (10-6) de
que existan en l microorganismos viables.
Tambin se usa el trmino desinfeccin referido a la tcnica que empleando calor o
substancias qumicas reduce la carga microbiana o elimina los microorganismos de las
superficies. Un trmino parcialmente sinnimo es el de descontaminacin que es un
poco ms general ya que en l se aplican adems del calor, otros mtodos de
eliminacin de microorganismos.
Se dice que un ambiente es asptico cuando se han eliminado todos los
microorganismos patgenos. Un ambiente asptico no tiene porqu ser estril. La
asepsia tambin se puede conseguir por procedimientos fsicos y qumicos.
LIMPIEZA
La limpieza tiene por objetivo dejar un objeto libre de contaminacin. En algunas
ocasiones es suficiente con la limpieza en el medio hospitalario; sin embargo, en otras
es necesario proceder a la desinfeccin o a la esterilizacin. Nada debe ser sometido a
procedimientos de desinfeccin o esterilizacin si no ha sido sometido anteriormente a
limpieza manual o a limpieza mecnica (con lavadoras).
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En el medio hospitalario, los principales agentes de limpieza son:

Hipoclorito sdico
Derivados fenlicos
Complejos trialdehdicos quirrgicos
Polvo abrasivo clorado
Por otra parte, la limpieza en el medio hospitalario ser diferente si se trata de:
Zonas sin contacto con enfermos
Zonas de hostelera y lavandera
Servicios y cuartos de bao
reas de hospitalizacin, consultas externas y servicios generales
reas crticas (quirrgicas, intensivos, prematuros, hemodilisis, quemados,
diagnsticas intervencionistas)
Banco de sangre, laboratorios, hospital de da, urgencias, habitaciones con
aislamiento indicado.
El personal de enfermera debe vigilar de forma personal la limpieza de su rea
asistencial.
La limpieza del material hospitalario en muchas ocasiones requiere personal
especializado adiestrado en el manejo de aquellos materiales que por ser huecos
(botellas) o tubulares con dimetro pequeo (canales de endoscopa por ejemplo)
presentan dificultades especiales.
CLASIFICACIN DE LOS MATERIALES SEGN SU USO
Los equipos que se reutilizan en los hospitales se pueden clasificar segn su
aplicacin en:

Elementos crticos que entran en contacto con el sistema vascular u otras zonas
estriles del cuerpo (catteres intravasculares)
Elemento semicrtico que entra en contacto con la mucosa (tubos endotraqueales)
Elementos no crticos que entran en contacto con la piel intacta (cua de orina)
Todos los elementos que vayan a ser reutilizados deben ser limpiados previamente.
Adems, los elementos crticos deben ser esterilizados, los semicrticos sometidos a una
desinfeccin de alto grado y los no crticos a una desinfeccin de bajo grado.
2.- DESINFECTANTES Y ANTISPTICOS
Se denominan antispticos aquellos compuestos qumicos que desarrollan su
accin letal inteaccionando de forma inespecfica con los componentes celulares de
forma que no existe una accin selectiva frente a grupos de microorganismos sino que
su accin es ms general. Los antispticos no suelen ser demasiado txicos y pueden
aplicarse sobre tejidos vivos. Esta falta de especificidad de los antispticos los
diferencia de los antibiticos cuya principal caracterstica es la selectividad.
Los desinfectantes son productos qumicos que matan los microorganismos y se
aplican sobre objetos inanimados, mientras que los antispticos, por su menor
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toxicidad, se emplean sobre tejidos vivos. Puesto que dependiendo de la forma como se
realice el tratamiento un mismo agente puede utilizarse como antisptico o como
desinfectante, se suele usar el trmino germicida para englobar ambos conceptos.
Los diferentes tipos de microorganismos o de sus formas de desarrollo (esporas vs.
clulas vegetativas) tienen diferentes grados de sensibilidad a los tratamientos fsicos o
qumicos. En muchos casos, el tratamiento con agentes desinfectantes no elimina
completamente los microorganismos presentes, sino que simplemente se reduce mucho
su nmero de forma que la accin indeseable de los microorganismos se retrasa.
Las esporas bacterianas son las formas ms resistentes a los antispticos y
desinfectantes y slo mueren al ser tratadas con agentes con alta actividad germicida. En
general las formas vegetativas de las bacterias son sensibles a todos los agentes
desinfectantes, aunque algunos grupos de microorganismos tales como las
micobacterias pueden presentar especial resistencia a los de baja actividad. Los hongos
presentan, en general, mayor resistencia que las bacterias y resisten los desinfectantes de
baja actividad. Por ltimo, los virus presentan una sensibilidad similar a la de las
bacterias, aunque es un poco ms elevada en el caso de los virus desnudos que no
presentan envueltas lipdicas.
3.- EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD GERMICIDA.
La determinacin del efecto antisptico o desinfectante de los diferentes productos
es complicada porque este efecto depende de gran nmero de factores externos
(temperatura, humedad, pH, etc.) as como de los diferentes tipos de microorganismos
que se desea eliminar o controlar. Existen protocolos que regulan cmo se debe evaluar
la eficacia de un compuesto germicida y entre ellas destaca la prueba del coeficiente
del fenol (CF) en la que se toma como referencia de desinfectante el fenol y como
referencia de microorganismos Staphylococcus aureus y Salmonella typhi.
CF = dil fenol / dil desinf

(Ecuacin 17)

donde dil fenol es el inverso de la mayor dilucin del fenol que elimina completamente
la bacteria de referencia en 10 min de tratamiento, y dil desinf es la mayor dilucin del
desinfectante que elimina el microorganismo de referencia en 10 min de tratamiento
realizado el estudio de los supervivientes tras un cultivo de 48h1. El valor de CF es
simplemente indicativo ya que se trata de una medida realizada sobre cultivos puros y
en la realidad, los germicidas se usan sobre poblaciones mixtas.
Para evaluar la accin de un germicida frente a un microorganismo en particular se
realizan test de dilucin similares a los realizados para los antibiogramas cualitativos o
cuantitativos.
En funcin de su CF, los germicidas se clasifican en de actividad alta, media o
baja. Si se desea realizar una esterilizacin se debern escoger germicidas de actividad
ms alta o a mayores concentraciones. Igual ocurre si en la muestra existen substancias
que protegen a los microorganismos de la accin de los germicidas (como ocurre en el
caso de la sangre o en las heces).
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Por ejemplo, si dil fenol es 1/90 y dil desinf es 1/450, el cf ser de 50; esto es, el desinfectante es 50
veces ms activo que el fenol.

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4.- DESINFECTANTES DE ALTA, MEDIA Y BAJA ACTIVIDAD.

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA DESINFECCIN
Los factores que afectan la eficiencia de un proceso de desinfeccin son los
siguientes: naturaleza del microorganismo, su nmero, la concentracin del germicida,.
el tiempo de actuacin, la temperatura, pH, el deterioro del producto en agua o por
almacenamiento, la inactivacin por la presencia de materia orgnica (moco, pus, heces,
agua dura, etc.), la presencia de otros compuestos que modulen la actividad del
germicida (detergentes, corcho, etc.) y las caractersticas de la superficie sobre la que se
aplica.
PRINCIPALES FAMILIAS DE AGENTES ANTISTICOS
Agentes oxidantes

Halogenados
Gas cloro, y Compuestos de cloro (500-5000 mg/l), agentes oxidante que se
usa para desinfectar el agua.
Soluciones de iodo, agente oxidante que inactiva las protenas, se usa en la piel,
jabones, etc.
La tintura de iodo es una solucin al 2% (o ms) de yoduro potsico en
agua y etanol (CF 4.0 - 5.0)
Solucin de iodo, se usa en instrumental mdico
Povidona yodada (Betadine) que es un complejo de iodo con
polivinilpirrolidona de forma que se libera el germicida lentamente, se
inactiva menos por materia orgnica y penetra mejor. Se utiliza en
desinfeccin de la piel e incluso en lavados quirgicos.
Bromo
Flor
Otros oxidantes
Permanganato potsico
Perxido de hidrgeno (agua oxigenada) en disolucin del 6 al 30% (para
esterilizacin en este caso), es una agente oxidante que se usa sobre la piel.
cido peractico
Sales del cido persulfrico

Agentes reductores

Aldehdos tales como el formaldehdo (6-8%) y el glutaraldehdo (2%) que

inactivan las protenas y se pueden usar como agentes esterilizantes.

Se suelen usar para esterilizar instrumental como soluciones acuosas.

El glutaraldehdo a pH alcalino (Cidex) permite una desinfeccin de alto

grado y se aplica al material que no puede ser sometido al autoclave. Es un
compuesto txico e irritante que hay que utilizar de acuerdo con unos
procedimientos especiales.

Alcoholes

Etanol
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Solucin de alcohol al 70% en agua (CF 0.04), disuelve los lpidos y

desnaturaliza las protenas, se usa sobre la piel.

Alcohol isoproplico

Fenol y derivados

Compuestos fenlicos (0.5-3%), agentes oxidantes que se usan para desinfectar

superficies.
El fenol fue histricamente el primer agente antisptico utilizado en clnica.
Actualmente no se emplea en clnica sino que se usan en hospitales y laboratorios
derivados fenlicos menos custicos.
Los cresoles (Lysol, CF 2.3) que tienen importancia por ser tuberculocidas y
activos durante largo tiempo; sin embargo, su olor es desagradable y pueden llegar
a ser txicos.
El hexaclorofeno (CF 5-15 para S. typhi y 15-40 para Staph. aureus) es una
agente muy activo que perdura durante largo tiempo. Se usa solo para desinfectar
departamentos infantiles despus de brotes con estafilococos. Sin embargo, puede
ser txico y por eso su uso es limitado.
Bifenoles, rompen la membrana celular y se usan en jabones y lociones.
Agentes tensoactivos

Sales de amonio cuaternario

Tensoactivos anfteros

Derivados minerales y organominerales

Dicloruro de mercurio, inactiva las protenas y se usa para desinfectar mesas,

suelos y otras superficies.
Compuestos organomercuriales, actan inhibiendo las protenas, se emplean en
uso tpico (por ejemplo, la mercromina o mercurocromo CF de 2.7 para S. typhi a 5.3
para Staph. aureus)
Sulfato de cobre, precipita las protenas y se usa como alguicida y como
antifngico.
Nitrato de plata, precipita las protenas. Se usa como solucin al 1% en ojos de
recin nacidos para evitar la ceguera producida por N. gonorrhoeae o por C.
trachomatis.
Clorhexidina

antisptico que combina la accin germicida de los compuestos yodados y la

permanencia del hexaclorofeno. Es un bactericida eficaz, aunque tiene menos eficacia
sobre micobactrias y sobre esporas.
Se usa en la desinfeccin de la piel al 5%, en la de la boca (0.5 - 0.1%) y en jabones.
N-duopropenida

compuesto formado por dos yoduros de amonio cuaternario con gran actividad y
rapidez frente a bacterias y hongos, aunque menos activo frente a micobacterias. Es de
baja toxicidad por lo que puede usarse para la esterilizacin de endoscopios.
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5.- DESINFECCIN DE ENDOSCOPIOS

La esterilizacin de endoscopios es muy importante porque pueden ser un elemento
de transmisin de procesos infecciosos tales como la hepatitis B o C, VIH o
micobacterias. El desinfectante que se emplee debe ser rpido y enrgico, capaz de
destruir las micobacterias no tuberculosas y Mycobacterium tuberculosis sin daar el
instrumento.
El desinfectante ms aconsejado es el glutaraldehdo alcalino o la N-duopropenida.

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Antispticos y Desinfectantes usados en aplicaciones relacionadas con la salud

Agente
Antispticos
Mercuriales orgnicos
Nitrato de plata

Uso en campos relacionados con la salud

Modo de accin

Piel
Ojos de los recin nacidos para evitar la
ceguera
Piel
Jabones, desodorantes y lociones corporales

Se combina con grupos SH de las protenas

Precipita protenas

Alcohol (etanol al 70% en agua)

Piel

Bifenoles (Hexaclorofeno)
Perxido de hidrgeno (solucin al 3%)

Jabones, lociones
Piel

Disolvente de lpidos y desnaturalizante de

protenas
Rompe la membrana celular
Agente oxidante

Solucin de iodo

Desinfectantes
Dicloruro mercrico
Solucin de Yodo
Gas cloro
Compuestos de cloro
Compuestos fenlicos
Detergentes catinicos (compuestos de
amonio cuaternario)
xido de etileno
Ozono

Mesas, superficie de los bancos, suelo

Instrumental metlico
Depuracin de los suministros de agua
Suministros de agua
Superficies
Instrumental mdico
Material de laboratorio sensible a la
temperatura como los plsticos
Agua de bebida

Ioda los residuos de tirosina de las protenas

Agente oxidante

Se combina con grupos SH

Ioda los residuos de tirosina
Agente oxidante
Agente oxidante
Desnaturaliza protenas
Interacciona con los fosfolpidos de la
membrana
Agente alquilante
Fuerte agente oxidante

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6.- ESTERILIZACIN POR CALOR.

Los microorganismos mueren rpidamente cuando son sometidos a temperaturas
superiores a su ptima de crecimiento. Esto permite utilizar altas temperaturas para
eliminar microorganismos por termodestruccin. Los mtodos basados en el calor son
quiz los ms utilizados para controlar el crecimiento microbiano.
La sensibilidad de los diferentes tipos de microorganismos a los tratamientos
trmicos es distinta. Las esporas y algunos virus son la formas ms termorresistentes y
las clulas vegetativas las ms sensibles. Por otro lado, los microorganismos Grampositivos tienden a ser ms resistentes que los Gram-negativos. Por consiguiente, desde
un punto de vista prctico, la esterilizacin por calor est destinada a matar las esporas
bacterianas.
El medio en el que se encuentra un microorganismo influye en su sensibilidad al
calor. Por lo general, los microorganismos son ms sensibles a las altas temperaturas
cuando se encuentran a pHs cidos, mientras que las concentraciones altas de protenas
o azcares en el medio disminuyen la efectividad del calor y protegen a las bacterias.
Las altas concentraciones de sal tienen efectos variables segn el tipo de
microorganismo
La esterilizacin por calor se puede hacer usando calor seco o calor hmedo.
ESTERILIZACIN POR CALOR SECO
Horno Pasteur: usa calor seco transmitido por el aire al objeto en esterilizacin.
En este caso, la temperatura ms usual suele ser de 160C y durante dos horas. El uso
del horno Pasteur est limitado por las caractersticas del material a esterilizar y se usa
de forma limitada para la esterilizacin de objetos metlicos y de vidrio y para algunos
productos secos que no puden mzclarse con el agua.
Flameado: tiene usos muy limitados.
ESTERILIZACIN POR CALOR HMEDO
El autoclave esteriliza usando el calor hmero transmitido por vapor de agua
sobrecalentado debido al uso de altas presiones. El efecto del vapor de agua es facilitar
la transmisin del calor al objeto en esterilizacin. El procedimiento usual es usar 121C
para lo que es necesaria una presin de 1.1 kg/cm2. En estas condiciones un tratamiento
de 15 min es suficiente para eliminar las esporas de Gram-positivos. Tambin puede
usarse un ciclo ms rpido de 134C y 3 min. En los autoclaves modernos es posible
secar el producto una vez esterilizado antes de sacarlo del autoclave.
Una versin reducida del autoclave es una olla a presin domstica que, sin
embargo, tiene el inconveniente e que no es posible secar el producto.
Para evitar que los productos esterilizados en el autoclave se humedezcan con el
vapor de agua se deben empaquetar en bolsas impermeables de papel Kraft o de
poliamida.

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Puesto que el tratamiento trmico puede alterar las caractersticas del producto
tratado, en el caso de alimentos o de productos termosensibles, se han desarrollado
diferentes tipos de tratamiento industriales entre los que destacan:
La Pasteurizacin destinada a reducir las poblaciones bacterianas. Se emplea
principalmente en el tratamiento de alimentos (por ejemplo, leche) y tiene muy poca
utilidad en clnica. La pasteurizacin de la leche se realiza a 71C durante 15 seg. y el
tratamiento UHT consiste en calentar el producto a 140-150C durante unos pocos
segundos. Este tratamiento permite un tiempo de conservacin del producto mucho ms
largo (hasta 8 semanas).
CINTICA DE TERMODESTRUCCIN: VALORES D YZ.
La muerte de microorganismos como consecuencia de un tratamiento a altas
temperaturas sigue una cintica exponencial. Si representamos la variacin del
logaritmo del nmero de clulas supervivientes a un tratamiento trmico realizado a una
temperatura dada en funcin del tiempo de tratamiento, se obtiene recta cuya pendiente
nos indica la velocidad de termodestruccin.

Se define el valor D como el tiempo necesario para que el nmero de

supervivientes caiga al 10% del valor inicial (o, lo que es lo mismo, para que el
logaritmo del nmero de supervivientes se reduzca en una unidad). Si consideramos N0
como el nmero de clulas al inicio del tratamiento y Nx el nmero de clulas
supervivientes despus de un tratamiento de t minutos a una temperatura T, el tiempo de
termodestruccin se calcula de la siguiente manera:

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La magnitud de D es tiempo (en muchos casos se usan los min; pero ciertos
tratamientos son tan efectivos que resulta ms prctico usar los s, que, por otra parte,
son unidades del SI).
El tiempo de termodestruccin (D) vara para cada temperatura (de ah el subndice
t) de forma que a mayores temperaturas el valor de D es menor, es diferente para
distintos microorganismos, distintos entornos y diferentes condiciones fisiolgicas.
Si aumentamos la temperatura de tratamiento, el valor de D disminuye de forma
logartmica. De manera anloga a como el valor D indicaba el tiempo necesario para
lograr que el nmero de supervivientes se redujera al 10% de la poblacin inicial, el
valor z indica el incremento en la temperatura (medida en nmero de grados) necesario
para que el valor D se reduzca a la dcima parte del inicial.
z = T / [log (Dt1 / Dt2)]
donde T es el incremento de temperatura, y DT1 y DT2 los valores de D a las dos
temperaturas estudiadas.

Los valores D y z varan para cada microorganismo y para cada condicin. Las
esporas, por ejemplo, tienen valores D mucho ms altos que las clulas vegetativas de
los mismos microorganismos. Cuando el valor tratamiento se realiza a 121.1C (250F)
al valor D se le denomina Dr y, por tanto, representa el tiempo necesario para lograr la
destruccin del 90% de las clulas del microorganismo tratado a esa temperatura.

7.- ESTERILIZACIN POR XIDO DE ETILENO

xido de etileno (OE), agente alquilante que se usa en la esterilizacin del material
de laboratorio, material de plstico y en general para aquellos productos que no pueden
ser esterilizados por calor.

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La esterilizacin se lleva a cabo en un esterilizador similar a un autoclave que

controla la concentracin de xido de etileno, la temperatura (60C) y la humedad
(esterilizacin en condiciones de alta humedad).
El OE puede usarse puro (la duracin del tratamiento en este caso es de 3-4 horas)
o como mezcla de OE al 10 - 20% con CO2 u otro gas reductor porque el OE es
explosivo. El tratamiento dura varias horas. Se usa tambin en disoluciones de 450-500
mg/l.
El OE es muy txico; pero se diluye rpidamente en el aire, lo que permite su
eliminacin fcil despus del tratamiento.