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Fundamentos de Bioquimica Metabolica, Amado Garrido Pertierra Jose Maria Teijon Rivera
Fundamentos de Bioquimica Metabolica, Amado Garrido Pertierra Jose Maria Teijon Rivera
FUNDAMENTOS
DE BIOQUMICA
METABLICA
FUNDAMENTOS
DE BIOQUMICA
METABLICA
COORDINACIN Y DIRECCIN CIENTFICA
Amando Garrido Pertierra
Catedrtico de Bioqumica y Biologa Molecular.
Doctor en Ciencias Qumicas y Farmacia. Universidad Complutense de Madrid. Acadmico de la Real
Academia de Doctores y de la Real Academia de
Farmacia.
AUTORES
Amando Garrido Pertierra
Catedrtico de Bioqumica y Biologa Molecular.
Doctor en Ciencias Qumicas y Farmacia. Universidad Complutense de Madrid. Acadmico de la Real
Academia de Doctores y de la Real Academia de
Farmacia.
Carmen Villaverde Gutirrez
Catedrtica de Fisiologa. Doctora en Medicina y
Ciruga. Escuela Universitaria de Ciencias de la Salud. Universidad de Granada.
M Dolores Blanco Gaitn
Profesora Titular de Universidad de Bioqumica y
Biologa Molecular. Doctora en Ciencias Biolgicas.
Universidad Complutense de Madrid.
COLABORADORES
Ramn Bordes Gonzlez
Catedrtico de Bioqumica. Doctor en Ciencias Qumicas. E.U. de Ciencias de la Salud. Universidad de
Granada.
Francisco Javier Caldern Montero
Profesor Titular de Fisiologa. Doctor en Medicina y
Ciruga. INEF. Madrid.
Fernando de Jess Franco
Profesor Titular de Farmacologa. Doctor en Farmacia. Universidad Alfonso X el Sabio. Madrid.
Rosa Olmo Lpez
Profesora de Bioqumica y Biologa Molecular. Escuela Universitaria de Enfermera y Fisioterapia.
San Juan de Dios integrada en la Universidad
Pontificia de Comillas. Doctora en Ciencias Qumicas (Bioqumica).
Pginas: 422
www.editorialtebar.com
Prlogo
La Ciencia avanza, por una parte con nuevos conceptos y
teoras y, por otra, con la invencin de nuevos mtodos e instrumentos. El afn y la curiosidad natural de los hombres por
conocer la naturaleza de los seres vivos les llev, desde los albores de su existencia, a la observacin directa de los organismos enteros y sus partes ms visibles y, en la mayora de las
ocasiones, se ayudaban de materiales que utilizaban en sus tareas domsticas como cuchillos y tijeras. Siglos despus, la invencin y el desarrollo del microscopio permiti estudiar los tejidos y establecer el hecho general de que todos los seres estn
formados por un gran nmero de unidades vivas denominadas
clulas y surgi la teora celular. Estas observaciones aunque
importantes no proporcionaron respuestas a cuestiones fundamentales como qu sustancias componen los seres vivos? y
cmo obtienen los organismos la energa y la utilizan para
manifestar las propiedades de la vida? Las respuestas a estas
preguntas se encuentran en la Bioqumica.
La Bioqumica es una ciencia que estudia los seres vivos a
nivel molecular. Uno de sus objetivos es el aislamiento de compuestos de los seres vivos y la determinacin de sus estructuras;
esto es, un tipo de microanatoma que dilucida la estructura a
la diminuta escala molecular. Por ello su desarrollo ha estado
muy condicionado a la invencin y desarrollo de nuevas tcnicas e instrumentos. stos han permitido a esta ciencia identificar las molculas que constituyen los organismos, las reacciones que transforman unas sustancias en otras y los procesos
que les permiten desarrollar las actividades vitales. De esta forma, la descripcin y el estudio de la inmensa mayora de los
procesos vitales pueden expresarse mediante conceptos, mtodos y procedimientos bioqumicos. Se ha comprobado que a
nivel molecular no hay grandes diferencias entre los organismos y ello ha dado lugar a la teora de la unidad bioqumica de
la vida. En los ltimos aos la utilizacin de refinadas tcnicas
moleculares ha permitido caracterizar la naturaleza del material
hereditario. Los estudios sobre los genomas de los organismos
han refrendado la utilizacin de molculas para describir los
procesos de la vida, su evolucin y su variedad. El conocimientos de los genes, su descripcin y, sobre todo, su comprensin
est posibilitando entender los aspectos morfolgicos, la evolucin de las especies, el comportamiento de sus productos y la
funcin y disfuncin de ellos. Adems est permitiendo controlar el desarrollo y la diferenciacin de los rganos, el metabolismo y proliferacin de las clulas y, lo que es muy importante,
descifrar la causa y el origen de muchas enfermedades.
Con la idea de facilitar la comprensin de dichos procesos y
mecanismos vitales a los estudiantes de las licenciaturas y diplomaturas de Ciencias de la Salud y, basado en la experiencia
como profesores de la materia, han surgido estos libros de Bioqumica. El primero se dedica a los aspectos estructurales y en
l se describen las sustancias, sus propiedades y las funciones
que realizan en el organismo; en el segundo se tratan los aspectos metablicos, y en l se estudian las transformaciones de las
sustancias las cuales sirven para el funcionamiento normal del
organismo. Al inicio de cada tema se incluye una pequea introduccin que fija el (o los) objetivo(s) a cumplir y, al final, un
resumen que repasa los conceptos ms importantes y un apartado dedicado a aplicaciones clnicas en el que se describen algunos casos prcticos relativos al contenido del mismo.
Los autores desean expresar su agradecimiento a todos los
que han participado en la elaboracin de la obra. Las crticas,
sugerencias y comentarios acerca de los contenidos de la misma sern bien recibidos y tenidos en cuenta en ediciones posteriores.
Queremos agradecer la magnfica labor editorial desarrollada por Beatriz Heras de Editorial Tbar, y la excelente maquetacin de Rebeca Irazbal.
ndice
Tema 1:
Metabolismo ......................................................................
Introduccin al metabolismo .................................................
Reacciones catablicas y anablicas: etapas .........................
El flujo de energa en las clulas ...........................................
La localizacin de las rutas metablicas en la clula .............
Regulacin del metabolismo .................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................
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Tema 2:
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Tema 3:
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Tema 4:
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Tema 5:
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Tema 6:
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Tema 7:
Tema 8:
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Tema 9:
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Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................
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Bibliografa ...........................................................................................
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TEMA 1
Metabolismo
En la bioqumica estructural hemos examinado las propiedades y estructura de las molculas que constituyen las clulas.
En esta parte, Bioqumica metablica, vamos a estudiar cmo
interaccionan esas molculas para originar y mantener la propiedad que denominamos vida. Para ello, las clulas realizan
un conjunto de reacciones catalizadas por enzimas que se denomina metabolismo. Estas reacciones se llevan a cabo de forma constante desde la absorcin de nutrientes, su degradacin
para obtener energa, la utilizacin de sta, la sntesis de nuevos componentes y la liberacin de productos de deshecho. Todos estos procesos los realiza la clula manteniendo un equilibrio dinmico, autorregulndose y cumpliendo con el principio
de mxima economa.
INTRODUCCIN AL METABOLISMO
El metabolismo se puede definir como el conjunto de reacciones catalizadas enzimticamente que tienen lugar en la clula viva. En l se pueden distinguir cuatro funciones especficas:
El metabolismo es el
conjunto de reacciones que tiene lugar
en las clulas vivas.
14
Estas funciones no se realizan de forma aislada o independiente sino de forma coordinada y organizada. Cada
orgnulo o subunidad celular posee funciones especficas
para establecer y mantener la vida de la clula. As, algunas
estn comprometidas en generar energa para la absorcin
de sustancias nutritivas, otras en la movilidad celular o en la
sntesis de biomolculas. En los organismos superiores, como
el hombre, existen determinadas clulas o tejidos especializados en funciones como los glbulos rojos para el transporte
de oxgeno, las clulas musculares para la locomocin, las
clulas glandulares endocrinas para la secrecin de hormonas y las clulas nerviosas (neuronas) para la coordinacin
intercelular.
Las secreciones metablicas estn controladas con precisin
por sistemas intrnsecos y extrnsecos, estrechamente interrelacionados. El estado dinmico del metabolismo y sus mecanismos reguladores son las caractersticas ms excepcionales de la
vida, por ello su comprensin es primordial en el entendimiento e interpretacin de los procesos vitales.
REACCIONES CATABLICAS Y
ANABLICAS: ETAPAS
El metabolismo tiene lugar a travs de secuencias de reacciones consecutivas en las que se transforman los intermediarios qumicos o metabolitos.
El metabolismo se divide en catabolismo y anabolismo. El
catabolismo es la fase degradativa del metabolismo en la que
los nutrientes (carbohidratos, lpidos, protenas) provenientes
del medio externo o de los depsitos de la misma clula pueden degradarse generalmente por reacciones oxidativas en productos ms sencillos como cido lctico, cido actico, amonaco, urea o CO2. El catabolismo va acompaado de liberacin
de la energa inherente en la estructura compleja de las grandes
molculas orgnicas. La energa es transformada en forma de
adenosina trifosfato (ATP).
El anabolismo es la fase constructiva o de sntesis del metabolismo. Tambin se denomina biosntesis. En el anabolismo
las pequeas molculas precursoras de las clulas se ensamblan para originar componentes celulares como polisacridos,
cidos nucleicos, protenas y lpidos. Puesto que del proceso de
biosntesis resultan molculas de mayor tamao y complejidad
estructural, requiere energa libre, la cual es proporcionada por
la hidrlisis del ATP. El catabolismo y el anabolismo tienen lugar simultneamente en la clula.
METABOLISMO
15
Figura 1.1. Las etapas del catabolismo y del anabolismo. La etapa III del
catabolismo y I del anabolismo coinciden, por ello se denomina anfiblica.
El anabolismo tambin transcurre en tres etapas. Comienza con las pequeas molculas de la etapa III del catabolismo, como son los intermediarios del ciclo de Krebs, los
cuales son aminados o transformados en aminocidos, ci-
16
El ATP es la forma
universal de transporte de la energa que
transfiere al hidrolizarse en ADP y Pi.
METABOLISMO
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18
METABOLISMO
RESUMEN
El metabolismo es el conjunto de reacciones catalizadas enzimticamente que tienen lugar en las clulas vivas.
Cumple con cuatro funciones especficas que se realizan
de forma coordinada: obtener energa qumica de los nutrientes, transformar estos en molculas sencillas, unir y
transformar estos para obtener los componentes celulares
y sintetizar y degradar las biomolculas especializadas. El
metabolismo se puede dividir en catabolismo o procesos
degradativos y anabolismo o procesos biosintticos. Tanto
el catabolismo como el anabolismo se pueden ordenar en
tres etapas que implica cada una, una serie de reacciones
enzimticas. La energa qumica que se obtiene de los nutrientes se transforma en ATP que es el compuesto portador de energa para los procesos que lo requieren: trabajo
mecnico, biosinttico y de transporte. En las clulas animales los procesos bioqumicos se localizan en diferentes
orgnulos o compartimentos, lo que facilita la regulacin
que se realiza a tres niveles; mediante las enzimas alostricas, la sntesis de enzimas y las hormonas.
APLICACIONES CLNICAS
Las clulas animales no pueden llevar a cabo un metabolismo completo como les sucede, por ejemplo, a las clulas bacterianas, debido a que a lo largo de la evolucin han perdido la
capacidad de sintetizar todos los compuestos que requieren
para la vida. Por ello dependen de otros organismos para el suministro de dichos compuestos. Pero, adems, en ocasiones las
clulas humanas sintetizan enzimas defectuosas o defectivas, o
bien producen cantidades insuficientes de una enzima que se
traduce en un suministro insuficiente de un compuesto metablico esencial. Por ello, una enfermedad metablica puede
derivar de la incorrecta expresin de una enzima.
La determinacin de la actividad de una enzima en los lquidos biolgicos o tejidos constituye un indicador valioso de
una determinada enfermedad metablica.
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Diagnstico probable
Amilasa
Enfermedad pancretica
Alanina aminotransferasa
Enfermedad cardaca
Aspartato aminotransferasa
Enfermedad cardaca
Glutamato aminotransferasa
Enfermedad cardaca
Fosfatasa cida
Carcinoma prosttico
Fosfatasa alcalina
Enfermedad sea
Creatina
Anemia hemoltica
Lactato deshidrogenasa
Enfermedad cardaca
Galactosemia
Glutatin reductasa
Anemia
Elastasa
TEMA 2
La ruta glucoltica
La ruta glucoltica. Las rutas de los tomos de carbono, la de la energa y la de los electrones. Rutas
afluentes de la glucoltica. La regulacin de la
gluclisis.
LA RUTA GLUCOLTICA
Los carbohidratos de la dieta son digeridos y absorbidos
en el intestino delgado pasando por va portal a la sangre. En
un perodo de 30-60 minutos despus de la comida se alcanza en sangre, generalmente, un nivel mximo de 130 mg/dl
(7,2 mol/L) que disminuye a las dos o dos horas y media a
70-90 mg/dl. Por la sangre la glucosa llega al hgado donde se
metaboliza ms del 60%. En condiciones normales el hgado
contiene poca glucosa libre ya que bien la convierte en glucgeno o la fosforila a glucosa 6-fosfato, que como es impermeable a la membrana plasmtica la mantiene retenida en la clula
y en el tejido muscular.
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LA RUTA GLUCOLTICA
23
'G 0c
0,4 kcal/mol
24
La fosforilacin de la fructosa 6-P es una reaccin esencialmente irreversible como corresponde al valor de 'G 0c y es
un punto clave en la ruta glucoltica. La fosfofructoquinasa es
una enzima reguladora alostrica, con un peso molecular alto
(360.000); es activada por moduladores positivos como ADP,
AMP y fructosa 2,6-bisfosfato, e inhibida por moduladores
negativos como ATP y citrato. La fructosa 1,6-bisfosfato aumenta la afinidad de la enzima por la fructosa 6-fosfato y disminuye la inhibicin por ATP; adems, su activacin es sinrgica con el AMP.
Escisin de fructosa 1,6-bisfosfato. Esta reaccin es
catalizada por la aldolasa:
aldolasa
La aldolasa rompe la
fructosa 1,6-bifosfato
en condiciones intracelulares a pesar de
su DG0' positivo en
condiciones estndar.
Aunque esta reaccin tiene un 'G 0c muy positivo en condiciones fisiolgicas, la reaccin transcurre hacia la formacin de
las triosas fosfato porque el gliceraldehdo 3-fosfato desaparece
rpidamente al seguir metabolizndose en la ruta glucoltica.
Interconversin de las triosas fosfato. Puesto que
nicamente el gliceraldehdo 3-fosfato es metabolizado en la
gluclisis toda la dihidroxiacetona fosfato se transforma en
gliceraldehdo 3-fosfato mediante la enzima triosa fosfato isomerasa:
triosa fosfato
isomerasa
gliceraldehdo 3-fosfato
deshidrogenasa
LA RUTA GLUCOLTICA
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sta es una de las reacciones ms importantes de la secuencia glucoltica puesto que se conserva la energa de oxidacin
del grupo aldehdo del gliceraldehdo 3-fosfato en la forma de
un compuesto rico en energa como es el 1,3-bisfosfoglicerato.
La funcin de NAD es la de portador de electrones o tomos
de hidrgeno. El mecanismo de accin de la enzima es bastante complejo ya que el substrato primeramente se combina con
un grupo SH del centro activo de la enzima y sta reacciona
con el NAD. El complejo acil-enzima reacciona posteriormente
con el fosfato para producir 1,3-bisfosfoglicerato. Un hecho
que apoya este mecanismo es que la enzima es inhibida por
aquellos reactivos que bloquean el grupo SH.
Transferencia del fosfato de 1,3-bisfosfoglicerato. El
1,3-bisfofoglicerato transfiere el fosfato al ADP mediante la enzima fosfoglicerato quinasa (Fig. 2.2).
fosfoglicerato
quinasa
26
7,3 kcal/mol
3-fosfoglicerato o
2-fosfoglicerato.
m
Mg
'G 0c 1,06 kcal/mol
2
2-fosfoglicerato o
fosfoenolpirato H2O
m
Mg
'G 0c 0,44 kcal/mol
2
La piruvato quinasa
cataliza la segunda
reaccin de la ruta
glucoltica que proporciona ATP.
LA RUTA GLUCOLTICA
27
piruvato NADH H o
m lactato NAD
0
'G c 6,0 kcal/mol
En el organismo humano existen al menos cinco formas diferentes de lactato deshidrogenasa o isoenzimas. El corazn, hgado y riones son especialmente abundantes en isoenzimas
del tipo H, que tienen relativamente baja afinidad por piruvato,
mientras el msculo esqueltico es rico en isoenzimas del tipo
M, que tienen gran afinidad por piruvato y tienden hacia la formacin de cido lctico.
COH
l
H 2C OH
l
o 2
HO 3C H
l
H 4C OH
l
H 5C OH
l
6
CH2OH
glucosa
(6)(3)
CH3
COH
l
l
(2) (5)
(5)(2)
H C OH
o 2 H COH
l
l
(3)(6)
(1)(4)c
CH2OPO32
COOH
(1)(4)
gliceraldehdo
3-fosfato
lactato
28
LA RUTA GLUCOLTICA
29
lactasa
fructoquinasa
UDP-galactosa o
m UDP-glucosa
glucosa 1-fosfato-uridil
transferasa
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LA REGULACIN DE LA GLUCLISIS
En la ruta glucoltica existen tres puntos importantes de control (Fig. 2.3). El primero es aquel en que la glucosa se fosforila
a glucosa 6-fosfato por ATP y la hexoquinasa. Otro importante
punto de control es la reaccin catalizada por la fosfofructoquinasa. Esta enzima reguladora es activada por AMP y ADP e inhibida por ATP y citrato. El tercer punto de regulacin es la
reaccin catalizada por la piruvato quinasa, que es activada
por fructosa 1,6-bisfosfato y AMP. Como se puede observar, las
tres enzimas de control estn reguladas por un intermediario
metablico, pero de una manera especial por la concentracin
de AMP, ADP y ATP. De una manera simplificada se puede afirmar que la relacin ADP/ATP regula el flujo metablico de la
ruta. Si esta relacin es alta porque la concentracin de ATP es
baja, la gluclisis se activa para formar ATP. Si, por el contrario,
la relacin ADP/ATP es baja, la clula inhibe la fosfofructoquinasa y se interrumpe la gluclisis para no producir ms ATP.
LA RUTA GLUCOLTICA
RESUMEN
La gluclisis es un proceso para obtener energa de la
glucosa en ausencia de oxgeno. Tiene lugar en dos etapas
y estn implicadas 11 reacciones catalizadas enzimticamente. En la primera etapa la glucosa es fosforilada por
ATP y, posteriormente, escindida en dos molculas de Dgliceraldehdo 3-fosfato. Otras hexosas, pentosas y glicerol
entran en la ruta mediante otras reacciones en esta etapa
para converger tambin en D-gliceraldehdo 3-fosfato.
En la segunda etapa el D-gliceraldehdo 3-fosfato es
oxidado por NAD para formar un compuesto rico energticamente, el 1,3-difosfoglicerato, que cede su fosfato al
ADP para obtener ATP y 3-fosfoglicerato; este compuesto
se isomeriza a 2-fosfoglicerato, el cual se deshidrata a fosfoenolpiruvato, que nuevamente dona su fosfato al ADP
para formar ATP y piruvato. El piruvato se reduce a lactato por NADH procedente de la deshidrogeneracin de la
triosa-fosfato. En la ruta glucoltica entran dos moles de
ATP en la primera etapa y se forman cuatro de ATP en la
segunda. Existen en la ruta tres puntos de regulacin, uno
en la entrada y otros dos en la ruta, los cuales sirven de reacciones limitantes de la velocidad glucoltica.
APLICACIONES CLNICAS
Diabetes mellitus y gluclisis
La insulina y el glucagn son dos hormonas esenciales en
el control homeosttico del nivel de glucosa sangunea. Normalmente despus de cada comida experimentamos un aumento de glucosa en sangre. Las clulas E de los islotes de
Langerhaus del pancreas perciben estos niveles de glucosa circulante y liberan insulina que disminuye el nivel de glucemia
principalmente estimulando el transporte activo de la glucosa a
travs de las membranas celulares de los tejidos muscular y
adiposo. Esto es as porque la insulina se fija a una protena receptora especfica de la membrana celular y facilita la entrada
de glucosa. En la enfermedad de diabetes mellitus se produce
un nivel insuficiente de insulina o una hormona defectuosa
con una afinidad disminuida por los centros receptores. Debido a que la glucosa no puede ser captada por las clulas de los
diabticos, una caracterstica de estos enfermos es que el nivel
de glucosa en sangre permanece alta y esto va acompaado
31
32
TEMA 3
El ciclo de Krebs
34
Las enzimas del ciclo de Krebs se localizan de forma ordenada en el interior de la mitocondria. La membrana mitocondrial es impermeable a los compuestos fosforilados y al acetilCoA, por lo que el piruvato de la ruta glicoltica, que se origina
en el citosol, es transportado, mediante difusin facilitada, al
interior de la mitocondria (Fig. 3.1). Posteriormente, el piruvato, a travs de una descarboxilacin oxidativa, se transforma en
acetil-CoA, segn la ecuacin global:
piruvato NAD CoA-SH o acetil-CoA
NADH H CO2
'G0c 8,0 kcal
Figura 3.1. El piruvato procedente de la gliclisis atraviesa la membrana mitocondrial para ser oxidado y descarboxilado a acetil-CoA en la matriz mitocondrial.
EL CICLO DE KREBS
Figura 3.2. Descarboxilacin oxidativa del piruvato a acetil-CoA por el complejo piruvato deshidrogenasa. Las sustancias que entran y salen del complejo
aparecen enmarcadas. Las enzimas que intervienen son: E1 piruvato deshidrogenasa, E2 dihidrolipiol transacetilasa, E3 Dihidrolipoil deshidrogenasa.
35
36
La reaccin catalizada por el complejo piruvato deshidrogenasa se encuentra en una posicin clave del metabolismo, no
slo porque sirve de conexin entre la ruta glicoltica y el ciclo
de Krebs sino porque el piruvato y el acetil-CoA son componentes de varias rutas biosintticas y degradativas (Fig. 3.3).
As, el piruvato, adems de ser el producto final de la ruta glicoltica, se forma en el catabolismo de aminocidos, en la oxidacin del lactato, y es un precursor de la sntesis de aminocidos, de la glucosa y del lactato. El acetil-CoA se forma en la degradacin de los cidos grasos y de aminocidos y es un
precursor de la sntesis de cidos grasos, cuerpos cetnicos, colesterol y otros lpidos de gran importancia biolgica.
EL CICLO DE KREBS
37
Figura 3.5. El complejo PDH est regulado de manera lenta por un sistema de
fosforilacin/desfosforilacin en el que intervienen la PDH-quinasa y la PDHfosfatasa.
EL CICLO DE KREBS:
REACCIONES Y REGULACIN
El ciclo del cido ctrico, de los cidos tricarboxlicos, del
cido tricarboxlico o, simplemente, de Krebs, en honor de su
descubridor Hans Krebs, fue la consecuencia de propuestas,
experimentos y deducciones brillantes que han marcado un
hito en la historia y el desarrollo de la Bioqumica. Krebs bas
sus estudios en los realizados previamente por Thumberg,
Szent Gyorgyi, Martius, Knoop y Ochoa y sus primeros resultados los public en 1937 en las revistas Enzymologia y Lanzet.
El carcter cclico se debe a que, despus de una serie de
reacciones, se regenera el compuesto de partida, el oxalacetato.
En cada vuelta del ciclo de Krebs una molcula de acetilo (del
acetil-CoA) de dos tomos de carbono se condensa con una
molcula de cido oxalactico de cuatro tomos de carbono
para formar cido ctrico, un compuesto de seis tomos de carbono. Este ltimo se oxida mediante una secuencia de reacciones, de tal modo que se liberan dos molculas de CO2 y se regenera una molcula de cido oxalacetato. Este compuesto
puede combinarse con otra molcula de acetilo, iniciando el ciclo otra vuelta. En cada vuelta se incorpora una molcula de
El ciclo de Krebs es
la ruta de oxidacin
de todos los combustibles metablicos en
condiciones aerbicas.
38
acetilo y se eliminan dos de CO2. Cuando el ciclo est funcionando con fines energticos, una molcula de cido oxalactico sera suficiente para lograr la oxidacin de un nmero infinito de molculas de acetilo. En estas condiciones, por cada
vuelta se liberan cuatro pares de hidrgeno (o sus electrones
equivalentes), los cuales pasarn al oxgeno molecular para obtener energa en forma de ATP.
El conjunto de reacciones del ciclo se muestra en la figura 3.6.
Del funcionamiento del ciclo de Krebs se puede destacar los
siguientes hechos:
1. La primera reaccin del ciclo es la condensacin de una
molcula de acetil-CoA con otra de cido oxalactico
por la accin cataltica de la citrato sintasa. La reaccin
Figura 3.6. Reacciones del ciclo de Krebs. Los nmeros corresponden a las siguientas enzimas: (1) Citrato
sintasa. (2) Aconitasa. (3) Aconitasa. (4) Isocitrato deshidrogenasa. (5) Complejo D-cetoglutarato deshidrogenasa. (6) D-cetoglutarato deshidrogenasa. (7) Succinil CoA sintetasa. (8) Succinato deshidrogenasa.
(9) Fumarasa. (10) Malato deshidrogenasa. Los tomos de carbono del acetil-CoA aparecen en color naranja para que pueda observarse que despus de las dos descarboxilaciones permanecen integrados en la
molcula de succinato.
EL CICLO DE KREBS
2.
3.
4.
5.
6.
39
40
REACCIONES
ANAPLERTICAS
Figura 3.7. El ciclo de Krebs y la cadena respiratoria
estn acoplados por los electrones que fluyen desde
los intermediarios del ciclo a travs de la cadena al
oxgeno molecular.
El ciclo de Krebs se
controla fundamentalmente por tres reacciones y por las
concentraciones intramitocondriales de
NAD+ y NADH.
EL CICLO DE KREBS
41
Figura 3.8. Regulacin del flujo metablico a travs del ciclo de Krebs. Las
tres enzimas alostricas estn controladas por los niveles de varios efectores positivos y negativos.
Los intermediarios
del ciclo de Krebs
que se utilizan en
otras rutas biosintticas deben reponerse
para que el flujo metablico a travs del
ciclo no se detenga.
enzima
malica
piruvato CO2 NADPH H o
m L-malato NADP
42
De estas dos reacciones anaplerticas, la que tiene ms importancia cuantitativamente es la catalizada por la piruvato
deshidrogenasa, cuya actividad aumenta con el ejercicio, el
ayuno y la diabetes. Curiosamente la actividad de la enzima
mlica se encuentra disminuida en diabetes y aumentada tras
la administracin de insulina.
RESUMEN
La reaccin catalizada por el complejo piruvato deshidrogenasa conecta las rutas glicoltica y el ciclo de Krebs,
ya que transforma el cido pirvico en acetil-Co. El complejo est formado por tres enzimas y cinco coenzimas, y
est regulado por modificacin covalente. El ciclo cumple
con dos funciones importantes:
1) Es la ruta degradativa final para la oxidacin de
molculas combustibles.
EL CICLO DE KREBS
APLICACIONES CLNICAS
Los casos clnicos derivados de una disfuncin del complejo
piruvato deshidrogenasa, ciclo de Krebs y de las reacciones
anaplerticas son consecuencia de una insuficiente actividad
enzimtica debido a una deficiencia en una coenzima o a un
defecto estructural de la protena. Entre los primeros, el caso
ms conocido es el de la deficiencia en vitamina B1, y entre los
segundos, la reducida actividad de las enzimas del complejo piruvato deshidrogenasa, de la fumarasa y de la citrato sintasa.
Deficiencia vitamnica B1
La deficiencia vitamnica B1 ocasiona una enfermedad neurolgica y cardiovascular descrita en 1630 por J. Bonitus que la
denomin beriberi (cordero), porque las personas que padecian esa enfermedad andaban como los corderos. El problema
contina siendo grave en el Extremo Oriente, donde el arroz
que es el alimento bsico, contiene niveles muy bajos de tiamina y practicamente nulos cuando el arroz se descascarilla. Los
pacientes con esta enfermedad suelen tener niveles altos de piruvato, lactato y alanina en sangre, y baja actividad de los complejos piruvato deshidrogenasa y de D-cetoglutarato deshidrogenasa.
43
44
Los sntomas de esta enfermedad se originan como consecuencia de una hipoavitaminosis B1 o tiamina. La tiamina en el
organismo se fosforila a pirofosfato de tiamina (TPP), que es
una de las coenzimas del complejo piruvato deshidrogenasa, y
del D-cetoglutarato deshidrogenasa, por eso las actividades de
estas enzimas en sangre estn disminuidas en el beriberi.
Una terapia lgica es una dieta baja en carbohidratos y la
administracin de tiamina. La administracin de TPP no es
ms eficaz que la de la tiamina, dado que la coenzima, al ser
un compuesto fosforilado, no atraviesa las membranas. En ocasiones la terapia no es tan sencilla ya que la baja actividad del
PDH puede tener un origen gentico.
Una deficiencia en piruvato carboxilasa produce tambien
un aumento de piruvato y alanina en sangre, ya que el piruvato no puede convertirse en oxalacetato, que es el aceptor de
grupos acetilo en el ciclo de Krebs.
TEMA 4
La ruta de las
pentosas fosfato
ETAPA I
La primera reaccin es la deshidrogenacin enzimtica de
la glucosa 6-fosfato por la glucosa 6-fosfato deshidrogenasa
46
En la siguiente reaccin el 6-fosfogluconato sufre una descarboxilacin oxidativa por la 6-fosfogluconato deshidrogenasa
que requiere NADP para dar ribulosa 5-fosfato y CO2:
ETAPA II
Esta etapa comprende una serie de condensaciones, isonomerizaciones y reagrupamientos catalizados enzimticamente.
47
Las reacciones de la
etapa II son todas reversibles.
48
CH2OH
l
La transcetolasa transfiere el grupo C O
de una moll
cula a otra y requiere para su actividad pirofosfato de tiamina
TPP, la coenzima que requieren los complejos enzimticos piruvato deshidrogenasa y a-cetoglutanato deshidrogenasa. La
transcetolasa cataliza dos reacciones en las que interviene la
xilulosa 5-fosfato, una es la transformacin de xilulosa 5-fosfato y ribosa 5-fosfato en sedoheptulosa 7-fosfato y gliceraldehdo 3-fosfato y la otra la transformacin de xilulasa 5-fosfato y
eritrosa 4-fosfato en fructosa 6-fosfato y gliceraldehdo 3-fosfato. La sedoheptulosa 7-fosfato es un azcar inusual de siete
tomos de carbono que tambin se encuentra en las reacciones del ciclo de Calvn en la fase de la fotosntesis que no depende de la luz.
RENDIMIENTO ENERGTICO
Para conocer el rendimiento energtico de la ruta de las
pentosas fosfato es necesario considerar tres molculas de glucosa 6-fosfato, ya que en la etapa II (Fig. 4.1) se requieren una
molcula de ribosa 5-fosfato y dos de xilulosa 5-fosfato. La ri-
Figura 4.1. La ruta de las pentosas fosfato. Obsrvese que las reacciones de la
etapa I son irreversibles y las de la II, reversibles. Este hecho permite que si la
clula requiere ribosa 5-fosfato y no NADPH se pueda obtener a travs de las
reacciones de la etapa II, mediante los intermediarios de la gluclisis.
49
50
o
3 CO2
2 fructosa 6-fosfato
1 gliceraldehdo 3-fosfato
La degradacin completa de una molcula de glucosa requiere, para entender fcilmente el proceso, considerar seis
molculas de glucosa 6-fosfato que originarn 6 CO2, esto es,
tantas molculas de anhdrido carbnico como tomos de carbono tiene la molcula de glucosa (C6H12O6):
6 glucosa 6-fosfato 12 NADP o
o 5 glucosa 6-fosfato 6 CO2 12 NADP Pi
Dos caractersticas importantes de esta ruta es que no requiere ATP una vez formada la glucosa 6-fosfato y que puede
funcionar en condiciones anaerbicas. Ello es fcil de comprender ya que el NADP se puede regenerar en procesos de
biosntesis, no requiere la cadena respiratoria, y, por tanto, la
ruta permite la produccin anaerobia de pentosas.
En condiciones aerbicas, para que el NADPH se reoxide a
NADP debe reaccionar con NAD, ya que el NADPH es impermeable a la membrana mitocondrial. La transferencia de
hidrgenos del NADPH al NAD se produce por un proceso de
transhidrogenacin. Por consiguiente, cada mol de NADPH
producira un mol de NADH y ste, en presencia de oxgeno,
3 moles de ATP. De esta forma la oxidacin completa de 1 mol
de glucosa por la ruta de las pentosas fosfato producira
12 u 3 36 ATP. A este nmero hay que descontarle un ATP
que se utilizara en la fosforilacin de la glucosa por la hexoquinasa, luego en total seran 35 ATP.
51
REGULACIN DE LA RUTA
Las reacciones de la ruta de las pentosas fosfato tienen lugar como las de la glucoltica, en el citosol, y la regulacin se
produce en la primera enzima de la misma, la glucosa 6-fosfato
deshidrogenasa. La enzima se sintetiza en gran cantidad cuando se ingieren dietas ricas en hidratos de carbono. Cuando una
persona pasa de un estado de inanicin a otro en exceso de hidratos de carbono, la glucosa 6-fosfato deshidrogenasa heptica puede aumentar ms de 10 veces la concentracin.
La regulacin de la sntesis coexiste con un control fino de
la actividad enzimtica mediante el NADPH como inhibidor
competitivo con una constante de inhibicin muy baja
(Ki 7 PM). La inhibicin es superior al 90% cuando el cociente de la concentracin NADPH/NADP es mayor de 10.
La concentracin celular de la glucosa 6-fosfato es aproximadamente 1 PM; esto limita en cierta medida la actividad de
la glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, que tiene una Km en el
rango micromolecular.
Dependiendo de las demandas celulares, una combinacin del flujo de intermediarios de las rutas glucoltica y de las
pentosas fosfato puede estar regulada para producir proporciones adecuadas de NADPH, ribosa 5-fosfato y gliceraldehdo 3-fosfato.
RESUMEN
La glucosa 6-fosfato puede ser oxidada a travs de la
ruta de las pentosas fosfato por un conjunto de enzimas
que se encuentra en el citosol de, principalmente, clulas
hepticas, glndulas mamarias, tejido adiposo y corteza
adrenal. Se distinguen dos etapas en funcin de la naturaleza de las reacciones. En la I existen dos reacciones que
requieren como aceptor electrnico NADP, que pasa a
NADPH y es el principal compuesto reductor en la sntesis
de biomolculas como cidos grasos y colesterol. La oxidacin completa de una molcula de glucosa origina
12 NADPH y 6 CO2. Aunque la ruta puede actuar en condiciones anaerbicas, cuando acta en presencia de oxgeno puede producir 35 ATP. La primera enzima de la ruta la
glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, controla el flujo a travs
de la misma; la actividad y la sntesis de la enzima se encuentran perfectamente reguladas.
52
APLICACIONES CLNICAS
Deficiencias de la glucosa 6-fosfato
deshidrogenasa
Se han identificado varios tipos de deficiencia hereditaria de
glucosa 6-fosfato, los cuales producen hipersensibilidad a ciertos frmacos, lo que conduce a una anemia hemoltica.
Aunque los primeros casos se descubrieron al tratar enfermos de paludismo con la droga antimalaria primaquina, posteriormente se han descrito acciones similares en otros frmacos.
Las clulas deficientes en glucosa 6-fosfato deshidrogenasa
tienen una baja produccin de NADPH, el cual es imprescindible para mantener el glutation en forma reducida (GSH). Este
compuesto es esencial para mantener la integridad de la membrana de los eritrocitos o glbulos rojos. Cuando el glutation no
se encuentra en forma reducida, las membranas no conservan
la estructura adecuada y pueden ser destruidas por los frmacos, y esto sucede con mayor facilidad cuando ms viejos son
los eritrocitos. Ello explica el alto porcentaje de eritrocitos jvenes circulantes concentrados en las personas con deficiencia en
glucosa 6-fosfato deshidrogenasa.
Curiosamente esta deficiencia grave en el caso de tratamiento con frmacos ofrece una ventaja a los pacientes que la
presentan y es que tienen menor probabilidad de contraer la
malaria. El parsito de la malaria, Plasmodium falciparum, requiere esencialmente para su crecimiento y desarrollo
NADPH. Las personas con deficiencia enzimtica no aportan
suficiente coenzima reducido para el desarrollo del parsito.
Esta ventaja ha provocado una seleccin natural de los deficientes en la glucosa 6-fosfato deshidrogenasa que la padecen,
ms de 400 millones de personas en el planeta, concentrandose en aquellos pases en que la malaria es una enfermedad
endmica.
TEMA 5
Gluconeognesis
Glucognesisglucogenlisis
La gluconeognesis es la biosntesis de glucosa y otros hidratos de carbono a partir de molculas precursoras sencillas.
Es uno de los procesos ms importantes de los organismos vivos ya que las clulas requieren glucosa para el normal metabolismo y algunas, como las del cerebro, de manera esencial.
La gluconeognesis difiere de la gluclisis en unas pocas reacciones.
La concentracin de glucosa en sangre debe permanecer
dentro de un intervalo adecuado y el control se consigue mediante la regulacin precisa del metabolismo del glucgeno, un
modelo de regulacin de dos rutas inversas. La diferente regulacin de las reacciones inversas conduce a la formacin de ciclos de substrato, de gran importancia biolgica en la regulacin de la velocidad del flujo metablico.
GLUCONEOGNESIS
Hemos estudiado que la conversin de glucosa 6-fosfato en
piruvato es la ruta central del catabolismo de hidratos de carbono en la mayora de los organismos, tanto en condiciones
aerbicas como anaerbicas. De manera similar, el proceso inverso, la conversin de piruvato en glucosa 6-fosfato es una
ruta esencial en la biosntesis de monosacridos y polisacridos
en todas las clulas. Esta ruta se denomina gluconeognesis
(Fig. 5.1).
Las fuentes de carbono para la gluconeognesis las constituyen varios precursores obtenidos principalmente a partir de
L-aminocidos, del cido pirvico o del cido lctico. Por ejem-
54
La gluconeognesis
es esencial para el
mantenimiento de las
concentraciones normales de glucosa en
sangre.
Formacin de fosfenolpiruvato
La primera de estas reacciones es la conversin de piruvato
en fosfenolpiruvato, la cual no puede llevarse a cabo en direccin inversa a la reaccin catalizada por la piruvato quinasa debida a un elevado valor negativo de energa libre ('G 0c
7,5 kcal/mol). En vez de esta reaccin, la fosforilacin de piruvato es conseguida a travs de una secuencia de reacciones
que requiere la cooperacin de enzimas del citoplasma y de la
mitocondria. La primera reaccin de esta secuencia est catalizada por la piruvato carboxilasa mitocondrial:
GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS
piruvato carboxilasa
55
56
El oxalacetato formado es reducido a malato en la mitocondria a expensas de NADH y mediante la malato deshidrogenasa:
malato deshidrogenasa
oxalacetato NADH H o
m malato NAD
malato NAD o
m oxalacetato NADH H
14,6 kcal/mol
La segunda reaccin en que las rutas glucoltica y gluconeognica divergen es la fosforilacin de la fructosa 6-fosfato por
la fosfofructoquinasa. Esta reaccin irreversible es sobrepasada
gluconeognicamente por la fructosa 1,6-bisfosfatasa
fructosa 1,6bifosfatasa
GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS
57
glucosa 6-fosfatasa
58
dieta rica en grasas y pobre en glucosa, sta tiene que ser sintetizada a partir de lactato o glicerol (procedente de la hidrlisis
de trigliceridos), o de los aminocidos glucognicos. Todos estos procesos son estimulados por el cortisol.
Por otra parte, en la ruta gluconeognica existen reacciones
del xido-reduccin que son controladas por la disponibilidad
celular de coenzimas oxidadas y reducidas que se producen en
el proceso de oxidacin de los cidos grasos y en el ciclo de
Krebs.
De forma resumida podemos decir que el control fino de la
ruta gluconeognica se lleva a cabo por las relaciones
NAD ,
NADH
NADP ,
NADPH
ATP
ADP
el acetil-CoA y algunos intermediarios del ciclo de Krebs, mientras el control de la sntesis depende de seales hormonales.
GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS
59
GLUCOGNESIS Y GLUCOGENLISIS
El anabolismo y el catabolismo del glucgeno se producen
a travs de diferentes rutas que estn controladas con precisin
y relacionadas entre s, con el fin de mantener los niveles de
glucosa sangunea adecuados y disponer de glucosa 6-fosfato
para la produccin de ATP.
Prcticamente todas las clulas de animales superiores contienen glucgeno pero las fuentes ms ricas son el tejido muscular y el hgado. En un hombre de 70 kg de peso, el peso del
tejido muscular es aproximadamente la mitad y el del glucgeno 245 g (0,7%), mientras el hgado pesa aproximadamente
1.800 g y el glucgeno que contiene 110 g (6,1%). El hgado
es, pues, el principal reservorio de carbohidratos que se almacena como glucgeno; este proceso anablico se denomina
glucognesis. El glucgeno es una fuente de glucosa mediante
un proceso catablico que se conoce como glucogenlisis. Ambos procesos siguen rutas diferentes y estn regulados independientemente.
Como se ha estudiado anteriormente, el glucgeno es un
homopolisacrido de unidades de glucosa unidas mediante enlaces D (1 o 4) glucosdicos con ramificaciones D (1 o 6) cada
7-12 unidades.
La glucgeno fosforilasa hidroliza los enlaces D (1 o 4) glucosdicos del extremo no reductor de la cadena utilizando fosfato inorgnico:
Los polisacridos de
la dieta se metabolizan mediante hidrlisis a monosacridos.
60
dos formas: activa (R) e inactiva (T). La fosforilasa b se convierte en a mediante fosforilacin, un proceso catalizado por la
fosforilasa quinasa (Fig. 5.4). La fosforilasa a se desactiva por
hidrlisis del fosfato, una reaccin catalizada por la protena
fosfatasa 1, una fosfatasa que se encuentra en la clula abundantemente.
En la regulacin de la
degradacin del glucgeno intervienen
tres factores o seales: metablicas, hormonales y neuromusculares.
La fosforilasa b muscular slo se activa en presencia de elevadas concentraciones de AMP, que acta alostricamente,
unindose al centro activo de la enzima y alterndo la conformacin de la fosforilasa b. El ATP y la glucosa 6-fosfato actan
como efectores negativos. Cuando el msculo requiere energa
(AMP concentracin alta), la fosforilasa b se activa. Por el contrario, la fosforilasa a es totalmente activa independientemente
de los niveles de AMP, ATP y glucosa 6-fosfato.
En la mayora de las condiciones fisiolgicas, la proporcin
de enzima activa es determinada por las velocidades de fosforilacin y desfosforilacin.
La regulacin alostrica de la fosforilasa heptica difiere de
la muscular en dos aspectos importantes:
1. El AMP no activa la fosforilasa b heptica.
2. La fosforilasa a del hgado se desactiva por la unin de
glucosa.
Esto es, la glucosa desplaza el equilibrio de la forma a de R
a T. El hecho principal de la degradacin del glucgeno heptico es liberar glucosa cuando el nivel de esta sustancia en sangre es bajo.
La fosforilasa existe tambin en dos formas: fosforilada,
que es activa y desfosforilada, inactiva. Esta enzima es calciodependiente, en su estado no fosforilado, posee una Km elevada gracias a la presencia del in Ca2; a concentraciones citoslicas normales, la enzima es prcticamente inactiva. La
GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS
fosforilacin de la enzima por una protena quinasa de AMPcclico aumenta la afinidad de la enzima Ca2 reduciendo el
valor de la Km.
Todas estas etapas de la glucogenlisis se relacionan de una
forma continua mediante factores en que la seal de regulacin
inicial se va ampliando mediante un proceso en cascada (Fig.
5.5). Una molcula de AMP-c activa varias de las protena quinasas las cuales actan transformando muchas de fosforilasa b
en a, y as sucesivamente.
61
62
Las reacciones en
cascada controlan y
amplifican la seal
hormonal en la degradacin del glucgeno.
El proceso inverso, la glucognesis, comienza con el intermediario central del metabolismo de carbohidratos: la glucosa
6-fosfato. La primera reaccin es la conversin de glucosa 6fosfato en glucosa 1-fosfato por la fosfoglucomutasa:
fosfoglucomutasa
En el segundo paso en la formacin de glucgeno la UDPglucosa es transferido al extremo no reductor de la glucosa terminal formando enlaces D (1 o 4) entre el tomo 1 del residuo
glucoslico aadido y el 4-hidrxilo del residuo glucosa de la
cadena. La reaccin es catalizada por la glucgeno sintasa:
glucogeno sintasa
GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS
63
64
rece cuando la clula requiere energa iniciado por la epinefrina. Por otra parte, un exceso de glucosa 6-fosfato activa el
paso de la forma D a la I favoreciendo la glucognesis e inhibe
la fosfarilasa quinasa para impedir la glucogenlisis.
El control de los procesos glucognico y glucogenoltico en
el hgado es muy similar al que tiene lugar en el msculo, aunque existen algunas diferencias estructurales. La hormona que
inicia los procesos de movilizacin de la glucosa del glucgeno
heptico es el glucagn. Esta hormona es liberada por las clulas D del pncreas en respuesta a un nivel bajo de glucosa sangunea y funciona a travs del sistema protena quinasa AMP-c
GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS
dependiente. Como en las clulas musculares, esta enzima activa la glucogenlisis e inhibe la glucognesis, aunque la epinefrina tambin provoca estos efectos en el hgado.
En el hgado la glucosa libre acta como una sustancia reguladora y, cuando alcanza niveles superiores a los normales,
inhibe la degradacin de glucgeno y favorece la sntesis del
mismo. As, un aumento de la concentracin de glucosa activa
la fosforilasa a fosfatasa aumentando la fosforilasa b, que es la
forma poco activa en la ruta glucogenoltica, y, al mismo tiempo, activa la fosfoprotena fosfatasa para favorecer la forma I,
activa, de la glucgeno sintasa.
65
66
108
64
540%
Otra posible funcin de los ciclos de substrato es la generacin de calor producido por la hidrlisis del ATP. Esto es, la
hidrlisis de ATP origina calor que sirve para mantener el entorno celular a una temperatura adecuada para que las enzimas desarrollen una actividad ptima (Fig. 5.9).
GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS
RESUMEN
La gluconeognesis es la ruta central para la biosntesis
de carbohidratos a partir de precursores no hidrocarbonados sencillos como lactato, piruvato o algunos aminocidos.
Esta ruta es comn a la glucoltica salvo en las tres
reacciones irreversibles glucolticamente y que son sobrepasadas en reacciones energticamente favorables en direccin gluconeognica. As el piruvato es convertido en
fosfoenolpiruvato mediante la secuencia mitocondrial piruvato-oxalacetato-malato, seguida de la secuencia citoslica
malato-oxalacetato-fosfoenolpiruvato.
El segundo paso es la hidrlisis de fructosa 1,6-bisfosfato a fructosa 6-fosfato y el tercero es la hidrlisis de glucosa 6-fosfato por la glucosa 6-fosfatosa para originar glucosa. La ruta requiere seis enlaces fosfato ricos en energa
y es regulada, principalmente, por la primera enzima, la
piruvato carboxilasa. La gluconeognesis tambin se puede lograr a partir de algunos aminocidos o intermediarios
del ciclo de Krebs.
Los procesos de degradacin y sntesis del glucgeno
en clulas musculares y hepticas estn regulados con precisin y mediante seales metablicas y hormonales. Los
ciclos de substrato sirven para amplificar seales metablicas y pueden generar calor muscular local.
APLICACIONES CLNICAS
Se conocen hasta ocho enfermedades en el almacenamiento del glucgeno (Tabla 5.1). La enfermedad de Cori o de tipo
III se origina como consecuencia de una deficiencia en la enzima desramificante y, por ello, la degradacin del glucgeno
est limitada quedando molculas mayores que las normales.
Esto es, las molculas son mayores debido a que las regiones
internas del glucgeno no pueden ser degradadas por la glucgeno fosforilasa.
Despus de una alimentacin normal, el glucgeno heptico muestra una estructura normal, pero, a medida que el organismo requiere glucosa, produce glucosa 1-fosfato que la convierte en glucosa 6-fosfato y que, por hidrlisis, libera glucosa a
la sangre. Las cadenas externas del glucgeno van disminuyendo progresivamente hasta que no se puede producir ms glu-
67
68
Enfermedad
Defecto enzimtico
Tejido u rgano
afectado
Glucgeno en el rgano
afectado
Caractersticas clnicas
Enfermedad de
von Gierke
Glucosa-6-fosfatasa
Hgado y rin
Cantidad aumentada;
estructura normal
II
Enfermedad de
Pompe
-1,4-Glucosidasa
(lisosmica)
III Enfermedad de
Cori
Amilo-1,6-Glucosidasa
(enzima desramificante)
Msculos e hgado
IV Enfermedad de
Anderson
Enzima ramificante
(-1,4 -1,6)
Hgado y bazo
Enfermedad de
Mc Ardle
Fosforilasa
Msculo
Cantidad moderadamente
aumentada; estructura normal
VI Enfermedad de
Hers
Fosforilasa
Hgado
Cantidad aumentada
VII Enfermedad de
Tauri
Fosfofructoquinasa
Msculo
Cantidad aumentada;
estructura normal
VIII
Fosforilasa quinasa
Hgado
Cantidad aumentada;
estructura normal
GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS
69
TEMA 6
Metabolismo lipdico
Los lpidos, como grupo heterogneo de sustancias, desempean funciones muy diversas en el organismo, ya que
actan como vitaminas, hormonas, componentes de membranas biolgicas o reserva energtica, almacenndose principalmente en el tejido adiposo en forma de triacilglicridos. En el
caso de los mamferos, el metabolismo lipdico comienza con
la digestin de las grasas ingeridas en la dieta, su transporte a
travs de las lipoprotenas, su posterior almacenamiento y su
movilizacin cuando son necesarios para la obtencin de
energa. En este sentido, los cidos grasos representan la principal fuente de almacenamiento de energa en muchos organismos, ya que suponen una ventaja con relacin a los polisacridos, puesto que en los cidos grasos el carbono est casi
completamente reducido y, por lo tanto, su oxidacin genera
ms energa, en forma de ATP, que la de otros compuestos de
carbono como los glcidos.
DIGESTIN, MOVILIZACIN
Y TRANSPORTE DE LOS LPIDOS
Digestin de los lpidos
La digestin de los lpidos comienza en el estmago mediante una lipasa estable frente a cidos. La velocidad de
hidrlisis es muy lenta, los triacilglicridos son apenas digeridos a nivel gstrico, debido a que el pH del estmago es muy
cido y no puede actuar la lipasa gstrica. En la regin inferior
del estmago los triacilglicridos se mezclan con protenas, hi-
72
La hidrlisis de los
triacilglicridos se
produce fundamentalmente en el intestino
delgado por accin
de la lipasa pancretica.
dratos de carbono, jugo gstrico y otras sustancias; la degradacin de esta mezcla, junto con la accin motriz del estmago,
origina una sustancia denominada quimo. Al mismo tiempo
que el quimo pasa al duodeno, se mezcla con el jugo pancretico, el cual contiene sales biliares, lipasa pancretica y estearasas, as como iones bicarbonato, que neutralizan la actividad
del quimo.
La hidrlisis de los triacilglicridos se produce fundamentalmente en el intestino delgado por accin de la lipasa pancretica, esta enzima se sintetiza en el pncreas en forma de zimgeno siendo secretada al duodeno a travs del conducto linftico.
El zimgeno es activado al ser hidrolizado de forma especfica
por la tripsina, requiriendo para su actividad la presencia de sales biliares e iones Ca2. La lipasa pancretica es especfica
para steres en la posicin D del glicerol, de manera que se escinden cidos grasos de las posiciones C-1 y C-3, dando como
resultado cidos libres y E-monoacilgliceroles. La forma purificada de la enzima es fuertemente inhibida por los cidos biliares, normalmente presentes en el intestino delgado durante la
digestin de los lpidos, esta inhibicin se supera mediante la
accin de la colipasa, una protena de 12 kDa que se une tanto
a la interfase lpido-agua como a la lipasa, anclndose y activando a la enzima.
Los fosfolpidos son degradados mediante fosfolipasas especficas, que se sintetizan en el pncreas en forma de zimgenos, y son activadas como las lipasas por proteolsis mediada
por tripsina, y de igual modo que ellas requieren la presencia
de cidos biliares e iones calcio para su actividad y son inhibidas por los cidos biliares.
Las estearasas son una familia de enzimas menos especficas, que catalizan la hidrlisis de otro tipo de lpidos tales como
steres de colesterol, monoacilgliceroles u otros steres como la
vitamina A con cidos carboxlicos. A diferencia de las anteriores, estas enzimas requieren la presencia de los cidos biliares
para su actividad.
Las sales biliares emulsionan los triacilglicridos y steres
de los cidos grasos de cadena larga, hacindolos accesibles a
la accin hidroltica de las lipasas y estearasas intestinales.
Este proceso de emulsin es posible gracias a la naturaleza
anfiptica de las sales biliares, que pueden formar micelas y
stas solubilizar otros lpidos, tales como fosfolpidos y cidos
grasos.
Las micelas son transportadas desde el lumen del intestino
delgado hasta las microvellosidades de las clulas epiteliales del
mismo, localizacin en la cual los cidos grasos de cadena larga
se disocian de las micelas y difunden a travs de la membrana
METABOLISMO LIPDICO
73
74
se hidrolizan a glicerol y cidos grasos en las superficies internas de los capilares de los tejidos perifricos. Esta hidrlisis
comporta una activacin de la enzima extracelular lipoprotena lipasa por la apoprotena C-II. Algunos de estos cidos grasos liberados son absorbidos por las clulas prximas, mientras que otros, debido a que son bastante insolubles, forman
complejos con la albmina srica para ser transportados a clulas ms distantes. Tras la absorcin en la clula, el glicerol y
los cidos grasos pueden ser utilizados para obtener energa o,
en las clulas adiposas, utilizarse para volver a sintetizar triacilglicridos.
A partir de la VLDL se obtienen las IDL, y los quilomicrones
se transforman en restos de quilomicrones; ambos tipos de restos son captados por el hgado a travs de receptores especficos y degradados posteriormente en los lisosomas hepticos.
La apoprotena B-100 se utiliza para la sntesis de las LDL (a
partir de las IDL), siendo stas las lipoprotenas que transportan el colesterol a los tejidos (Fig. 6.2). Las HDL desempean
el papel de eliminar el exceso de colesterol de los tejidos y devolverlo al hgado para su metabolismo o excrecin.
METABOLISMO LIPDICO
75
76
Mg2
b)
La carnitina no slo
es el transportador de
cidos grasos de cadena larga al interior
mitocondrial, sino
que, adems, cumple
la funcin de mantener separados el almacn de coenzima
A citoplasmtico del
mitocondrial.
METABOLISMO LIPDICO
77
Adenosina.
78
METABOLISMO LIPDICO
3 reaccin: Hidratacin del doble enlace. Es una reaccin catalizada por la enoil-hidrasa o enoil-CoA hidrasa, en la
que la aparicin de un OH en el producto final dar lugar a
que exista una forma D y otra L.
79
80
enoil-hidrasa
L-3-hidroxiacil-CoA
Los cidos grasos se
oxidan mediante ciclos repetidos de oxidacin, hidratacin,
oxidacin y liberacin o escisin de
una molcula de acetil-CoA
METABOLISMO LIPDICO
81
RENDIMIENTO ENERGTICO DE LA
OXIDACIN DE LOS CIDOS GRASOS
Para determinar el rendimiento energtico de esta ruta metablica hay que tener en cuenta que cada conjunto de oxidaciones que da lugar a una molcula de acetil-CoA produce tambin una molcula de FADH2 (flavoprotena reducida) y un
NADH. Cada una de las flavoprotenas reducidas puede originar 2 ATP, y cada uno de los NADH puede producir 3 ATP,
cuando son procesados por la cadena de transporte de electrones. Si consideramos, por ejemplo, la oxidacin del palmitoilCoA, en donde se dan siete vueltas al ciclo, ya que en la ltima
se forman dos molculas de acetil-CoA, el rendimiento total de
la E-oxidacin sera de 129 ATP. Se obtienen ocho molculas de
acetil-CoA, que, al incorporarse al ciclo de Krebs, generaran
96 ATP, siete molculas de FADH2 que dan 14 ATP, y siete
molculas de NADH que generan 21 ATP. La suma total de
molculas de ATP sera 131, pero hay que tener en cuenta que
para la activacin del cido palmtico a palmitoil-CoA se requiere la hidrlisis de una molcula de ATP para dar AMP y PPi; la
molcula de AMP se transforma en ADP mediante hidrlisis de
otra molcula de ATP, por tanto, a los 131 ATP obtenidos hay
que restarles 2 ATP de la activacin del cido graso.
La reaccin para la degradacin global del palmitoil-CoA a
ocho unidades de acetil-CoA es la siguiente:
palmitoil-CoA 7 CoA a SH 7 FAD 7 NAD+
7 H2O o 8 acetil-CoA 7 FADH2 7 NADH 7 H
La reaccin para la
degradacin global
del palmitoil-CoA a
ocho unidades de
acetil-CoA es la siguiente: PalmitoilCoA + 7 CoA ~ SH +
7 FAD + 7 NAD+ + 7
H2O o 8 Acetil-CoA
+ 7 FA D H 2 + 7
NADH + 7 H+.
ATPs producidos
Oxidacin de 7 FADH2
Oxidacin de 7 NADH
Oxidacin de 8 acetil-CoA
Activacin del ac. palmtico
o 7u 2
o 7u 3
o 8 u 12
o
Palmtico + 23 O2
o 16 CO2 + 16 H2O + 129 ATP
14
21
96
2
82
35 ATP
33 ATP
96
33 ATP
96 ATP
129 ATP
METABOLISMO LIPDICO
83
84
taliza el desplazamiento del doble enlace desde la configuracin 'E-J-cis a la 'D-E-trans (Fig. 6.6). El producto resultante es
ya un acil-D-E-insaturado-CoA sobre el que puede actuar la
enoil-hidrasa, continuando el proceso de la E-oxidacin.
METABOLISMO LIPDICO
85
86
pletar la degradacin. Veamos como ejemplo el cido linoleico (18: '9,12). Las tres primeras vueltas del ciclo desprenden
tres molculas de acetil-CoA, llegndose a un doble enlace
'E-J-cis o '3-cis, como en el caso del oleil-CoA. Por accin de la
'E-J-cis- 'D-E-trans-enoil-CoA isomerasa se forma el ismero
'D-E-trans, que se hidrata a continuacin al correspondiente
L-E-hidroxiacil-CoA, continuando el proceso de la E-oxidacin
para desprenderse una nueva molcula de acetil-CoA. Llegamos as a la formacin de un acil-D-E-insaturado, pero cuyo
doble enlace est en posicin cis. La enoil-hidrasa acta sobre
l igualmente pero el resultado de la hidratacin es un '-hidroxiacil-CoA en lugar del L-hidroxiacil-CoA correspondiente. Esta
irregularidad se solventa con la actuacin de una segunda enzima auxiliar, la E-hidroxiacil-CoA epimerasa, que cataliza la epimerizacin del carbono E. El compuesto resultante se oxida por
la deshidrogenasa correspondiente, y contina el proceso normal de la E-oxidacin (Fig. 6.7).
Mediante estas dos enzimas auxiliares ('E-J-cis- 'D-E-transenoil-CoA isomerasa la E-hidroxiacil-CoA epimerasa) pueden
ser degradados todos los cidos grasos de la naturaleza.
CONTROL DE LA OXIDACIN DE
LOS CIDOS GRASOS
En la mayora de las
clulas, la oxidacin
de los cidos grasos
se controla por la disponibilidad de los
propios cidos grasos
para la oxidacin.
En la mayora de las clulas, la oxidacin de los cidos grasos se controla por la disponibilidad de los propios cidos grasos para la oxidacin. En los animales, esta disponibilidad se
regula mediante el control hormonal de la movilizacin de las
grasas en los adipocitos, ya que la funcin del tejido adiposos
consiste en almacenar la grasa para que sea utilizada en otras
clulas, luego tiene sentido, desde el punto de vista metablico,
que la liberacin y la degradacin de esta grasa almacenada se
regule por hormonas, que son mensajeros extracelulares.
En el hgado, la concentracin de malonil-CoA constituye
otro mecanismo regulador que controla la captacin de acilCoA desde el citosol a las mitocondrias. En este tejido, el malonil-CoA es un inhibidor de la carnitina aciltrasferasa I, luego inhibe la oxidacin de los cidos grasos, al impedir el transporte
de stos a las mitocondrias.
METABOLISMO LIPDICO
87
88
RESUMEN
La movilizacin de las grasas en las clulas adiposas
tiene lugar mediante la hidrlisis enzimtica de los triacilgliceroles a cidos grasos y glicerol, el proceso se controla
hormonalmente, a travs de la fosforilacin de la lipasa
dependiente de AMPc.
Una vez hidrolizados los triacilglicridos, los cidos
grasos son oxidados por un mecanismo denominados Eoxidacin, que es un proceso mitocondrial que comporta la oxidacin escalonada y la liberacin de dos tomos de carbono simultneamente en forma de acetilCoA. Los cidos grasos se activan mediante su unin a
CoA ~ SH en una reaccin doble que requiere la energa
del ATP. Esta reaccin tiene lugar en la membrana mitocondrial externa. Los acil-CoA son transportados a
travs de la membrana interna mitocondrial por la carnitina, y son oxidados en la matriz mitocondrial por una
secuencia repetida de cuatro reacciones: oxidacin (deshidratacin) ligada al FAD, hidratacin, oxidacin (deshidrogenacin) ligada al NAD, y liberacin o fragmentacin tilica por CoA ~ SH, de tal manera que cada ciclo produce una molcula de acetil-CoA. El FADH2 y el
NADH formados en las etapas de oxidacin transfieren
sus electrones al O2 por medio de la cadena respiratoria,
mientras que el acetil-CoA formado en la reaccin de liberacin o tilisis, entra, generalmente, en el ciclo de
Krebs por condensacin con oxalacetato, y el acil-CoA
formado con dos tomos de carbono menos que el cido graso original, repite ciclo en la primera reaccin de
oxidacin.
Varias enzimas, conocidas como oxidasas de los cidos grasos, que se encuentran en las mitocondrias ntimamente asociadas a las enzimas de la cadena respiratoria, catalizan la oxidacin de los cidos grasos.
En la oxidacin de las cadenas de cidos grasos con un
nmero impar de tomos de carbono se produce una
molcula de propionil-CoA.
En la oxidacin de los cidos grasos insaturados se necesitan dos enzimas auxiliares para transformar los dobles
enlaces de la forma cis a la trans y de la posicin 'E-J a
'D-E, estas enzimas son la E-hidroxiacil-CoA epimerasa
(enoil-CoA isomerasa) y la 'E-J-cis- 'D-E-trans-enoil-CoA
isomerasa ('2-trans- '4-cis dienol-CoA-reductasa).
METABOLISMO LIPDICO
APLICACIONES CLNICAS
Enfermedad de Refsum
La ruta de la D-oxidacin se descubri mediante el anlisis
de un trastorno neurolgico congnito grave y poco frecuente,
denominado enfermedad de Refsum. El uso de la D-oxidacin
es secundario en lo referente a produccin de energa, pero s
es significativo en el metabolismo de los cidos grasos metilados de la dieta, uno de los ms importantes es el cido fitnico,
que es un derivado del fitol, que forma parte de la clorofila.
CH3 CH (CH2)3 CH (CH2)3 CH (CH2)3 CH CH2 COOH
l
l
l
l
CH3
CH3
CH3
CH3
El cido fitnico es un constituyente de los lpidos lcteos y
de las grasas animales, se metaboliza generalmente mediante
una D-hidroxilacin inicial, seguida de deshidrogenacin y decarboxilacin, ya que el carbono D puede oxidarse para dar el
cido pristnico, que puede degradarse siguiendo el proceso de
la E-oxidacin. En la enfermedad de Refsum, la D-oxidacin es
defectuosa, y el cido fitnico no puede convertirse en un sustrato que pueda degradarse debido al grupo 3 metilo de su
molcula. Es sta una enfermedad gentica poco comn, los
enfermos que padecen este trastorno carecen de la enzima Dhidroxilante, por lo que acumulan grandes cantidades de cido
fitnico en los tejidos y en el suero. Este hecho origina problemas neurolgicos graves, tales como la retinitis pigmentosa, la
neuropata perifrica, la ataxia cerebelosa y la sordera de tipo
nervioso.
El tratamiento consiste en seguir una alimentacin que contenga poca o ninguna clorofila; es un tratamiento difcil ya que
descarta todos los vegetales de hoja verde, la carne y el consumo de productos lcteos, sobre todo la leche procedente de
animales herbvoros, ya que estos alimentos contienen grandes
cantidades de cido fitnico. La reduccin en el consumo de
estos productos tiene como resultado la disminucin del cido
fitnico del plasma, as como la regresin de los sntomas neurolgicos.
89
TEMA 7
Formacin de cuerpos
cetnicos.
Cetosis o cetognesis
92
dacin est limitada. En estas condiciones metablicas, asociadas a una tasa elevada de oxidacin de cidos grasos, la
molcula de acetil-CoA se utiliza para la obtencin de considerables cantidades de sustancias denominadas en general
cuerpos cetnicos. Cantidades ms altas de las normales presentes en sangre o en orina constituyen la cetonemia o cetonuria, el estado metablico general, en estas condiciones, se
denomina cetosis o cetognesis, proceso que tiene lugar en
las mitocondrias, siendo el hgado el principal centro de produccin de estos compuestos.
Los cuerpos cetnicos son fundamentalmente el acetoacetato o cido acetoactico y su producto de reduccin el D-3-hidroxibutirato o cido b-hidroxibutrico que tiene caracter cido,
solubles en agua, se sintetizan, como hemos dicho anteriormente, en el hgado. La acetona que procede de la decarboxilacin espontanea del acetoacetato, tambin se considera cuerpo cetnico.
Cuando las concentraciones de acetil-CoA son elevadas, dos
moles de acetil-CoA se condensan para formar acetoacetil-CoA.
Como hemos indicado anteriormente, la cetognesis se produce fundamentalmente en el hgado, debido a las elevadas
concentraciones de HMG-sintasa de ese tejido. Los cuerpos
cetnicos difunden de la mitocondria heptica a la sangre y sta
los transporta a los tejidos perifricos, siendo utilizados como
93
94
La cetognesis se
produce fundamentalmente en el hgado,
debido a las elevadas
concentraciones de
HMG-Sintasa de ese
tejido.
La cetognesis es el
resultado de una deficiencia de los hidratos de carbono disponibles.
95
96
RESUMEN
Existen circunstancias como el ayuno, la diabetes o
cualquier situacin de incapacidad de obtener glucosa,
en las que el organismo utiliza una ruta biosinttica que
garantice la formacin necesaria de glcidos, de manera
que el oxalacetato, que es la molcula inicial del ciclo
del cido ctrico, se utilice para la formacin de glucosa,
de esta forma la molcula de oxalacetato no es accesible
para su condensacin con el acetil-CoA obtenido a partir de la E-oxidacin. En estas condiciones, dicha molcula de acetil-CoA se utiliza para formar cuerpos cetnicos. Este estado metablico se denomina cetosis o cetognesis.
Los cuerpos cetnicos, compuestos de carcter cido,
solubles en agua, son el acetoacetato y el E-hidroxibutirato, se sintetizan fundamentalmente en el hgado, debido a
las elevados concentraciones de la HMG-sintasa de ese
tejido. El tercer cuerpo cetnico es la acetona que se forma en cantidades bajas por descarboxilacin del acetoacetato. Son sustratos energticos excelentes para algunos
rganos.
Los cuerpos cetnicos difunden desde la mitocondria
heptica a la sangre y sta los transporta a los tejidos
perifricos. Son combustibles normales en el metabolismo aerbico y son importantes como forma de energa
en otros tejidos, en especial el msculo cardaco y la
corteza renal.
La glucosa en condiciones normales es el combustible
principal del cerebro. No obstante, el cerebro sufre una
adaptacin metablica para utilizar cuerpos cetnicos durante el ayuno y la diabetes.
Si el acmulo de estos compuestos es muy elevado, se
produce un aumento excesivo de los niveles de los cuerpos cetnicos en sangre, y producen desequilibrios ms o
menos graves, conocidos genricamente con el nombre de
cetosis o cetoacidosis, siendo la cetoacidosis diabtica la
ms importante.
La cetognesis es el resultado de una deficiencia de los
hidratos de carbono disponibles causando un desequilibrio
entre la esterificacin y la liplisis en el tejido adiposo, los
cidos grasos que quedan sin esterificar se oxidan a CO2 y
cuerpos cetnicos.
APLICACIONES CLNICAS
Cetoacidosis diabtica
Cuando la alimentacin es normal, la produccin heptica
de acetoacetato y E-hidroxibutirato es mnima, de tal forma
que la concentracin sangunea de estos compuestos es muy
baja 0,2 mM. Sin embargo, la falta de alimentacin acelera
en gran medida la sntesis de estos compuestos, hasta una concentracin del orden de 3 a 5 mM. sta constituye la respuesta
normal del organismo a la escasez de glcidos y desempea
una serie de misiones fundamentales. En las primeras fases del
ayuno, la utilizacin de los cuerpos cetnicos por parte del
msculo cardaco y esqueltico reserva la glucosa para el mantenimiento del sistema nervioso central. Cuando el ayuno se
prolonga, la concentracin de cuerpos cetnicos en sangre aumenta para ser utilizados por el cerebro, permitiendo un ahorro
de glucosa. Determinadas condiciones patolgicas, de las que
la cetoacidosis diabtica es la ms importante, se caracterizan
por la produccin y acumulacin excesiva de cuerpos cetnicos
en sangre; no es extrao que se llegue a unos niveles sanguneos de los cidos acetoactico y E-hidroxibutirato de 20 mM. Al
ser ambos cidos relativamente fuertes (pKa 3,5-4), esta situacin produce una peligrosa acidosis metablica. La acumulacin excesiva de cuerpos cetnicos en la sangre en la cetoacidosis diabtica, enfermedad muy general entre los pacientes
afectados por la diabetes mellitus dependiente de insulina, proviene de su elevada tasa de produccin heptica, por lo que
supera a la capacidad de otros tejidos para utilizarlos.
La cetoacidosis diabtica es causada por una deficiencia
grande de insulina, junto con un exceso de glucagn, y viene
acompaada frecuentemente por aumento de otras hormonas
relacionadas con el estrs. Los principales transtornos metablicas son hiperglucemia, cetonemia excesiva y cetonuria. Aunque la tasa de mortalidad ha disminuido, el porcentaje oscila
entre el 6 y 10%. Al contrario que la cetosis fisiolgica, producida por inanicin, en la cual la secreccin de insulina por las
clulas E del pancreas limita la disponibilidad de cidos grasos
libres para el hgado, esta restriccin est ausente en los individuos diabticos y, como consecuencia de ello, la concentracin
de cidos grasos libres en el plasma llega a niveles muy elevados como 4 mM, lo cual impulsa la produccin heptica de
cuerpos cetnicos a la mxima velocidad.
El tratamiento de la cetoacidosis diabtica depende de la
gravedad de las anomalas metablicas y del equilibrio hdrico
y de electrolitos en los tejidos. La insulina es bsica, disminuye
97
98
los niveles plasmticos de glucagn, se opone a los efectos catablicos de ste en el hgado, inhibe el aporte de sustratos cetognicos y glucognicos (cidos grasos libres y aminocidos)
provenientes de la periferia, y en los tejidos diana estimula la
captacin de glucosa.
TEMA 8
Biosntesis
de cidos grasos
100
Figura 8.1. Sistema de transporte de los precursores para la biosntesis de cidos grasos desde la mitocondria al citosol, y acetil-CoA como intermediario entre el metabolismo de hidratos de carbono y grasas.
101
La estequiometra
global para la biosntesis de palmitato
(conversin del acetil-CoA en palmitato)
es: 8 Acetil-CoA + 7
ATP + 14 NADPH +
14 H+ o Palmitato +
8 CoA~SH + 7 ADP
+ 7 Pi + 14 NADP+ 6
H 2O
102
Una caracterstica que distingue al mecanismo de la biosntesis del cido graso consiste en que los productos intermedios
del proceso de alargamiento de la cadena son tiosteres, pero
no del CoA, como en la oxidacin del cido graso, sino de una
protena conjugada, de bajo peso molecular, denominada protena portadora de acilos (ACP, Fig. 8.2). En la mayora de las
clulas eucariticas, las siete protenas del complejo cido graso-sintetasa o sintasa, se encuentran asociadas formando un
agregado multienzimtico. En la mayora de los organismos, el
producto final es el cido palmtico, precursor de todos los
dems cidos grasos superiores saturados y de todos los cidos
grasos no saturados.
103
104
1. Formacin de malonil-CoA:
Acetil-CoA-carboxilasa
En el citosol, el malonil-CoA se forma a partir del acetilCoA y el bicarbonato por accin de la acetil-CoA-carboxilasa,
complejo enzimtico que cataliza la siguiente reaccin:
O
ll
acetil-CoA-carboxilasa
CH3 C S CoA ATP HCO3 o
O
ll
o OOC CH2 C S CoA ADP Pi H
105
En primer lugar el acetil-CoA reacciona con el grupo sulfhidrilo de la (ACP) por accin de una de las seis enzimas del sistema sintasa, la acetil-CoA-ACP-transacilasa que cataliza la siguiente reaccin:
o acetil-ACP CoA a SH
acetil-CoA ACP a SH m
Este grupo acetilo no permanece unido a la ACP, sino que
es transferido a un resto de cistena especfico perteneciente a
otra de las enzimas del complejo cido graso-sintasa, la E-cetoacil-ACP-sintasa, segn la reaccin:
o ACP a SH acetil-sintasa
acetil-ACP sintasa a SH m
en la que, la E-cetoacil-sintasa se designa simplemente por
sintasa. Con esta reaccin, el complejo de la cido grasosintasa queda activado (iniciado) y dispuesto para llevar a
cabo la secuencia de reacciones requeridas para unir una
unidad de dos carbonos en el proceso de prolongacin de la
cadena.
106
4. Reaccin de condensacin
Es la siguiente reaccin de la secuencia, catalizada por la
E-cetoacil-ACP-sintasa, el grupo acetilo esterificado al resto de
cistena de esta enzima es transferido al carbono 2 del grupo
malonilo de la ACP, con la liberacin del grupo carboxilo libre
del resto del malonilo, en forma de CO2.
La molcula de CO2 as liberada contiene el mismo tomo
de carbono que fue introducido como HCO3, en la reaccin de
la acetil-CoA-carboxilasa. En esencia, el HCO3 desempea un
papel cataltico en la sntesis del cido graso, puesto que se regenera en forma de CO2, a medida que cada unidad de dos
carbonos se inserta en la cadena de crecimiento del cido graso.
O
O
ll
ll
reduccin
H3C C CH2 C S ACP NADPH H o
m
acetoacetil-ACP
OH
O
l
ll
o
m H3C CH CH2 C S ACP NADP
D-b-hidroxibutiril-ACP
6. Etapa de deshidratacin
El D-E-hidroxibutiril-ACP es deshidratado al correspondiente trans-'2-enoil-ACP, esto es, el crotonil-ACP, por accin de la
enoil-ACP-deshidratasa:
107
108
109
110
En las mitocondrias,
el cido palmtico y
otros cidos grasos
saturados son prolongados mediante adiciones sucesivas al
extremo carboxilo
terminal de unidades
acetilo en forma de
acetil-CoA. El malon i l -AC P n o p u e d e
sustituir al acetilCoA.
CONTROL DE LA SNTESIS
DE CIDOS GRASOS
La biosntesis de cidos grasos se controla en gran medida
por mecanismos hormonales. La insulina acta de diversas formas, uno de sus efectos consiste en estimular la entrada de glucosa en las clulas, este efecto aumenta el flujo a travs de la
gluclisis y la reaccin con la piruvato deshidrogenasa, que
111
112
Figura 8.7. La acetil-CoA carboxilasa se inactiva por fosforilacin y se activa por unin al citrato.
Por ltimo, tambin se regula la sntesis a partir de la disponibilidad de equivalentes reductores (NADPH), de los que una
gran parte provienen de la ruta de las pentosasfosfato.
RESUMEN
Los cidos grasos se sintetizan en el citosol por una va
diferente a la E-oxidacin. La reaccin basada en la formacin y ruptura del citrato transporta grupos acetilo desde la mitocondria al citosol para la biosntesis. Se inicia la
sntesis con la carboxilacin del acetil-CoA hasta malonilCoA, etapa limitante, catalizada por la acetil-CoA carboxilasa, principal punto de control y regulacin de la biosntesis de los cidos grasos. Los intermediarios de la sntesis
de cidos grasos estn unidos a una protena portadora de
acilos (ACP).
El acetil-ACP y el malonil-ACP se condensan para formar acetoacetil-ACP. A continuacin sigue una reduccin,
una deshidratacin y una segunda reduccin. El reductor
en estas etapas es el NADPH. Se forma de esta manera el
butiril-ACP, que inicia un segundo ciclo de elongacin, comenzando con la adicin de una unidad de dos carbonos
procedentes del malonil-ACP. Siete ciclos de elongacin
producen palmitil-ACP, el cual se hidroliza hasta palmitato.
La sntesis de palmitato requiere ocho molculas de
acetil-CoA, 14 de NADPH y siete de ATP. Otras siete
molculas de HCO3, que realizan un papel cataltico, intervienen en la formacin de malonil-CoA y se recuperan en
forma de CO2 en la reaccin de condensacin. En organismos superiores, las enzimas que realizan la sntesis de los
cidos grasos, estn unidas covalentemente formando un
complejo enzimtico multifuncional, la acido graso sintasa.
La acetil-CoA carboxilasa, enzima limitante de la velocidad del proceso, es regulada a travs de las formas desfosforilada activa y fosforilada inactiva de la carboxilasa, el citrato la activa alostricamente.
APLICACIONES CLNICAS
Aplicaciones clnicas de los inhibidores
de la cido graso sintasa
Muchos de los cnceres habituales del ser humano, como
los carcinomas de colon, prstata, ovario, mama y endometrio, expresan elevados niveles de cido graso sintasa, la primera enzima de la sntesis de cidos grasos. As, la distinta expresin de esta enzima en los tejidos normales y los neoplsi-
113
114
cos ha llevado a pensar que la cido graso sintasa es una diana importante en la terapia anticancergena. Estudios realizados en pacientes con carcinoma de mama indican que los niveles de la cido graso sintasa se elevan en las clulas neoplsicas, y este incremento de concentracin es proporcional al
estadio clnico del tumor, por lo que se relaciona con la virulencia del mismo.
Uno de los inhibidores de la cido graso sintasa, que actualmente se encuentra en fase de estudio, es el denominado C75,
una pequea molcula sinttica que presenta una actividad antitumoral significativa, paralela a la inhibicin de la sntesis de
cidos grasos en los tejidos tumorales, as como en los normales. Este inhibidor no produce efectos adversos en la prolilferacin celular normal de mdula sea, el tracto gastrointestinal,
la piel o los tejidos linfoides. Ello hace pensar en la utilidad de
C75 como agente antitumoral.
Por otra parte, recientes estudios realizados con ratones,
han puesto de manifiesto el efecto de los inhibidores de la cido graso sintasa, concretamente de C75 y de cerulenn, en la
inhibicin de la alimentacin y en una dramtica prdida de
peso. Parece que C75 inhibe la expresin de un neuropptido
hipotalmico decisivo en la seal profgica. Por lo tanto, la cido graso sintasa puede jugar un papel importante en la regulacin de la alimentacin, y as ser una diana terapetica decisiva en el control de la obesidad.
TEMA 9
Metabolismo
de acilgliceroles
y esfingolpidos
METABOLISMO DE TRIACILGLICEROLES
Biosntesis de triacilgliceroles
Los acil-CoA, junto con el glicerol-3-fosfato, son los principales precursores de los triacilglicridos. La primera ruta predomina en el tejido adiposo, el glicerol-3-fosfato sufre dos esterificaciones sucesivas con acil-CoA, para producir diacilglicerol-3fosfato (cido fosfatdico), que es el precursor tanto de los
triacilglicridos como de los fosfoglicridos. La ruta hacia los
triacilgliceroles implica la eliminacin hidroltica del fosfato, seguida de una transferencia de otro grupo acilo procedente de
un acil-CoA.
El producto de partida es el glicerol-3-fosfato, formado
principalmente por reduccin de la hidroxiacetona fosfato y en
menores proporciones por la fosforilacin del glicerol. Puede
116
tambin formarse a partir de la glicerina procedente de la degradacin de los triacilglicridos por la accin de la glicerolquinasa.
HIDRLISIS Y MOVILIZACIN DE
TRIACILGLICEROLES
El primer paso en la recuperacin de los cidos grasos almacenados para la produccin de energa es la hidrlisis de los
triacilgliceroles, la cual es catalizada por una serie de lipasas del
tejido adiposo. La lipasa que libera el primer cido graso est
sometida a control por una serie de hormonas. Este control de
la hidrlisis de los triacilgliceroles debe guardar un equilibrio
117
118
METABOLISMO DE GLICEROFOSFOLPIDOS
Degradacin de fosfoglicridos
La degradacin de los fosfolpidos corre a cargo de las fosfolipasas, enzimas que liberan los cidos grasos componentes
de estos compuestos. Tiene lugar de forma continua, en todos
los tejidos del organismo. Estas fosfolipasas se clasifican segn
la posicin en la molcula del cido graso que liberen, en fosfolipasas A1, A2, C y D.
Las fosfolipasas estn ampliamente distribuidas en la naturaleza: se localizan tanto en el jugo intestinal como en las secreciones bacterianas o en los venenos actuando como enzimas
digestivas; por ejemplo, al fosfolipasa A2 es muy abundante en
el veneno de ciertas especies de serpientes. Estas enzimas tambin actan en la sntesis de lpidos importantes para el organismo, por ejemplo la fosfolipasa A2, que libera cido araquidnico, precursor de las prostaglandinas.
Los fosfoglicridos, mediante la accin conjunta de varias
fosfolipasas, pueden ser catabolizados hasta la formacin de
glicerol-3-fosfato. Los cidos grasos libres, como los dems productos que se van liberando en esta degradacin, pueden ser
reutilizados para la sntesis de nuevos fosfolpidos o dirigirse
hacia otras rutas metablicas.
Sntesis de fosfoglicridos
Las dos clases principales de glicerolpidos son los triacilglicridos, ya estudiados, y los glicerofosfolpidos, y dentro de
estos nos centraremos en la sntesis de los fosfoglicridos y los
esfingolpidos.
Como metabolito intermediario utilizan la molcula de cido fosfatdico al igual que los triacilgliceroles. Para la sntesis de
los fosfoglicridos se une un nucletido activado CTP (citidina
trifosfato), formando un intermediario CDP-diacilglicerol. La
porcin fosfatidilo reacciona con alcoholes de naturaleza polar,
obtenindose los fosfoglicridos como la fosfatidilserina o el
fosfatidil inositol; a partir de la fosfatidilserina se obtienen la
fosfatidil etanolamina o la fosfatidilcolina.
La sntesis de estos dos ltimos puede tambin realizarse
por otra va: la colina o la etanolamina son activadas mediante
su unin a CTP y en una reaccin posterior se unen al fosfatidato para formar los dos fosfoglicridos.
119
120
La porcin fosfatdico activado reacciona con el grupo hidroxilo de un alcohol polar, cuando el alcohol es serina se obtiene la fosfatidilserina. Igualmente, el fosfatidil inositol se forma por transferencia del fragmento diacilglicerolfosfato desde
el CDP-diacilglicerol al inositol.
Igualmente, la fosfatidiletanolamina, puede obtenerse a partir de etanolamina, que origina un intermediario CDP-etanolamina, por una serie de reacciones similares (Fig. 9.3).
Algunos fosfolpidos tiene en el C1 un radical ter en lugar
de un radical acilo, se denominan glicerileterfosfolpidos, su sntesis comienza con la hidroxicetona fosfato que es acilada con
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122
123
METABOLISMO DE ESFINGOLPIDOS
Degradacin
El catabolismo de los esfingolpidos se produce en los lisosomas, por la accin de una familia de enzimas hidrolticas. Estas rutas tienen un gran inters a nivel mdico dada su relacin
con un grupo de enfermedades congnitas denominadas esfingolipidosis, cada una de las enfermedades se caracteriza por el
dficit de una de las enzimas de la degradacin (Tabla 9.1).
Tabla 9.1. Esfingolpidos
Enfermedad
Enzima deficitaria
Intermedio acumulado
Gangliosidosis GM1
-Galactosidasa
Ganglisido GM1
Tay-Sachs
-N-acetilhexosaminidasa
Ganglisido GM1
Fabry
-Galactosidasa A
Trihexosilceramida
Gaucher
-Glucosidasa
Glucosilceramida
Niemann-Pick
Esfingomielinasa
Esfingomielina
Lipogranulomatosis de Farber
Ceramidasa
Ceramida
-Galactosidasa
Galactosilceramida
Leucodistrofia metacromtica
Arilsulfatasa A
3-sulfogalactosil-ceramida
Sandhoff
N-acetilhexosaminidasas A y B
124
Sntesis de esfingosina
La sntesis de esfingosina, un componente comn de los esfingolpidos, se realiza mediante la condensancin del palmitoil-CoA y serina, formando una amina de 18 tomos de carbono denominada esfingonina. A travs de una decarboxilacin y dos reducciones posteriores se obtiene la esfingosina
(Fig. 9.5). La incorporacin de un acil-CoA da origen a la
125
126
RESUMEN
Los triacilgliceroles se sintetizan mediante rutas sencillas en las que los grupos acilo de los acil-CoA se transfieren a los grupos hidroxilo del glicerol-3-fosfato, que sufre
dos esterificaciones sucesivas para formar diacilglicerol-3fosfato, tambin denominado cido fosfatdico, que es precursor tanto de los fosfolpidos como de los triacilglicridos. La posterior formacin de los triacilglicridos implica
la eliminacin hidroltica del fosfato seguida de una nueva
esterificacin con un acil-CoA.
Los glicerofosfolpidos, lpidos predominantes en las
membranas, se sintetizan mediante vas que parten del
fosfatidato y activan intermediarios mediante la reaccin
con la citidina trifosfato (CTP). La S-adenosilmetionina es
el donador de grupos metilo para la sntesis de la fosfatidilcolina a partir de fosfatidiletanolamina.
Los esfingolpidos (glucoesfingolpidos) se sintetizan a
partir de ceramida, es decir, del ceramido, que se forma
por acilacin de esfingosina, y la adicin sucesiva de azcares mediante la accin sucesiva de glucosiltransferasas,
que actan sobre los azcares ligados a nucletidos. Los
ganglisidos son esfingolpidos que contienen un oligosacrido con al menos un residuo de N-acetilneuraminato
o un cido silico derivado de l.
Las esfingolipidosis, tambin conocidas como enfermedades de almacenamiento de lpidos, son mayoritariamente enfermedades autosmicas recesivas, que se caracteri-
APLICACIONES CLNICAS
Enfermedad de Tay-Sachs
Es la mejor conocida de las esfingolipidosis, se caracteriza
porque hay un dficit o ausencia de la N-acetilhexosaminidasa
A liposmica. Las irregularidades o anomalas en la degradacin de los ganglisidos pueden tener serias consecuencias clnicas. El dficit enzimtico causa una elevada concentracin de
ganglisidos, concretamente el denominado GM2, fundamentalmente en el cerebro. Esta concentracin de ganglisidos GM2
es mucho ms alta de lo normal porque un residuo N-acetilgalactosamina terminal se elimina muy lentamente o no se elimina. Los cambios patolgicos ms sorprendentes tienen lugar en
el sistema nervioso, ya que las neuronas se hinchan enormemente y los lisosomas aparecen repletos de lpidos.
En la enfermedad de Tay-Sachs los sntomas, por lo general, son evidentes antes de que los nios tengan un ao, la enfermedad causa por lo general degeneracin del sistema nervioso central, debilidad y retraso del desarrollo psicomotor, lo
que conlleva retraso mental, ceguera y la muerte entre el segundo y tercer ao.
Se produce en esta enfermedad una desaparicin de las clulas ganglionares y la proliferacin de las clulas gliales, y la
desmielinizacin de los nervios perifricos. El hallazgo patognmico es una mancha rojo cereza en la mcula causada por el
hinchamiento y la necrosis de las clulas ganglionares del ojo.
Esta enfermedad, como la mayora de almacenamiento de lpidos, se transmite en forma de anormalidades genticas recesivas, la anormalidad se encuentra en un cromosoma autosmico. Por lo general, los sntomas son evidentes antes de que los
nios afectados tengan un ao, a la edad de 2 aos, el nio
est demente y ciego, la muerte generalmente se produce antes
de los 3 aos de edad, como indicamos anteriormente. Dado
que no hay ninguna forma de curacin conocida de esta enfermedad, se ha centrado la atencin en la deteccin prenatal,
sta fue una de las primeras enfermedades genticas que se
diagnostic con xito durante el desarrollo del feto. Se obtiene
el lquido amniotico por amniocentesis y se analiza para ver la
127
128
actividad de la N-acetilhexosaminidasa A. La nica forma conocida de abordar la enfermedad cuando se detecta es la interrupcin del embarazo.
Aunque la enfermedad de Tay-Sachs es rara en la poblacin general, es relativamente frecuente en los judos americanos procedentes del centro y del este de Europa, aproximadamente 1 de cada 30 individuos es portador del gen defectuoso
y 1 de cada 300 en los americanos no judos.
TEMA 10
Metabolismo
del colesterol
130
que puede reducirse a mevalonato por una reductasa que necesita NADPH. Esta reaccin es limitante y constituye la clave
para regular la velocidad de sntesis del colesterol. El HMGCoA se encuentra tanto en el citoplasma como en la mitocondria del hepatocito, aunque en esta ltima constituye fundamentalmente un precursor de los cuerpos cetnicos (Fig. 10.1).
131
132
La incorporacin del
colesterol a las clulas hepticas depende de receptores especficos.
El colesterol, junto con los triglicridos y fosfolpidos, altamente hidrofbicos, es transportado en los lquidos corporales
unido a protenas, en forma de agregados macromoleculares o
lipoprotenas (ver tema 12).
El colesterol heptico de origen exgeno, procedente de la
dieta, llega hasta el hepatocito vehiculizado en los remanentes
de los quilomicrones. El colesterol endgeno, por su parte, es
sintetizado en la clula heptica a partir del acetil-CoA procedente de azcares, cidos grasos y aminocidos. Una parte de
este colesterol endgeno sale del hgado en forma de LDL,
para regresar formando parte de diferentes lipoprotenas y remanentes de las mismas. Su incorporacin est mediada por
receptores especficos. El colesterol de los tejidos llega al higado a travs de las LDL, IDL y HDL. Finalmente el exceso de
colesterol heptico acta como mecanismo de autorregulacin
y es excretado en la bilis como tal o en forma de cidos biliares (Fig. 10.5).
133
REGULACIN DE LA BIOSNTESIS
DE COLESTEROL
El acetil CoA es un metabolito intermediario tanto de azcares como de cidos grasos y de algunos aminocidos, por lo
que su disponibilidad est asegurada, lo que por otra parte es
comprensible dada la importancia fisiolgica del colesterol. La
regulacin de la biosntesis es compleja y, aunque no est totalmente dilucidada, parece depender tanto del propio colesterol,
como de sus metabolitos intermediarios que actuaran sobre las
enzimas reguladoras del proceso.
El rgano donde se regula fundamentalmente la sntesis del
colesterol es el hgado. Los niveles de colesterol en plasma pueden modificarse por efecto de la dieta. El colesterol de la dieta
disminuye la sntesis y actividad de la 3-hidroxi-3-metilglutarilCoA reductasa, como hemos visto, enzima clave en la primera
etapa de la sntesis, que cataliza la formacin de mevalonato a
partir del acetil CoA. El control de la reductasa es bastante
complejo y puede hacerse a distintos niveles que incluyen la
transcripcin de la informacin del DNA, la traduccin del
RNA o sntesis de la enzima y la degradacin o prdida de su
actividad biolgica. A estos niveles actan metabolitos derivados del cido mevalnico o del colesterol, a travs de enzimas
especficas que pueden reconocerlos y actuar en consecuencia.
El exceso de grasas en la dieta tiene efecto sobre los niveles
plasmticos de colesterol. Mientras que las grasas saturadas lo
elevan de forma importante al aumentar los niveles de acetilCoA en el hepatocito, las grasas poliinsaturadas lo disminuyen
moderadamente. Estas observaciones son la base de muchas
de las estrategias dietticas actuales. Por otra parte, el aumento
El exceso de grasas
en la dieta influye sobre los niveles de colesterol en sangre.
134
RESUMEN
La regulacin de la biosntesis del colesterol se ejerce
fundamentalmente en el hgado. El aumento de colesterol
en la dieta produce una inhibicin de la sntesis heptica,
que se lleva a cabo en la primera etapa de formacin de
mevalonato, por inhibicin de la HMG-CoA reductasa,
que acta como enzima limitante.
Por otra parte, la sntesis de colesterol tambin se ve inhibida como consecuencia del efecto que ejercen sus niveles intracelulares sobre la sntesis y expresin del receptor
celular para LDL, que bloquea la incorporacin de colesterol desde dichas lipoprotenas plasmticas.
APLICACIONES CLNICAS
1. Hipercolesterolemia primaria
Es una patologa que se produce como consecuencia de un
defecto en el receptor de las LDL (protena codificada por un
gen localizado en el brazo corto del cromosoma 19). Es la enfermedad monognica ms frecuente: 1/1500 de herencia
autosmico dominante. Cursa con elevacin de LDL-Colesterol. En la clnica se caracteriza por presentar ateroesclerosis coronaria precoz, xantomas tendinosos, tuberosos, xantelasmas y
arco corneal. Las manifestaciones cutneas, como en otras enfermedades, estn en relacin con el tiempo de evolucin de la
enfermedad. Requiere tratamiento diettico (dieta pobre en colesterol y grasas saturadas y rica en grasas poliinsaturadas).
Cuando este tratamiento fracase se emplear un tratamiento
combinado de colestiramina (de primera eleccin en nios y en
mujeres en edad frtil que no usen anticonceptivos) e inhibidores de la HMG-CoA reductasa.
2. Aterosclerosis
Es un proceso patolgico conocido ya en la antigedad, habindose descrito cambios compatibles con la aterosclerosis en
las momias de la XI dinasta de los faraones. Crawford la define
como una lesin arterial muy prevalente, caracterizada por un
engrosamiento focal de la ntima constituido por acmulos de
grasas y capas de fibras finas semejantes a colgeno en proporciones variables. Mediante esta definicin puso de manifiesto
sus tres aspectos fundamentales:
La distribucin focal de las lesiones, determinada por factores hemodinmicos.
La afeccin predominante de la ntima.
La naturaleza compleja de los elementos que forman las
lesiones ateroesclerticas consistentes en lpido, tejido
conectivo necrtico y tejido fibromuscular fibroproliferado, formando este ltimo un recubrimiento que separa
los dems constituyentes del flujo sanguneo en la luz arterial.
135
136
TEMA 11
Metabolismo
de los derivados
del colesterol
Sntesis de hormonas esteroideas. Sntesis de cidos biliares. Circulacin enteroheptica de las sales biliares. Sntesis de Vitamina D.
El destino metablico del colesterol, adems de formar parte de las membranas celulares, es servir de precursor para la
sntesis de hormonas esteroideas, cidos biliares y vitamina D.
Las hormonas esteroideas tienen efectos significativos sobre el
metabolismo de los glcidos y de las protenas de muchos tejidos. Los cidos biliares, que se sintetizan en el hgado y se almacenan y concentran en la vescula biliar, solubilizan los lpidos de la dieta y pueden ser reabsorbidos por el hgado o eliminados por el intestino delgado. La vitamina D, que acta
sobre la calcificacin de los huesos, se almacena en el hgado y
se excreta por el mismo camino que los cidos biliares.
138
La pregnenolona es
precursora de varias
hormonas con gran
significado biolgico.
del citocromo P450. La ruptura entre ambos carbonos hidroxilados se produce por una desmolasa. Las tres reacciones necesitan NADPH y O2. La reaccin ocurre en la mitocondria, hasta
donde es conducido el colesterol por medio de un transportador especfico.
La corticotropina o ACTH secretada por la adenohipfisis
estimula la sntesis de pregnenolona a partir de colesterol. La
pregnenolona es el precursor de las dems hormonas esteroideas mediante una serie de transformaciones qumicas sencillas.
La progesterona se sintetiza a partir de pregnenolona en
dos etapas, en la primera el grupo hidroxilo del C-3 se transforma en 3-ceto y en la segunda, el doble enlace de C-5 pasa a
C-4 (Fig. 11.1). El cortisol se obtiene a partir de la progesterona por hidroxilacin en C-17, C-21 y C-11 (Fig. 11.2). Las enzimas que catalizan estas reacciones son muy especficas. La hidroxilacin en C-21 de la progesterona inicia la sntesis de aldosterona mientras que la hidroxilacin en C-17 inicia la
sntesis de andrgenos (Fig. 11.3).
En la eliminacin de
las hormonas esteroideas intervienen los
cidos biliares.
139
140
141
CIRCULACIN ENTEROHEPTICA
DE LAS SALES BILIARES
El 90% aproximadamente de las sales biliares que llegan al
intestino delgado durante la digestin son recuperadas en el
mismo, en parte por difusin y en parte por transporte activo.
Una vez absorbidas pasan a la sangre y vuelven por la vena
aorta al hgado, donde son captadas de nuevo por el hepatocito para su almacenamiento en la vescula biliar.
La recuperacin de las sales biliares permite su reutiIizacin al menos 18 veces antes de su eliminacin definitiva por
las heces. Esta recirculacin de las sales biliares desde el intestino al higado, recibe el nombre de circulacin enteroheptica y es el proceso ms importante para la formacin
de bilis.
SNTESIS DE VITAMINA D
La vitamina D se obtiene a partir del 7-dehidrocolesterol
por accin de la luz ultravioleta (Fig. 11.5). En el hgado es hidroxilada pasando a 25-hidroxicolecalciferol y posteriormente
en el rin, bajo la accin de la parathormona (PTH), es convertida en la forma biolgicamente activa, la 1,25 dihidroxicolecalciferol, considerada una hormona esteroidea con funciones sinrgicas a la PTH de gran importancia en la homeostasis
de calcio y fosfato.
142
RESUMEN
Adems de formar parte de las membranas celulares, el
colesterol es el precursor de las hormonas esteroideas, vit.
D y cidos biliares. Estos compuestos desempean funciones importantes en el organismo. Las hormonas esteroide-
APLICACIONES CLNICAS
1. Colelitiasis biliar
En determinadas condiciones el colesterol de la bilis puede
precipitar formando clculos. Una de las causas ms frecuentes
es la secrecin excesiva de colesterol en la bilis, determinada
en parte por el exceso de colesterol en la dieta, ya que las clulas hepticas lo sintetizan como parte del metabolismo orgnico de las grasas. Otras veces se trata de inflamacin e infeccin
crnica del epitelio vesicular, que altera sus caractersticas permitiendo una absorcin excesiva de agua y sales biliares necesarias para mantener disuelto el colesterol. El tratamiento farmacolgico se basa en la administracin exgena de cido
quenodesoxiclico, uno de los cidos biliares naturales cuyo
efecto consiste en aumentar la formacin de bilis y reducir la
concentracin de colesterol, ayudando a su disolucin y disminuyendo la formacin de cidos biliares por el hgado, lo que
reduce simultneamente la secrecin heptica de colesterol a la
bilis. Es importante la disminucin de grasas en la dieta. En
muchas ocasiones el tratamiento debe ser quirrgico.
2. Dficit de 21-hidroxilasa
La anomala congnita ms frecuente de la produccin de
hormonas esteroideas es la deficiencia de la 21-hidroxilasa,
necesaria para la sntesis de glucocorticoides y mineralcorticoides. La disminucin en la sntesis de estos esteroides aumenta
143
144
la secrecin de ACTH hipofisaria al disminuir el freno que realizan habitualmente las hormonas perifricas por retrocontrol.
La consecuencia es un aumento en la sntesis de progesterona
que deriva hacia la sntesis de andrgenos, produciendo virilizacin en la nia. En los nios se producen signos de madurez
sexual prematura y en ambos sexos aceleracin del crecimiento y calcificacin temprana de los nucleos de osificacin con
tallas finales pequeas. El tratamiento se basa en la administracin de glucocorticoides como terapia de sustitucin, entre
cuyas acciones se produce la disminucin de ACTH por inhibicin negativa.
TEMA 12
Lipoprotenas
LIPOPROTENAS
Representan la nica forma reconocida de transporte de los
lpidos circulantes, desde su aislamiento e identificacin por
Macheboeuf.
La funcin principal
de las lipoprotenas
es la de transportar
lpidos.
146
gado a los tejidos perifricos o desde estos al hgado Las lipoprotenas se encuentran formadas por un ncleo esfrico integrado por los componentes ms apolares, triglicridos y colesterol esterificado, envueltos por una capa de fosfolpidos y colesterol libre, de forma que las porciones ms polares se
orientan hacia fuera, mientras que el ncleo hidrfobo es totalmente inaccesible a las enzimas plasmticas y ser necesario
que las lipoprotenas penetren en las clulas para que el colesterol y los triglicridos puedan ser utilizados. Envolviendo este
complejo se sitan las apoprotenas. Los lpidos y las protenas
no estn unidos covalentemente, sino que mantienen estable
su estructura gracias a interacciones hidrofbicas entre las porciones apolares de ambos, que de esta forma quedan protegidas del contacto con el agua, pero que tambin les permiten
intercambiar sus componentes entre s y con las membranas
celulares. Estos intercambios son la base del metabolismo de
las lipoprotenas. Existen una gran variedad de apoprotenas
con diferentes funciones, adems de vehiculizar los lpidos,
como servir de cofactores a enzimas plasmticas que intervienen en el metabolismo de las lipoprotenas, o contener seales
para las clulas diana de los tejidos que han de captarlos mediante receptores especficos. Se han aislado y caracterizado
distintos tipos de apoprotenas formadas por polipptidos monocatenarios sintetizadas y secretadas todas ellas en el hgado
y en el intestino.
Apo-A: I ,II y III
Apo-B: B-48 y B-100
Apo-C: I, II, III
Apo-D
Apo-E
Apo-F
Apo-G
En las lipoprotenas, varias apoprotenas primarias se asocian para dar lugar a apoprotenas secundarias.
Tipos de lipoprotenas
La separacin por ultracentrifugacin nos permite diferenciar las lipoprotenas en cinco tipos diferentes segn la densidad, que depende de la relacin lpido/protena. De menor a
mayor densidad son las siguientes:
1. Quilomicrones: Compuestos fundamentalmente por triglicridos. Contienen colesterol y fosfolpidos en pe-
LIPOPROTENAS
2.
3.
4.
5.
147
RECEPTORES DE LIPOPROTENAS
Se encuentran en la membrana de las clulas implicadas en
el metabolismo de las lipoprotenas. Su presencia permite identificar de forma especfica la porcin proteica de las lipoprotenas y desencadenar los mecanismos que en cada caso permitan la incorporacin de los lpidos a la clula diana.
Los receptores de
membrana de las lipoprotenas son de
tres clases E/B-100,
E y de HDL.
Receptores E/B-100. Se encuentran en la membrana del hepatocito y de la mayora de los tejidos perifricos. Su
mecanismo de accin es el mejor conocido. Reconocen
las apoprotenas B-100 y E. La unin apoprotena-receptor provoca la invaginacin de la membrana plasmtica y la incorporacin del complejo recin formado al
interior celular por endocitosis. Ya en el citoplasma se
produce la fusin de la vescula neoformada con un lisosoma para la degradacin de su contenido. Los produc-
148
Las lipoprotenas sufren numerosos cambios y transformaciones tanto en la circulacin, como en los tejidos.
Metabolismo de los quilomicrones. Se trata de los
complejos lipoproteicos circulantes de mayor tamao. Transportan lpidos de la dieta desde el intestino. Alrededor del 90%
de su contenido son triglicridos y el resto se trata de fosfolpidos y algo de colesterol libre y esterificado, con protenas de
tipo apo-B. Su origen es exclusivamente intestinal. Despus de
la ingesta de grasas en la dieta, se produce su hidrlisis a nivel
intestinal con el concurso de las lipasas pacreticas. Las sales
biliares contribuyen a la digestin emulsionando las grasas y facilitando la accin de las enzimas. Concluida la hidrlisis se
produce la absorcin en forma de colesterol libre, cidos grasos
libres, glicerol y monoglicridos, que pasan al interior del enterocito, donde se produce nuevamente su esterificacin para
LIPOPROTENAS
formar triglicridos y steres de colesterol. En el retculo endoplsmico de stas clulas, son envueltos en apoprotenas A y
B para hacerlos hidrosolubles. El paso a travs de la membrana basal del enterocito requiere de las apoprotenas, sin las
cuales se acumularan en su interior. Desde aqu, en forma de
quilomicrones nacientes, son recogidos por el sistema linftico
y conducidos a travs del conducto torcico hasta la vena cava
superior sin sufrir el filtro heptico. Una vez en la circulacin se
produce la interaccin con las HDL realizndose un intercambio entre ambas. Las HDL les ceden colesterol esterificado y las
apo-C-III, C-II y E, de gran importancia para su degradacin,
mientras que los quilomicrones ceden a stas triglicridos, fosfolpidos y colesterol libre. Los triglicridos de los quilomicrones
proceden exclusivamente de la dieta. A nivel capilar, fundamentalmente en el tejido adiposo, msculo, glndula mamaria
y pulmn se produce la hidrlisis de los triglicridos, ya que de
esta forma no pueden pasar al interior de ninguna clula. La
enzima responsable es la lipoprotena lipasa extraheptica, situada en la cara externa del endotelio vascular y activada por
la apo-C-Il. Esta enzima se libera por la heparina activada por
la insulina. Los cidos grasos liberados son captados por las clulas de los tejidos circundantes, mientras que el glicerol es
transportado por la sangre hasta el hgado para su metabolismo. La vida media de los quilomicrones en la circulacin es
muy corta, menos de una hora en el hombre, aunque desde la
ingesta de grasas en la dieta hasta su presentacin en el plasma
pueden pasar varias horas. Como producto final del metabolismo de los quilomicrones, se forman unas partculas denominadas remanentes de quilomicrones, que apenas contienen triglicridos y s una proporcin elevada de colesterol esterificado
y apo-E que recibieron de las HDL. Las apo C-II y C-III son
ahora devueltas a las HDL de origen.
Los remanentes de los quilomicrones son captados por el
hgado gracias a la presencia de apo-E, a travs de receptores
especficos para dicha apo-protena. Ya en el interior del hepatocito se produce la hidrlisis para liberar el colesterol y los cidos grasos, que sern utilizados en la sntesis de nuevas lipoprotenas y de cidos biliares. Cuando los remanentes de los
quilomicrones exceden su concentracin fisiolgica en plasma,
o permanecen ms tiempo del acostumbrado, son fagocitados
por macrfagos del sistema reticuloendotelial.
149
En el hepatocito los
remanentes de los
quilomicrones se hidrolizan y liberan colesterol y cidos grasos.
150
LIPOPROTENAS
Metabolismo de las LDL. Su formacin resulta de la degradacin intravascular de las VLDL. Son los principales transportadores de colesterol en la sangre. Su funcin consiste en regular la sntesis de colesterol de novo en los tejidos perifricos.
La mayor parte de las LDL van a ser captadas por el hgado a
travs de receptores especficos en la membrana del hepatocito.
El receptor de LDL reconoce la apo-B-100 de su estructura interaccionando entre s para formar el complejo lipoprotena-receptor que a continuacin se internaliza en la membrana tras la
formacin de una vescula que pasa al citoplasma celular por
endocitosis. Las vesculas que contienen LDL se fusionan en el
interior celular con lisosomas para su degradacin. La porcin
proteica produce aminocidos libres. Los steres de colesterol
son hidrolizados para producir colesterol libre y el receptor suele
reciclarse volviendo a la superficie celular, para repetir el transporte de nuevas molculas. El colesterol no esterificado es utilizado para la renovacin de la membrana, o reesterificado y almacenado en la clula. Estos steres contienen cidos grasos
monoinsaturados, a diferencia de los steres de colesterol en las
LDL, que son poliinsaturados. Por su parte, la sntesis y expresin del receptor para la LDL estn sometidos a un mecanismo
de retroalimentacin segn el cual, cuando aumenta el colesterol dentro de la clula, se produce la inhibicin de la transcripcin y traduccin de la informacin necesaria para la sntesis del
receptor y en consecuencia se bloquea la incorporacin de ms
colesterol desde las LDL plasmticas.
El aumento de colesterol en la clula inhibe la sntesis y expresin del receptor para LDL, con lo que se evita la captacin
de ms colesterol circulante. Tambin se inhibe la sntesis de la
reductasa de hidroximetilglutaril-CoA, enzima clave en la formacin de colesterol. Por otra parte se estimula la actividad de
la enzima acil-colesterol-acil-transferasa, encargada de reesteriflcar el colesterol dentro del hepatocito. El resultado de estas
acciones es disminuir la sntesis y aumentar el colesterol esterificado, que es utilizado por el hgado para la formacin de cidos biliares y nuevas lipoprotenas (Fig. 12.2). La interaccin
de las LDL en los tejidos perifricos es similar a lo descrito para
el hepatocito, ya que est mediada por el mismo tipo de receptores, regulables por los niveles de colesterol intracelular. Esta
posibilidad de captacin tisular nos da idea de su capacidad
aterognica en potencia, ya que pueden ceder en determinadas circunstancias una gran cantidad de lpidos en la pared
vascular. Una pequea proporcin de las LDL es captada por
las suprarrenales y las gnadas que tambin disponen de receptores especficos y utilizada en la sntesis de hormonas esteroideas. El resto de las LDL es aclarado en otros tejidos perif-
151
El aumento de colesterol inhibe su sntesis porque acta a nivel de la hidroximetilglutaril-CoA y del receptor para las LDL.
152
LIPOPROTENAS
nes, VLDL, IDL y remanentes, mediante la accin de una protena de transferencia de steres de colesterol (CETP). Las HDL
enriquecidas con triglicridos llegan hasta el hgado, en donde
van a ser degradadas por la lipasa heptica que las convierte
en HDL3, y finalmente son catabolizadas. Cuando el contenido
en triglicridos de las HDL es bajo, se extraen los fosfolpidos y
se liberan de nuevo a la circulacin para seguir desempeando
su funcin.
153
154
Por su parte el hgado capta LDL, como cualquier otra clula del organismo, adems de las IDL, con lo que se elevan los
niveles de colesterol en el hepatocito. El exceso de coleslerol intracelular inhibe el sistema enzimtico para la sntesis de nuevo
colesterol. ste es el mecanismo heptico que funciona cuando
a nivel perifrico no se consume colesterol.
El papel de las HDL se conoce bastante menos. Su sntesis
ocurre en el hgado y en menor proporcin en el intestino durante la absorcin intestinal de las grasas. Contienen apo-A-I y
II y no contienen apo-B, lo que las diferencia respecto a las
LDL. Son reconocidas por receptores distintos y el mecanismo
de accin tambin es diferente. Recogen colesterol y apoprotenas de las lipoprotenas degradadas y de los tejidos, adems de
intercambiar coleslerol esterificado con las VLDL y quilomicrones durante su metabolismo. Las HDL incorporan la mayor
parte del colesterol, probablemente desde las membranas de
muchos tejidos y paredes arteriales, esterificndolo por la
LCAT. Este transporte inverso de colesterol desde los tejidos
hasta el hgado, al contrario del que realizan las LDL, le confiere su carcter de lipoprotena antiaterognica. La relacin
HDL/LDL es por tanto un indicador inportante de riesgo aterognico.
LIPOPROTENAS
RESUMEN
Las lipoprotenas son complejos macromoleculares
constituidos por lpidos y protenas que representan la
nica forma de transporte de los lpidos circulantes. La
porcin lipdica est integrada por fosfolpidos, colesterol libre y esterificado, triglicridos y cidos grasos no esterificados. La parte proteica, denominada apoprotena,
est compuesta por cadenas peptdicas designadas con
las primeras letras del alfabeto en maysculas. Las lipoprotenas se diferencian entre s por la naturaleza y proporcin de su contenido en lpidos y protenas, que les
proporcionan distinta densidad y nos permiten clasificarlas en:
Quilomicrones, de origen intestinal, ricos en triglicridos procedentes de la dieta.
VLDL, de origen heptico, ricas en glicridos de origen
endgeno.
IDL y LDL son lipoprotenas ricas en colesterol procedente de la degradacin de las anteriores. Pueden
entrar en las clulas hepticas y en los tejidos perifricos gracias a receptores especficos, lo que las
hace especialmente patgenas en caso de alteracin metablica.
Los triglicridos de los quilomicrones y de las VLDL
son catabolizados en los capilares de los tejidos por la lipoprotenlipasa extraheptica para suministrar cidos
grasos para su consumo o almacenamiento. Los quilomicrones remanentes son reciclados en otras lipoprotenas o captados por el hgado. Las IDL y LDL resultantes
de la degradacin perifrica de las VLDL transportan
colesterol al hgado o a los tejidos que disponen de receptores para ellas. Los niveles de colesterol intracelulares regulan estos receptores, as como la sntesis heptica de nuevo colesterol cuando los niveles intracelulares
son altos.
Las HDL se sintetizan a nivel heptico e intestinal. Su
funcin es captar colesterol de los tejidos, esterificarlo y
transportarlo hasta el hgado para su utilizacin o degradacin.
El metabolismo de las lipoprotenas se produce a base
de intercambios y transformaciones que aseguran el transporte de los lpidos.
155
156
APLICACIONES CLNICAS
Deficiencia familiar de lipoprotena lipasa
Es una enfermedad de herencia autosmica recesiva (el gen
alterado est situado en el cromosoma 8) cuya prevalencia es
1/1.000.000. Los quilomicrones estn elevados en sangre perifrica.
Se inicia en la infancia presentando crisis de dolor abdominal recidivante (pancreatitis aguda). Asimismo se observa la
presencia de xantomas eruptivos, lipemia retinalis y hepatoesplenomeglia. El suero extrado es de aspecto plido y cremoso
(suero lipmico), pero sin embargo no existe riesgo de aterosclerosis precoz.
El tratamiento consiste en una reduccin drstica de las grasas de la dieta (triglicridos de cadena media) y aportar suplementos de vitaminas liposolubles.
TEMA 13
Aspectos bioqumicos
de la nutricin
158
tenas musculares. Por otra parte, los macronutrientes inorgnicos son el calcio, fsforo, sdio, cloro, potasio y magnesio, as
como el agua. Todos ellos han de ingerirse diariamente en
grandes cantidades, es decir, de uno a dos gramos diarios de
minerales, y unos 2,5 litros de agua.
El grupo de micronutrientes est constituido por vitaminas y
oligoelementos, que han de ingerirse en pequeas cantidades,
pero que son esenciales en el mantenimiento de la actividad
bioqumica, ya que participan en un gran nmero de reacciones catalizadas enzimticamente, las cuales no se produciran
en su ausencia y por tanto no se podran metabolizar los macronutrientes. Las vitaminas son imprescindibles, y pueden ser
de dos tipos: vitaminas hidrosolubles, que incluyen la vitamina
C y ocho del complejo vitamnico B; y las vitaminas liposolubles: A, D, E y K. En cuanto a los oligoelementos esenciales, se
encuentran el hierro, zinc, cobre, manganeso, molibdeno, selenio, yodo y flor, que en su mayora son imprescindibles para
que muchas enzimas sean activas.
Una correcta nutricin se basa en una dieta apropiada, que
aporte los nutrientes necesarios para que el ser humano mantenga su composicin corporal y obtenga energa para desarrollar su actividad fsica. Una disminucin en la ingestin o un
aporte excesivo de nutrientes conduce a la malnutricin, como
consecuencia de un desequilibrio entre las necesidades corporales y el consumo de nutrientes.
159
de protenas que, desde un punto de vista diettico, se recomienda ingerir vara con la edad; mientras que para los lactantes se recomienda 2,2 g/kg, ya que comienzan su etapa de crecimiento, para los adultos slo es de 0,8 g/kg. Estas cantidades
lgicamente estn directamente relacionadas con la cantidad
de aminocidos esenciales que necesita un individuo en crecimiento que ha de sintetizar una gran cantidad de protenas
para sus tejidos, y un adulto que esencialmente slo ha de
mantener sus tejidos. El Food and Nutrition Board (FNB) de la
National Academy of Sciences/National Research Council de
Estados Unidos de Amrica ha estimado que la cantidad total
de aminocidos esenciales necesaria para un lactante es de
unos 715 mg /kg diarios, mientras que la de un adulto es de
unos 86 mg /kg diarios (Tabla 13.1). En este sentido, no todas
las protenas que se ingieren tienen el mismo valor biolgico, lo
que est relacionado con su coincidencia en aminocidos con
los tejidos humanos; as una coincidencia total (100%) es la de
la ovoalbmina, mientras que esta similitud es menor para las
protenas de la leche o la carne (90%), disminuyendo notablemente en el caso de cereales y verduras (40%).
Tabla 13.1. Cantidad de aminocidos esenciales (mg/kg peso corporal/da)
en funcin de la edad.
Lactante
(4-6 meses)
Nio
(10-12 aos)
Adulto
Phe y Tyr
120
24
14
His
020
Ile
088
28
10
Leu
150
44
14
Lys
099
49
12
Met y Cys
072
24
13
Tre
074
30
07
Trp
019
04
03
Val
093
28
13
Food and Nutrition Board, National Academy of Sciences/National Research Council 1989.
La cantidad diaria de protenas dietticamente recomendada que ha de ingerirse vara con la edad, el sexo, la estatura,
peso corporal y actividad metablica y fsica de los individuos;
segn el FNB en su informe de 1989, los lactantes necesitan
13-14 g, los nios 16-28 g, los hombres 45-63 g y las mujeres
46-50 g (Tabla 13.2).
160
Peso
(kg)
Protenas
(g/da)
Lactantes
0,0-0,5
0,5-1,0
6
9
13
14
Nios
0,1-3,0
0,4-6,0
0,7-10,
13
20
28
16
24
28
Hombres
11-14
15-18
19-24
25-50
> 51
45
66
72
79
77
45
59
58
63
63
Mujeres
11-14
15-18
19-24
25-50
> 50
46
55
58
63
65
46
44
46
50
50
Food and Nutrition Board, National Academy of Sciences/National Research Council 1989.
Si se consumen ms
protenas de las necesarias, el exceso de
protenas se emplea
como fuente de energa, convirtindose
los aminocidos en
glucosa o cidos grasos y cetocidos
161
Las protenas de la
dieta no pueden ser
absorbidas y por ello
han de ser digeridas
hasta aminocidos libres y pequeos pptidos (di y tripptidos), los cuales pueden ser absorbidos en
el intestino y, de esta
forma, pasar a la sangre.
162
que participan aminocidos sin carga (Tyr, Trp, Phe, Met, Leu)
y la elastasa hidroliza los enlaces en lo que intervienen aminocidos pequeos (Gly, Ala, Ser). Estas enzimas actan sobre
las protenas y polipptidos liberados del estmago al intestino
y generan polipptidos y pptidos de menor tamao. Por su
parte, las carboxipeptidasas A y B son exopeptidasas que
actan sobre el extremo carboxi-terminal de los pptidos generados por las endopeptidasas pancreticas, liberando aminocidos simples. Se trata de metalo proteasas, concretamente de
zinc. El resultado final de la accin de estas enzimas es la formacin de aminocidos libres y pptidos pequeos de 2-8 residuos.
Puesto que el proceso de activacin de zimgenos es irreversible, la regulacin de la actividad enzimtica se realiza mediante inhibidores especficos. El inhibidor de tripsina, que se
encuentra en la secrecin pancretica, es una protena pequea de 6 kDa, que se une fuertemente al centro activo de la
tripsina, dada su analoga con el sustrato, fomndose un complejo muy estable.
El proceso digestivo se completa con las enzimas presentes
en las secreciones intestinales (Fig. 13.3), producidas por las
glndulas de Brunner y de Lieberkhn. Estas enzimas son aminopeptidasas, exopeptidasas que hidrolizan los enlaces peptdicos prximos al extremo amino-terminal de los oligopptidos;
entre ellas estn la aminopeptidasa A, que hidroliza oligopptidos con residuo amino-terminal cido, y aminopeptidasa N
que acta cuando el citado residuo es neutro. Tambin existen
163
El proceso digestivo
se completa con las
aminopeptidasas de
las secreciones intestinales
164
dipeptidasas de diversas especificidades; algunas de estas enzimas se encuentran en el citoplasma de las clulas del epitelio
intestinal, donde pueden pasar los dipptidos va sistemas de
transporte especficos, y es en el citoplasma donde son hidrolizados hasta aminocidos libres.
Las protenas de la dieta, a la vista de lo expuesto, se transforman finalmente en aminocidos libres y algunos dipptidos
en el intestino delgado, donde son absorbidos, pasando al sistema portal heptico que conduce al hgado.
El transporte de L-aminocidos (Fig. 13.4), a travs de la
membrana luminal de las clulas en cepillo del intestino delgado, es un transporte facilitado por un transportador, que se
produce a favor de gradiente de concentracin, y en muchos de
los casos es dependiente de Na+, con un mecanismo semejante al de transporte de glucosa, esto es, se genera un gradiente
electroqumico de Na, que es mantenido por la Na/K ATPasa
con hidrlisis de ATP. Se han descubierto distintos tipos de
transportadores especficos para L-aminocidos y dipptidos:
a) para aminocidos neutros con cadenas laterales polares
o cortas (Ala, Ser, Thr);
165
b) para aminocidos neutros con cadenas laterales aromticas o hidrfobas (Phe, Tyr, Met, Ile, Leu, Val);
c) para iminocidos (Pro, Hyp);
d) para E-aminocidos (E-Ala, taurina);
e) para aminocidos bsicos y cistina (Arg, Lys, Cys-Cys);
f) para aminocidos cidos (Asp, Glu);
g) para dipptidos.
Los dipptidos neutros son cotransportados con un in H a
travs de la membrana luminal, y ya en el interior celular hidrolizados por dipeptidasas. Una vez en el interior citoplasmtico, los aminocidos son transportados fuera de la clula intestinal a travs de la membrana contraluminal, mediante transporte facilitado por transportador, que en muchos casos es
independiente de Na+. De esta forma los aminocidos se incorporan a la sangre por la vena porta.
RESUMEN
Uno de los principales macronutrientes de la dieta son
las protenas, que constituyen una fuente tanto de energa,
proporcionando 4 kcal/g cuando se oxidan completamente, como de nutrientes esenciales. En este sentido, las protenas de la dieta aportan los nueve aminocidos esenciales para el hombre: Phe, His, Ile, Leu, Lys, Met, Tre, Trp y
Val. La cantidad de protenas que, desde un punto de vista diettico, se recomienda ingerir varan con la edad, ya
que se relaciona con la cantidad de aminocidos esenciales que necesita un individuo para sintetizar las protenas
para sus tejidos. Si se consumen ms protenas de las necesarias, el exceso se transforma en glucosa o cidos grasos y cetocidos, que finalmente pueden producir triacilgliceroles. En situacin de ayuno, algunas protenas se degradan y sus aminocidos se emplean para producir
compuestos esenciales para el organismo como glucosa,
algunas enzimas y hormonas.
Las protenas de la dieta han de ser digeridas hasta
aminocidos y pequeos pptidos, que pueden ser absorbidos en el intestino, y de esta forma pasar a la sangre. En
el proceso digestivo participan diferentes peptidasas, la
gran mayora de las cuales se producen como zimgenos.
La digestin comienza en el estmago por accin del
carcter cido del jugo gstrico y de la pepsina A, que se
produce en el estmago en forma de zimgeno, el pep-
166
APLICACIONES CLNICAS
Malnutricin proteicoenergtica
La malnutricin proteicoenergtica (MPE) o proteicocalrica se debe a una deficiencia no slo de todos los macronutrientes, sino tambin de muchos micronutrientes. Existen va-
rios niveles de este sndrome, segn sea la insuficiencia proteica, desde la inanicin a la alimentacin insuficiente. Puede
producirse en personas de cualquier edad y procedencia, aunque los ms afectados son los lactantes y nios de pases en
vas de desarrollo. Existen tres formas clnicas de MPE:
a) la forma seca, deshidratada o marasmo;
b) la forma hmeda, edematosa o kwashiorkor; y
c) una forma combinada o kwashiorkor marsmico.
La forma clnica depende del equilibrio de la ingesta no
proteica y proteica. A su vez, dentro de cada forma, existen diversos grados: leve, moderado y grave.
El marasmo o forma seca se produce por ingesta casi nula
de nutrientes proteicos y no proteicos; los nios que la padecen
estn muy delgados debido a la prdida de msculo y grasa
corporal, y tienen hambre. La ingesta energtica es insuficiente
para las necesidades corporales y el organismo las cubre con
sus propias reservas. El glucgeno heptico se agota rpidamente, y las protenas del msculo esqueltico se utilizan va
gluconeognesis para mantener el nivel de glucosa plasmtica.
Simultneamente, los triacilglicridos del tejido adiposo se degradan a cidos grasos para proporcionar energa a algunos tejidos, pudiendo transformarse en cuerpos cetnicos para que
los utilice el cerebro.
El kwashiorkor o forma hmeda se produce al destetar al
nio antes de lo necesario, generalmente por el nacimiento de
un segundo hijo, y alimentarlo con nutrientes de baja calidad,
como gachas diluidas, por lo que frena su desarrollo; en este
caso, ms que una deficiencia energtica, se produce un deficiencia proteica importante, lo que origina el edema. Dado que
estos nios ingieren hidratos de carbono y pocas protenas, disminuye la sntesis de protenas por las vsceras, lo que provoca
hipoalbuminemia, que es la causante del edema. Este sndrome se caracteriza por edema generalizado, dermatosis escamosa, adelgazamiento, decoloracin y enrojecimiento del pelo; hgado graso agrandado, y apata irritable adems de retraso del
crecimiento.
Los nios que padecen el kwashiorkor marsmico tienen
algo ms de edema y de grasa corporal que los que padecen
marasmo.
En todas las formas de MPE se presentan infecciones, con
diversas bacterias productoras de neumona, otitis media, diarrea, enfermedad genitourinaria y sepsis. La infeccin se presenta a causa de una inmunidad deprimida. Asimismo, en la
MPE leve o moderadamente grave, hay una depleccin de los
electrlitos, en especial potasio y magnesio, y una disminucin
167
168
TEMA 14
Degradacin
de los aminocidos
La degradacin de
aminocidos comienza con la eliminacin
de su grupo a-amino,
quedando el esqueleto carbonado, que es
catabolizado hasta
intermediarios metablicos importantes.
TRANSAMINACIN Y
DEGRADACIN OXIDATIVA
La transaminasas o aminotransferasas son enzimas que
catalizan la transferencia de un grupo D-amino desde un
D-aminocido a un D-cetocido. En muchos casos el D-cetocido es el D-cetoglutarato (DKG), que se transforma en glutamato
170
simultneamente a la formacin del D-cetocido del D-aminocido dador del grupo D-amino. De esta forma, mediante la formacin de glutamato a partir de D-cetoglutarato, se elimina el
grupo D-amino de muchos aminocidos.
O
NH
ll
l
H
C COO
O
H
C
COO
l
l
ll
l
o C COO
H3N C COO CH2
m
CH2
l
l
l
l
CH2
R
R
CH
2
l
l
aminocido
D-cetocido
COO
COO
D-cetoglutarato
glutamato
Una de las formas de
eliminar el grupo aamino de los aminocidos est catalizada
por aminotransferasas que transfieren
un gr upo a-amino
desde un aminocido
a un a-cetocido.
D-cetocido-2
D-cetocido-1
aminocido-2
El mecanismo cataltico de las transaminasas incluye la formacin de bases de Schiff intermediarias debido a la participacin del grupo prosttico de estas enzimas, el piridoxal fosfato
(PLP). El piridoxal fosfato procede de la Vitamina B6 o piridoxina, y en el curso de la reaccin se transforma en piridoxamina
fosfato:
171
172
La reaccin catalizada por las transaminasas es completamente reversible. El glutamato producido en las reacciones de
transaminacin puede sufrir una desaminacin oxidativa, catalizada por la glutamato deshidrogenasa, formndose in amonio (NH4):
173
Los D-cetocidos resultantes de la transaminacin son degradados hasta intermediarios metablicos, los cuales pueden
utilizarse en la biosntesis de cidos grasos, cuerpos cetnicos y
glucosa.
D-cetoglutarato
174
Figura 14.2. Esquema general del destino metablico de los esqueletos carbonados de los aminocidos.
175
El piruvato formado
en la degradacin de
Ala, Tre, Cys, Ser y
Gly, puede transformarse en glucosa por
la va gluconeognica, transformarse en
acetil-CoA e incorporarse al ciclo de
Krebs.
176
177
Figura 14.6. Degradacin de prolina, arginina, glutamina, histidina y glutamato hasta D-cetoglutarato.
178
cistationina E-sintasa; la cistationina es el sustrato de la cistationina J-liasa que la desamina formando cistena y D-cetobutirato. Se genera propionil-CoA, que finalmente se transforma
en succinil-CoA, que se incorpora al ciclo del cido ctrico. La
deficiencia en metionina adenosiltransferasa produce hipermetioninemia, una patologa benigna ya que no se han detectado pacientes con ausencia completa de la enzima. La deficiencia en cistationina E-sintasa produce homocistinuria
clsica o tipo I, y es el error congnito ms frecuente del
metabolismo de la metionina, que se transmite como autos-
179
180
181
Figura 14.8. Rutas degradativas de los aminocidos de cadena ramificada: valina, isoleucina y leucina.
182
maciones catalizadas enzimticamente, produce D-metilacetoacetil-CoA, compuesto que sufre una tiolisis y se escinde
en acetil-CoA y propionil-CoA, el cual finalmente genera
succinil-CoA.
Esencialmente, se produce por una deficiencia en el complejo deshidrogenasa de D-cetocidos de aminocidos ramificados (Val, Ile y Leu), que puede implicar a uno o a todos sus
componentes (D-cetocido descarboxilasa, transacilasa y dihidrolipoil deshidrogenasa), o bien puede afectar al pirofosfato
de tiamina (TPP), que es el cofactor de la enzima. Esta patologa se denomina EOJA por el olor dulzn propio del jarabe
de arce que exhalan los lquidos corporales, sobre todo la orina. Existen viarios tipos de EOJA:
a) EOJA clsica: Es la ms grave. Los lactantes son normales al nacer pero presentan vmitos y poca tendencia a
alimentarse, y a los pocos das letargia y coma, junto
con rigidez muscular, convulsiones, hipoglucemia y acidosis metablica. Si no se tratan, los pacientes fallecen a
las pocas semanas o meses de vida. La orina, el sudor y
el cerumen exhalan olor a jarabe de arce, lo cual es indicativo de la patologa, que cursa con elevados niveles
plasmticos de Leu, Ile y Val y descenso de los niveles
de Ala. En orina se detectan elevados niveles de Leu, Ile
y Val, as como de sus correspondientes D-cetocidos. El
tratamiento de la fase aguda consiste en eliminar los
aminocidos de cadena ramificada y sus metabolitos de
los lquidos corporales y de los tejidos mediante dilisis
peritoneal; una vez superada esta fase, ha de ingerirse
una dieta pobre en aminocidos de cadena ramificada,
para lo cual existen preparados comerciales carentes de
estos aminocidos, sin embargo, puesto que Val, Leu e
183
La EOJA se produce,
esencialmente, por
una deficiencia en el
complejo deshidrogenasa de a-cetocidos
de aminoacidos ramificados (Val, Lev, Ile),
o por carencia de
TPP.
Todas las formas de EOJA se transmiten con carcter autosmico recesivo. La existencia de numerosas variedades es
debido a la deficiencia en las diversas subunidades del complejo de la deshidrogenasa.
2. Acidemias orgnicas
Todos los metabolitos intermediarios del catabolismo de los
aminocidos de cadena ramificada son cidos orgnicos, y el
deficit de cualquiera de las enzimas de estas vas metablicas,
excepto de las transaminasas, origina acidosis; los cidos orgnicos que preceden al bloqueo enzimtico se acumulan en los
lquidos corporales y se eliminan por la orina, ocasionndose
una acidosis metablica intensa en los primeros das de vida.
As, existen algunas enfermedades asociadas con el catabolismo
de la leucina:
184
El catabolismo de
Lem produce acetoacetato y acetil-CoA, y
el de Lys genera acetil-CoA, por lo que
ambos aminocidos
son estrictamente cetognicos.
ropinuria. Otra patologa es la acidemia a-cetoadpica, debida a una deficiencia en la descarboxilacin del D-cetoadipato,
que produce niveles elevados de D-cetoadpico en plasma y
orina del recien nacido, causando convulsiones, acidosis metablica leve e intenso retraso mental.
La degradacin del triptfano se produce mayoritariamente en el hgado hasta acetil-CoA. En esta ruta en la reaccin catalizada por la quinureninasa se forma alanina, que puede
transformarse en piruvato y 3-hidroxiantranilato, que es un precursor de la biosntesis de NAD y NADP. Se genera D-cetoadipato, metabolito comn con la ruta degradativa de lisina, y
desde este punto ambas vas presentan los mismos pasos metablicos hasta acetil-CoA.
185
186
En la degradacin de
Trp se produce acetilCoA y Ala, la cual
puede transformarse
en piruvato.
187
188
deficit de una de las enzimas que sintetiza o reduce el cofactor tetrahidrobiopterina (BH4). Este cofactor tambien participa
en la reaccin catalizada por las hidroxilasas de triptfano y
de tirosina, que son esenciales para la biosntesis de los neurotransmisores dopamina y serotonina, por lo que la deficiencia en BH4 afecta gravemente a las funciones del sistema nervioso central. Las manifestaciones clnicas son indistinguibles
de las de la fenilcetonuria clsica, pero, aunque se aplique
una dieta adecuada, los lactantes desarrollan manifestaciones
neurolgicas. El tratamiento consiste en la administracin de
precursores de los neurotransmisores, como L-dopa y 5-dihidroxitriptfano.
189
La tirosina se utiliza
no slo para la sntesis de protenas, sino
como precursor de
dopamina, noradrenalina, adrenalina,
melanina y tiroxina.
190
se a los diez aos de edad por fallo heptico. El tratamiento con dieta baja en Tyr, Phe y Met no suele ser
efectivo, y el nico recurso es el transplante heptico.
La alcaptonuria se debe a una deficiencia de homogentisato 1,2-dioxigenasa, que provoca que los pacientes excreten
prcticamente toda la Tyr que ingieren en exceso en forma de
cido homogentsico por la orina. Se transmite con carcter autosmico recesivo. El cido homogentsico es incoloro, pero
con el tiempo se oxida generando un compuesto que polimeriza adquiriendo un intenso color oscuro. Inicialmente slo se
produce una orina de color oscuro, pero con el tiempo los pigmentos procedentes de la oxidacin del cido homogentsico
se depositan en los huesos, tejido conjuntivo y diveros rganos
produciendo en ellos una pigmentacin generalizada denominada ocronosis, pudindose producir artritis.
RESUMEN
Los aminocidos que exceden las necesidades de la
sntesis proteica no pueden almacenarse, y han de ser catabolizados, al igual que aquellos procedentes de las protenas del organismo que se utilizan como combustible en
algunas circustancias metablicas.
La degradacin de aminocidos se produce mayoritaritamente en el hgado. Comienza con la eliminacin del
grupo D-amino de los aminocidos, quedando el esqueleto carbonado de los mismos, que es catabolizado hasta
formar intermediarios metablicos importantes.
La eliminacin del grupo D-amino se puede producir
por transaminacin, llevada a cabo por transaminasas o
aminotransferasas que catalizan la transferencia de un grupo D-amino desde un D-aminocido a un D-cetocido. El
mecanismo cataltico de las transaminansas incluye la formacin de bases de Schiff intermediarias. El glutamato
producido en las reacciones de transaminacin puede sufrir una desaminacin oxidativa, catalizada por la glutamato deshidrogenasa, formndose in amonio (NH4), el cual,
en la mayora de los vertebrados terrestres, se convierte en
urea en el hgado, y es excretada por el rin.
Los D-cetocidos resultantes de la transaminacin son
degradados hasta intermediarios metablicos, los cuales
pueden utilizarse en la biosntesis de cidos grasos, cuerpos cetnicos y glucosa. Los esqueletos carbonados de los
20 aminocidos se transforman en una o varias de las siguientes molculas: piruvato, acetil-CoA, acetoacetil-CoA,
D-cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato y oxalacetato. Los
aminocidos que al degradarse producen acetil-CoA o
acetoacetil-CoA se denominan cetognicos; mientras que
los que se transforman en cualquiera de los otros intermediarios son glucognicos. Los aminocidos puramente cetognicos son leucina y lisina. Otros aminocidos como
isoleucina, fenilalanina, triptfano y tirosina son tanto cetognicos como glucognicos.
Se han descubierto numerosos errores congnitos del
metabolismos en las rutas catablicas de los aminocidos,
que traen consigo deficiencias en determinadas enzimas.
Estas deficiencias enzimticas pueden producir patologias
de diversa gravedad.
APLICACIONES CLNICAS
Por el gran nmero de trastornos metablicos que se aplican a lo largo de este tema, y por su especial importancia, los
casos clnicos se han integrado en los apartados correspondientes a este captulo.
191
TEMA 15
Excrecin del
nitrgeno proteico
En condiciones de
inanimacin se degradan las protenas
musculares.
194
en D-cetoglutarato y liberando NH4. El NH4 producido en el hgado es transformado en urea, mediante el ciclo de la urea,
que es excretada por el rin.
195
196
CICLO DE LA UREA
La urea es la principal forma de excrecin de nitrgeno en
los vertebrados terrestres.
La urea se sintetiza
en el hgado a travs
de una ruta metablica cclica.
La formacin de carbamoil fosfato por la
carbamoilfosfato sintetasa I, y la de citrulina, catalizada por la
ornitina transcarbamoilasa, se producen
en el interior mitocondrial.
197
En el citosol, la citrulina se condensa con aspartato formando argininosuccinato, reaccin catalizada por la argininosuccinato sintetasa, con hidrlisis de ATP a AMP y PPi, el cual es enzimticamente hidrolizado a 2Pi.
El argininosuccinato se hidroliza, por accin de la argininosuccinato liasa, en arginina y fumarato. El fumarato es el punto
de conexin entre el ciclo de la urea y el ciclo de los cidos tricarboxlicos.
La arginina es escindida en ornitina y urea por la arginasa,
una enzima exclusivamente heptica. La ornitina producida en
el citosol vuelve a entrar en la mitocondria mediante su transportador, y as se incorpora nuevamente al ciclo. La urea es
transportada al rin para su excrecin por la orina.
Para la biosntesis de una molcula de urea es necesaria la
hidrlisis de cuatro enlaces fosfato de alta energa: tres ATP y
un PPi:
La urea sintetizada
en el hgado es transportada al rin para
su excrecin por la
orina.
198
El ciclo de la urea
est regulado a travs
de la carbamoil fosfato sintetasa I mediante N-acetilglutamato,
que acta como activador alostrico de la
enzima.
En el rion y en la
mucosa intestinal
existen las enzimas
que permiten la sntesis de arginina.
RESUMEN
La excrecin del amoniaco que se produce en el proceso de degradacin proteica es esencial para el organismo,
ya que las deficiencias en su eliminacin provocan hiperamonemia, con elevacin de los niveles plasmticos y en l-
quido cefalorraquideo del amonio, y las graves consecuencias neurolgicas que puede ocasionar.
La degradacin de protenas, procedentes del exceso
ingerido en la dieta, del recambio proteico y la apoptosis
normales del organismo, as como de la degradacin de
protenas musculares en situaciones de inanicin, conduce
a la formacin de alanina y glutamina, que en el hgado
originan finalmente NH4, que es transformado en urea, la
cual es excretada por el rin. Tambin en el rin se produce NH4, procedente de alanina y glutamina, que es excretado. Otra forma de excrecin de nitrgeno es la formacin de creatinina en el msculo, este compuesto pasa a la
sangre y es excretado por el rin.
La formacin de urea en el hgado a partir de NH4 se
produce mediante una ruta metablica cclica denominada ciclo de la urea, parte del cual se desarrolla en la matriz
mitocondrial, y que comienza y termina en ornitina. Participan cinco sistemas enzimticos, el primero de los cuales,
que conduce a la formacin de carbamoil fosfato, no es
estrictamente parte de ciclo, pero introduce en el mismo, a
travs de esta molcula, el nitrgeno procedente del NH4.
El otro nitrgeno se incorpora a travs del grupo amino
del aspartato mediante la formacin de argininosuccinato,
compuesto que se escinde para formar arginina y fumarato. La arginasa, que escinde la arginina en urea y ornitina,
es especfica del hgado. La regulacin del ciclo se produce
por un activador alostrico, el N-acetilglutamato, de la carbamoil fosfato sintetasa I, as como por induccin enzimtica por incremento de los niveles de amoniaco o aminocidos en el hgado.
El fumarato producido en el ciclo es el nexo de unin
con el ciclo de Krebs, ya que este compuesto puede pasar
al interior mitocondrial y transformarse en oxalacetato, el
cual puede utilizarse para la sntesis de glucosa por gluconeognesis, transaminarse a aspartato y con ello incorporarse nuevamente al ciclo de la urea, o degradarse en el ciclo de Krebs para producir finalmente ATP.
APLICACIONES CLNICAS
Hiperamonemia
La hiperamonemia es la elevacin de los niveles de amonio
en sangre por encima de 30-60 PM, y conduce a prdida de
199
200
C)
D)
E)
F)
201
202
TEMA 16
Biosntesis
de aminocidos
Los aminoacidos
esenciales para el ser
humano son His, Ile,
Lem, Lys, Met, Phe,
Tre, Trp y Val, y han
de ingerirse con la
dieta.
BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS
NO ESENCIALES
En los siguientes epgrafes se describen las rutas biosintticas de los aminocidos no esenciales para los seres humanos.
El a-cetoglutarato es
el precusor de la biosintesis de Glu, Gln,
Pro y Arg.
204
Figura 16.1. Agrupamiento de los aminocidos en familias segn el intermediario metablico que
acta de precursor en la biosntesis.
La glutamina acta
como dadora de nitrgeno en numerosas biosntesis.
BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS
La sntesis de arginina (Fig. 16.4), necesaria para la sntesis de protenas, se produce en el rin (que carece de arginasa), pero la primera etapa de la ruta biosinttica hasta la formacin de citrulina desde glutamato tiene lugar en la mucosa
intestinal; la citrulina es transportada al rin para producir arginina. La biosntesis se produce con consumo de ATP y de
NADPH. El control de la va es mediante retroinhibicin por
arginina sobre la primera enzima de la ruta, la N-acetilglutamato sintasa.
205
206
BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS
La serina y la glicina son precursores de numerosos compuestos. Etanolamina y colina, ambas componentes de los lpidos, son derivados de la serina. La glicina participa en la biosntesis de purinas, as como en la de los sistemas cclicos porfirnicos de la clorofila, el grupo hemo y la vitamina B12;
igualmente, est implicada en la biosntesis de glioxilato, el cual
puede oxidarse a oxalato, y en la de cidos biliares, creatina y
glutation.
La biosntesis de cistena a partir de serina es una va metablica que consta de dos etapas (Fig. 16.7). La va se regula
por producto final, ya que la cistena ejerce retroinhibicin sobre la serina acetil transferasa, adems de inhibir, junto con el
sulfuro, la sntesis de esta enzima.
Tambin se forma cistena en la ruta degradativa de metionina (Fig. 16.7).
207
208
BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS
209
210
para formar treonina. Tanto la treonina como la homoserina inhiben alostricamente la actividad quinasa de la aspartato quinasa I-homoserina deshidrogenasa I, y la treonina tambin produce represin gnica sobre esta enzima, adems de inhibir
alostricamente la homoserina quinasa.
La isoleucina se biosintetiza a partir de treonina, cuya desaminacin, catalizada por la treonina desaminasa, genera
D-cetobutirato, al cual se transfiere un grupo hidroxietilo proveniente del pirofosfato de hidroxietiltiamina, catalizada por la
acetohidroxicido sintasa, para formar D-ceto-D-hidroxibutira-
BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS
to, que, tras una reduccin, seguida de deshidratacin y transaminacin, genera isoleucina. La regulacin se produce por retroinhibicin de la primera etapa especfica, as, la isoleucina
inhibe a la treonina desaminasa.
211
212
BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS
213
214
mutasa. El prefenato puede sufrir una deshidratacin y descarboxilacin, catalizada por la prefenato deshidratasa, que conduce a fenilpiruvato, el cual por transaminacin genera fenilalanina; pero si el prefenato experimenta una descarboxilacin
oxidativa dependiente de NAD, catalizada por la prefenato
deshidrogenasa, se transforma en 4-hidroxifenilpirvico, el cual
se transamina para formar tirosina.
La biosntesis bacteriana de triptfano parte de corismato,
que se transforma en antranilato por accin de la antranilato
sintasa, con glutamina como dador de nitrgeno. El antranilato reacciona con el 5-fosforribosil-1-pirofosfato (PRPP),
formndose N-(5c-fosforribosil)-antranilato por accin de la
antranilato fosforribosil-transferasa, que tras isomerizacin,
descarboxilacin y eliminacin de gliceraldehdo 3-fosfato, da
lugar a triptfano.
En cuanto a la regulacin de estas biosntesis, el corismato
inhibe alostricamente a la DHAP sintasa; en E. coli hay tres
isoenzimas de la DHAP sintasa, cada una de las cuales se inhibe por cada uno de los tres aminocidos aromticos. El prefenato inhibe a la corismato mutasa. La fenilalanina y la tirosina
inhiben tambin el primer paso de sus biosntesis especficas: la
Phe inhibe a la prefenato deshidratasa, y la Tyr inhibe a la prefenato deshidrogenasa. Igualmente, el triptfano inhibe a la antranilato sintasa.
BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS
RESUMEN
De los 20 aminocidos que constituyen las protenas,
nueve de ellos son esenciales para el ser humano, estos
son histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptfano y valina. Los seres humanos
deben ingerir estos aminocidos esenciales en la dieta.
Sin embargo, el hombre es capaz de sintetizar los otros 11
aminocidos (alanina, arginina, asprtico, asparagina, cistena, glutmico, glutamina, glicina, prolina, serina y tirosina, ste ltimo a partir de fenilalanina) a partir de intermediarios de la gluclisis y del ciclo de los cidos tricarboxlicos.
Los precursores de los aminocidos no esenciales para
el hombre son:
A) el D-cetoglutarato, del cual procede el esqueleto
carbonado de glutamato, glutamina, prolina y arginina;
B) el 3-fosfoglicerato, intermediario glicoltico a partir
del que se sintetizan la serina, la glicina y la csteina;
C) del oxalacetato proceden el aspartato y la asparagina;
D) y a partir de piruvato se sintetiza la alanina.
La regulacin de estas vas biosnteticas suele ser mediante
retroinhibicin de la primera enzima de la ruta por el producto final.
Los aminocidos esenciales para el ser humano pueden ser sintetizados por otros organismos, entre ellos las
215
216
APLICACIONES CLNICAS
Hiperglicinemia no cetsica
La glicina es un aminocido no esencial para el ser humano
que se sintetiza a partir de serina, y tambin en la ruta degradativa de treonina. El catabolismo de la glicina consiste en su
escisin en CO2 y en un grupo monocarbonado que es transferido al tetrahidrofolato para formar N5,N10-metilentetrahidrofolato, compuesto que acta como dador de grupos metilo en diversas reacciones; esta reaccin de degradacin de la glicina
est catalizada por el sistema enzimtico de degradacin de glicina, cuya deficiencia causa la hiperglicinemia no cetsica. Este
sistema enzimtico consta de cuatro subunidades polipeptdicas, en tres de las cuales se han detectado deficiencias. En esta
patologa, que se hereda como autosmica recesiva, se produce una elevacin de los niveles de glicina en los lquidos corporales, es decir, hay hiperglicinemia e hiperglicinuria moderadas
a intensas, y un aumento de la concentracin de glicina en el lquido cefalorraqudeo. Puesto que la glicina es uno de los neurotransmisores inhibidores, su incremento en lquido cefalorraqudeo puede ser una de las causas de las alteraciones neurolgicas que se observan, que incluyen retraso mental y
convulsiones. No se conoce ningn tratamiento eficaz, la reduccin de los niveles de glicina mediante transfusiones sanguneas, y la restriccin del aminocido de la dieta, as como la
administracin de folato, no modifican las alteraciones neurolgicas. En los casos ms graves, la enfermedad es mortal.
TEMA 17
Biosntesis
de porfirinas
La principal funcin de los glbulos rojos o hemates consiste en servir de transportadores de hemoglobina, la cual es responsable a su vez del transporte de oxgeno desde los pulmones a los tejidos. En algunos animales inferiores la hemoglobina circula como una protena libre en el plasma, pero en los
animales superiores y en el hombre debe viajar dentro de los
hemates o eritrocitos, para evitar su filtracin a travs de los
capilares tisulares y renales. Los eritrocitos poseen la capacidad
de concentrar la hemoglobina en el lquido intracelular hasta
unos 34 g/dL. Cuando la formacin de hemoglobina es deficiente, el transporte de oxgeno disminuye y el tamao de los
hemates puede verse reducido, alterando el valor hematocrito
(porcentaje de la sangre que corresponde a las clulas, normalmente entre el 40-45%).
BIOSNTESIS DE PORFIRINAS Y
DEL GRUPO HEMO
Los anillos porfirnicos o grupos hemo, son grupos prostticos de protenas conjugadas, hemoprotenas como hemoglobina, mioglobina y citocromos de la cadena de transferencia de
electrones y de enzimas como catalasas y peroxidasas.
La estructura de los grupos hemo consiste en un anillo porfirnico plano constituido por cuatro anillos pirrol que rodean
un tomo de hierro, el cual puede establecer seis enlaces de coordinacin con atomos diferentes. Cuatro de ellos son atomos
de nitrgeno de los anillos pirrol, cuya unin permite mantener
el hierro en el plano del anillo de porfirina. Los otros dos enlaces pueden establecerse con distintos ligandos dependiendo
218
del tipo de hemoprotena. En la cadena de transporte de electrones existen distintos tipos de citocromos, por su estructura
proteica y por la naturaleza de los grupos sustituyentes en el
hemo. Los enlaces se producen con atomos de los aminocidos
de la cadena peptdica del citocromo. En las hemoprotenas fijadoras de oxgeno, slo uno de estos dos enlaces se establece
con la porcin apoproteica, ya que el otro es ocupado por la
molcula de oxgeno (Fig. 17.1).
La biosntesis del anillo porfirnico comienza por condensacin del aminocido glicina y succinil-CoA, intermediario del
ciclo de Krebs, para formar delta-aminolevulinato (Fig. 17.2).
La reaccin es catalizada a nivel mitocondrial por una sintasa, limitante de la velocidad de reaccin. El grupo hemo inhibe
la sntesis de la enzima y bloquea su transporte hasta la mitocondria, donde se produce la catlisis.
BIOSNTESIS DE PORFIRINAS
219
220
Figura 17.4. Formacin del grupo hemo. Los sustituyentes son: A: acetilo o acetato, CH2 COOH;
P: propionilo o propionato, CH3 CH2 COOH; V: vinilo, CH CH2; M: metil o metilo, CH3.
REGULACIN
La incorporacin del
hierro se produce en
forma ferrosa
BIOSNTESIS DE PORFIRINAS
221
La regulacin de la
sntesis del hemo se
produce por inhibicin de la enzima
delta-aminolevulnico-sintetasa.
La bilirrubina soluble
o conjugada forma
parte de la bilis.
222
La fragilidad de la
membrana celular facilita la eritrocatresis o rotura de los eritrocitos a su paso por
los capilares sinusoidales.
bio metablico. Las prdidas fisiolgicas de hierro son mnimas y su regulacin se produce a nivel de la absorcin digestiva. Slo se absorbe el hierro necesario para equilibrar las prdidas. La disminucin de los depsitos de hierro favorecen la
absorcin de la vit. C, aminocidos y citratos, mientras que la
saturacin de los depsitos inhibe la absorcin junto con los
tanatos, fitatos y fosfatos que se comportan como antinutrientes de tipo mineral.
BIOSNTESIS DE PORFIRINAS
RESUMEN
223
APLICACIONES CLNICAS
Porfirias
Incluyen un grupo de enfermedades adquiridas o congnitas, de carcter autosmico dominante o recesivo, causadas
por el dficit de una enzima que interviene en la sntesis del
grupo hemo. La Porfiria eritropoytica congnita o Enfermedad de Gnther es una enfermedad de carcter autosmico recesivo, caracterizada por un defecto en la sntesis de la
enzima uroporfiringeno III cosintetasa, necesaria para la formacin de uroporfiringeno III. La enfermedad cursa con
aumento del ismero uroporfiringeno I afuncional y de sus
derivados. La destruccin prematura de los eritrocitos y la excrecin renal del uroporfiringeno I colorea la orina de forma
importante al nacimiento. El deposito en los dientes ocurre tardiamente, provocando fluorescencia rojiza o eritrodoncia por
accin de la luz ultravioleta. Existe fotosensibilidad muy grave.
El tratamiento consiste en evitar la exposicin solar y administracin de derivados hmicos que inhiben la sntesis de la enzima delta-aminosintasa y el acmulo de intermediarios no fisiolgicos. A veces es necesario la extirpacin quirrgica del
bazo para evitar la hemolsis exagerada.
224
Ictericias hereditarias
Incluyen un grupo de enfermedades congenitas de tipo
autosmico dominante. La ms frecuente es el sndrome de
Gilbert, que se caracteriza por un dficit parcial de glucuronil
transferasa, necesario para la conjugacin y consiguiente solubilizacin heptica de la bilirrubina. El aumento de bilirrubina
no conjugada o indirecta en plasma, es moderado y suele ser
intermitente, aumentando con el ayuno, ejercicio fsico, fiebre,
infecciones, etc. El fenobarbital disminuye los niveles plasmticos de bilirrubina por induccin enzimtica, aunque no se requiere tratamiento.
TEMA 18
Metabolismo
de los nucletidos:
biosntesis
y degradacin
Digestin de purinas y pirimidinas: vas de recuperacin o salvamento. Biosntesis de novo de los nucletidos de purina. Biosntesis de novo de nucletidos de pirimidina. Sntesis de desoxirribonucletidos. Biosntesis de los desoxirribonucletidos de
timina. Degradacin de purinas: sntesis de cido
rico. Degradacin de pirimidinas. Frmacos anticancerosos que bloquean las vas de biosntesis de
nucletidos.
226
La mayora de los organismos pueden sintetizar los nucletidos a partir de los nuclesidos o las bases de las que disponen
por haberlas ingerido con los alimentos o por haberlas obtenido mediante la degradacin enzimtica de los cidos nucleicos.
Estos procesos se denominan vas de recuperacin o rutas de
salvamento, ya que en estas vas se utilizan los compuestos de
purinas y pirimidinas preformadas para de nuevo sintetizar nucletidos que, de lo contrario, se perderan como bases libres
mediante la biodegradacin.
La degradacin de los cidos nucleicos puede producirse
intracelularmente, como consecuencia de la muerte celular o,
en los animales, por la digestin de los cidos nucleicos ingeridos en los alimentos.
En los animales, la hidrlisis extracelular de los cidos nucleicos ingeridos constituye la principal va de obtencin de bases y nuclesidos. Los procesos de degradacin son similares a
los que intervienen en la digestin proteica.
La fragmentacin se inicia en los enlaces fosfodister internos, catalizada por endonucleasas, como la ribonucleasa o la
desoxirribonucleasa pancretica, que actan digiriendo los cidos nucleicos en el intestino delgado; as se generan oligonucletidos, que se fragmentan de forma exonucleotdica por accin de las enzimas denominadas fosfodiesterasas, generndose mononucletidos.
Los nucletidos pueden fragmentarse de forma hidroltica
mediante un grupo de fosfomonoesterasas denominadas nucleotidasas, dando ortofosfato y el correspondiente nuclesido,
que sufre ruptura para dar la base por accin de la nuclesido
fosforilasa.
Estas reacciones son reversibles, de manera que una nuclesido fosforilasa puede catalizar tambin el primer paso de
sntesis de salvamento o recuperacin de nucletidos a partir
de bases libres. Cuando esto ocurre, el nuclesido producido
puede fosforilarse por el ATP, por la accin de una nuclesido
quinasa. Si las bases o los nuclesidos no se reutilizan para la
sntesis de cidos nucleicos a travs de las rutas de salvamento,
las bases pricas y pirimidnicas continan degradndose, hasta cido rico o E-ureido propionato.
Otra ruta de salvamento o recuperacin es la que sintetiza
nuclesidos 5c-fosfato directamente a partir de las bases libres.
En esta ruta interviene una clase de enzimas denominadas fosforribosiltransferasas y un azcar fosfato activado, el 5-fosfo-DD-ribosil-1-pirofosfato (PRPP). El PRPP es un intermediario
clave en la sntesis de novo de los nucletidos pricos y pirimidnicos. Se forma por accin de la PRPP sintetasa que activa
el C1 de la ribosa-5-fosfato mediante la transferencia al mismo
del grupo pirofosfato del ATP (Fig. 18.1).
227
228
El pirofosfato se transforma en fsforo inorgnico por accin de la pirofosfatasa. Ello hace que las fosforribosil transferasas acten la mayor parte de las veces en la direccin de la
biosntesis de nucletidos.
pirofosfatasa
PPi o 2 Pi
Igualmente
adenosina fosforribosil
transferasa
5c-monofosfato (IMP) o cido inosnico, fue descrita por J. Buchanan y G. Robert Greenberg en la dcada de los cincuenta
consiste en diez pasos metablicos. Varias de las reacciones requieren la hidrlisis de ATP, por lo cual es un proceso caro
energticamente.
Todas las enzimas implicadas en la sntesis de los nucletidos purnicos se encuentran en el citosol de la clula. No obstante, no todas las clulas (por ejemplo, los eritrocitos) son capaces de realizar esta sntesis. La ruta biosinttica parte del 5fosfo-D-D-ribosil-1-pirofosfato (PRPP) (Fig. 18.3).
El paso limitante en la sntesis de novo de los nucletidos
de purina es la formacin de 5-fosforribosilamina (PRA) a partir de PRPP y glutamina (reaccin 1). El grupo amina, procedente de la cadena lateral de la glutamina, desplaza al grupo
pirofosfato unido al C1 del PRPP. En esta reaccin la configuracin del C1 se invierte de D a E. El enlace C-N-glicosdico resultante tiene la configuracin E, caracterstica de los nucletidos
que tienen lugar en la naturaleza. Esta reaccin se ve favorecida por la hidrlisis del pirofosfato por la pirofosfatasa para formar ortofosfrico.
229
El anillo purnico se
sintetiza de novo en
las clulas de los
mamferos utilizando
aminocidos como
dadores de C y N, y
CO2 como dador de C.
El paso limitante en
la sntesis de novo de
los nucletidos de
purina es la formacin de 5-fosforribosilamina (PRA) a partir de PRPP y glutamina.
pirofosfatasa
PPi o 2 Pi
En contra de lo que parece lgico, esto es, que el anillo
purnico se formaba en primer lugar y que despus se le una la
cadena lateral de la D-ribosa-fosfato, se ha descubierto que el
material de partida es una forma activada de la ribosa-5-fosfato, sobre el que se forma, paso a paso, un ncleo purnico, lo
que conduce directamente a la produccin de un nucletido.
Para la formacin del cido inosnico (IMP) a partir de la
D-ribosa-5-fosfato se han utilizado 5 ATP y en conjunto seis
grupos fosfato de alta energa, teniendo en consideracin que
el grupo pirofosfato desplazado del 5-fosforribosil-1-pirofosfato resulta finalmente hidrolizado a ortofosfato por una pirofosfatasa.
En la va de sntesis del IMP, existen tres etapas que son inhibidas por agentes antibacterianos especficos. El antibitico
azaserina bloquea las dos transferencias enzimticas del grupo
amino de la glutamina y compite con ella, reacciones 1 y 4.
Las sulfonamidas que inhiben el crecimiento de muchas bacterias, impiden la formacin de cido flico, reacciones 3 y 9, as,
al inhibir indirectamente la ltima etapa, impiden la biosntesis
purnica.
Las clulas de los vertebrados contienen las actividades enzimticas que catalizan varios de los pasos de esta ruta en dominios separados de enzimas multifuncionales. As en las reac-
230
Figura 18.3. Sntesis del IMP (cido inosnico). R 5 P representa el grupo 5-fosfo-D-ribosilo.
231
El cido inosnico
(IMP) es el primer ribonucletido formado en la ruta de novo,
es el precursor comn de la sntesis de
los cidos adenlico
(AMP) y guanlico
(GMP).
232
Figura 18.4. Sntesis de AMP y GMP a partir de IMP. Las enzimas son:
(1) adenilsuccinato sintetasa; (2) adenilsuccinato liasa; (3) IMP deshidrogenasa;
(4) XMP-glutamina amidotransferasa o GMPsintetasa. R 5 P es ribosa-5fostato.
La formacin de GMP
a partir de IMP req u i e r e AT P c o m o
fuente de energa,
mientras que la formacin de AMP a
partir de IMP requiere GTP.
Hemos visto que la formacin de GMP a partir de IMP requiere ATP como fuente de energa, mientras que la formacin
de AMP a partir de IMP requiere GTP. Esto puede interpretarse
como una relacin recproca, es decir, cuando hay suficiente
ATP en la clula, se sintetizar GMP y viceversa, cuando hay
suficiente GTP se sintetizar AMP.
En el metabolismo, los nucletidos son activos, principalmente, en forma de nuclesidos trifosfato. El GMP y el AMP se
convierten en sus correspondientes trifosfatos a travs de dos
reacciones de fosforilacin sucesivas. La conversin en los difosfatos comporta la accin de quinasas especficas dependientes de ATP:
233
guanilato
quinasa
El ATP es el donador
de fosfato para la
conversin del GDP y
otros nucletidos difosfato al nivel de trifosfatos, mediante la
accin de la nuclesido difosfoquinasa.
Regulacin de la sntesis de
nucletidos purnicos
Tres mecanismos importantes de retroinhibicin cooperan
en la regulacin de la velocidad de la sntesis de novo de nucletidos purnicos. El punto clave de regulacin es la formacin de 5-fosforribosilamina a partir de 5-fosforribosil-1-pirofosfato, reaccin catalizada por la glutamina-PRPP amidotransferasa, que est regulada alostricamente por los productos
finales de la ruta IMP, GMP y AMP, estos nucletidos actan
como efectores negativos. El PRPP es un efector positivo.
La glutamina-PRPP-amidotransferasa, enzima alostrica, es
un monmero de 135 Kda enzimticamente activo. En presencia de IMP, AMP o GMP, la enzima forma un dmero mucho
menos activo. La presencia de PRPP favorece la forma monomrica activa de la enzima. La enzima de tejidos humanos
tiene dos centros de fijacin de nucletidos. Uno de ellos fija
especficamente los nucletidos oxopurnicos (IMP y GMP), y el
otro fija nucletidos aminopurnicos (AMP). La fijacin simultnea de AMP y GMP o IMP produce una inhibicin sinrgica de
la enzima.
El segundo mecanismo de control en la sntesis del GMP a
partir del IMP es la IMP deshidrogenasa, enzima limitante de la
velocidad y regulada por el GMP, que acta como un inhibidor
competitivo e inhibe la formacin de XMP. De la misma forma,
una acumulacin de AMP inhibe la formacin de adenilsuccinato por la adenilsuccinato sintetasa, que es la enzima limitante
de la velocidad, actuando el AMP como inhibidor competitivo.
El tercer mecanismo consiste en que se precisa GTP para la
conversin de IMP en AMP, y se precisa ATP para la conversin de IMP en GMP, un control recproco que tiende a mante-
234
La sntesis de novo
conduce a UMP en
seis pasos metablicos, se necesita la
presencia de carbamoil fosfato, aspartato y PRPP, tiene lugar
de forma distinta a la
sntesis de purinas,
puesto que el anillo
de pirimidina se forma en primer lugar y
a continuacin se engancha la ribosa-5fosfato procedente
del PRPP.
BIOSNTESIS DE NOVO DE
NUCLETIDOS DE PIRIMIDINA
Los ribonucletidos de pirimidina son la uridina 5c-monofosfato (UMP) o uridilato y la citidina 5c-monofosfato (CMP) o
citidilato, que contienen las pirimidinas uracilo y citosina, respectivamente. La sntesis de novo conduce a UMP en seis pasos metablicos, se necesita la presencia de carbamoil fosfato,
aspartato y PRPP, tiene lugar de forma distinta a la sntesis de
purinas, puesto que el anillo de pirimidina se forma en primer
lugar y a continuacin se engancha la ribosa-5-fosfato procedente del PRPP (Fig. 18.6).
235
236
El carbamoil fosfato
reacciona con el aspartato para dar Ncarbamoilaspartato
en el primer paso de
la sntesis de pirimidinas. Esta reaccin
est catalizada por la
aspartato carbamoil
transferasa o aspartato transcarbamoilasa,
y constituye la etapa
determinante de la
biosntesis de pirimidinas.
El UTP es tambin un
sustrato para la sntesis de CTP, por lo
cual la clula tiene
UTP y CTP suficientes para la sntesis de
cidos nucleicos.
formando parte de protenas multifuncionales. As, las actividades de la carbamoil fosfato sintetasa II, la aspartato carbamoil
transferasa y la dihidrooratasa estn presentes en una nica
protena trifuncional (CAD), que est formada por tres cadenas
polipeptdicas idnticas, de manera que cada una de ellas contiene los centros activos para las tres reacciones. Por otra parte,
las actividades de la orotato fosforribosil transferasa y OMP
descarboxilasa se encuentran en una protena bifuncional, definida como UMP sintasa; un defecto en esta protena bifuncional conduce a un raro trastorno clnico conocido como aciduria
ortica hereditaria; se caracteriza por fuerte anemia, retraso en
el crecimiento y elevados niveles de excrecin del cido ortico. A los pacientes se les suministra uridina, que disminuye la
formacin de cido ortico. La uridina es captada por las clulas y transformada en UMP por la uridina fosfotransferasa, y
sta en UDP y posteriormente en UTP. El UTP inhibe la carbamoil fosfato sintetasa II, con lo cual la formacin de cido ortico disminuye a niveles prcticamente normales.
El UTP es tambin un sustrato para la sntesis de CTP, por
lo cual la clula tiene UTP y CTP suficientes para la sntesis de
cidos nucleicos.
Regulacin de la sntesis de
nucletidos pirimidnicos
En las clulas de los
mamferos la regulacin de la sntesis se
produce a nivel de la
carbamoil fosfato sintetasa II, que es inhibida por UTP, un producto final de la va,
y activada por el
PRPP.
237
final de esta secuencia de reacciones. La aspartato transcarbamoilasa bacteriana consta de seis subunidades catalticas y seis
subunidades reguladoras. Las molculas de sustrato se unen a
las subunidades catalticas, mientras que el inhibidor alostrico
CTP se une a las subunidades alostricas. La enzima existe en
dos conformaciones, una activa y otra inactiva. Cuando las subunidades reguladoras estn vacas, la actividad enzimtica resulta mxima. Cuando aumentan las concentraciones de CTP,
que se une a las subunidades reguladoras, se origina un cambio en su conformacin, y como consecuencia de este cambio
se produce una conformacin inactiva de la enzima (Fig. 18.8).
La presencia de ATP previene los cambios inducidos por el
CTP y por ello evita la inhibicin (Fig. 18.9).
La regulacin de la
velocidad de la sntesis en las bacterias
tiene lugar a travs
de la enzima aspartato transcarbamoilasa,
o aspartato carbamoil transferasa, que
cataliza la primera
reaccin de la secuencia, la formacin
de N-carbamoil aspartato. Esta enzima
resulta inhibida por
el CTP, que es el producto final de esta
secuencia de reacciones.
SNTESIS DE DESOXIRRIBONUCLETIDOS
Los desoxirribonucletidos, las piezas de construccin del
ADN, contienen 2c-desoxirribosa en vez de ribosa como pentosa, no se sintetizan a partir de la desoxirribosa como elemento
de construccin, derivan de los correspondientes ribonucletidos a travs de unas reacciones en que el tomo de carbono
en posicin 2c de la D-ribosa del ribonucletido se reduce di-
238
239
240
Figura 18.11. Reduccin de los ribonucletidos por la ribonucletido reductasa (NDP reductasa).
La unin de ATP a los sitios de actividad tienden a aumentar la eficiencia cataltica de la NDP reductasa para todos los
sustratos; mientras que el dATP acta como inhibidor general
de las cuatro reacciones. La unin de los nucletidos a los sitios de especificidad modula las actividades de la enzima respecto a diferentes sustratos, de manera que se mantiene un
equilibrio en la produccin de los cuatro dNTP. As, por ejemplo, la unin de dTTP (con ATP unido en el sitio de actividad)
241
242
activa la enzima para la produccin de GDP, pero reduce su capacidad de reducir UDP o CDP (Tabla 18.1).
Tabla 18.1. Regulacin de las actividades de la ribonucletido
reductasa de los mamferos.
Nucletido unido en
Activa la
reduccin de
Inhibe la
reduccin de
Lugar de
actividad
Lugar de
especificidad
ATP
ATP o dATP
CDP, UDP
ATP
dTTP
GDP
CDP, UDP
ATP
dGTP
ADP
CDP, UDP*
dATP
Cualquier efector
ADP, GDP,
CDP, UDP
BIOSNTESIS DE LOS
DESOXIRRIBONUCLETIDOS DE TIMINA
243
El dUMP acta como sustrato para la formacin de desoxitimina monofosfato (dTMP) catalizada por la timidilato sintasa. Esta enzima transfiere una unidad de un carbono, al nivel de oxidacin de metileno, y lo reduce a nivel de metilo.
El donador del carbono es el N 5, N 10-metilentetrahidrofolato,
que en esta reaccin poco habitual acta tambin como cofactor redox, para dar dihidrofolato, como el otro producto
de la reaccin. El cofactor debe reducirse luego, por la dihidrofolato reductasa, y ha de captar otro grupo metileno, la
mayor parte de las veces a travs de la serina transhidroximetilasa o serina hidroximetil transferasa. La interrupcin de
cualquiera de estos pasos del ciclo interfiere con la formacin de nucletidos de timina. El dTMP, una vez formado, se
convierte en dTTP mediante dos fosforilaciones sucesivas
(Fig. 18.14).
DEGRADACIN DE PURINAS:
SNTESIS DE CIDO RICO
El catabolismo de los nucletidos de purina da lugar a cido rico a travs de las siguientes rutas (Fig. 18.15):
Las rutas especficas utilizadas varan en los diversos organismos y en distintos tejidos del mismo organismo. As, por
ejemplo, el AMP o bien se desamina para producir cido
inosnico (IMP) o se hidroliza para transformarse en adenosina. La desaminacin es activa en el msculo, mientras que la
hidrlisis predomina en la mayor parte de los dems tejidos
animales.
En las rutas de degradacin, la adenosina se desamina por
la adenosina desaminada (ADA) para dar inosina. Sobre la
inosina y la guanosina acta la nuclesido de purina fosforilasa
para formar hipoxantina y guanina, respectivamente.
El catabolismo de los
nucletidos de purina
da lugar a cido rico.
244
La guanina se desamina a xantina por la guanina desaminasa, una enzima abundante en el cerebro y el hgado de los
mamferos.
La hipoxantina se oxida a xantina, y la xantina a cido rico, por accin de la xantina oxidasa, una flavoenzima que contiene FAD, un tomo de molibdeno y cuatro centros Fe-S. Los
electrones obtenidos de la oxidacin de los sustratos se transfieren a cada uno de estos transportadores, que finalmente reducen el O2 a H2O2, sobre la que acta una catalasa que la des-
245
compone en H2O y O2, luego es el oxgeno molecular el aceptor de electrones en esta reaccin.
La forma ceto del cido rico est en equilibrio con la forma enlica, la cual a pH 7 pierde un protn para formar urato. El urato es el producto final de la degradacin de las purinas y se excreta como tal por la orina.
El cido rico es el producto final de excrecin del catabolismo de purinas en los primates, aves, reptiles e insectos. Pero
en muchos otros vertebrados el cido rico se degrada dando
alantoina y finalmente urea.
Una sobreproduccin de cido rico es la causa de la gota
(ver aplicacin clnica). La gota es una enfermedad que afecta
a las articulaciones y a los riones, provocada por una concentracin elevada de cido rico en la sangre y en los tejidos.
La degradacin de
los nucletidos de pirimidina se produce
por diversas rutas,
que conducen a la
produccin de uracilo
y timina.
246
DEGRADACIN DE PIRIMIDINAS
El uracilo y la timina
continan degradndose mediante reacciones anlogas, aunque los productos finales son diferentes.
247
248
cletidos. Existe un gran nmero de agentes quimioterapeticos que actan por inhibicin de una o ms enzimas de las rutas de biosntesis de nucletidos. Estudiaremos algunos ejemplos de estos agentes que representan a la vez una posibilidad
de tratamiento del cncer y una opcin para la mejor comprensin del mecanismo de accin de estas enzimas.
La primera serie de ejemplos se refiere a los compuestos
que inhiben las glutamina amidotransferasas. La glutamina
acta como dador de nitrgeno en distintas reacciones de la
biosntesis de nucletidos. Los centros de unin de la glutamina son parecidos en muchas de estas enzimas, y la mayora resultan fuertemente inhibidas por anlogos de la glutamina como la azaserina y la acivicina. Ambos son ejemplos
de inhibidores suicidas, y parecen ser buenos agentes anticancergenos.
Otras enzimas que resultan tiles para la accin de agentes
farmacolgicos son la timidilato sintasa y la dihidrofolato reductasa (Figs. 18.17-A y 18.17-B). Estas enzimas representan la
nica va celular para la sntesis de timina. Un inhibidor que
acta sobre la timidilato sintasa es el 5-fluorouracilo (5-FU)
(Fig. 18.17-B), un importante agente quimioterpico. En la clula, a travs de las vas de recuperacin, el 5-FU se convierte
en 5-fluorodesoxiuridilato (desoxinuclesido monofosfato)
(F-dUMP). Este anlogo de dUMP inhibe irreversiblemente a la
timidilato sintasa despus de actuar como sustrato normal durante una parte del ciclo cataltico. Durante la catlisis se forma
un complejo covalente entre F-dUMP, metilentetrahidrifolato y
el grupo sulfhidrilo de la enzima, que inhibe la timidilato sintasa. Es un ejemplo de inhibicin suicida, en la que una enzima
transforma un sustrato en inhibidor reactivo, que inmediatamente inactiva su propia actividad cataltica.
La sntesis de dTMP tambin puede bloquearse inhibiendo
la regeneracin del tetrahidrofolato. Analogos estructurales del
dihidrofolato, como el metotrexato (ameptoterina) y la aminopterina son potentes inhibidores competitivos de la dihidrofolato
reductasa (Fig. 18.17-B). El metotrexato es un frmaco valioso
en el tratamiento de muchos tumores de crecimiento rpido, tales como leucemia aguda y coriocarcinoma. Sin embargo, es
muy txico, mata rpidamente clulas en reproduccin, tanto si
son malignas como si no lo son. Las clulas de la mdula sea,
las epiteliales del tubo digestivo y los folculos pilosos son especialmente vulnerables a la accin de este antagonista del folato.
La utilizacin en medicina de los inhibidores de la biosntesis de nucletidos no se limita al tratamiento del cncer. Existen
otro tipo de inhibidores de la hidrofolato reductasa, como por
ejemplo la trimetoprima, que es un anlogo del folato con una
Figura 18.17. Sntesis del timidilato y metabolismo del folato como dianas de
accin quimioterpica. FdUMP nucletido derivado del Fluorouracilo.
potente actividad antibacteriana y antiprotista (protozoos fundamentalmente). La combinacin de trimetoprima y sulfametoxazol (inhibidor de la sntesis de folato) se utiliza ampliamente
para tratar procesos infecciosos.
RESUMEN
Las rutas metablicas que conducen a la formacin de
nucletidos son: las vas de novo y las vas de recuperacin. La sntesis de novo de los nucleticos empieza a partir de sus precursores metablicos, aminocidos, ribosa-5fosfato, CO2 y NH3. Las rutas de recuperacin reciclan las
249
250
bases libres y los nuclesidos liberados a partir de la ruptura de los cidos nucleicos.
El PRPP es un intermedio clave en la sntesis de novo
de los nucletidos purnicos y pirimidnicos. El anillo de
purina se forma a partir de la ribosa-5-fosfato, sobre el que
se genera paso a paso un ncleo purnico, lo que conduce
a la formacin de un nucletido. El de pirimidina se sintetiza como cido ortico unido a ribosa-5-fosfato y se transforma en los nucletidos de pirimidina.
El cido inosnico (IMP) es el primer ribonucletido formado en la ruta de novo, es el precursor comn en la sntesis de los cidos adenlico (AMP) y guanlico (GMP); la
formacin de GMP requiere ATP como fuente de energa,
mientras que la formacin de AMP requiere GTP.
El punto clave en la regulacin de los nucletidos purnicos es la formacin de 5-fosforribosilamina a partir de 5fosforribolsil-1-pirofosfato, reaccin catalizada por la glutamina-PRPP amidotransferasa, que est regulada alostricamente por los productos finales de la ruta, IMP, GMP y
AMP. Tanto el AMP como el GMP son inhibidores de su
propia sntesis.
La sntesis de novo de nucletidos de pirimidina conduce a UMP, se necesita la presencia de carbamoil fosfato,
aspartato y PRPP, tiene lugar de forma distinta a la sntesis
de purinas, el anillo de pirimidina se forma en primer lugar
y a continuacin se engancha la ribosa-5 fosfato procedente del PRPP. El primer paso de la sntesis de pirimidinas es la reaccin entre el carbamoil fosfato y el aspartato
para dar N-carbamoil-aspartato, esta reaccin est catalizada por la aspartato carbamoil transferasa y constituye la
etapa determinante de esta biosntesis. Esta enzima resulta
inhibida por CTP, que es el producto final de esta sucesin
de reacciones.
Los desoxirribonucletidos contienen 2c-desoxirribosa
en vez de ribosa, no se sintetizan a partir de 2c-desoxirribosa, sino de los correspondientes ribonucletidos a travs
de unas reacciones en que el tomo de carbono en posicin 2c de la D-ribosa del ribonucletido se reduce directamente para dar lugar al derivado 2c-desoxi, para ello se
necesitan un par de tomos de hidrgeno que, en ltimo
trmino, proporciona el NADP, pero son transportados a
la NDP-reductasa a travs de un intermedio proteico que
acta como transportador de hidrgenos, la tiorredoxina.
La biosntesis de la desoxitimidina trifosfato (dTTP) se pro-
APLICACIONES CLNICAS
La gota
La hiperuricemia puede producir la gota, que es una enfermedad provocada por una elevada concentracin de cido rico en la sangre y en los tejidos, y que afecta a las articulaciones
y a los riones, sobre todo en los varones. Las articulaciones se
inflaman debido a la precipitacin de cristales de urato sdico
en el lquido sinovial de las mismas, lo que produce dolor y
conduce al desarrollo de artritis. Los riones tambin resultan
afectados ya que los cristales de urato precipitan en los tbulos
renales.
La gota se debe, o bien a una sobreproduccin de nucletidos de purina, que como sabemos da lugar a una sntesis excesiva de cido rico, o bien a un deterioro de la excrecin de
cido rico a travs de los riones como consecuencia de una
enfermedad renal, o incluso por una muerte celular excesiva
que conduce a un incremento de la degradacin de cidos nucleicos, como sucede en los tratamientos de tumores malignos.
La sobreproduccin de cido rico como consecuencia de
un exceso de sntesis de purinas puede producirse por diversas
deficiencias enzimticas como actividad elevada de PRPP sintetasa, prdida de retroinhibicin de PRPP amidotransferasa y
por dficit en la enzima de recuperacin hipoxantina guanina
fosforribosiltransferasa (HGPRT).
En cuanto al desarrollo de la gota por causas no relacionadas con deficiencias enzimticas, puede citarse el deterioro de
la excrecin de cido rico. Un ejemplo es el de los pacientes
que sufren algunas formas de enfermedad de almacenamiento
de glucgeno, los cuales son generalmente gotosos. Una hipoglucemia prolongada produce la acumulacin de cidos org-
251
252
nicos (lactato y similares), lo cual interfiere con la excrecin tubular del cido rico en el rin.
Tambin la gota es una consecuencia de la quimioterapia y
la radioterapia del cncer, debido a una sobrecarga de purinas
causada por la degradacin de los cidos nucleicos tras la
muerte celular.
La gota puede tratarse de manera eficaz por medio de una
combinacin de terapia nutricional (restriccin de la ingesta de
alimentos ricos en purinas; hgado, productos glandulares, anchoas, vino, etc.) y farmacolgica. Se consigue una mejora importante tras la utilizacin del frmaco alopurinol, un anlogo
de la hipoxantina, que inhibe la xantina oxidasa. Esta inhibicin produce la acumulacin de hipoxantina y xantina, sustancias ms solubles en agua que el cido rico, y por tanto ms
fciles de excretar que dicho cido. Se produce por ello una
mejora de la artritis
Sndrome de Lesch-Nyhan:
deficit grave de HGPRT
La ausencia total de la enzima hipoxantina-guanina fosforribosil transferasa (HGPRT) tiene consecuencias devastadoras
para el ser humano. Este trastorno fue descrito por primera vez
en 1964 por el estudiante de medicina Michael Lesch y su tutor
en la Facultad, William Nyhan.
El sndrome de Lesch-Nyhan es un rasgo ligado al sexo, ya
que el gen estructural de la HGPRT est situado en el cromosoma Y, por lo que la deficiencia prcticamente slo se presenta
en varones. Los pacientes con este trastorno presentan una artritis gotosa grave, pero tambin sufren una disfuncin aguda
del sistema nervioso, que se manifiesta en trastornos de conducta, discapacidad para el aprendizaje y comportamientos
hostiles o agresivos, a menudo contra s mismos. En los casos
en los que la deficiencia de la actividad enzimtica de HGPRT
es casi completa, los pacientes se muerden las puntas de los
dedos o los labios, causndose automutilaciones.
Existen diferentes grados de gravedad en esta enfermedad
debido al gran nmero de mutaciones distintas que afectan al
gen de la HGPRT. La hiperuricemia que se observa en este sndrome como consecuencia de una elevada sntesis de cido
rico es claramente debida a la deficiencia de la enzima
HGPRT, que impide la recuperacin de hipoxantina y guanina,
lo que trae como consecuencia un incremento de los niveles intracelulares de PRPP y la disminucin de IMP o GMP, lo que se
traduce en una mayor sntesis de novo de nucletidos purni-
cos. Lo que todava est por dilucidar es la causa de los problemas neurolgicos asociados a esta deficiencia enzimtica. Se
piensa en la posibilidad de que los productos de degradacin
de las purinas, hipoxantina, xantina y cido rico, que no son
txicos para el sistema nervioso central de un adulto, s podran
resultar txicos para dicho sistema nervioso en el caso de un
individuo en desarrollo. Otra posibilidad es que el descenso de
la actividad HGPRT junto con un descenso de la actividad IMP
deshidrogenasa condujesen a una cada de los niveles intracelulares de GTP, lo que afectara a la transduccin de seales va
protenas G, a los niveles de tetrahidrobiopterina, necesaria
para la sntesis de neurotransmisores, y a la sntesis proteica.
Todo ello podra tener como resultado los trastornos neurolgicos que acompaan a este sndrome.
253
TEMA 19
Integracin
del metabolismo
en mamferos
La absorcin de iones
Na+ y Ca2+ por el intestino delgado se
produce por transporte activo. Los iones
K+, Cl y HCO3 por
difusin facilitada.
256
257
258
La mayora de los nutrientes absorbidos pasan de la mucosa intestinal a la circulacin sangunea, a travs de la vena porta que los conduce en primer lugar al hgado. El filtro heptico
se constituye como un paso esencial para la transformacin de
la mayora de los nutrientes, transformacin que permite la
adaptacin de los mismos a las necesidades del organismo, y
que inicia un proceso fisiolgico clave para la supervivencia del
organismo, el mantenimiento de la homeostasis. El hgado
es pues un rgano metablico de gran trascendencia, localizado estratgicamente entre el intestino y la circulacin sangunea. No obstante algunos nutrientes, como la mayora de las
grasas, eluden el filtro heptico al pasar del enterocito directamente a la linfa, que finalmente alcanza el torrente circulatorio
a travs del conducto torcico.
Los nutrientes as absorbidos van a ser utilizados por el organismo, sometidos previamente a pequeas o grandes transformaciones metablicas, que van a permitir su utilizacin para
obtener energa, monmeros para la sntesis de molculas propias, o simplemente su almacenamiento.
El metabolismo de los nutrientes es un conjunto de reacciones qumicas ntimamente relacionadas, de forma que cada
una de las vas metablicas est cuidadosamente regulada y todas ellas en conjunto estn ntimamente relacionadas e integradas en el denominado metabolismo corporal.
El metabolismo se ha modificado a lo largo de la evolucin,
de forma que se han ido seleccionando las especies que disponan de la mayor eficacia metablica, al disponer de mecanismos adecuados para sintetizar en cada momento las biomolculas necesarias, tanto desde el punto de vista cualitativo
como cuantitativo, y con el menor coste energtico. El resultado producido es una mayor adaptacin al medio.
Existen distintos niveles de regulacin:
1.
2.
3.
4.
Nivel
Nivel
Nivel
Nivel
somtico.
de rganos.
celular.
molecular.
259
membrana post-sinptica. Por su parte, las glndulas del sistema endocrino, van a liberar sustancias muy activas, las hormonas. Estas sustancias de composicin qumica muy variada se
van a distribuir por todo el organismo a travs de la sangre,
produciendo cambios metablicos en las clulas efectoras, las
cuales se sitan lejos del punto de liberacin de la hormona,
siendo sus efectos de lenta aparicin y larga duracin en comparacin con los producidos en la comunicacin sinptica. De
esta forma el sistema endocrino cumple una funcin reguladora e integradora del metabolismo de los diferentes rganos,
modificando armnicamente la velocidad de los procesos en
los diferentes tejidos, para que de su actividad multifuncional
resulte una mejor adaptacin al medio que permita la supervivencia del organismo.
El conocimiento del control que ejerce el Sistema Nervioso
Central (S.N.C.) sobre la secrecin endocrina ha experimentado profundos cambios en los ltimos aos. Todas las hormonas hipofisarias son susceptibles de ser reguladas por el hipotlamo. Esto implica que la actividad de otras estructuras
cerebrales, incluyendo la corteza, pueden modificar el equilibrio endocrino.
Adems y por otra parte los datos publicados acerca de la
importancia de los estmulos psicofisiolgicos sobre la secrecin
hormonal, son an escasos y los conocimientos sobre estos aspectos van avanzando muy lentamente en relacin a los avances sobre la descripcin de importantes vas y conexiones cerebrales. No obstante, el gran impulso actual de la investigacin
sobre la bioqumica y fisiologa de los pptidos ha permitido
clarificar procesos endocrinos poco conocidos, y ha obligado a
replantearnos las bases de la regulacin neuroendocrina.
2. Nivel de rganos: La regulacin va a depender tambin de las especializaciones metablicas de algunos rganos.
En los humanos la regulacin metablica vara segn el rgano
del que se trate.
Durante el proceso de diferenciacin se producen cambios
acentuados en la estructura y en la funcin celular, que se
acompaan de marcados cambios en el contenido enzimtico.
Cada clula, a excepcin de las clulas sexuales maduras (haploides) y clulas muy especializadas como los eritrocitos, posee la informacin gentica necesaria para la sntesis de todas
las enzimas presentes en el organismo y con ello la posibilidad
de llevar a cabo las diferentes rutas metablicas, sin embargo,
slo una proporcin de los genes se expresa, y lo hace en forma diferente segn el tipo de clula del que se trate. Esto implica la existencia de mecanismos precisos de control de la ex-
260
261
262
263
Metabolismo basal es
la energa utilizada
por el organismo en
unas condiciones determinadas.
Actividad fsica: El gasto energtico que genera la actividad fsica, para un mismo individuo, es variable y puede controlarse voluntariamente, a diferencia de lo que ocurre con la
energa del MB. Existen numerosos clculos generalmente
aceptados que tratan de orientar acerca de las necesidades de
energa para los distintos tipos de trabajo fsico en adultos normales de ambos sexos. De forma sencilla se resumen los distintos tipos de trabajo fsico en tres grupos, teniendo en cuenta las
necesidades de energa (kcal) con relacin al peso corporal (kg)
y tiempo de duracin del trabajo (horas):
264
de crecimiento, las necesidades de mantenimiento y renovacin van a ser menores. A este respecto es preciso recordar que
aproximadamente el 50% de los aminocidos proteicos son
esenciales, por lo que en caso de suministrar protenas que no
los aporten en cantidad suficiente, ser preciso suplementarlas
adecuadamente. Tambin es importante considerar que las
protenas pueden ser utilizadas para abastecer las necesidades
de energa en ausencia de otros sustratos energticos, por lo
que la funcin plstica en estos casos aumenta los requerimientos proteicos.
Para poder establecer un aporte nutricional equilibrado que
no genere ni carencias ni excedentes y que contemple los requerimientos individuales para los distintos nutrientes, es preciso tener en cuenta a modo de conclusin general lo siguiente:
Determinar el aporte energtico diario, lo que puede hacerse de forma sencilla calculando el MB y el tipo de actividad laboral y de ocio que el sujeto lleva a cabo a lo largo del da.
Una vez establecidas las Kcal/da, se distribuyen entre los
macronutrientes, teniendo en cuenta las necesidades proteicas
para mantener el balance nitrogenado. Aunque en nuestro
pas no se han establecido objetivos nutricionales, se recogen
los porcentajes que en opinin de los expertos estn ampliamente aceptados, as:
azcares ............................ 57%
grasas ............................... 30%
protenas ........................... 13% (Fig. 19.4)
265
266
Del 30% de grasas debe reservarse un 14-15% para el cido monoinsaturado oleico y slo un 7-8% para los cidos grasos poliinsaturados y grasas saturadas respectivamente. La ingesta de colesterol debe reducirse por debajo de los 300 mg.
La ingesta de protenas para hacer frente al balance nitrogenado, supone alrededor del 14% de las necesidades totales
de energa, la mitad de las cuales deben aportarse como alimentos de origen animal y la otra mitad de origen vegetal, debiendo reducirse de forma especial el consumo de carnes rojas
y huevos.
Existen mltiples combinaciones para satisfacer estas necesidades y numerosas tablas sobre la composicin de los alimentos que recogen adems las necesidades mnimas diarias de estos nutrientes y los alimentos que los contienen. Una recomendacin general, respetando la distribucin porcentual descrita,
sera la de consumir alimentos variados, e incluir de manera
abundante alimentos crudos del grupo de las frutas y verduras,
ya que la coccin destruye muchas vitaminas.
RESUMEN
La absorcin de nutrientes se produce fundamentalmente en la mitad proximal del intestino delgado, aunque
en tramos inferiores tambin se produce absorcin, fundamentalmente de iones y del excedente de agua presente
en el quimo. La mayora de los nutrientes absorbidos pasan de la mucosa intestinal por la vena porta hasta el hgado, donde son inicialmente transformados segn las necesidades del organismo. Los lpidos sin embargo eluden
mayoritariamente el filtro heptico, alcanzando la circulacin sangunea a travs de la linfa.
Los nutrientes absorbidos son utilizados por los tejidos
para la obtencin de energa, la sntesis de molculas propias o para su almacenamiento y posterior utilizacin. Todos los procesos metablicos estn ntimamente relacionados, integrados y cuidadosamente regulados a diferentes
niveles. El sistema endocrino a travs de la secrecin hormonal controla el metabolismo celular especializado segn
el tipo de tejido, rgano, y hasta compartimento celular
donde tienen lugar las reacciones qumicas, controlando
fundamentalmente la sntesis de determinadas enzimas
que juegan un papel clave en la produccin de las diferentes vas metablicas.
APLICACIONES CLNICAS
Enfermedad de Hirschsprung
Se trata de un trastorno congnito que se manifiesta en la
lactancia. Cursa con distensin abdominal, ausencia de movimientos intestinales y alteraciones nutricionales como consecuencia de la obstruccin crnica del colon. La ampolla rectal
se presenta vaca a la exploracin, siendo normal el esfnter del
ano. La informacin que se obtiene tras la exploracin con
enema opaco, pone de manifiesto un segmento estrechado,
normalmente a nivel de recto o sigma, con dilatacin por encima del mismo. El tratamiento para restaurar la defecacin normal debe ser quirrgico.
Abetalipoproteinemia
La enfermedad, de carcter autosmico recesiva, se caracteriza por la falta de sntesis de apoprotena B, necesaria para
la formacin de quilomicrones VLDL y LDL, que se presentan muy disminuidas en el plasma. Los triglicridos exgenos
se acumulan en las clulas intestinales epiteliales al no poder
pasar a la linfa, lo que provoca un cuadro de mala absorcin
exclusiva de las grasas, con el consiguiente dficit en el desarrollo del paciente. Se manifiesta en el primer ao de vida
con una clnica de diarreas, distensin abdominal, anorexia y
desarrollo anormal. Ms tarde se presentan alteraciones neurolgicas con ataxia y en la adolescencia suele aparecer retinitis pigmentaria. La clnica responde a alteraciones en las
membranas celulares por hipo y dislipemia. El anlisis bioqumico muestra niveles reducidos de colesterol y triglicridos.
La biopsia intestinal confirma el depsito de lpidos en los enterocitos. El tratamiento consiste en reducir las grasas de la
dieta, aportando triglicridos de mediana cadena y vitaminas
liposolubles.
Obesidad infantil
El progresivo aumento de la obesidad infantil es actualmente uno de los problemas ms importantes de salud pblica. La inactividad creciente y el consumo excesivo de alimentos de naturaleza grasa son las principales causas. La intervencin en estos nios debe hacerse lo ms pronto posible y
deben tenerse presentes las necesidades nutricionales que im-
267
268
TEMA 20
Caractersticas
metablicas de los
principales rganos
HGADO
Una vez absorbidos del tracto intestinal, los diferentes nutrientes son conducidos hasta las clulas hepticas. En el hga-
270
El hgado desempea
muchas funciones vitales, desde sintetizar
protenas, regular la
produccin de compuestos y transformar
o eliminar sustancias
txicas.
do, los azcares, aminocidos y lpidos sern sometidos a diferentes procesos para ser posteriormente distribuidos a travs de
la sangre a los diferentes rganos.
El hgado tiene un
papel central debido
al procesamiento y
distribucin de sustancias, y es por ello
que los dems rganos y tejidos se refieren como extrahepticos o perifricos.
Azcares: La mezcla de azcares libres que llegan al hgado van a ser transformados en glucosa 6-fosfato. Tal es el caso
de las hexosas fructosa, manosa y galactosa. La glucosa 6-fosfato puede seguir, al menos, cinco destinos metablicos:
4. Una pequea parte del acetil CoA formado en la degradacin de los cidos grasos va a rendir cuerpos cetnicos: cido acetoactico y cido beta-hidroxibutrico. Estos cidos pasarn desde la clula heptica a la circulacin para alcanzar los tejidos perifricos, donde sern
oxidados a travs del ciclo del cido ctrico.
5. Finalmente otra fraccin del acetil CoA, que se obtiene
de la degradacin de los cidos grasos en la clula heptica, ser utilizada en la sntesis de colesterol, precursor
de otros esteroides.
Aminocidos: Tras su absorcin en el tracto intestinal, los
aminocidos alcanzan el hgado, donde van a ser utilizados con
diferentes fines:
1. Parte de los mismos abandonarn la clula heptica alcanzando otros rganos a travs de la circulacin perifrica. Una vez en ellos sern utilizados en la sntesis de
nuevas protenas.
2. Otra fraccin ser utilizada por el propio hgado para la
sntesis de protenas intrnsecas y extrnsecas, que abandonarn la clula heptica para formar parte de las protenas plasmticas.
3. El exceso de aminocidos, si lo hubiere, podr ser utilizado en la produccin de glucosa mediante la gluconeognesis, si se trata de aminocios glucognicos o
mixtos. Cuando las necesidades energticas estn cubiertas, la glucosa sintetizada de esta forma se emplea
en la sntesis de glucgeno heptico para su almacenamiento. Otros aminocidos, fundamentalmente los cetognicos, sern transformados en acetil CoA, que
271
272
podr ser degradado a travs del ciclo de los cidos tricarboxlicos y la fosforilacin oxidativa rindiendo CO2,
H2O y ATP. El acetil CoA tambin podr ser utilizado
como precursor en la biosntesis de lpidos. Estos diferentes fines dependen de las necesidades energticas
del organismo en cada momento. El amoniaco liberado
en la degradacin de los aminocidos podr ser reutilizado en procesos de biosntesis de molculas nitrogenadas o bien ser eliminado como urea a travs del
proceso de urognesis. Algunos de los aminocidos
pueden transformarse en el propio hgado en otras biomolculas tales como porfirinas.
CEREBRO
El combustible preferente de las clulas nerviosas es la glucosa. El cerebro posee un metabolismo aerobio muy activo, de
tal forma que una persona adulta normal utiliza en estado de
reposo alrededor del 20% del consumo total de oxgeno. Las
neuronas apenas almacena glucgeno, lo que las hace dependientes casi segundo a segundo de la glucosa que reciben desde el torrente circulatorio. Esta glucosa procede del hgado. En
el ayuno prolongado el cerebro consume 2/3 de la glucosa que
el hgado produce, alcanzando este consumo 100 g de glucosa
al da. Si el nivel de glucosa desciende por debajo de un nivel
crtico, aun siendo este descenso poco duradero, pueden aparecer sntomas de alteraciones cerebrales que resulten graves e
incluso lleguen a ser en ocasiones irreversibles. La glucosa es
utilizada por el cerebro de forma aerbica. El ATP producido
va a ser utilizado para generar impulsos nerviosos y para la sntesis de protenas, ambos procesos son frecuentes en este rgano. El cerebro posee una concentracin muy elevada de aminocidos, algunos de los cuales son sintetizados in situ. Son especialmente abundantes el cido glutmico, la glutamina, el
cido asprtico, la glicina y el cido aminobutrico, utilizados
como neurotransmisores en la sinpsis qumica. El cerebro no
tiene capacidad para metabolizar los cidos grasos libres, sin
embargo en periodos de inanicin en los que escasea la glucosa, puede metabolizar cuerpos cetnicos y ms concretamente
cido E-hidroxibutrico. Este cido se va a producir a nivel
heptico cuando exista degradacin masiva de cidos grasos libres procedentes de la movilizacin de las reservas de triglicridos del tejido adiposo. El cido E-hidroxibutrico se oxida en
las clulas nerviosas a travs del ciclo de Krebs y posterior fosforilacin oxidativa.
273
CORAZN
El msculo cardaco presenta una intensa actividad metablica de forma permanente, la cual es de tipo aerobio. El combustible que utiliza la clula cardaca puede ser glucosa, cidos
grasos libres y cuerpos cetnicos. Todos ellos van a ser oxidados a travs del ciclo de Krebs y de la fosforilacin oxidativa.
Debido a la permanente exigencia metablica por parte del corazn, las clulas cardacas contienen un gran nmero de mitocondrias. La clula muscular miocrdica puede almacenar pequeas cantidades de fosfato de creatina, aunque no almacena
glucgeno y tampoco grasa.
RIN
Este rgano posee un metabolismo aerobio muy activo y
dispone de una importante flexibilidad metablica, pudiendo
utilizar como combustible: glucosa, cidos grasos, cuerpos cetnicos y aminocidos. Todos ellos van a ser degradados por el
ciclo de los cidos tricarboxlicos y fosforilacin oxidativa para
la obtencin de energa. La mayor parte de la misma ser utilizada en la produccin de orina. Efectivamente, ms de las 3/4
partes del ATP generado por el metabolismo aerobio renal
sern utilizadas para la formacin de orina, mediante la accin
de mecanismos de transporte activo (Fig. 20.2).
MSCULO ESQUELTICO
En condiciones de reposo el tejido muscular representa ms
del 50% de la capacidad metablica del cuerpo humano. Dicha
274
275
276
RESUMEN
Una caracterstica esencial de los organismos pluricelulares consiste en el reparto del trabajo metablico entre los
distintos rganos y tejidos, lo que les confiere un relativo
grado de especializacin. De esta forma el hgado desempea un papel central en lo que se refiere al procesamiento y distribucin de los nutrientes. Por su parte el cerebro
utiliza como sustrato preferente glucosa, pudiendo metabolizar en situaciones fisiopatolgicas cuerpos cetnicos.
La energa que obtiene en forma de ATP la emplea en generar y transmitir impulsos nerviosos. El msculo cardaco
presenta un metabolismo aerbico en todo momento,
igual que el observado para el rin. ste a su vez exhibe
una importante flexibilidad metablica al servicio de la formacin de orina fundamentalmente. Por ltimo el msculo
esqueltico est especializado en producir ATP para la
contraccin muscular, pudiendo ser su metabolismo aerobio y/o anaerobio, dependiendo de la duracin, intensidad
y grado de entrenamiento previo. De todo ello se desprende que el cerebro, corazn, rin y msculo esqueltico
poseen esquemas metablicos caractersticos y estn interrelacionados metablicamente con el hgado.
APLICACIONES CLNICAS
Adaptaciones metablicas al ayuno
Las reservas de glucosa en forma de glucgeno heptico y
muscular comienzan a disminuir a las 24 horas de no ingerir
alimento. Esta situacin provoca un descenso en la secrecin
de insulina concomitante a un aumento en la secrecin de glucagn. De esta forma las reservas grasas son movilizadas para
proporcionar energa al hgado y al msculo. Debido a la falta
de glucosa, la clula heptica degrada aquellas protenas que
presentan menor utilidad. Tras la hidrlisis proteica, se utilizan
los aminocidos glucognicos y mixtos para la sntesis de glucosa a travs de la gluconeognesis. La glucosa obtenida de
novo es utilizada preferentemente por las neuronas. Por otra
parte, el agotamiento de los intermediarios metablicos del ciclo de Krebs que se utilizan en la produccin de glucosa, provoca la falta de degradacin del acetil-CoA, metabolito que
procede de la E-oxidacin de los cidos grasos. El incremento
Diabetes Mellitus
Se trata de un sndrome crnico multifactorial, cuya principal manifestacin es la hiperglucemia, la cual es responsable de
la sintomatologa y de las complicaciones agudas y a largo plazo que durante el transcurso de la enfermedad se van a ir produciendo. Las causas de hiperglucemia se pueden resumir en
una falta de produccin de insulina o en un defecto perifrico
de la misma. Aunque se pueden diferenciar distintos tipos de
diabetes segn la etiologa, la diabetes propiamente dicha puede ser de dos clases: D.M. tipo I, tambin denominada juvenil
o insulina dependiente, en la cual la secrecin de insulina es
inexistente debido a susceptibilidad gentica (HLA), etiologa
viral o autoinmune. La presentacin suele ser brusca con evolucin hacia el coma cetoacidtico, debido a la oxidacin incompleta de cidos grasos hasta cuerpos cetnicos, responsables de la cetosis. La segunda clase de diabetes es la D.M. tipo
II del adulto o no insulina dependiente, con una importante
carga hereditaria (alta incidencia en gemelos) y resistencia tisular a la insulina por exceso de peso. Presentacin insidiosa
cuya evolucin tarda puede conducir al coma hiperosmolar. El
estilo de vida juega un importante papel en la prevencin de la
enfermedad. La determinacin de los niveles de glucemia basales y tras sobrecarga oral con glucosa son particularmente
importantes para el diagnstico, tratamiento y control de la enfermedad. En la diabetes tipo I la administracin parenteral de
la hormona es imprescindible para mantener la normoglucemia
y evitar o retrasar en la medida de lo posible las complicaciones. La diabetes tipo II se controla fundamentalmente con la
dieta, y antidiabticos orales, excepcionalmente es necesaria la
administracin de insulina.
277
TEMA 21
La regulacin
hormonal
del metabolismo
280
HORMONAS ACTIVAS EN LA
SUPERFICIE CELULAR
En la transmisin de
la informacin hormonal participan tres
elementos: un receptor, una protena de
membrana y un segundo mensajero.
RECEPTORES
Los receptores de la superficie celular son de naturaleza
proteica y presentan al menos dos dominios diferentes, uno ex-
281
El AMPc se sintetiza
a partir del ATP por
la adenilato ciclasa.
282
SEGUNDOS MENSAJEROS
Existen distintas clases de segundos mensajeros: AMPc, GMPc,
Ca2+, etc.
Existen distintas clases de segundos mensajeros, pero los mejor estudiados son los nucletidos cclicos. Otros segundos
mensajeros son los iones calcio o determinados intermediarios
metablicos producidos en la respuesta hormonal, que modifican la permeabilidad al calcio como ocurre con el inositol-trifosfato, formado a partir de fosfatidil-inositol por accin de la
fosfolipasa C. La entrada de calcio en la clula desde el lquido
extracelular o desde el retculo endoplsmico donde se almacena, ejerce diversas funciones, p.e. es responsable de la contraccin muscular, secrecin hormonal, liberacin de neurotransmisores, etc. El calcio tambin puede activar una protena intracelular, la calmodulina, provocndole un cambio de conformacin
necesario para su accin sobre determinadas enzimas celulares.
Los nucletidos por s solos no son capaces de inducir una
respuesta celular, por lo que han de interaccionar con enzimas
protena-quinasas especficas con subunidades reguladoras
para la unin al nucletido cclico y subunidades catalticas que
quedan libres tras la unin y sirven para fosforilar enzimas celulares. Tras la fosforilacin, las enzimas pueden ser activadas o
inhibidas y, como consecuencia, se modificar la actividad celular. En general las enzimas catablicas se activan y las anablicas se inhiben.
Los principales nucletidos que actan como segundos
mensajeros son el AMPc y el GMPc, y las enzimas catalticas en
cada caso son la adenilato ciclasa y guanilato ciclasa respectivamente. Cuando cesa la accin hormonal, estas enzimas se
inactivan y los nucletidos cclicos son hidrolizados hasta AMP
y GMP por fosfodiesterasas especficas, las cuales pueden ser
moduladas por diversas sustancias, tales como prostaglandinas,
cafeina, calcio, etc.
HORMONAS ACTIVAS EN EL
INTERIOR DE LA CLULA
Las hormonas esteroideas y los derivados de la tirosina se
unen al receptor especfico en el interior
de la clula y no requieren segundos
mensajeros.
Una diferencia importante entre los receptores de membrana y los receptores intracelulares es que estos ltimos no
precisan de segundos mensajeros, si bien la interaccin hormona-receptor tiene caracteristicas similares a las descritas para las
hormonas peptdicas.
Por ltimo es preciso sealar que el complejo hormona-receptor puede tener efectos directos en el citoplasma, los cuales
son independientes de los efectos producidos sobre el nucleo
celular, donde tambin puede haber receptores para las hormonas esteroideas, como se han demostrado para las tiroideas.
EFECTOS BIOLGICOS
Las hormonas peptdicas se sintetizan en forma de precursores pre-prohormonales, en el retculo endoplsmico de las
clulas endocrinas y antes de abandonarlo se suelen fragmentar dando lugar a la prohormona, que es transferida al aparato de Golgi donde ser de nuevo fragmentada y almacenada
en grnulos de secrecin que contienen el pptido de conexin
y la hormona totalmente aislada. El estmulo o seal especfica
pone en marcha el proceso de secrecin por exocitosis.
Para las hormonas derivadas del aminocido tirosina, la sntesis ocurre en el citoplasma celular, mediante una serie de reacciones catalizadas por enzimas, que como en el caso anterior
culminan con el almacenamiento de la hormona hasta el momento de su secrecin.
283
284
Las hormonas esteroideas, por el contrario, no se encuentran almacenadas en cantidades suficientes, si bien las clulas
endocrinas responsables de su secrecin contienen las enzimas
y precursores necesarios para la sntesis y liberacin casi inmediata de dichas hormonas ante la llegada de la seal especfica.
El periodo de almacenamiento previo a la secrecin hormonal, el inicio de la actividad biolgica tras la estimulacin especfica y la duracin de la misma, son factores caractersticos
de cada una de las hormonas y existen en consecuencia grandes diferencias de unas a otras.
Las hormonas peptdicas y las catecolaminas (adrenalina y
noradrenalina) circulan en sangre libremente por ser solubles
en el plasma sanguneo, mientras que las hormonas tiroideas y
esteroideas, por su escasa solubilidad, necesitan de transportadores proteicos, los cuales se comportan como almacenes circulantes de la hormona, establecindose un equilibrio dinmico entre la hormona ligada al transportador y una pequea
concentracin de hormona libre que representa la fraccin
biolgicamente activa, por ser la nica que puede unirse de
forma especfica a los receptores hormonales celulares.
El metabolismo hormonal podra definirse como la desaparicin irreversible de la hormona de la circulacin sangunea
tras su captacin especfica por la clula diana, o como la modificacin de su estructura a nivel heptico y/o renal para su total eliminacin.
Las concentraciones hormonales en plasma suelen ser muy
pequeas y se encuentran sometidas a un riguroso control. El
sistema endocrino funciona como un todo, existiendo mltiples
conexiones entre las distintas glndulas endocrinas y el otro
gran sistema de coordinacin y control de nuestro organismo,
el sistema nervioso.
El principal mecanismo de control de la secrecin hormonal es sin duda la retroinhibicin o feed-back. Prcticamente
todas las hormonas se encuentran sometidas a este mecanismo de control que se establece a travs de diferentes interme-
285
RESUMEN
La gran complejidad de las reacciones qumicas que
tienen lugar en nuestro organismo, muchas de ellas en
sentidos opuestos, y que en conjunto determinan el metabolismo corporal, necesitan un control riguroso. Las reacciones qumicas se encuentran catalizadas por protenas
286
APLICACIONES CLNICAS
Sndrome de resistencia a la insulina
Se caracteriza por una falta de respuesta perifrica a la insulina debido a mutaciones mltiples en el receptor, y cursa con
hiperinsulinismo. Es posible diferenciar entre el tipo A, de presentacin en mujeres jovenes de talla alta con tendencia al hirsutismo facial y alteraciones del aparato reproductor, fundamentalmente del tipo ovarios poliqusticos; y el tipo B, que corresponde a mujeres mayores y se acompaa de enfermedades
del sistema inmune. Clnicamente cursa con dolores articulares,
Clera
Se trata de una infeccin producida por el vibrin colrico
cuyo vehculo de transmisin es el agua y algunos alimentos de
origen marino. No existen reservorios animales y son muy raros
los portadores humanos crnicos. El periodo de incubacin es
de cinco das, al cabo de los cuales se presenta un cuadro de
diarrea acuosa con prdida de moco y electrolitos que conduce
a deshidratacin, acidosis, calambres, hipotensin, shock y
muerte si no se acta con prontitud. En caso de toxiinfeccin
alimentaria el comienzo suele ser con dolor abdominal y vmitos que preceden a la diarrea. La txina proteica presenta dos
componentes, uno que permite su fijacin a la mucosa intestinal, y otro que acta sobre la protena G de la membrana disminuyendo su actividad GTPasa, responsable de la activacin
permanente de la enzima adenilato-ciclasa, la cual produce un
aumento extraordinario de AMPc que altera el transporte de iones a travs de la mucosa intestinal, provocando el escape masivo de electrolitos acompaado de grandes volmenes de
agua hacia la luz intestinal.
287
TEMA 22
Estructura de
cromosomas y genes
CROMOSOMAS
En las clulas eucariticas, el ADN se encuentra asociado a
protenas bsicas, las histonas, formando nucleoprotenas que
se organizan de forma caracterstica para dar lugar a la cromatina nuclear. Durante la fase de divisin, la cromatina alcanza
un mayor grado de compactacin formando los cromosomas,
que estn constituidos por una nica molcula lineal de ADN,
unida a histonas en cantidades prcticamente iguales, con un
altsimo grado de empaquetamiento, cuya unidad estructural
sera el nucleosoma. Resulta sorprendente la capacidad de empaquetamiento que manifiesta el ADN. Por ejemplo, los 46 cromosomas de una clula humana contienen, en conjunto, alrededor de 7.800 Mpb en molculas de ADN que extendidas llegaran a alcanzar algo ms de 2,5 metros de longitud.
La microscopa electrnica muestra que la cromatina nuclear es una organizacin basada en cadenas de forma esfrica,
Durante la divisin
celular, la cromatina
alcanza un mayor grado de compactacin
formando los cromosomas.
290
Aminocidos
Relacin Lys/arg
Localizacin
H1
215
20,00
Conexin
H2A
129
01,25
Ncleo
H2B
125
02,50
Ncleo
H3
135
00,72
Ncleo
H4
102
00,79
Ncleo
291
En relacin con la estructura de los cromosomas, en las clulas eucariticas, durante la fase de divisin, una vez duplicado el contenido del ADN, se produce una condensacin del
mismo, dando lugar a los diferentes cromosomas. En la organizacin del ADN cromosmico los nucleosomas constituyen la
estructura bsica, los cuales se asocian para constituir fibras de
100 denominadas nucleofilamentos, y stos, a su vez, se empaquetan en fibras ms gruesas o solenoide de 300 o incluso
292
GENES
Un gen es una secuencia de ADN que
se expresa de manera
especfica codificando una cadena polipeptdica, o produciendo formas estables de RNA.
Un gen es una secuencia de ADN que se expresa de manera especfica, codificando una cadena polipeptdica a traves del
ARN mensajero o produciendo formas estables de ARN distintos del mensajero o participando en procesos de regulacin de
la expresin gnica. A los primeros se les denomina genes estructurales y a los segundos genes reguladores. Por regla general, los genes ocupan posiciones constantes en la cadena de
ADN y, en consecuencia, se correspondern con segmentos determinados en los cromosomas. En los virus, el material gentico es reducido y puede estar en forma de ADN o ARN (ver
tema 19 de la primera parte). En los ARN-virus el genoma es
muy reducido, siendo ms variable el tamao en los de ADN.
En las bacterias, existe normalmente un slo cromosoma circular que contiene, en la mayora de los casos, una nica copia
de cada gen; disponen, adems, de ADN extracromosmico
circular que constituye los denominados plsmidos que permanecen siempre aislados aunque, en determinadas ocasiones
pueden integrarse en el cromosoma circular, de forma tempo-
293
Las molculas de
ADN presentan como
caracterstica estructural la presencia de
giros en la direccin
del eje longitudinal,
llamados superenrrollamientos.
294
La importancia de los
superenrrollamientos
guarda relacin con
la compactacin del
ADN y con la separacin transitoria de
sus filamentos para
la replica o transcripcin.
a) Si un filamento trenzado que constituye un sistema estable enrollado en hlice, es girado por uno de sus extremos en el sentido que reduce el nmero de vueltas iniciales mientras permanece el otro fijo, se introduce una
tensin que, cuando se unan posteriormente los extremos para formar un crculo, se liberar provocando un
enrollamiento aadido o superenrollamiento que se conoce como superhlice negativa.
b) De manera similar, si el giro al que se somete el filamento provoca un exceso de vueltas, cuando se unan los extremos para formar un crculo, la liberacin de la tensin
provocar un superenrollamiento, en este caso conocido
como superhlice positiva.
La forma habitual de superenrollamiento en la naturaleza es
la superhlice negativa, pero experimentalmente pueden ser
obtenidas superhlices positivas de ADN, conformacin que,
en determinadas situaciones, tambin aparece de forma transitoria in vivo. Tanto una como otra no son formas privativas de
cadenas circulares de ADN, sino que stas pueden producirse
en molculas lineales siempre que sus extremos permanezcan
anclados. En la formacin de superhlices actan un tipo de
295
296
plo de reiteracin moderada se encuentra en los genes que codifican determinadas protenas, como los de las histonas, que
aparecen repetidos de forma variable, segn la especie, entre
algunos pares y 1.000 veces. Los genes de los cinco tipos de
histona, aparecen en una secuencia, separados por otros tantos
segmentos espaciadores, repetidos en tndem. Son caractersticas muy particulares de los genes de histonas el hecho de carecer de intrones y de secuencias finalizadoras de poliadenina
(Fig. 22.6).
MUTACIONES
Una mutacin es la
alteracin permanente de una secuencia
del ADN capaz de
modificar la informacin gentica previa.
Una mutacin es una alteracin permanente en una secuencia de ADN, capaz de modificar la informacin gentica
previa, lo que repercute en el producto final de su expresin,
codificando protenas diferentes, si es que el fenmeno afecta a
genes estructurales, o interfiriendo en procesos de control si se
trata de secuencias de regulacin de la expresin gentica. Pero
lo ms importante es su trascendencia, porque puede transmitirse a generaciones futuras a travs de procesos normales de
replicacin. El ADN genmico que contiene la informacin
gentica de la clula resulta irreemplazable, al no disponerse
ms que de una o dos copias completas, segn sea su condicin de clula haploide o diploide, por lo que, ante la perspectiva de produccin de errores, existen diferentes mecanismos
de reparacin para prevenir los efectos de modificaciones espontneas inducidas por mutgenos o los fallos que tienen lugar en procesos normales de replicacin.
Los tipos de mutaciones ms frecuentes son, la sustitucin
de pares de bases por otros, la eliminacin de pares de bases,
la insercin de uno o ms pares de bases y la introduccin de
modificaciones que afectan a la disposicin de los nucletidos.
La ms comn de ellas, la sustitucin de bases, puede ser de
dos tipos: transiciones, cuando se sustituye una purina con
otra purina o una pirimidina con otra pirimidina, y transversiones, cuando se sustituye una purina con una pirimidina o
viceversa.
Existen sustancias que tienen el carcter de mutgenos qumicos, unas por ser anlogas de bases como el 5-bromo-uracilo o la 2-amino-purina, causantes de transiciones AT GC; y
otras por provocar modificaciones qumicas en las bases, por
ejemplo, la hidroxilamina, que afecta especficamente a la citosina provocando su transformacin en un derivado que se
aparea con adenina para dar lugar a una transicin CG AT.
Tambin el cido nitroso es otro agente modificador capaz de
provocar desaminaciones que transforman la adenina en hipoxantina, la citosina en uracilo y la guanina en xantina, originando transiciones AT GC.
Otros agentes tienen naturaleza fsica, como las radiaciones
ionizantes y luz ultravioleta. La luz UV provoca la aparicin de
enlaces covalentes entre timinas contiguas, dando lugar a dmeros que alteran la estructura del ADN e impiden cualquier
proceso de expresin gentica o replicacin a partir de ellos.
Las clulas tienen a su disposicin diferentes mecanismos
de correccin de errores que son bien conocidos en E. coli (Tabla 22.2):
1. Reparacin de apareamientos incorrectos: Una
enzima denominada Dam metilasa produce metilacin
en las adeninas de secuencias (5')GATC, antes de la
replicacin. Una vez que se produce sta, durante un
corto periodo de tiempo pueden ser discriminadas las
hebras molde de las hijas, hasta que finalmente acte
la enzima metilasa. Un sistema enzimtico repara los
errores de apareamiento en regiones prximas a la secuencia GATC.
2. Reparacin por eliminacin de base: Cuando la alteracin corresponde a una base modificada, como
297
298
Enzimas/protenas
Sistema
reparador
Apareamientos
incorrectos
Dam metilasa
ADN helicasa
SSB
ADN polimerasa III
Exonucleasa I
ADN ligasa
Protenas MutH, MutL, MutS
Reparacin de
apareamientos
incorrectos
Bases
modificadas
ADN glucosilasas
AP endonucleasas
ADN polimerasa I
ADN ligasa
Reparacin por
eliminacin de base
Alteraciones
estructurales
en el ADN
ABC escinucleasa
ADN polimerasa I
ADN ligasa
Reparacin por
eliminacin de
nucletido
Dmeros de
pirimidina,
O6-metilguanina
ADN fotoliasas
O6-metilguanina-ADN
metiltransferasa
Reparacin directa
del ADN
desaminaciones o formacin de dmeros de pirimidina, enzimas del tipo ADN glucosilasas provocan la eliminacin de la base afectada quedando, en ese lugar,
un sitio apurnico o apirimidnico (sitios AP). Posteriormente otras enzimas AP endonucleasas eliminan el
resto desprovisto de base, que es reemplazado por el
nucletido correcto por medio de ADN polimerasa I y,
finalmente, se restablece la unin de la cadena mediante ADN ligasa.
3. Reparacin por eliminacin de nucletidos: Cuando tienen lugar importantes alteraciones en la estructura
del ADN, como por ejemplo, en la formacin de dmeros de pirimidina, acta un tipo de endonucleasa especfica que provoca la eliminacin del fragmento
daado. En E. coli interviene una enzima denominada
ABC escinucleasa capaz de provocar dos cortes, uno a
cada lado del fragmento daado. La regeneracin de la
secuencia corre a cargo de enzimas ADN polimerasa I y
ADN ligasa.
4. Reparacin directa del ADN: Enzimas ADN fotoliasas,
en el caso de dmeros de pirimidina producidos por la
exposicin a luz UV y O6-metilguanina-ADN metiltransferasa, en la formacin de O6-metilguanina por alquilacin de la guanina, reparan directamente los nucletidos
alterados, sin necesidad de provocar cortes ni eliminaciones en la cadena.
RESUMEN
Estructura de cromosomas y genes. En las clulas
eucariticas, el ADN se encuentra asociado a protenas
bsicas, las histonas, formando nucleoprotenas, para dar
lugar a la cromatina nuclear. Durante la fase de divisin,
la cromatina alcanza un mayor grado de compactacin
formando los cromosomas. La unidad estructural sera el
nucleosoma, formado por una secuencia de ADN de
unas 200 pb, enrollados alrededor de un octmero de histonas en el que entran a formar parte dos de cada uno de
los tipos H2A, H2B,H3 y H4. Las histonas son protenas
con un carcter bsico, de las cuales se distinguen cinco tipos distintos, cuatro entran a formar parte del nucleo central del nucleosoma y un quinto tipo, H1, juega un papel
importante en la conexin de nucleosomas adyacentes.
Un nivel estructural distinto es el cromatosoma, en el que
se incorpora un monmero H1. La asociacin de varios
nucleosomas unidos constituye el polinucleosoma. En los
cromosomas eucariticos los nucleosomas constituyen la
estructura bsica que se asocian para constituir fibras de
100 denominadas nucleofilamentos y stos, a su vez,
empaquetarse en fibras ms gruesas o solenoide de 300 o
incluso de 600. Los cromosomas muestran un armazn
proteico central conocido como protenas andamio al que
se unen las distintas fibras. En procariotas, el cromosoma
bacteriano es generalmente circular y se muestra unido a
la cara interna de la membrana. Un gen es una secuencia
de ADN que se expresa de manera especfica, codificando
una cadena polipeptdica o produciendo formas estables
de ARN distintos del mensajero, genes estructurales, o
participa en procesos de regulacin, genes reguladores.
En los virus, el material gentico es reducido y puede estar
en forma de ADN o ARN. En las bacterias existe normalmente un slo cromosoma circular con una nica copia de
cada gen. En el caso de las clulas eucariticas la complejidad es mucho mayor. En sus genes existen regiones codificantes o exones, separados por fragmentos no codificantes o intrones. El ADN tanto en procariotas como eucariotas presenta giros en la direccin del eje longitudinal de la
cadena que se conocen como superenrollamientos, cuya
forma habitual en la naturaleza es la superhlice negativa.
En su formacin actan un tipo de enzimas denominadas
topoisomerasas. En relacin con secuencias especficas
299
300
APLICACIONES CLNICAS
Las alteraciones en genes que intervienen en los sistemas
de reparacin de ADN conducen a diferentes enfermedades
que frecuentemente desembocan en cncer. El Xeroderma pigmentosum es una enfermedad gentica autosmica recesiva
que provoca una extremada sensibilidad a la luz solar y a la radiacin UV. Hace su aparicin en la infancia, con sequedad de
la piel, cicatrices y queratosis, acompaado de un desarrollo
atrofico de la dermis. El proceso finalmente suele conducir a la
aparicin de cncer de piel. En estudios sobre fibroblastos de la
piel se ha puesto de manifiesto, en los afectados por esta enfermedad, una manifiesta incapacidad para reparar los dmeros
de pirimidina producidos por efecto de la luz solar. En concreto
se ha sugerido un defecto en la escinucleasa que corta el fragmento daado.
Otras enfermedades degenerativas como el cncer colorrectal sin plipos hereditario (Sndrome de Lynch) se relacionan
con alteraciones en los sistemas de reparacin de apareamientos incorrectos de ADN. La mayora de los sujetos con predisposicin a esta enfermedad muestran mutaciones en dos genes
identificados como hMLH1 y hMSH2, cuyos equivalentes en E.
coli son las protenas MutS y MutL, que junto con MutH intervienen en procesos de reparacin de ADN. Probablemente, la
imposibilidad de codificar de forma correcta protenas dependientes de hMLH1 y hMSH2 permita la acumulacin de mutaciones que pueden afectar a genes que controlan la proliferacin celular, y con ello, la aparicin de la neoplasia.
TEMA 23
Replicacin y
transcripcin del ADN
Replicacin del ADN. ADN polimerasas. Transcripcin. Polinucletido fosforilasa. Transcriptasa inversa y replicasas.
La conservacin y expresin de la informacin gentica exige, por una parte, la existencia de un mecanismo de copia capaz de reproducir la totalidad del contenido gentico de una
clula, y por otra, un dispositivo adecuado que traslade parte
de la informacin del ADN a molculas de ARN, para su expresin activa. Tales mecanismos son los procesos de Replicacin
y Transcripcin del ADN que constituyen pilares centrales del
flujo de informacin gentica en los seres vivos, procesos complejos que incluyen, adems, mecanismos de control y correccin, que garantizan la integridad de la informacin que en
cada momento se est transfiriendo. Ambos procesos se basan
en un ensamblaje ordenado de nucletidos siguiendo un modelo que acta de molde, y una estricta ley de correspondencias bajo la cual una secuencia determina invariablemente otra
complementaria.
302
303
En eucariotas, la replicacin se produce a partir de varios puntos de iniciacin en cada uno de los cromosomas, lo que resulta lgico si se considera la mayor complejidad del ADN eucaritico, tanto en longitud como en
estructura.
3. La sntesis de ADN tiene lugar en direccin
5c o 3c, a cargo de ADN polimerasas, y para su inicio se requiere una pequea molcula cebadora,
habitualmente ARN. En la horquilla de replicacin, las
cadenas del ADN que se va a copiar permanecen abiertas, actuando de moldes para la insercin de desoxinucletidos trifosfato (d-NTP), por parte de la ADN polimerasa que, de esta forma, ir generando las dos cadenas hijas. Pero una caracterstica de estas enzimas es que
La sntesis de ADN
ocurre en direccin
5' o 3' y corre a cargo de ADN polimerasas.
304
incorporan los nucletidos en direccin 5c o 3c, de manera exclusiva. Esto hace que una de las cadenas, la que
coincide con dicha direccin, denominada hebra conductora o gua, se sintetice de forma continua, en tanto
que la otra, la hebra rezagada, lo hace en secuencias
cortas, conocidas como fragmentos de Okazaki, que
posteriormente son unidos (Fig. 23.3). Por otra parte, la
accin de las ADN polimerasas requiere la existencia
previa de una cadena de polinucletido sobre la cual comienza a adicionar d-NTP en su extremo 3c-OH. Puesto
que ninguna enzima puede sintetizar directamente ADN,
se utiliza un pequeo fragmento cebador de ARN, sintetizado por ARN polimerasas, que forman parte del complejo de replicacin, conocidas como primasas, siendo
posteriormente eliminado por accin exonucleasa de la
ADN polimerasa I.
Accin
AdnA
AdnB
AdnC
HU
Primasas
SSB
ADN girasa
9 pb. La fijacin de esta protena inicia el proceso de separacin de las hebras de ADN, permitiendo la actuacin de adnB,
enzima helicasa que cataliza el desenrollamiento de la cadena,
y adnC, que es necesaria para la correcta fijacin de la anterior. Una vez separadas, las hebras sencillas han de ser estabilizadas, lo que se logra con la fijacin de una protena SSB. La
apertura de la cadena provoca un aumento de superhelicidad
positiva que es eliminada por la accin de una topoisomerasa,
la ADN girasa, que introduce superenrollamientos negativos.
Queda as todo preparado para que se comience la sntesis de
las nuevas cadenas, en la siguiente fase de elongacin. Un aspecto esencial es el estricto control que la clula tiene que ejercer sobre la replicacin de su ADN, que debe producirse una
sla vez en cada ciclo. Se conocen al menos dos mecanismos
que participan en el control del inicio de la replicacin, por una
parte, la formacin de un complejo inactivo adnA-ADP, por
hidrlisis del ATP, que puede ser nuevamente reactivado por
accin de fosfolpidos cidos de la membrana; y por otra, se
han identificado protenas inhibidoras de la iniciacin cromosmica, IciA, que se fijan a los segmentos de 13 pb de la secuencia iniciadora, impidiendo la accin de la protena adnA.
305
306
307
308
ADN POLIMERASAS
Como ya se ha indicado, son las enzimas responsables de la
insercin especfica de d-NTP que muestran, adems, capacidad de correccin y reparacin. Se han estudiado con detalle
las ADN polimerasas de E. coli, desde el aislamiento de la primera por Kornberg, en 1955, lo que ha facilitado el conoci-
309
La ADN polimerasa I
es capaz de adicionar
d-NTP de forma especfica a un extremo
3'-hidroxilo de una
cadena previa de
ADN.
310
La ADN polimerasas
II est involucrada en
los procesos de reparacin del ADN.
La ADN polimerasas
III es 100 veces ms
activa para la insercin de nucletidos
que la I, siendo el
componente principal
del complejo multienzimtico responsable
de la sntesis de ADN.
Adems, se han aislado otras dos enzimas, ADN polimerasa II y ADN polimerasa III, que participan en el proceso
de replicacin de ADN. Ambas incorporan desoxinucletidos
5c-trifosfato en el extremo 3c-OH de una cadena preexistente,
manteniendo la direccin de sntesis 5c-3c y tienen, adems,
actividad 3c-5c exonucleasa. Las evidencias han puesto de
manifiesto que la ADN polimerasa II est involucrada en los
procesos de reparacin del ADN, mientras que la ADN polimerasa III es el componente principal de un complejo multienzimtico responsable de la mayor parte de la sntesis de
ADN, del que forma parte tambin la ADN polimerasa I, que
se encarga de eliminar el cebador y completa los huecos con
nuevo ADN, ademas de ejercer la misin correctora que le es
propia.
La ADN polimerasa III es un holoenzima compuesto de 10
subunidades con una eficacia para la insercin de nucletidos
del orden de cien veces mayor que la de ADN polimerasa I. El
conjunto se organiza en forma de dmero asimtrico que abraza a la cadena de ADN, formando un anillo, de manera que
ejerce su funcin deslizndose a lo largo de la cadena.
En eucariotas, tambin existen diferentes ADN polimerasas.
Se ha identificado una ADN polimerasa a, con cuatro subuni-
TRANSCRIPCIN
Es el proceso por el que se sintetiza ARN, a partir de un
fragmento de ADN, iniciando as un flujo de informacin que
culmina con la sntesis de ARNm y, finalmente, de protenas;
o con la de formas estables de ARN (ARNt, ARNr, ARNnp),
con fines de regulacin o cataltico. Las secuencias de ADN
utilizadas corresponden a genes o grupos de genes que constituyen una unidad de transcripcin, precedidos de secuencias especficas de control. Un aspecto importante del proceso
es, precisamente, que el inicio de la sntesis de ARN no se
produce en puntos cualesquiera de la cadena de ADN, sino
en lugares determinados denominados promotores, que generalmente anteceden a los genes, es decir, se localizan arriba
del nucletido que inicia la sntesis, el cual es designado
como nucletido 1. Es en estos puntos donde se fijan las
ARN polimerasas, para comenzar la transcripcin. De la doble cadena del ADN, una es la que acta como molde o cadena (), que sirve de soporte y modelo para la insercin de
ribonucletidos, y la otra es la hebra codificante o cadena (),
que contiene la informacin a transferir al ARN, comenzando
desde el nucletido 1 hasta el punto de finalizacin, abajo,
en direccin 5c-3c.
La sntesis de ARN est dirigida por ARN polimerasas dependientes de ADN que, a diferencia de las ADN polimerasas,
no requieren una cadena cebadora previa. La enzima inserta
nucletidos trifosfato de ribosa (NTP) siguiendo la complementaridad con las bases de una hebra molde de ADN, con la salvedad de que el complementario de la Adenina, en el molde,
es el uracilo, en la nueva cadena. El mecanismo de reaccin es
similar al de las polimerasas de ADN, mantenindose por tanto
la direccin de sntesis 5c-3c; y una cuestin importante es que
carecen de actividad nucleasa, por lo que no estn capacitadas
para la correccin de errores.
311
312
El ARN se sintetiza a
partir de un fragmento de ADN mediante
el proceso de transcripcin.
Transcripcin en procariotas: En las bacterias, los promotores estn situados siempre aguas arriba, constituidos por
dos secuencias que, aunque varan en los diferentes promotores, muestran nucletidos que se repiten en todos ellos, lo que
permite definir las denominadas secuencias de consenso. En E.
coli, se sitan en torno a las posiciones 10 y 35 y las secuencias de consenso son, para el primero, TATAAT, que es conocida como TATA o caja de Pribnow, y, para el segundo,
TTGAC (Fig. 23.9).
313
La sntesis de ARN es
dirigida por ARN polimerasas dependientes de ADN.
314
Se distinguen tres
ARN polimerasas diferentes en el ncleo
de las clulas eucariticas que se encargan de la sntesis de
los distintos tipos de
ARN.
Figura 23.11. (A) Localizacin de promotores en eucariotas. (B) Localizacin de los factores TFII-A, TFII-B,
TFII-D y TFII-E. La ARN-pol. II y TFII-E se unen al complejo despus de que lo hayan hecho los factores
TFII-A, D y E.
315
316
POLINUCLETIDO FOSFORILASA
La polinucletido fosforilasa es una enzima no dependiente
de ADN que polimeriza ARN de forma aleatoria incorporando
nucletidos de ribosa
para formar un polinucletido.
La biologa de los virus ha incorporado al dogma fundamental del flujo de informacin gentica nuevas posibilidades
como son la sntesis de ADN y ARN dependientes de ARN.
Como se trat en el tema 20 de la primera parte, los retrovirus son virus con ARN como material gentico, que desarrollan su ciclo de infeccin incorporndose al genoma del huesped, para lo que necesitan transcribir la informacin desde
ARN a ADN, esto es, en sentido inverso. Tal accin es llevada a
cabo por una enzima vrica denominada transcriptasa inversa o
retrotranscriptasa. Durante el proceso de infeccin, el virus introduce su genoma codificado en un ARN monohebra junto
con la enzima, que cataliza la formacin de una cadena complementaria de ADN, formando un hbrido ADN-ARN, y posteriormente degrada la cadena de ARN sustituyndola por ADN
complementario del primero, con lo que queda ultimado el duplex. Al igual que las ADN y ARN polimerasas, la transcriptasa
inversa contiene Zn2 en su molcula y, para iniciar el proceso
requiere un cebador, para lo que utiliza un ARNt que es introducido por el virus en el proceso de internalizacin. El ARNt se
aparea con su secuencia complementaria en el extremo 3c de la
cadena de ARN viral, permitiendo la accin de la transcriptasa
inversa que incorpora nucletidos en direccin 5c-3c al igual
que las dems polimerasas. Esta enzima carece de actividad
3c-5c correctora, por lo que su tasa de error es relativamente
elevada (1/20.000).
En clulas eucariticas se ha identificado una enzima que
utiliza un mecanismo similar a la transcripcin inversa, produciendo ADN a partir de ARN, en los telmeros de los cromosomas. El ADN telomrico plantea un problema especial, porque
al ser el ADN del cromosoma una estructura lineal, no es posible, con las enzimas habituales, situar un cebador en los extremos y, posteriormente, sustituirlo por ADN. Para evitar el acortamiento paulatino del cromosoma, por prdida de nucletidos
de los extremos, en cada ciclo de replicacin, existe una enzima, la telomerasa, constituida por protena y ARN que contiene copias de los fragmentos telomricos. Mediante una retrotranscripcin, la telomerasa incorpora ADN telomrico obtenido a partir del ARN.
Finalmente, existe otra enzima vrica capaz de sintetizar
ARN complementario a partir del ARN del virus, conocida
como ARN polimerasa dependiente de ARN o ARN replicasa. La enzima cataliza la sntesis de ARN en direccin 5c-3c,
requiriendo como molde ARN. Tienen una alta especificidad,
lo que hace que slo acten con ARN del virus.
317
La ARN replicasa o
ARN polimerasa dependiente de ARN es
capaz de sintetizar
ARN complementario
a partir de ARN viral.
RESUMEN
Replicacin del ADN: Es un proceso de sntesis de
ADN que permite obtener una copia exacta de otra previa
que acta como molde. Es semiconservativa; se desarrolla en ambos sentidos, a partir de un punto de origen en
procariotas, o varios en eucariotas; La sntesis de ADN tiene lugar en direccin 5c-3c, a cargo de ADN polimerasas,
y para su inicio se requiere una pequea molcula cebadora, habitualmente ARN. Una de las cadenas, la que
coincide con la direccin 5c-3c, denominada hebra conductora o gua, se sintetiza de forma continua, en tanto
que la otra, la hebra rezagada, lo hace en secuencias cortas, conocidas como fragmentos de Okazaki, que posteriormente son unidas. Como cebador se utiliza un pe-
318
queo fragmento de ARN, sintetizado por primasas, siendo posteriormente eliminado por accin exonucleasa de la
ADN polimerasa I. ADN polimerasas: Son las enzimas
responsables de la insercin especfica de d-NTP que
muestran, adems, capacidad de correccin y reparacin.
La transcripcin es el proceso por el que se sintetiza ARN
a partir de un fragmento de ADN, partiendo de lugares especficos de la cadena de ADN denominados promotores, que generalmente anteceden a los genes, y est dirigida por ARN polimerasas dependientes de ADN. Ademas
de los promotores, en las clulas eucariticas son necesarios factores de transcripcin (TF). Maduracin del
ARN: Una parte del ARN procaritico y, prcticamente,
todos los eucariticos sufren un proceso de transformacin
postranscripcional conocido como maduracin, que puede
corresponder a cortes especficos en la cadena, adicin de
secuencias nucleotdicas en ambos extremos de la cadena
o transformacin de nucletidos existentes. Polinucletido fosforilasa: Es una enzima no dependiente de ADN
que polimeriza ARN de forma aleatoria. Transcriptasa
inversa y replicasas: Los retrovirus introducen su genoma codificado en un ARN monohebra junto con una enzima transcriptasa inversa que cataliza la formacin de
una cadena complementaria de ADN, formando un hbrido ADN-ARN, y posteriormente degrada la cadena de
ARN sustituyndola por ADN complementario del primero, con lo se obtiene un dplex completo de ADN. En clulas eucariticas se ha identificado una enzima, la telomerasa, que utiliza un mecanismo similar a la transcripcin inversa, produciendo ADN a partir de ARN, en los
telmeros de los cromosomas. La ARN polimerasa dependiente de ARN o ARN replicasa es otra enzima vrica capaz de sintetizar ARN complementario a partir del ARN
del virus.
APLICACIONES CLNICAS
Desde hace algn tiempo se ha tratado de establecer una
relacin directa entre el acortamiento de los telmeros cromosmicos y procesos de envejecimiento celular que conducen
a la prdida de vitalidad y capacidad de divisin en los tejidos.
En 1986 Howard Cooke, examinando regiones telomricas de
cromosomas sexuales humanos, observ que stas eran ms
cortas en clulas somticas que en las lneas germinales, sugiriendo que la paulatina prdida de la secuencia telomrica protectora podra limitar la capacidad de proliferacin en estos tejidos. Desde entonces se ha suscitado una controversia que
poco a poco se va despejando con trabajos que aportan una
relacin causal entre acortamiento de los telmeros y senescencia celular, comprobada tanto en envejecimiento de cultivos celulares como en tejidos humanos, in vivo. La identificacin de
la telomerasa, una nucleoprotena capaz de restaurar las secuencias telomricas, mediante transcripcin inversa, a partir
del ARN que la integra, es un mecanismo esencial para el mantenimiento de la integridad de los telmeros, que abre perspectivas insospechadas. Si el acortamiento de los telmeros constituye, de alguna manera, un reloj celular que delimita la expectativa de vida en una clula, los sistemas que lo previenen
deben apuntar hacia una inmortalizacin de sta. La mayor
parte de las clulas somticas humanas no expresan una subunidad de la telomerasa conocida como hTRT (transcriptasa inversa de la telomerasa humana), con lo que, a pesar de disponer del resto de unidades de la enzima, sta no resulta activa.
Bodnar y colaboradores han comprobado que la activacin de
la telomerasa en cultivos celulares humanos a los que se haba
incorporado genes hTRT, provocaba una elongacin artificial
en los cromosomas, por adicin de secuencias repetidas
TTAGGG, que constituyen las terminaciones normales en las
regiones telomricas, acompaada de una espectacular alteracin en la capacidad de crecimiento de las clulas. Se sabe que
los telmeros humanos pierden alrededor de 100 pb en cada
ciclo de divisin y, cuando han sido eliminadas algunas pocas
kilobases, la clula detiene su divisin y envejece. Sin embargo,
se desconoce qu mecanismo est implicado en la deteccin
del acortamiento telomrico y de qu forma interviene en el
funcionamiento celular. Lo que pocos dudan es de que este
proceso tiene que jugar un papel importante como sistema supresor tumoral en clulas que hayan alterado el patrn normal
de crecimiento. El avance en este campo de investigacin abre
nuevas perspectivas en el control de las enfermedades tumorales, pero tambin en otros campos en los que sea un aspecto
clave el mantenimiento de la vitalidad celular, como en el caso
de enfermedades crnicas degenerativas o en las alteraciones
patolgicas del envejecimiento.
319
TEMA 24
Sntesis
de protenas
En el esquema del flujo de la informacin gentica, la traduccin constituye el ltimo paso que materializa la informacin contenida en el ADN, mediante la descodificacin de rdenes que determinan finalmente la secuencia de cadenas polipetdicas concretas. Unas molculas del tipo ARN transferente
actan como adaptadores encargados de hacer corresponder
las distintas rdenes genticas, transcritas desde el ADN a
ARNm, y dirigir la insercin de aminocidos de forma especfica, de tal manera que se establece una correspondencia entre
la secuencia de nucletidos y la cadena de aminocidos sintetizada, correspondencia que sustenta el concepto de cdigo
gentico. El orden en el que aparecen los distintos nucletidos
en el ADN es, pues, determinante de la composicin del polipptido que se sintetiza, concretamente, se sabe que cada grupo de tres constituye una orden gentica elemental que dirige
la insercin de un aminocido determinado y es conocido
como codn. El conjunto de codones responsables de la sntesis de una cadena polipeptdica completa se ordena a lo largo
de una secuencia de ADN constituyendo un gen. La sntesis de
protenas tiene lugar en fases. Tres son comunes a otros procesos de sntesis de cadenas complejas: Iniciacin, elongacin y
finalizacin. En sta han de considerarse, adems, otras fases
adicionales: una previa de carcter preparatorio, con la activacin de aminocidos, y otra, posterior a la finalizacin, que
consiste en la maduracin y plegamiento del polipptido formado. En el proceso participan ms de un centenar de molculas distintas, lo que pone de manifiesto su complejidad. Un grupo de ellas se estructuran formando los ribosomas, verdaderas
maquinarias de montaje en la sntesis de protenas en las que
322
RIBOSOMAS
Los ribosomas son
orgnulos celulares
desprovistos de membrana, constituidos
por diferentes tipos
de ARN ribosmico
(ARNr) y protenas
que dirigen el proceso
de sntesis proteica.
Son orgnulos celulares desprovistos de membrana, constituidos en su mayor parte por diferentes tipos de ARN ribosmico (ARNr) y protenas que actan, en realidad, como un sistema multienzimtico que dirige el proceso de sntesis de protenas. En las clulas procariticas tiene un coeficiente de
sedimentacin de 70S y est formado por dos subunidades,
una grande y otra pequea, de 30S y 50S, respectivamente
(Fig. 24.1). La subunidad pequea est consituida por un ARNr
16S y 21 protenas que se identifican de la S-1 a S-21. La subunidad grande la forman dos tipos de ARNr, 5S y 23S, y 34 protenas que se conocen como L-1 a L-34. En cada una de ellas
se localizan puntos crticos donde tienen lugar los diferentes pasos de la sntesis de protenas. En la porcin pequea, se localiza el punto de unin del ARNm, prximo al extremo 3c de la
cadena de ARNr 16S. En esta misma subunidad, en una hendi-
SNTESIS DE PROTENAS
323
ACTIVACIN DE AMINOCIDOS
Es una fase preparatoria que tiene un objetivo doble, por
una parte, capacitar a los distintos aminocidos para que puedan ser incorporados a la cadena naciente que se va a sintetizar, mediante su unin a un transportador que es el ARNt; y,
por otra, establecer un sistema de correspondencias mediado
por el por el propio ARNt, al que se unen de forma especfica,
a travs del cual puede ser interpretado el cdigo gentico.
Adems de los 20 aminocidos y otros tantos, o ms, ARNt,
participan en esta fase enzimas aminoacil-ARNt sintetasas,
cada una de ellas es especfica de la unin de un aminocido a
su ARNt correspondiente, como establecieron Paul Zamecnik y
Mahlon Hoagland en 1957. Son enzimas dependientes de ATP
y Mg2 que catalizan la reaccin:
324
Tanto el tamao de
los aminocidos
como sus propiedades, juegan un papel
preponderante en la
unin con el ARNt
adecuado.
SNTESIS DE PROTENAS
325
La fase de iniciacin
comienza con la unin
del ARNm a la unidad pequea del ribosoma y posterior incorporacin de un
ARNt iniciador.
326
SNTESIS DE PROTENAS
327
328
Figura 24.4. Ciclo de elongacin. (A) Complejo de iniciacin. (B) Incorporacin del aminoacil-ARNt siguiente, con intervencin del factor EF-Tu. (C) Unin peptdica catalizada por la peptidiltransferasa. (D) Desplazamiento del ribosoma, con posterior expulsin del ARNt desacilado.
SNTESIS DE PROTENAS
te de energa. As, el ciclo se va repitiendo en tanto que el ribosoma se desplaza en direccin 3c, incorporando un nuevo
aminocido cada vez, con lo que la cadena polipeptdica se
alarga desde su extremo amino hacia el carboxilo terminal. El
mismo ARNm puede ser ledo por varios ribosomas a la vez
que constituyen un polirribosoma, lo que aumenta la eficacia
del proceso.
En eucariotas, el ciclo de elongacin sigue pasos similares, con factores denominados eEF-1D, eEF-1EJ y eEF-2, cuyas acciones se corresponden con los de procariotas EF-Tu,
EF-Ts y EF-G.
El proceso de elongacin contina hasta que se incorpora
un triplete que tiene como significado la finalizacin de la sntesis. En procariotas participan tres factores de liberacin (RF)
que intervienen en la rotura del enlace que une la cadena polipeptdica al ARNt, en la liberacin como polipptido libre y en
la separacin de las subunidades del ribosoma que, de esta forma, queda inativo. EL factor RF-1 reconoce los codones terminadores UAG y UAA, en tanto que RF-2 reconoce a UGA y
UAA En eucariotas un solo factor de liberacin eRF reconoce
los tres codones de finalizacin.
A partir de ahora, la cadena polipeptdica entrar en una
fase de maduracin en la que es sometida a plegamiento y modificaciones que incluyen proteolsis en puntos especficos, modificacin de cadenas laterales de determinados aminocidos,
formacin de enlaces covalentes entre puntos determinados,
generalmente puentes disulfuros entre restos de cistena, e incorporacin de grupos prostticos, entre las ms relevantes.
329
Durante la fase de
maduracin las protenas son sometidas
a plegamiento y modificaciones que incluyen proteolsis en
puntos especficos de
la cadena.
INHIBIDORES DE LA SNTESIS
DE PROTENAS
La posibilidad de interferir de forma especfica e irreversible
sobre la mayor parte de los procesos que constituyen la sntesis
de protenas, a travs de sustancias inhibidoras, es un fenmeno ampliamente utilizado en la naturaleza como estrategia
competitiva entre los distintos seres vivos, especialmente microorganismos. Antibiticos y toxinas integran la mayor parte del
arsenal de este tipo de sustancias. Los aminoglucsidos (estreptomicina, neomicina, tobramicina, etc.) actan inhibiendo la
sntesis bacteriana de protenas en etapas iniciales de activacin y en la formacin del complejo iniciador. La estreptomicina impide la translocacin del ribosoma a lo largo del ARNm lo
que bloquea la traduccin e impide la incorporacin de nuevos
ribosomas. Las tetraciclinas se unen a la subunidad 30S de ri-
330
bosomas bacterianos impidiendo la incorporacin del aminoacil-ARNt al locus A y, adems, ejercen un efecto quelante sobre
el Mg2, dificultando la unin de las dos subunidades ribosmicas. Los fenicoles (cloranfenicol) bloquean la transferencia de
la cadena peptidlica del locus P al locus A, impidiendo la formacin del enlace peptdico, efecto que puede aparecer tambin en algunas clulas eucariticas, lo que explica la toxicidad
de estos frmacos.
Otro grupo de inhibidores con especial repercusin en el
hombre son las toxinas. La toxina diftrica, procedente del
Corynebacterium diphteriae, acta sobre el factor de elongacin eucaritico eEF-2, responsable de la translocacin del ribosoma. La toxina produce una ADP-ribosilacin en un resto
modificado de la histidina, denominado diftamida. La transformacin de la diftamida bloquea la capacidad de eEF-2 para
promover el desplazamiento del ribosoma sobre el ARNm.
Tambin la ricina, procedente del ricino, tiene una accin inhibidora sobre los ribosomas eucariticos.
EL CDIGO GENTICO
De los 64 tripletes de
nucletidos identificados, 61 codifican
aminocidos y tres,
UAA, UAG y UGA,
son tripletes de finalizacin, provocando
la liberacin de la cadena peptdica sintetizada.
Desde la identificacin de los cidos nuclicos como soporte de la informacin gentica, se haca evidente que el orden
en el que apareca la secuencia de nucletidos codificaba la
insercin de aminocidos en la sntesis de una cadena polipeptdica. Puesto que son 20 los aminocidos a codificar, la
mnima unidad de codificacin habra de construirse al menos
con secuencias de tres nucletidos, ya que de ello resultaran
combinaciones suficientes para este propsito (43 64). En los
aos sesenta, los trabajos realizados por Nirenberg, Mathaei y
Leder y finalmente las observaciones de Khorana contribuyeron decisivamente a la identificacin de los tripletes de nucletidos que codificaban todos los aminocidos, estableciendo
una especie de diccionario que se conoce como cdigo gentico (Tabla 24.1).
De las 64 combinaciones, 61 codifican la insercin de aminocidos y tres, UAA, UAG y UGA, se denominan codones sin
sentido, cuyo papel es indicar el punto de finalizacin del proceso, provocando la liberacin de la cadena polipeptdica, junto con los correspondientes factores de liberacin.
Una de las caractersticas ms notorias del cdigo gentico
es el hecho de que un mismo aminocido venga codificado por
varios codones, por lo que se dice que el cdigo est degenerado, sin embargo, ello no quiere decir que sea ambiguo, puesto
que un mismo triplete slo puede especificar un aminocido
SNTESIS DE PROTENAS
331
UUU
UUC
UUA
UUG
Fen
Fen
Leu
Leu
UUC
UUC
UCA
UCG
Ser
Ser
Ser
Ser
UAU
UAC
UAA
UAG
Tirl
Tir
Final
Final
UGU
UGC
UGA
UGG
Cis
Cis
Final
Trp
U
C
A
A
CUU
CUC
CUA
CUG
Leu
Leu
Leu
Leu
CCU
CCC
CCA
CCG
Pro
Pro
Pro
Pro
CAU
CAC
CAA
CAG
His
His
Gln
Gln
CGU
CGC
CGA
CGG
Arg
Arg
Arg
Arg
U
C
A
A
AUU
AUC
AUA
AUG
Ile
Ile
Ile
Met
ACU
ACC
ACA
ACG
Tre
Tre
Tre
Tre
AAU
AAC
AAA
AAG
Asp
Asp
Lis
Lis
AGU
AGC
AGA
AGG
Ser
Ser
Arg
Arg
U
C
A
G
GUU
GUC
GUA
Val
Val
Val
GCU
GCC
GCA
Ala
Ala
Ala
GAU
GAC
GAA
Asp
Asp
Glu
GGU
GGC
GGA
Gli
Gli
Gli
U
C
A
concreto. El orden en que se lee un codn es 5c-3c, como corresponde a la direccin de avance del ribosoma, y el triplete
anticodn del ARNt se inserta en direccin 3c-5c, es decir, que
la primera base del codn se aparea con la tercera del anticodn. De los tres nucletidos del transferente, el primero de
ellos puede formar combinaciones al margen del patrn de
Watson y Crick, mediante puentes de hidrgeno ms dbiles
que las uniones A-U y G-C. Este hecho sustenta la hiptesis del
balanceo, que afecta a la unin de los ARNt al mensajero, y
que justifica la existencia de ms de un codn para la mayora
de los aminocidos. Segn esto, los dos primeros nucletidos
del codn establecen uniones estrictas, segn el modelo habitual, con el tercero y segundo del anticodn, respectivamente,
siendo responsables de la especificidad definitiva de la secuencia, en tanto que la tercera base del triplete codn puede unirse, de manera menos especfica, con el primero del anticodn,
lo que hace que un mismo aminocido pueda ser codificado
por secuencias que se diferencien en el tercero de los nuclotidos, dentro de unos lmites. As, arginina o leucina disponen de
hasta seis secuencias codificadoras, mientras que triptfano o
metionina slo de una. La hiptesis del balanceo puede esquematizarse segn cuatro relaciones establecidas por Crick:
1. Las dos primeras bases de un codn establecen uniones
estrictas con el anticodn, segn el modelo de apareamiento de Watson y Crick.
2. La primera base de un anticodn, que se aparea con la
tercera del codn, determina el nmero de codones que
pueden ser compatibles. As, cuando se trata de C o A,
332
Figura 24.5. Ejemplo de utilizacin de diferentes marcos de lectura en el gen D, del ADN del virus IX174,
que contiene el gen E. En la secuencia superior, la lectura a partir del triplete iniciador AUG en el ARNm
transcrito da lugar a una protena, en tanto que una modificacin en el marco de lectura que afecta al codn
UAU (tyr), es ledo como AUG (Met), lo que inicia una segunda protena.
El cdigo gentico es
universal, siendo de
aplicacin a la totalidad de los seres vivos.
El cdigo gentico tiene una vigencia universal, siendo aplicable a la totalidad de los seres vivos, con algunas excepciones
encontradas en mitocondrias, cloroplastos y algunos eucariotas
unicelulares.
SNTESIS DE PROTENAS
RESUMEN
La traduccin constituye el ltimo paso que materializa
la informacin contenida en el ADN. Unas molculas del
tipo ARN transferente actan como adaptadores dirigiendo la insercin de aminocidos de forma especfica, de tal
manera que se establece una correspondencia entre la secuencia de nucletidos y la cadena de aminocidos sintetizada. Un grupo de tres nucletidos consecutivos, en el
ARNm, constituye una orden gentica elemental que dirige la insercin de un aminocido determinado y es conocido como codn. Los ribosomas son orgnulos celulares
desprovistos de membrana, constituidos en su mayor parte por diferentes tipos de ARN ribosmico (ARNr) y protenas que actan como un sistema multienzimtico que dirige el proceso de sntesis de protenas. La sntesis de protenas se produce en fases: Activacin de aminocidos:
con un objetivo doble, capacitar a los distintos aminocidos para que puedan ser incorporados a la cadena naciente y establecer un sistema de correspondencias que interprete el cdigo gentico. Iniciacin: que comienza con la
unin del ARNm a la unidad pequea del ribosoma, en la
que intervienen factores de iniciacin, y posterior incorporacin de un ARNt iniciador. Finalmente, se incorpora al
conjunto la unidad grande del ribosoma, quedando todo
preparado para la siguiente fase. Elongacin: donde tiene lugar la insercin sistemtica de aminocidos para
construir un pptido, segn las indicaciones codificadas
por el ARNm. Finalizacin: el proceso de elongacin
contina hasta que se incorpora un triplete que tiene
como significado la finalizacin de la sntesis. Maduracin: en la que los polipptidos sintetizados son sometidos a plegamiento y modificaciones que incluyen proteolisis, modificacin de cadenas laterales, formacin de enlaces covalentes, generalmente puentes disulfuros e
incorporacin de grupos prostticos. Inhibidores de la
sntesis de protenas: los aminoglucsidos (estreptomicina, neomicina, tobramicina, etc.) inhiben la sntesis bacteriana en etapas iniciales de activacin y en la formacin
del complejo iniciador. La estreptomicina impide la translocacin del ribosoma a lo largo del ARNm. Las tetraciclinas impiden la incorporacin del aminoacil-ARNt al locus
A y, adems, ejercen un efecto quelante sobre el Mg2, dificultando la unin de las dos subunidades ribosmicas. Los
333
334
fenicoles (cloranfenicol) bloquean la transferencia de la cadena peptidlica del locus P al locus A. La toxina diftrica
acta sobre el factor de elongacin eucaritico eEF-2, responsable de la translocacin del ribosoma. La ricina, procedente del ricino, tiene una accin inhibidora sobre los ribosomas eucariticos. El cdigo gentico: se han identificado los tripletes de nucletidos que codifican todos los
aminocidos, lo que se conoce como cdigo gentico. De
las 64 combinaciones, 61 codifican la insercin de aminocidos y tres indican finalizacin del proceso. Se dice
que el cdigo est degenerado por el hecho de que un
mismo aminocido puede estar codificado por varios codones, pero no es ambiguo, puesto que un mismo triplete
slo puede especificar un aminocido concreto. El cdigo
gentico tiene una vigencia universal, con algunas excepciones encontradas en mitocondrias, cloroplastos y algunos eucariotas unicelulares.
APLICACIONES CLNICAS
Por lo general, el marco de lectura de un ARNm es nico y
comienza con la primera base del triplete contiguo al AUG iniciador. No obstante, en determinadas ocasiones, las modificaciones en el patrn de lectura permiten la obtencin de formas
variadas del polipptido, conservando su funcionalidad o bien
adquiriendo otra (vase el apartado Cdigo Gentico). Sin
embargo, otras variaciones en el marco de lectura del ARNm
conducen a alteraciones patolgicas como las que tienen lugar
en relacin con la sntesis de hemoglobina, como consecuencia de alteracin en los codones terminadores. Las talasemias
constituyen un conjunto de sndromes que afectan a la estructura y tamao de las cadenas D y E que integran la hemoglobina. La talasemia D se produce por mutacin en el codn terminador UAA, en posicin 142, lo que provoca cadenas de
globina D ms largas de lo normal, por lo general de 172 aminocidos, en lugar de 141. En la talasemia E0 no se sintetiza la
globina E debido a una mutacin en el codn 17 del gen, que
transforma AAG (lisina) en el terminador UAG. Los pptidos
obtenidos no tienen capacidad para constituirse como cadenas E funcionales y, en consecuencia, la globina D se acumula
precipitando y alterando la membrana celular, provocando un
sndrome hemoltico. Otras mutaciones que alteran el marco
de lectura normal del ARNm que codifica cadenas de globina
SNTESIS DE PROTENAS
335
TEMA 25
Tecnologa de
ADN recombinante
FUNDAMENTOS DE LA CLONACIN
El conjunto de bacterias que surgen de una bacteria aislada
en una placa de cultivo, y que se conoce como colonia, es, sencillamente, un clon. Clonar es hacer copias idnticas de unos
organismos, clulas, virus o molculas de ADN derivadas de la
replicacin de un nico progenitor gentico. Mediante la clonacin se puede disponer de cantidades suficientes de un nico
tipo de clulas.
338
Etapas de la clonacin:
1. C o r t e d e l A D N
genmico por sitios especficos.
2. Eleccin de molculas de ADN (vectores) capaces de
autorreplicarse.
3. Unin de los fragmentos de ADN a
los vectores.
4. Introduccin de
los fragmentos de
ADN-vector en clulas husped.
5. Seleccin e identificacin de clulas
husped con el vector e inserto adecuado.
Figura 25.2. Fragmentos de ADN obtenidos de un genoma con diferentes enzimas de restriccin. Los fragmentos de mayor tamao son los de parte superior. El tamao de los fragmentos se conoce comparando con fragmentos
patrones de longitud conocida.
339
340
341
hern blotting) en honor a su diseador E. M. Southern. De forma similar se pueden separar molculas de ARN por electroforesis en gel e identificar secuencias concretas por hibridacin.
En este caso se denomina transferencia Northern. Tambin se
puede aplicar esta tcnica para detectar una protena determinada unindola a un anticuerpo especfico y entonces se denomina transferencia Western. Resumiendo, las tcnicas Southern, Northern y Western se corresponden respectivamente
con las transferencias de ADN, ARN y protena.
VECTORES DE CLONACIN
En E. coli, el microorganismo que ms se emplea en clonacin y el mejor conocido molecular y funcionalmente, se utilizan tres vectores o vehculos de clonacin: los plsmidos, los
bacterifagos y los csmidos. Los plsmicos son molculas de
ADN circular de doble cadena extrageniomales y que se replican independientemente del cromosoma bacteriano. Su tamao oscila entre 2 y 400 kilopares de bases (Kpb), transportan genes para la inactivacin de antibiticos, produccin de
toxinas y degradacin de productos naturales. Los plsmidos
no son imprescindibles para la vida de las bacterias, algunas no
contienen ninguno y otras pueden contener hasta veinte. Se
pueden clasificar en conjugativos y no conjugativos dependiendo de si llevan o no un conjunto de genes de transferencia, denominados trans, que favorece la conjugacin bacteriana es
decir, la transferencia de material gentico de una bacteria a
otra. Los plsmidos tambin se pueden introducir sin el concurso de ningn elemento por transformacin.
Tanto en el proceso de conjugacin como en el de transformacin para detectar el ADN plsmidico, se necesita un mtodo de seleccin. La estrategia ms comn es introducir en el
plsmido un gen que la clula husped necesita para crecer
bajo determinadas condiciones o un gen que confiera resistencia frente a un antibitico, en este caso slo aquellas clulas
bacterianas que porten el plsmido sern resistentes al antibitico y podrn crecer en medios que lo contengan.
Uno de los plsmidos ms utilizados es el pBR322, que contiene genes de resistencia a la tetraciclina y a la ampicilina. El
plsmido contiene una serie de sitios especficos que pueden
ser cortados por enzimas de restriccin para introducir fragmentos de ADN. La insercin de ADN en el punto de corte de
EcoRI no altera ninguno de los dos genes de resistencia a los
antibiticos. Sin embargo, la insercin en los puntos de corte a
los Hind III, Pal 1I o Ban HI inactiva el gen de resistencia a la
Vectores de clonacin:
Plsmidos: pBR322
pBR328
Bacterifagos: Fago
l, T2, Fago m.
Csmidos.
342
Figura 25.5. Transduccin o infeccin por fagos de una bacteria. El ADN del
fago controla el sistema metablico y replicativo bacteriano y termina por destruirla. En algunos casos el ADN del fago se inserta en el de la bacteria.
tetraciclina, y el PstI resistencia a amplicilina. Las clulas bacterianas que contengan pBR322 con un fragmento de ADN insertado en el punto de corte de, por ejemplo, Hind III, son resistentes a la ampicilina y sensibles a la tetraciclina, y se pueden seleccionar fcilmente observando las colonias que crecen
en amplicilina y no aparecen en la placa que contiene tetraciclina. Las clulas que no portan el plsmido son sensibles a los
343
344
dos antibiticos, mientras los que lo portan, pero no llevan insertado el ADN, son resistentes a ambos.
El bacterigrafo ms utilizado como vector es el fago O. Este
bacterigrafo tiene un mecanismo muy eficaz para introducir
ms de 48 Kpb de ADN en la bacteria. El procedimiento general para clonar ADN en el fago O se basa en dos caractersticas
de su genoma:
1) Cerca de un tercio de su genoma puede ser reemplazado por ADN forneo.
345
346
ESTRATEGIA DE LA CLONACIN
La clonacin de genes eucariotas no se
puede realizar directamente del ADN, ya
que ste est constituido por exones e intrones.
La clonacin de un gen es un procedimiento en teora relativamente sencillo. Si el ADN procede de una clula bacteriana,
una vez extrado y purificado se trata con una enzima de restriccin que deje extremos cohesivos. Si se elige como vector de clonacin, un plsmido (pBR322) se corta con la misma enzima de
restriccin para que queden extremos que se complementen con
los de los fragmentos de ADN. Ambos elementos se unen mediante la ADN ligasa. Los plsmidos con el inserto sufren una
primera seleccin en placas con antibiticos a los que son resistentes. Posteriormente, bien con una sonda, de forma semejante
a como se identifican los fragmentos de ADN, o bien extrayendo
el plsmido, cortndolo en la misma enzima de restriccin y realizando electroforesis se pueden seleccionar aquellas clulas bacterianas que llevan el plsmido con el inserto de ADN de inters.
La clonacin de genes eucariticos (vegetales o animales)
plante, al principio, serios problemas, puesto que la mayora
de sus genes son un conjunto de intrones y exones. Por ello, estos genes no pueden ser expresados en bacterias que carecen
de la maquinaria necesaria para cortar los intrones y eliminarlos del transcrito. Esta dificultad se supera introduciendo en la
bacteria plsmidos con fragmentos de ADN complementario
(ADNc) del ARNm. Esto es, existe una enzima denominada
transcriptasa inversa que sintetiza ADN a partir de un ARNm.
Para su accin la enzima requiere:
a) Los cuatro desoxirribonuclesidos trifosfato (dNTP);
b) ARNm purificado.
Posteriormente, se forma un doble cordn ADN-ARN que
se somete a degradacin alcalina para hidrolizar el ARN. El
ADN monocatenario o de simple cordn se trata con ADN polimerasa que requiere los 4 dNTP, un cebador o primer y la
cadena de ADN que le sirve de molde. El resultado es un fragmento de ADN bicatenario que se denomina ADNc.
347
A partir de este ADNc el procedimiento sigue el mismo camino que la clonacin de fragmentos de ADN de clulas procariticas.
Tcnicas en ingeniera gentica: PCR y secuenciacin
de ADN.
Existen dos tcnicas que han supuesto un avance espectacular en la investigacin sobre el ADN genmico:
a) La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
b) La secuenciacin de fragmentos de ADN.
Anteriormente hemos estudiado que la clonacin del ADN
genmico permite lograr dos objetivos importantes: Primero
separa cada fragmento de ADN de los dems del genoma, y
segundo, amplifica segmentos de ADN seleccionados. Despus
de que el ADN o regin particular del ADN ha sido clonado,
debe conocerse su secuencia.
La tcnica de PCR permite obtener millones e incluso miles
de millones de copias de cualquier secuencia seleccionada del
ADN genmico en unas pocas horas. Una propiedad importante de esta tcnica es que no hace falta que el segmento de
ADN elegido sea separado del ADN genmico antes de comenzar el procedimiento de amplificacin. Sin embargo, una
vez que se ha amplificado, el segmento puede separarse fcilmente del resto de ADN (que no se ha amplificado) mediante
la electroforesis en gel.
La tcnica de PCR
permite obtener millones de copias de
un fragmento de ADN
sin necesidad de separarlos previamente
del genoma.
348
349
Figura 25.10. Diagrama de una reaccin de PCR tpica. Los nmeros por encima de la lnea indican la temperatura y por debajo el tiempo en minutos:
segundos.
3'AGTAGACATGAC
GA5' 5'TC3'
3'AGTAGACATGAC
GA5' 5'TCATC3'
3 ' A G TA G A C T G A C
GA5'
3'TCATCT6AC3'
3'AGTAGATGAC6G
A5'
5'TCATCTGAC3'
Fragmentos de ADN
de distintos tamaos
obtenidos en la sntesis de una cadena
cuando en la mezcla
de reaccin se incorpora 2,3-didesoxicitidin trifosfato.
350
tancia con diferente color segn sea la base terminal, as, azul
para adenina, rojo para citosina, verde para timina y amarillo
para guanina.
Las mezclas de reaccin se juntan y se someten a electroforesis. Las bandas separadas de ADN se detectan por fluorescencia al salir del gel, y la secuencia de colores se corresponde
con la de las bases. El mtodo se realiza en un aparato automtico de secuenciacin que puede determinar de una vez cerca de un millar de bases.
Los descubrimientos producidos en los ltimos aos utilizando las tcnicas de ADN recombiante o Ingeniera gentica y
los relacionados con ellas han permitido obtener un mejor conocimiento de la estructura, organizacin y expresin de los genes, y han posibilitado su aplicacin en diferentes campos de
las ciencias. En medicina la aplicacin de estas tcnicas ha
abierto nuevas esperanzas en el diagnstico, prevencin, deteccin y terapia de varias enfermedades.
Las tcnicas de ADN recombinante han permitido la insercin y expresin de genes, que codifican productos de inters
biomdico en bacterias, levaduras, y el crecimiento a escala industrial ha facilitado la obtencin de cantidades apreciables de
protenas y pptidos humanos de gran utilidad para el tratamiento de determinadas enfermedades que hasta entonces se
obtenan slo en pequeas cantidades de tejidos animales o de
cadveres.
La mayor parte de las enfermedades genticas no tienen un
tratamiento eficaz, y las que lo tienen se basan tanto en el
aporte peridico de sustancias que el organismo no puede fabricar, como en evitar la acumulacin de un producto nocivo
provocado por la carencia de la enzima necesaria para su metabolismo. Una solucin teraputica sera la insercin del gen
normal en las clulas defectuosas del individuo enfermo y su
expresin correcta; este proceso se denomina terapia gnica.
Para aplicar esta clase de terapia es necesario, principalmente,
conocer el gen defectivo y clonar el gen homlogo normal.
Posteriormente, hay que saber en qu clulas suele estar activo,
ste es punto clave del proceso porque un gen slo puede ser
insertado en clulas accesibles, por ejemplo, clulas de la sangre o de la piel. Actualmente se estn ensayando varios protocolos clnicos para el tratamiento de enfermedades genticas
como la carencia de adenosina desaminasa (ADA), la fibrosis
qustica, las anemias hemolticas, la hemofilia, etc.
La obtencin de animales transgnicos mediante la microinyeccin de embriones con el gen o por transduccin con
retrovirus ha permitido obtener fundamentalmente ratones
transgnicos que tienen gran inters como modelos de enfermedades gnicas como la enfermedad de Tay-Sachs y la Diabetes mellitus.
Por otra parte, la tcnica de PCR tambin est proporcionando una ayuda valiosa a las ciencias mdicas. Mediante esta
tcnica se pueden detectar la presencia de bacterias y virus en
la sangre y tejidos de un individuo antes de que ste desarrolle
una respuesta inmune. Tambin se pueden detectar cnceres
en un estadio temprano. En medicina forense esta tcnica permite conocer el parentesco de personas. Un simple cabello, una
pequea mancha de sangre o de semen suelen ser suficientes
para obtener cantidades adecuadas de ADN para un anlisis
posterior. Otra aplicacin interesante es en el transplante de rganos. En este proceso el aceptor rechaza el rgano cuando los
antgenos HLA del donante no son suficientemente parecidos a
los del aceptor. La amplificacin de los genes por PCR permite
determinar los tipos de HLA y comprobar sus diferencias o
analogas.
RESUMEN
La tecnologa del ADN recombinante o Ingeniera
gentica ha supuesto un desarrollo extraordinario en el conocimiento de las bases moleculares de la vida. El diseo
y construccin de molculas recombinantes se basa en el
conocimiento de los mecanismos de replicacin del ADN,
de la estructura, de la organizacin y de la regulacin de la
expresin gnica.
La clonacin de un gen o fragmento de ADN de clulas procariotas requiere un corte especfico del ADN genmico por enzimas de restriccin, y la eleccin de un vector
adecuado para unir el gen. Los vectores ms utilizados son
los plsmidos, los baceteriofagos y los csmidos. El vector
con el gen se introduce en clulas hospedadoras para su
multiplicacin. La identificacin de las clulas con el inserto de inters se suele realizar mediante sondas radiactivas
segn la tcnica de transferencia de Southern. La clonacin de genes de clulas eucariticas requiere la obtencin
previa del ADN a partir de ARNm mediante la transcriptasa inversa.
351
352
APLICACIONES CLNICAS
La terapia gnica en las enfermedades hereditarias se aplic
por primera vez en 1990 a una nia de cuatro aos que padeca carencia de adenina desaminasa (ADA). Esta enzima del
sistema inmunolgico y su deficiencia expone a los pacientes a
contraer fcilmente enfermedades infecciosas. El gen que codifica la ADA suele estar activo en los linfocitos, por lo que fue
relativamente fcil extraer esas clulas de la sangre del paciente
e identificarlo.
Posteriormente, se introdujo el gen correcto en clulas precursoras de los linfocitos utilizando vectores basados en retrovirus. Este proceso permiti la correccin de la enfermedad debido a la deficiencia de ADA.
Otros casos susceptibles de aplicar una terapia gnica son
aquellos en los que el gen alterado es el responsable de la produccin de una sustancia presente en la sangre, donde su funcin es necesaria, por ejemplo, en las enfermedades hemoflicas debidas a la carencia de un factor de coagulacin. En estos
caso se puede insertar el gen correcto en cualquier tipo de clula del mismo organismo con tal de que ste pueda sintetizar
el producto e introducirlo en la sangre. Hay bastantes tipos de
clulas capaces de realizar esta funcin, como las clulas del tejido conjuntivo subcutneo, de la epidermis o de los msculos.
TEMA 26
Regulacin de
la expresin gnica
El conjunto de reacciones que tienen lugar en las clulas vivas est regulado y coordinado de forma precisa. Como se ha
visto anteriormente uno de los procesos que interviene en la
regulacin de una ruta metablica es a travs de la actividad
de sus enzimas, la cual puede ser controlada por varios factores, cambios alostricos y modificaciones covalentes. Otro proceso de control es a travs de la sntesis de enzimas, esto es, regulando la expresin gnica. Una clula de E. coli puede contener 10-15 molculas de una protena cuando utiliza un
determinado nutriente como fuente de carbono. Si en un momento determinado se cambia de nutriente, la velocidad de
sntesis de la protena puede aumentar considerablemente y
despus de un corto perodo de tiempo incrementar el nmero
de molculas por encima del millar.
La transcripcin de las enzimas de una ruta metablica suele realizarse de forma coordinada, ya que estn agrupadas
constituyendo una unidad denominada opern. La transcripcin de un opern es bloqueada por protenas represoras y activada por protenas activadoras. Los cromosomas de las clulas eucariticas son de tamao mayor que las procariticas y
poseen un nivel de organizacin ms complejo. En ellas la activacin de los genes es ms importante que la supresin. Para
que se puedan expresar es necesario que se activen mediante
la unin de factores de transcripcin o protenas reguladoras a
los centros de control del ADN.
354
Figura 26.1. El opern lac y su gen regulador. Los genes estructurados son los
genes que codifican las enzimas. El promotor y el operador son los centros de
control.
El represor interactua
con el operador impidiendo la transcripcin de los genes estructurales.
del opern implica todos los elementos genticos, se suele denominar opern lac al conjunto de los centros de control (p, o)
y los genes estructurales (x, y, z). (Fig. 26.2).
355
El inductor se une al
represor desbloqueando al operador y
permitiendo que la
ARN polimerasa
transcriba los genes
estructurales.
Cuando E. coli crece sobre lactosa, el inductor es la 1,6-alolactosa, un compuesto formado a partir de la lactosa del medio, pero pueden ser inductores los E-galactsidos, como el isopropiltiogalactosido (IPTG), que no es metabolizable.
El opern lac no slo est sujeto a un control negativo sino
que la expresin de sus genes estructurales est mediada por
un control positivo. Este control impide que, en presencia de
glucosa, se induzcan los genes implicados no slo en el catabolismo de la glucosa sino de otros azcares. Ello supone un ahorro energtico, ya que prefiere utilizar glucosa (puesto que sus
enzimas se sintetizan siempre cualquiera que sea el nutriente) a
otros compuestos en que sus enzimas deben ser inducidas para
que se sinteticen. Debido a este comportamiento, las enzimas
catablicas de la glucosa se tipifican como constitutivas y las
otras inducibles.
En E. coli existe otro mecanismo regulador denominado
represor por catabolito, por el que los genes implicados en el
catabolismo de lactosa, arabinosa y otras azcares permanecen
reprimidos en presencia de glucosa.
El efecto represor de la glucosa est mediado por el AMPc
(adenosina monofosfato cclico) y una protena denominada
CAP (del ingls, Catabolite gen-activator protein). En ausencia
356
La CAP y el AMPc estn implicados en la regulacin coordinada de muchos operones, sobre todo para enzimas del metabolismo de azcares. Por lo tanto, se puede resumir estos hechos indicando que los operones catablicos inducibles se encuentran bajo un doble control: un opern inductor especfico
357
para cada opern y el complejo CAP-AMPc, que afecta a muchos operones. Esta red de operones con un regulador comn
se denomina reguln.
La regulacin transcripcional de los operones no slo afecta
los procesos catablicos, sino que tambin opera en la regulacin de las enzimas de las rutas anablicas, como los de la sntesis de aminocidos. A este respecto uno de los operones ms
estudiados es el de la sntesis del triptfano. En E. coli, el
ARNm transcrito del opern trp codifica las cinco enzimas que
transforman el corismato en triptfano. Estas cinco protenas se
sintetizan de manera coordinada y en cantidades equimoleculares gracias a la traduccin de su ARNm polignico. La regulacin se obtiene de la interaccin de un represor especfico sobre el operador trp codificado para el gen trpR situado lejos del
opern trp. Un complejo represor-triptfano se une fuertemente al operador e impide que la ARN polimerasa pueda unirse al
promotor trp y los genes estructurados no se transcriben.
Figura 26.4. El opern trp y su gen regulador trpR. El complejo represor tripfano se une al operador impidiendo la transcripcin de los genes estructurados.
Para comprender la velocidad con que se sintetizan los genes estructurales hay que introducir un nuevo elemento descrito por Yanofsky y col. Este elemento denominado atenuador o
centro de terminacin controlada se localiza entre el operador y el primer gen estructural, y contiene una secuencia nucleotdica especfica. Cuando el triptfano escasea, se modifica la
estructura del ADN para que la ARN polimerasa sobrepase el
atenuador y transcriba los genes estructurales (Fig. 26.5).
El atenuador o centro
de terminacin controlada est situado
entre el operador y el
primer gen estructural.
GENOMAS EUCARITICOS
Los genomas de las clulas eucariticas son mayores y tienen una organizacin estructural superior a los procariticas.
Debido a que el ADN de los organismos superiores debe codificar todas las protenas especializadas que se encuentran en los
358
Los genomas de la
especie humana contienen un millar de
veces ms cantidad
de ADN que E. coli.
diferentes tejidos, cabra esperar que estos organismos contuvieran una cantidad mayor de ADN de la que se encuentra en
las procariotas como E. coli. Sorprendentemente la cantidad de
ADN en las clulas eucariotas es mucho mayor de la esperada.
As, el genoma humano codifica unas 50 protenas ms que
una clula bacteriana, pero el tamao es 1.000 veces superior;
evidentemente en las eucariotas existe una gran cantidad de
ADN que no codifica protenas. Mientras que en el ADN de E.
coli hay en su prctica totalidad una copia de cada gen, algunos fragmentos del ADN contienen secuencias 105 106 veces
repetidas.
Uno de los motivos del gran tamao de los genomas eucariotas es que la mayor parte de los genes eucariotas, estn inte-
rrumpidos por intrones, fragmentos de ADN que no se traducen. Tambin porque hay varios tipos de secuencias de ADN
repetidas, como son los ADN satlites y los denominados elementos Alu. Los ADN satlites se encuentran cerca de los
centrmeros de los cromosomas, que son las regiones en las
que se unen las cromtides hermanas, mientras la funcin de
las secuencias Alu es todava desconocida.
El ADN de los genomas eucariticos no est libre sino unido fuertemente a un grupo de sustancias denominadas histonas. El conjunto de ambas molculas (CNA-histonas) se denomina cromatina. Se han encontrado cinco tipos de histonas:
H1, H2A, H2B, H3 y H4. Las histonas son molculas proteicas
con una masa entre 11.000 y 21.000 daltons y, por trmino
medio, cada cuatro aminocidos uno es lisina o arginina y por
eso tienen carcter marcadamente bsico (cargados positivamente).
En 1974, Kornberg propuso que la cromatina estaba constituida por unidades repetitivas de 200 pares de bases de ADN y
de dos histonas, denominando a estas estructuras nucleosomas. Por ello, la mayor parte del ADN est enrollada por el exterior de un ncleo de histonas, y el resto del ADN une los nucleosomas adyacentes de la misma forma que un hilo une las
cuentas de un collar. Estas estructuras permiten un empaquetamiento ms compacto de ADN y una estabilizacin mayor de
los cromosomas.
La replicacin del ADN eucaritico es, como en las bacterias ,de forma semiconservativa. Sin embargo, segn se ha
demostrado por microscopia electrnica, la replicacin tiene
lugar simultneamente en varios puntos. As un cromosoma
de Drosophila tiene al menos 6.000 horquillas de replicacin por molcula de ADN. La activacin de cada punto de
iniciacin genera dos horquillas de replicacin divergentes.
Las formas elipsoides que se extienden en ambas direcciones se funden para formar las dos molculas de ADN hijas
(Fig. 26.6).
Las clulas eucariticas contienen varios tipos de ADN polimerasas. Las polimerasas D y G intervienen en la replicacin
del ADN, y las E y H en la reparacin del ADN. El modo de
accin de las enzimas es semejante al de las clulas bacterianas. Como estas requieren como intermediarios activados
cuatro desoxirribonuclesidos trifosfato, un molde (del que siguen las instrucciones) y un cebador; la sntesis tiene lugar en
direccin 5c-3c.
En el ciclo celular de las clulas eucariticas el ADN se replica durante la fase de sntesis, y los cromosomas replicados se
segregan al interior del ncleo durante la fase de mitosis (M).
359
El nmero de pares
de base en la especie
humana es de
3,9 109 y en E. coli
4,0 106.
Los nucleosomas permiten un empaquetamiento ms compacto del ADN y una estabilizacin mayor de
los cromosomas. Estn formados por unos
200 pares de bases y
dos histonas.
La replicacin del
ADN eucaritico se
realiza al mismo tiempo en diferentes puntos.
360
La mitosis en la especie humana est regulada por una protena denominada CDK2, y que para su actividad requiere a
otra protena denominada cclina B.
361
PROTENAS REGULADORAS DE
LA TRANSCRIPCIN
Las clulas de organismos superiores utilizan para regular la
expresin gnica algunos mecanismos similares a los de las clulas bacterianas. As, en principio, la regulacin tiene lugar,
como en las clulas procariotas, a nivel de transcripcin. Sin
embargo, las clulas de organismos superiores poseen algunas
caractersticas de control propias. Entre las ms importantes
est que la cromatina sufre mltiples cambios en la estructura
de la regin que se transcribe y que existe una separacin fsica
entre la transcripcin que tiene lugar en el ncleo y la traduccin que se realiza en el citoplasma (Fig. 26.8).
Caractersticas en la
regulacin de la expresin gnica de clulas eucariotas: La
cromatina altera la
estructura, y los procesos de transcripcin y traduccin estn separados fsicamente.
Figura 26.8. Los genes de las clulas eucariticas son un mosaico de exones
(e) e intrones (c), stos no se traducen. La transcripcin tiene lugar en el ncleo
y la traduccin en el citosol.
362
Un tercer grupo de reguladores transcripcionales lo constituyen las denominadas protenas con cremallera de leucina. La
caracterstica ms notable de estas protenas es la presencia de
segmentos con una longitud aproximada de 35 residuos en los
que aparecen cinco leucinas. Estas protenas forman un dmero
que se mantiene unido por un D-helicoide enrollado, las leucinas estabilizan la estructura mediante interacciones hidrofbicas y enlaces de van der Waals.
Estas protenas con cremallera de leucina se unen al ADN
en lugares especficos y aproximan fragmentos de ADN para
que se unan dos secuencias y se favorezca la transcripcin.
En la especie humana, las protenas con cremallera de leucina intervienen en el efecto del AMPc sobre la transcripcin.
Los genes controlados por AMPc presentan un elemento de
respuesta a este compuesto (CRE).
363
364
RESUMEN
Los genes de las clulas procariticas regulan su expresin fundamentalmente a nivel de transcripcin.
Los genes que codifican las protenas inducibles se
agrupan en operones, que son unidades de expresin gnica coordinada. El opern que primero se describi fue el
lac, que contiene dos centros de control y tres genes estructurales.
El AMPc estimula la transcripcin de muchos operones
catablicos al unirse a la protena activadora de los genes
catablicos (CAP).
La expresin completa del opern lac requiere tanto un
galactosido inductor como el AMPc que se forma cuando
est ausente o escasea la glucosa. Los genes que codifican
las enzimas de las rutas biosintticas tambin estn controlados con precisin. El opern trp, que es uno de los mejores estudiados, controla la transcripcin de los genes mediante un elemento denominado atenuador o centro de
terminacin controlada.
Los cromosomas eucariticos son mucho mayores y
ms complejos que los procariticos, pero la regulacin de
su expresin gnica es tambin a nivel de la transcripcin.
Sin embargo, el ADN eucaritico se une posteriormente a
protenas bsicas denominadas histonas, tiene algunas caractersticas propias por lo que se refiere a los cambios que
sufre el genoma durante la transcripcin y la reparacin fsica entre el lugar en que se realiza este proceso y la traduccin, y posee otros sistemas de control. Entre esos, los
ms importantes son:
a) la presencia de varias protenas reguladoras o factores de transcripcin que favorezca el ensamblaje del
complejo de iniciacin;
APLICACIONES CLNICAS
Una patologa relacionada con la sntesis de protenas son
los trastornos denominados talasemias. Las talasemias son un
grupo de hemoglobinopatas en los cuales se reduce el nivel de
sntesis de las cadenas D o E de la hemoglobina originando una
anemia severa. El nombre deriva del griego Thalassa (que significa mar), en referencia a los muchos casos encontrados alrededor del mar mediterrneo. En la mayora de las talaseminas
la estructura primaria de las cadenas de hemoglobina es normal, lo que es anmalo es la cantidad de las cadenas D (D-talasemia) y E (E-talasemia) o de los similares a la D y la E.
Las D-talasemias pueden ser debidas a defectos en la expresin de uno o de los cuatro genes que codifican las cadenas D
de la hemoglobina. Cuando son defectuosos cuatro, se produce anemia grave o muerte del organismo en el tero. Los defectos de tres genes dan lugar a la enfermedad por la hemoglobina H (Hb H), y los eritrocitos de estas personas contienen altas concentraciones de esta hemoglobina que es un tetrmero
formado solamente por subunidades E.
Las E-talasemias pueden ser de dos tipos: la talasemia E,
en la que se sintetizan cadenas E en cantidades anormalmente
pequeas, y la talasemia E0, en la que no se detectan cadenas
E en los eritrocitos.
Los lactantes con E-talasemia presentan anemia intensa antes de los dos aos de edad. Tienen icteria, hepatoesplenomegalia y cambios esquelticos que reflejan aumentos de volumen
de la mdula sea. Estos lactantes se dice que tienen talasemia
mayor. Los portadores de un alelo de E-talasemia se dice que
tienen talasemia menor.
No se conoce ningn tratamiento eficaz para las talasemias,
por lo que la deteccin de la naturaleza de los defectos genticos es de gran importancia para el tratamiento y medidas a seguir en el curso de la enfermedad.
365
TEMA 27
Introduccin a la
inmunologa molecular
El organismo est en contacto continuo con agentes microbianos, potencialmente infecciosos, como bacterias, virus, hongos y parsitos, que suponen una amenaza, ya que pueden producir alteraciones patolgicas e incluso la muerte. Para combatirlos, el cuerpo est equipado con un sistema de defensa que le
proporciona un considerable grado de inmunidad, ya que en
los individuos normales la mayora de las infecciones tienen una
duracin limitada y dejan pocas lesiones permanentes.
SISTEMA INMUNITARIO
Existen dos tipos de inmunidad:
a) inmunidad innata o inespecfica, y
b) inmunidad adaptativa o especfica.
Ambos tipos de sistemas estn estrechamente interconectados,
y estn constituidos por clulas y factores solubles.
El sistema inmune
inespecfico est constituido bsicamente
por la piel, los componentes bactericidas de
los fluidos corporales,
las clulas fagocitarias y las clulas NK.
368
El sistema inmune
adaptativo elabora
una respuesta especfica para cada agente
infeccioso.
que son atrados, en gran nmero, desde la circulacin sangunea hacia el sitio de penetracin de la bacteria mediante un
proceso denominado quimiotaxis, y fagocitan los microorganismos. El proceso de fagocitosis se ve favorecido si la superficie
del microorganismo tiene unidos factores del sistema del complemento, inmunoglobulinas o ambos, ya que los neutrfilos
tienen receptores especficos para estas molculas. La digestin
del microorganismo en el interior del neutrfilo se debe a las
enzimas hidrolticas que contiene en sus lisosomas, y a agentes
oxidantes como perxido de hidrgeno (H2O2). Todos estos
procesos van acompaados de un aumento del flujo sanguneo
en la zona de la infeccin, lo que provoca un enrojecimiento, y
de un aumento de la permeabilidad capilar para las protenas,
lo que genera tumefaccin, y son los aspectos esenciales de la
inflamacin. La capacidad de defensa de los granulocitos
neutrfilos es corta debido a que su vida media es breve, aproximadamente un da. A continuacin, la defensa la desarrollan
los macrfagos, que proceden de los monocitos circulantes en
la sangre y tienen capacidad fagocitaria. Adems de los monocitos/macrfagos circulantes, existen macrfagos en los tejidos,
donde constituyen el sistema retculo endotelial (SER). Son
clulas de vida media larga.
Otro tipo de leucocitos que se encuentran en la sangre son
las clulas asesinas naturales (NK o natural killer), especializadas en la defensa inespecfica frente a los virus. Detectan alteraciones en la superficie de las clulas infectadas por virus, se
acumulan en su superficie y las destruyen mediante la apertura
de poros, proceso denominado citotoxicidad. Tambin actan
sobre algunas clulas tumorales.
Las clulas NK son activadas por los interferones, compuestos producidos y liberados habitualmente por las propias
clulas infectadas por virus. Los interferones son un grupo de
protenas importantes en la defensa frente a infecciones vricas.
Los microorganismos patgenos tambin son atacados inespecficamente fuera de los fagocitos mediante el sistema del
complemento. El sistema del complemento es una de las principales vas efectoras del proceso de inflamacin, y conduce a la
perforacin de la pared externa de las bacterias gramnegativas.
Al mismo tiempo, la lisozima del plasma, la linfa y las secreciones corporales degradan enzimticamente la pared bacteriana.
para defenderse de las clulas fagocitarias, por lo que para eliminarlos ha de intervenir el sistema inmunitario adaptativo,
que elabora una respuesta especfica para cada agente infeccioso, que normalmente basta para erradicarlo. Adems, este
sistema adaptativo guarda memoria del agente infeccioso, y
puede impedir que cause la enfermedad si se tiene un segundo
contacto con el mismo. En este sistema adaptativo cooperan
macrfagos, inmunoglobulinas y distintos tipos de linfocitos.
Los linfocitos se desarrollan a partir de clulas madre hematopoyticas pluripotenciales, que estn localizadas primariamente en los tejidos hematopoyticos: el hgado en los fetos
y la mdula sea en los adultos. Durante la vida fetal y la primera infancia, algunas clulas precursoras procedentes de los
tejidos hematopoyticos migran, por va sangunea, al timo,
donde adquieren su especificidad o competencia inmune,
transformndose en linfocitos T. En los mamferos los linfocitos B se desarrollan a partir de clulas madre en la mdula
sea. El timo y la mdula sea son rganos linfoides primarios o centrales, ya que en ellos se desarrollan los linfocitos a
partir de clulas precursoras. Algunos de los linfocitos formados
en los rganos linfoides primarios, maduran y migran, va sangunea, hacia los rganos linfoides secundarios: bazo, ganglios linfticos, amgdalas y tejido linfoide no encapsulado; desde donde se desplazan a los vasos linfticos y sanguneos por
los que circulan, para participar en la defensa inmunitaria.
Los linfocitos expresan un gran nmero de molculas distintas en su superficie, algunas de las cuales aparecen brevemente
en ciertos estadios, mientras que otras son caractersticas de
distintas lneas celulares. Estas ltimas se denominan marcadores y se designan como CD (designacin de agrupamientos o
Cluster designation). Los linfocitos T expresan el complejo polipeptdico CD3 junto con el receptor antignico TCR y se pueden subdividir en dos poblaciones diferentes:
369
370
II, a lo cual tambin contribuye la interleuquina-1 (IL-1) segregada por el macrfago. La clula TH segrega entonces interleuquina-2 (IL-2), que induce la proliferacin de las clulas T
CD8, que tambin han reconocido al antgeno, presentado por
un macrfago en el contexto de la protena MHC clase I. Algunas de las clulas CD8, linfocitos T citotxicos, matan a las clulas infectadas que exhiben el antgeno vrico. Posteriormente,
otras clulas CD8, linfocitos T supresores, se encargan de suprimir esta respuesta citotxica, desconectando la defensa inmunitaria una vez cumplida su misin. Tras la supresin persiste una poblacin de clulas T de memoria, que probablemente
se mantengan toda la vida (Fig. 27.2).
En la respuesta inmune humoral, una clula T cooperadora CD4 (TH) se activa, como en el caso anterior, tras reconocer el antgeno presentado por un macrfago en el contexto de
una molcula MHC clase II y por accin de la IL-1 segregada
por el macrfago. La clula T CD4 se une entonces a una clula B que haya reconocido tambin el antgeno. El contacto de
371
372
la clula T CD4 estimula la maduracin, multiplicacin y diferenciacin de la clula B en un clon de clulas plasmticas que
secretan inmunoglobulinas especficas frente al antgeno, en
este ejemplo el virus, al que se unen rodendolo e inactivndolo. Las linfoquinas secretadas por la clula T CD4, entre ellas
interleuquina-2, interleuquina-4 e interleuquina-6, colaboran
en la maduracin de los linfocitos B. Las clulas B tambin
pueden reconocer antgeno libre en solucin en sangre o linfa,
pero tambin necesitan la ayuda de las clulas T CD4. Una
poblacin de clulas de memoria persiste para hacer frente rpidamente al antgeno en posteriores contactos (Fig. 27.3).
componentes se designan con la letra C seguida de un nmero, y cuando son escindidos por una enzima, el producto de
menor tamao tiene el sufijo a y el de mayor tamao el b.
El complemento se activa por dos vas distintas:
a) la va clsica y
b) la va alternativa.
En la va clsica hay una activacin especfica que presupone
una respuesta humoral, ya que est mediada por complejos
antgeno-anticuerpo, donde el anticuerpo es IgG o IgM, hacen
falta dos molculas de IgG o una de IgM. La va alternativa es
una activacin inespecfica, se produce directamente por polisacridos y liposacridos de la pared celular bacteriana.
En la activacin especfica por la va clsica, las protenas
que intervienen se anan en tres grupos:
373
El complemento se
activa por dos vias
distintas. La clsica
est mediada por
complejos antgenoanticuerpo. La alternativa se activa por
polisacaridos de la
pared celular bacteriana.
Grupo de reconocimiento: formado por C1, protena formada por varias subunidades, una molcula de C1q, dos
de C1r y dos de C1s. El C1q est formado por 18 cadenas polipeptdicas.
Grupo de activacin: formado por las protenas C4, C2 y
C3
Grupo de ataque a membrana: constituido por las protenas C5, C6, C7, C8 y C9.
Cuando las molculas de inmunoglobulina (2 IgG o 1 IgM)
se combinan con el antgeno, sufren un cambio conformacional
que permite la fijacin, a travs de su regin Fc, de C1q. La
unin de C1q induce la activacin autocataltica de una molcula de C1r, que escinde
el otro zimgeno C1r, transformndo
lo en su forma activa C1r (la barra significa activacin): C1r
escinde las dos molculas
de C1s, transformndolas en sern
esterasas activas, C1s .
La enzima C1s acta sobre C4, que tiene un enlace tioster, y lo escinde en C4b y C4a; el C4b se une a un receptor de
superficie de la membrana plasmtica, y acta a su vez como
sitio de unin para el zimgeno
C2, que combinado con C4b
se convierte en sustrato de C1s , que lo escinde en C2a y C2b.
El
fragmento C2a se une a C4b, y as se forma el complejo
se une a su receptor en la
superficie celular, junto a C4b2a , formando la enzima
374
375
El resultado final de la cascada del complemento es la formacin de agujeros, con un dimetro interior de unos 10 nm,
en la membrana celular. Que producen un hinchamiento celular, debido al efecto Donnan, por lo cual la clula se rompe explosivamente.
La va alternativa se desarrolla plenamente en presencia
de membranas celulares bacterianas. En la fase lquida el enlace tioster interno del componente C3 se escinde lentamente
de forma espontnea en medio acuoso, generndose una forma activa del C3 denominada C3i. Al C3i se une el factor B,
formndose C3iB, sobre el que acta el factor
D escindiendo a
B, as se libera Ba y se forma el complejo C3iBb, que es la convertasa de C3 de la va alternativa, y permanece en la fase lquida. El C3b que se genera por accin enzimtica puede unirse a la membrana de una clula bacteriana, se une a C3b el
factor B, con una elevada afinidad,
y por accin del factor D se
El resultado final de
la cascada del complemento es la formacin de agujeros en
la membrana celular.
Estos agujeros producen un hinchamiento
celular, debido al
efecto Donnan, por lo
cual la clula se rompe explosivamente.
376
Tanto la va clsica
como la alternativa
estn sometidas a
sistemas de regulacin.
INMUNOGLOBULINAS:
ESTRUCTURA Y FUNCIN
Las inmunoglobulinas son segregadas
por las clulas plasmticas, derivados de
los linfocitos B que
han tenido contacto
con el antgeno.
Las inmunoglobulinas (Ig) son glicoprotenas que se encuentran en el plasma y en la fase lquida tisular de todos los
mamferos, as como, algunas de ellas, en la superficie de los
linfocitos B, donde actan como receptores de antgenos especficos.
La estructura general de una molcula de inmunoglobulina
consiste en cuatro cadenas polipeptdicas iguales dos a dos,
unidas por puentes disulfuro y enlaces no covalentes. Las de
menor tamao se denominan cadenas ligeras (L) y las de mayor tamao pesadas (H) (Fig. 27.6). Las cadenas ligeras tienen
una masa molecular de 25.000 Da, y en los vertebrados pueden ser de dos tipos, kappa (N) o lambda (O); pero en una
molcula de inmunoglobulina las dos cadenas ligeras son iguales, bien N o bien O, nunca una de cada tipo. Las cadenas pesadas tienen una masa molecular entre 50.000 y 77.000 Da,
existen cinco tipos generales de cadenas pesadas, denominadas J, P, D, G y H, cada una de las cuales define una clase de inmunoglobulinas, as tendremos cinco clases de inmunoglobulinas: IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. Adems, las inmunoglobulinas de cada una de las clases son muy
heterogneas, dentro de cada clase hay subclases, que dependen del tipo de cadena pesada que posean, as por ejemplo,
hay cuatro subclases de IgG: IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4, segn
que su cadena pesada sea J1, J2, J3 o J4, respectivamente.
En la cadena ligera se distinguen dos regiones diferentes,
una regin variable (VL) desde el extremo amino terminal hasta
la mitad de la cadena (aminocidos 1 a 108), cuya secuencia
de aminocidos es variable, y una regin constante (CL) cuya
composicin en aminocidos es constante (excepto por las variaciones alotpicas e isotpicas). Cada regin VL y CL presenta
un puente disulfuro intracatenario que genera un bucle peptdi-
377
La estructura general
de una molcula de
inmunoglobulina consiste en cuatro cadenas polipeptdicas
iguales dos a dos,
unidas por puentes
disulfuro y enlaces no
covalentes. Las de
menor tamao se denominan cadenas ligeras (L) y las de mayor tamao pesadas
(H).
Figura 27.6. Esquema de la estructura de la IgG (A). Plegamiento caracterstico de los dominios de la cadena ligera de una inmunoglobulina, con las regiones hipervariables en el dominio VL (B). Esquema de los dominios de la molcula de IgG (C).
co de unos 60-70 aminocidos. Igualmente, en la cadena pesada hay dos regiones, una regin variable en cuanto a su secuencia de aminocidos situada en el extremo amino terminal
de la cadena, denominada VH, que abarca los primeros
378
La variabilidad de los
dominios variables de
cadena pesada y de
cadena ligera no es
homognea. Existen
algunos segmentos
poli-peptdicos cortos
en estas regiones
cuya variabilidad es
mucho mayor, y que
se denominan regiones hipervariables.
CLASES DE INMUNOGLOBULINAS
Cada clase de inmunoglobulinas presenta una funciones
biolgicas especficas.
La IgG activa el sistema del complemento,
acta como antitoxina y atraviesa la placenta.
IgG: Se encuentra slo en la forma monomrica de cuatro cadenas, su masa molecular es de 146.000 Da. Su cadena pesada es J, y existen cuatro subclases. Est distribuida entre los espacios intravascular y extravascular, la
subclase ms abundante en el suero es la IgG1 (9 mg/mL).
Entre sus funciones est la de activar el sistema del complemento, actuar como antitoxina, y en los seres humanos
atraviesa la placenta confiriendo inmunidad al recin nacido durante los primeros meses de vida.
IgM: Se encuentra fundamentalmente en el espacio intravascular, su concentracin plasmtica es de 1,5 mg/mL.
Su cadena pesada es P, no existen subclases, y su estructura consiste en un pentmero de la unidad bsica de cuatro
cadenas, por lo que su masa molecular es de 970.000 Da.
Las subunidades del pentmero estn unidas entre s mediante enlaces disulfuro entre los dominios CP3, as como
entre el pptido final del dominio CP4. En el pentmero
existe una cadena peptdica adicional denominada cadena J, formada por 137 aminocidos, con masa molecular
de 15.000 Da, y de estructura similar a un dominio de inmunoglobulinas, que est unida por enlaces disulfuro con
el pptido terminal de las cadenas pesadas (Fig. 27.7). La
IgM es el principal anticuerpo frente a microorganismos
infecciosos antignicamente complejos, es un agente aglutinante y citoltico muy eficaz.
379
La IgM es un agente
aglutinante y citoltico muy eficaz.
IgA: Su cadena pesada es D; se puede encontrar en forma monomrica y dimrica, y adems los dmeros pueden estar unidos al componente secretor. Asimismo, de la
La IgA secretora
abunda en las secreciones seromucosas.
380
La IgD abunda en la
superficie de los linfocitos B.
La IgE se encuentra
en la superficie de
basfilos mastocitos
y clulas de las mucosas.
RESUMEN
El organismo combate los agentes infecciosos mediante
su sistema inmunitario. Existen dos tipos de inmunidad, la
innata o inespecfica y la adaptativa o especfica, ambas
estrechamente relacionadas. La inmunidad innata est
constituida por barreras mecnicas como la piel, y qumicas como los componentes bactericidas de los fluidos corporales; adems participan clulas fagocitarias como los
granulocitos neutrfilos, otras clulas fagocitarias son los
macrfagos, que proceden de los monocitos circulantes en
la sangre. Otro tipo de leucocitos que se encuentran en la
sangre son la clulas asesinas naturales, especializadas en
la defensa inespecfica frente a los virus. Tambin participa
381
382
hay unas regiones hipervariables, que constituyen el centro de unin del antgeno. Las inmunoglobulinas son protenas bifuncionales, una regin de la molcula interviene
en la unin especfica al antgeno, y otra regin distinta es
la responsable de las funciones efectoras propias de cada
clase de inmunoglobulinas.
APLICACIONES CLNICAS
Hipersensibilidad inmediata de tipo I
El trmino hipersensibilidad se refiere a una situacin en
que se produce una respuesta inmune adaptativa exagerada o
inadecuada. La hipersensibilidad de tipo I consiste en una reaccin alrgica inmediata tras la exposicin al alergeno, que es
un antgeno. Dentro de este tipo de hipersensibilidad se encuentran el asma, la fiebre del heno, los eccemas, la urticaria y las alergias a los alimentos. Estas alergias se producen
tras la estimulacin de los mastocitos sensibilizados con IgE por
parte del alergeno.
Los antgenos ambientales (alergenos), inicialmente inocuos, penetran en el organismo a travs de las mucosas y son
fagocitados y procesados por las clulas presentadoras de antgeno (CPA) locales, que los presentan a los linfocitos TH, que
secretan citocinas para inducir la proliferacin de los linfocitos
B, los cuales secretan IgE especfica frente al alergeno. La IgE
se une a los receptores de FcH de los mastocitos, por lo que stos quedan sensibilizados. Cuando el individuo tiene un contacto posterior con el alergeno, ste se une a las IgE de la superficie de los mastocitos sensibilizados entrecruzndolas, se
produce un aumento de Ca2 intracelular que induce la liberacin de mediadores almacenados, como histamina y proteasas,
as como la sntesis de mediadores lipdicos, como leucotrienos
y prostaglandinas. Los agentes quimiotcticos (interleuquina 5,
interleuquina-8 o interferon D) que liberan los mastocitos atraen neutrfilos, eosinfilos y basfilos hacia la regin de activacin; la histamina produce vasodilatacin y aumenta la permeabilidad vascular, activando, junto con algunas proteasas, el
proceso inflamatorio; finalmente, las prostaglandinas (PGD2) y
los leucotrienos (LTC4, LTD4), junto con la histamina, producen contraccin de la musculatura lisa bronquial y aumentan
las secreciones mucosas, obstruyendo las vas areas. De esta
forma se producen los sntomas clnicos de la alergia.
TEMA 28
Estructura molecular
del msculo
Estructura de la fibra muscular esqueltica. Estructura molecular del msculo esqueltico. Mecanismo de la contraccin muscular. Control de la
contraccin muscular por calcio. El msculo cardaco. El msculo liso. Fuentes de energa en el
msculo.
ESTRUCTURA DE LA FIBRA
MUSCULAR ESQUELTICA
Las clulas cilndricas que forman el msculo esqueltico se
denominan fibras musculares, su longitud es de 1 a 40 nm y
su dimetro de unos 100 Pm. Cada fibra muscular est envuelta por una membrana celular elctricamente excitable denominada sarcolema (Fig. 28.1). Se trata de clulas plurinucleadas,
en las que el nmero de ncleos aumenta con la longitud de la
fibra. El citoplasma se denomina sarcoplasma, y contiene haces de filamentos fuertemente empaquetados, estos filamentos
En el citoplasma de
la fibra muscular
estn las miofibrillas,
compuestas por unidades repetitivas denominadas sarcmeros.
384
385
El sarcmero es la
unidad fundamental
de la miofibrilla. Presenta una alternancia
de bandas claras y
oscuras como consecuencia de la distribucin de los filamentos gruesos y de
los filamentos delgados.
386
Un filamento grueso
est formado por
unas 300 molculas
de miosina orientadas para conferirle un
carcter bipolar.
Un filamento delgado
est formado por una
cadena de actina F,
varias molculas de
tropomiosina y varias
del complejo troponina.
MECANISMO DE LA
CONTRACCIN MUSCULAR
Modelo de los filamentos deslizantes
La contraccin de las fibras musculares se produce por el
deslizamiento de los filamentos gruesos de miosina a lo largo
de los filamentos delgados de actina. La longitud de los filamentos gruesos y delgados no cambia durante la contraccin
387
Las diferentes etapas de la contraccin muscular estn impulsadas por la actividad ATPasa de la miosina. La fuerza de la
contraccin muscular se produce por la interaccin de miosina,
actina y ATP. Durante el ciclo de contraccin el ATP interacciona con la miosina, que produce su hidrlisis en ADP y Pi , los
cuales quedan unidos a la miosina; la actina interacciona con
el complejo miosina-ADP-Pi y estimula la liberacin del Pi y a
continuacin del ADP, por lo cual la actina aumenta el nmero
de recambio de la miosina; seguidamente, un nuevo ATP se
une al complejo actomiosina provocando la disociacin de la
actina y la miosina. El complejo ATP-miosina resultante est
dispuesto para otro ciclo de catlisis (Fig. 28.4). Estas reacciones requieren la presencia de Mg2.
La energa libre de la hidrlisis del ATP se traduce en cambios conformacionales en las cabezas de miosina, que produ-
El deslizamiento de
los filamentos gruesos y delgados se
debe a cambios conformacionales en las
cabezas de miosina
como consecuencia
de hidrlisis del ATP,
catalizada por la actividad ATPasa de la
miosina.
388
389
CONTROL DE LA CONTRACCIN
MUSCULAR POR CALCIO
El elemento desencadenante de la contraccin muscular es
el aumento de la concentracin de Ca2 en las inmediaciones
de las fibras musculares del msculo esqueltico o de los miocitos del msculo cardiaco y del msculo liso. En todos los casos,
el aumento de Ca2 se debe al flujo del mismo a travs de canales de calcio. La contraccin muscular termina cuando la
concentracin de Ca2 en el sarcoplasma disminuye por la ac-
En la fibra muscular,
el impulso del nervio
motor desencadena
la liberacin de Ca2+
del reticulo sarcoplsmico al sarcoplasma.
390
cin de bombas especficas como la ATPasa de Ca2 del retculo sarcoplsmico (Fig. 28.6).
391
392
EL MSCULO CARDACO
En la contraccin del
msculo cardaco es
esencial la entrada de
Ca2+ extracelular para desencadenar la liberacin de Ca2+ del
reticulo sarcoplsmico, que inducir los
cambios pertinentes
en el TnC.
EL MSCULO LISO
Las estructuras moleculares del msculo liso son muy semejantes a la de los msculos estriados, pero en l los sarcmeros
no estn alineados de la forma en que lo estn en los de apariencia estriada. Los miocitos que forman este tipo muscular
son clulas muy alargadas (100-500 Pm de longitud, 2-6 Pm
de dimetro), forman un sinctio, y el tejido tiene muy pocos
tbulos-t y un retculo sarcoplsmico rudimentario.
La contraccin del msculo liso, igual que la del estriado,
est regulada por Ca2. El Ca2 que estimula la contraccin del
msculo liso tiene un origen predominantemente extracelular, y
entra en el miocito a travs de canales de calcio del sarcolema.
Estos canales pueden abrirse por estimulacin elctrica o por la
unin de hormonas o frmacos a receptores de membrana.
393
394
La contraccin del
msculo liso se estimula por Ca2+ extracelular.
Figura 28.9. Modelo de control de la contraccin del msculo liso. CaM: calmodulina;
MLCK: quinasa de cadena ligera de miosina; MLC: cadena ligera de miosina (LC2).
395
396
RESUMEN
Los animales poseen tres tipos de msculos, el msculo
esqueltico, el cardaco y el liso. Los dos primeros se denominan estriados. Las clulas del msculo esqueltico se
denominan fibras musculares, mientras que las del msculo cardaco y las del liso se denominan miocitos.
La fibra muscular esqueltica es una clula cilndrica
multinucleada. En el sarcoplasma se encuentran haces de
filamentos denominados miofibrillas, cada una de las cuales est formada por unidades que se repiten, denominadas sarcmeros.
El sarcmero, se repite cada 2,3 Pm a lo largo del eje
de la fibrilla, la longitud entre dos lneas Z. La banda A oscura y la banda I clara se alternan con regularidad. Esta
APLICACIONES CLNICAS
Control teraputico de contraccin
del msculo liso
Trastornos respiratorios como el asma o diversas alergias
producen una contraccin excesiva del msculo liso bronquial.
El tratamiento con epinefrina (adrenalina), mediante pastillas o
aerosoles inhalados, acta inhibiendo la quinasa de cadena ligera de miosina (MLCK) mediante un proceso de fosforilacin
397
398
que la inactiva, ya que la forma fosforilada no puede interaccionar con el complejo Ca2-calmodulina, lo que impide la contraccin muscular, y relaja el msculo liso bronquial. Se han
desarrollado frmacos ms especficos, como el albuterol, que
actan ms selectivamente sobre los pulmones y evitan los
efectos secundarios de la epinefrina sobre el corazn.
TEMA 29
Estructura y funcin
del nervio
El sistema nervioso est compuesto por los nervios perifricos y las estructuras que configuran el sistema nervioso central
(SNC), cerebro, cerebelo, y mdula espinal. Desde un punto de
vista funcional se distingue el componente somtico y el componente vegetativo o sistema nervioso autnomo (SNA), ambos con sus respectivas porciones central y perifrica.
El SNC. se compone de todas las neuronas que conducen
estmulos desde los ncleos centrales hasta los msculos esquelticos y desde los receptores sensoriales hasta los ncleos
centrales. Los rganos internos, corazn, vasos sanguneos,
aparato digestivo, aparato genitourinario, y en general todo el
msculo liso y el tejido glandular, se encuentra inervado por
neuronas que no estn bajo el control de la voluntad, por lo
que se denomina SN autnomo o vegetativo.
El SN por lo tanto, integra tanto los ncleos centrales,
como las conducciones perifricas o nervios. Estos son: doce
pares de nervios craneales y treinta y un pares de nervios espinales. En el SN autnomo los nervios aislados suelen ser
la excepcin, tratandose bsicamente de redes nerviosas perifricas.
400
Las fibras nerviosas son prolongaciones del soma neuronal, tanto dendrticas como axnicas, rodeadas del neurilema.
La velocidad de conduccin de los impulsos nerviosos depende del dimetro de estas fibras y de la presencia de mielina.
Las fibras gruesas mielinizadas de tipo A son las ms rpidas,
mientras que las delgadas y amielnicas de tipo C son las ms
lentas. Tanto las fibras nerviosas como el soma de las neuronas se encuentran aislados del medio extracelular por la membrana plasmtica con sus caractersticas especiales de permeabilidad.
El potencial de reposo
El potencial de reposo puede calcularse
segn la ecuacin de
Goldman a partir de
las concentraciones
ionicas intra y extracelulares y de sus
permeabilidades relativas.
Consiste en una diferencia de potencial a travs de la membrana plasmtica, debido a la desigual distribucin de iones entre los compartimentos intra y extracelular. Su valor oscila en
torno a 70 mV, negativo el interior respecto al exterior. Las
causas del potencial de reposo se encuentran en la selectiva
permeabilidad de la membrana a los iones:
1. La presencia de protenas en el interior de la clula cargadas positivamente dado el carcter anftero de las
msmas y el pH celular ligeramente alcalino (7,4), establece un gradiente de concentracin de iones positivos
desde el interior hasta el exterior, responsable de la electronegatividad interna.
2. La bomba Na/KATPasa como mecanismo de transporte activo, establece una direccin preferente para el
transporte del Na hacia el exterior y K hacia el interior
celular.
3. El movimiento de los iones difusibles de Na, K y Cl,
que se mueven libremente dependiendo de su concen-
401
61 log
Dependiendo de la carga electrica de cada in, la permeabilidad selectiva de la membrana (P) para cada uno de ellos y
la concentracin (C) de los respectivos iones dentro (d) y fuera
( f ) de la clula. El grado de implicacin de cada uno de los iones en la determinacin del potencial de reposo es proporcional a la permeabilidad de la membrana para l mismo. Por tanto, cuando la permeabilidad de la membrana es cero, excepto
para uno de ellos, la ecuacin de Goldman se iguala a la de
Nernst y el potencial de membrana quedara establecido por el
gradiente de concentracin para ese ion.
Los valores calculados con sta ecuacin se corresponden
bsicamente con los observados experimentalmente (registro
de la diferencia de potencial a travs de la membrana introduciendo un electrodo en el interior celular). Pequeas diferencias
se deben a que la ecuacin no tiene en cuenta el efecto continuo de la bomba de sodio, sin cuya actuacin las concentraciones inicas cambiaran paulatinamente hasta igualarse en ambos compartimentos intra y extracelular. Los valores del potencial de reposo no coinciden por lo tanto con los potenciales de
equilibrio de ninguno de los distintos iones aisladamente. Finalmente es importante recordar que, para generar el potencial de
reposo, el movimiento de iones es mnimo y la clula permanece elctricamente neutra, de forma que el numero de aniones y cationes en cada compartimento es el mismo. No obstante la membrana queda revestida por cargas negativas en la superficie interna y positivas en la externa, como una placa
dipolar. En esta situacin que es la de reposo, se dice que la
membrana est polarizada.
402
El potencial de accin
Se denomina potencial de accin a los cambios de potencial que se producen en la membrana como respuesta a un
estmulo. Tales cambios obedecen a la modificacin de la permeabilidad a los iones que tiene lugar cuando la clula entra
en accin enviando seales.
Los estmulos capaces de generar potenciales de accin
pueden ser de distinta naturaleza (mecnicos, qumicos o elctricos) pero han de tener la intensidad mnima necesaria, denominada intensidad umbral para modificar la permeabilidad
de reposo de forma activa (Fig. 29.1).
Fase de despolarizacin. La membrana se vuelve extraordinariamente permeable al sodio por efecto del estmulo. Se
facilita as el cambio de configuracin espacial de protenas integrales presentes en las membranas de las clulas excitables,
que funcionan como canales de paso para sodio. Estos canales
son dependientes de voltaje y por tanto sensibles a las modificaciones del potencial de reposo. Cuando la diferencia de potencial entre el interior y exterior se hace menor, aproximndose a cero, ocurre el cambio abriendose la compuerta. El mecanismo funciona como un circuito de retroalimentacin positiva.
As, un potencial de accin no se producir hasta que no se alcance el nivel de potencial de reposo que alimenta el feed-back
positivo. Es lo que se denomina umbral de excitabilidad. Superado el umbral, el sodio entra en la clula a favor de su gradiente electroqumico. Esta acumulacin de cargas positivas en
la cara interna de la membrana, invierte la polaridad de reposo, que alcanza valores de 30 mV.
Fase de repolarizacin. En milsimas de segundo los canales de sodio se cierran por efecto del mismo cambio elctrico. Comienza as la fase de repolarizacin. Los canales de sodio no volvern a abrirse hasta que la membrana alcance su
polaridad de reposo. Los canales de potasio se abren coincidiendo en el tiempo con el cierre de los anteriores, ya que son
sensibles a los cambios de voltaje que se estn produciendo, lo
que facilita la salida del ion, ahora tambin a favor de su gradiente electroqumico. De esta forma se acelera la repolarizacin. Los canales de potasio tambin se cierran espontneamente.
Otros iones como el calcio intervienen tambin en el desarrollo del potencial de accin. El calcio es un ion extracelular
para el que existen en casi todas las clulas una bomba de calcio que lo expulsa hacia el exterior. Tambin existen canales de
paso dependientes de voltaje que se activan lentamente, algunos de los cuales pueden ser compartidos por el sodio.
La concentracin de iones intra y extracelulares en general
tiene importancia en el desarrollo de los potenciales de accin
y en la excitabilidad de las membranas al influir de forma importante en los mecanismos de permeabilidad y en el nivel de
voltaje al que se activan los canales.
Despus de un potencial de accin y durante un periodo de
tiempo denominado periodo refractario, no se puede producir un nuevo potencial de accin. Este efecto se debe al tiempo
necesario para que las protenas canales del sodio recuperen su
conformacin inicial y los valores del potencial de reposo alcancen o estn muy prximos a los valores iniciales.
403
404
Figura 29.2. Propagacin de los potenciales de accin en una fibra nerviosa amielnica.
A pesar de que no existe una direccin nica de propagacin, los impulsos nerviosos permiten la comunicacin entre
neuronas y suelen tener como destino final la sinapsis.
Se trata de una estructura funcional que permite el paso de
informacin de una neurona a otra o a un grupo de neuronas
conectadas con la primera. Existen distintos tipos de sinapsis,
pero desde una perspectva bioqumica es la sinapsis qumica
405
SINAPSIS Y NEUROTRANSMISORES
En la sinapsis qumica se distinguen tres elementos:
1) Terminal presinptica, habitualmente es una terminal axnica y contiene las vesculas del neurotransmisor para su liberacin inmediata por exocitosis. El acoplamiento excitacin-secrecin, implica a los iones de
calcio.
2) Neurotransmisor (NT), que es liberado a la hendidura
sinptica tras la llegada de un potencial de accin por el
axn hasta la terminal presinptica. Se han propuesto
dos sistemas efectores para el NT: uno sera la consecuencia de protenas receptoras que, tras la unin, aumentaran la permeabilidad inica, mientras que el otro
dependera de la actuacin de segundos mensajeros,
como ocurre con las hormonas petdicas.
3) Terminal postsinptica, con abundantes canales inicos y receptores para las molculas del neurotransmisor.
Suele localizarse en la membrana del soma o de las dendritas. As pues, una neurona recibe miles de contactos
sinpticos, y puede enviar informacin a su vez a varias
neuronas dependiendo de lo ramificado de su axn (Fig.
29.3). La eliminacin del neurotransmisor es importante
para finalizar la accin del mensajero y puede hacerse
de dos formas diferentes, una de ellas consiste en la
inactivacin a nivel de la hendidura sinptica mediante
enzimas presentes en la terminal postsinptica. La otra
sera por captacin del neurotransmisor desde la terminal presinptica para su reutilizacin, o por clulas de la
gla para su metabolizacin y excrecin posterior.
El metabolismo de los neurotransmisores incluye la sntesis,
almacenamiento, liberacin, accin e inactivacin. Estos procesos requieren energa, lo que justifica su gran demanda por
parte de las neuronas.
Aunque los primeros neurotransmisores estudiados fueron
la acetil-colina y las catecolaminas adrenalina y noradrenalina,
por ser los ms extendidos fuera del SNC. Sin embargo la familia de los neurotransmisores ha ido creciendo a expensas de
distintos tipos de sustancias que participan en la neurotransmisin a nivel central, tales como aminocidos y derivados, pptidos, otras catecolaminas, etc., que pasamos a considerar.
En la sinapsis qumica
se distinguen tres elementos:
1. Terminal presinptica.
2. Neurotransmisor.
3. Terminal postsinptica.
La eliminacin del
neurotransmisor es
importante para finalizar la accin del
mensajero.
406
o
o
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mientras que las neuronas noardrenrgicas y adrenrgicas transforman la DA en noradrenalina (NA) por hidroxilacin de la cadena lateral. Esta reaccin es catalizada
por la dopamina-beta-monooxigenasa. La NA a su vez es
convertida en adrenalina (A) por metilacin del grupo
amino terminal de la NA. La reaccin est catalizada por
la NA-metiltransferasa. Estas reacciones tienen lugar tambin en la mdula suprarrenal, capaz de liberar adrenalina y noradrenalina a la sangre, desde donde pueden
desarrollar sus acciones en calidad de hormonas. La degradacin tiene lugar por la accin de enzimas aminooxidasa (MAO), catecol-metiltransferasa y alcohol-deshidrogenasa. Algunos productos de degradacin pueden detectarse en el lquido cefalorraqudeo, sangre y orina, y
pueden determinarse analticamente como indicadores
del metabolismo de estos neurotransmisores.
3. Otras aminas. Serotonina e histamina. La serotonina
o 5-hidroxitriptamina se encuentra en muchos tejidos
aunque slo en el cerebro acta como neurotransmisor
(Fig. 29.6). Su sntesis se produce a partir del triptfano que las neuronas captan de la circulacin para su
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Algunos aminocidos
como GABA, c. glutmico y glicina actan como neurotransmisores.
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RESUMEN
El nervio es un conjunto de fibras, prolongaciones de
las neuronas, cuyas membranas se caracterizan por presentar una diferencia de potencial a su travs que se denomina potencial de reposo. El potencial de reposo se produce por una distribucin desigual de los iones entre el inte-
rior y el exterior. Esta distribucin puede variar a consecuencia de modificaciones temporales en la permeabilidad
de la membrana, cuya consecuencia es la excitacin.
Cuando el potencial de reposo alcanza un nivel crtico de
excitacin como consecuencia de un estmulo umbral, se
produce un potencial de accin. Los potenciales de accin
se transmiten a lo largo de la membrana de la fibra nerviosa y su destino final es la sinapsis. Se trata de una estructura de conexin que permite el paso de informacin de una
neurona a otra. Un elemento clave en este tipo de comunicacin es el neurotransmisor. Distintos tipos de neurotransmisores actan como mensajeros en la sinpsis, desde la acetil-colina y catecolaminas, hasta neuropptidos,
pasando por algunos aminocidos. El conocimiento de su
metabolismo incluye la sntesis, almacenamiento, liberacin, accin e inactivacin, as como su distribucin en el
sistema nervioso central (SNC) y est contribuyendo a esclarecer la funcin de los distintos grupos neuronales as
como una parte importante de la neurofisiologa y neuropatologa.
APLICACIONES CLNICAS
Enfermedad de Parkinson
Es debida a la lesin ms frecuente de los ganglios basales
del encfalo, concretamente del sistema nigro-estriatal. Los sntomas consisten en rigidez, temblor de reposo y bradicinesia.
La dopamina es el principal neurotransmisor en estas estructuras cerebrales, en las cuales se ha comprobado para los enfermos de Parkinson, una disminucin en las concentraciones
neuronales de dopamina, de las enzimas implicadas en su sntesis y degradacin y de los metabolitos intermediarios. La administracin de L-DOPA, precursor de la dopamina que puede
atravesar la barrera hematoenceflica, mejora los sntomas,
aunque es descarboxilada parcialmente en los tejidos perifricos. Para evitar este efecto se utiliza la metildopahidrazina que
inhibe la descarboxilasa y no penetra en SNC.
Epilepsia
Es una enfermedad convulsivante crnica con diferentes tipos y estados, segn se produzca o no prdida de conciencia y
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convulsiones tnico-clnicas. Una de sus causas es la disminucin en la actividad o sntesis del GABA, neurotransmisor de
caracter inhibidor cerebral. El tratamiento requiere el empleo
de anticonvulsionantes que actuen a nivel sinptico evitando
su inactivacin inmediata y prolongando su accin.
Depresin
Es una de las alteraciones afectivas ms frecuentes, cuya
sintomatologa principal es la tristeza, acompaada de una incapacidad para interesarse por el entorno y una disminucin
de la vitalidad con inactividad y cansancio general. En ocasiones se trata de un trastorno adaptativo reaccional ante un
acontecimiento demostrable. Otras veces se puede constatar su
base gentica. Puede demostrarse tambin un defecto en la
concentracin de catecolaminas o serotonina a nivel cerebral.
Los inhibidores de la aminooxidasa (IMAO) se utilizan para aumentar la accin del neurotransmisor, sin embargo tienen efectos secundarios importantes a nivel perifrico. Se puede aumentar el tiempo de accin inhibiendo la captacin por la terminal presinptica, siendo ste el mecanismo de accin de los
antidepresivos tricclicos.
TEMA 30
Bioqumica
de la visin
FOTORRECEPTORES
El proceso visual implica la participacin de fotorreceptores o clulas sensibles al estmulo luminoso. Existen dos tipos
de fotorreceptores, conos y bastones, ambos se localizan en
la retina.
Los conos se localizan casi exclusivamente en una regin
de la retina denominada fvea. Estn especializados en la estimulacin con luz abundante, proporcionando la visin en co-
414
El pigmento visual de
los bastones es la rodopsina, formada por
retinal (forma 11-cis)
y la protena opsina.
Las ondas luminosas impactan con estos receptores produciendo cambios qumicos que generan impulsos nerviosos que
sern transmitidos hasta el cerebro.
Estos dos tipos de clulas requieren vitamina A para la formacin de los pigmentos visuales.
Los bastones pierden su pigmento fotosensible, la rodopsina o prpura visual, cuando son iluminados, por lo que, al pasar de una zona bien iluminada hacia otra en penumbra, no
podemos ver hasta pasado un cierto tiempo, el cual es necesario para sintetizar de nuevo rodopsina.
La rodopsina es un compuesto formado por retinal (aldehdo de la vitamina A unido a una protena, la opsina). El retinal
por accin de la luz se transforma en un ismero que se desprende del fotorreceptor pasando a la sangre, y en el hgado se
resintetiza de nuevo hasta retinal.
BIOQUMICA DE LA VISIN
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BIOQUMICA DE LA VISIN
417
es el mismo para ambos tipos de fotorreceptores, si bien el proceso se ha estudiado fundamentalmente en los bastones, as
cuando la luz incide sobre el bastn, la rodopsina sufre una serie de transformaciones qumicas rpidas que conducen a la
formacin de rodopsina fotoexcitada que proporciona el nexo
de unin entre esta serie de reacciones y la respuesta elctrica.
El producto final de la transformacin ocasionada por la luz
consiste en la formacin de un complejo con el 11-cis-retinal
produciendo el pigmento visual rodopsina. Cuando la rodopsina absorbe luz, el 11-cis-retinal se isomeriza en todo-trans-retinal-opsina. En situaciones de luz y oscuridad la forma todo-
La luz transforma el
11-Cis retinal en su
isomero el todo-transretinal.
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La combinacin de
los tres colores bsicos produce toda la
gama de los mismos.
La isomerizacin de
los pigmentos de los
conos por efectos de
la luz, provoca cambios en el potencial
de membrana de los
receptores generando
as los impulsos nerviosos.
trans del retinal se isomeriza a 11-cis y la rodopsina es reconstituida. El retinol es devuelto a la circulacin y se almacena en el
hgado. Cuando es necesario, el retinol entra de nuevo en la
circulacin perifrica y es captado por la retina para ser convertido en todo-trans retinal e isomerizado a 11-cis retinal. El ciclo
se completa cuando ste ltimo se combina con la opsina para
producir de nuevo rodopsina.
Todas estas reacciones se producen en la zona de membranas del segmento externo de los bastones, la cual presenta gran
nmero de invaginaciones. El acoplamiento entre los cambios
moleculares que provoca la luz y la respuesta elctrica se realiza
mediante la activacin de la transducina, una protena G especfica. Esta protena intercambia GTP por GDP, activando
una fosfodiesterasa. sta ltima a su vez cataliza el paso de
GMPc a 5c-GMP. Cuando los niveles celulares de GMPc estn
elevados (como ocurre en la oscuridad) se mantienen abiertos
los canales de sodio de la membrana y la clula esta por lo tanto relativamente despolarizada. En estas condiciones se produce una liberacin tnica de neurotransmisor por parte del
bastn. La reduccin de los niveles de GMPc debido a la incidencia de la luz determina el cierre de los canales de sodio y la
membrana se hiperpolariza, disminuyendo de esta forma la liberacin de neurotransmisor. Este cambio en la liberacin del
neurotransmisor constituye la seal que posteriormente es procesada por las clulas nerviosas de la retina. La bomba de sodio mantiene baja la concentracin de este ion en el interior celular. Durante el proceso de transduccin se produce una amplificacin de la respuesta a la luz, cada molcula activa de
rodopsina activar unas 500 molculas de transducina, cada
una de las cuales a su vez producir la hidrlisis de varios miles
de molculas de GMPc.
Los procesos en los conos son similares, aunque existen
tres tipos distintos de rodopsinas (con diferentes espectros) y
de transducina. Los diferentes tipos de pigmentos contienen
la misma fraccin de 11-cis retinal, diferencindose en sus
opsinas. La sensibilidad de los conos es inferior a la de los
bastones.
En presencia de luz, la mayor parte de la rodopsina se encuentra no conjugada y, por lo tanto, la sensibilidad a la luz es
baja. Durante el proceso de adaptacin a la oscuridad, que
dura unos cuarenta minutos, los niveles de rodopsina se incrementan, aumentando as la sensibilidad a la luz hasta unas
25.000 veces. Los conos se adaptan ms rpidamente que los
bastones, pero su sensibilidad es mucho menor. El proceso inverso, adaptacin a la luz, requiere aproximadamente cinco minutos. Debido a que durante el proceso fotoqumico se produ-
BIOQUMICA DE LA VISIN
ce cierta perdida de vitamina A, es necesario un aporte continuo de la misma a travs de la dieta. Una deficiencia de vitamina A origina una disminucin en sus niveles sanguneos que
tiene como resultado un aumento del tiempo necesario para la
formacin de nueva rodopsina tras la exposicin a la luz. La vitamina A se almacena en el hgado en cantidades relativamente altas, por ello no es frecuente que se produzcan deficiencias
lo suficientemente graves como para causar problemas clnicos,
a menos que la carencia se prolongue de manera crnica durante periodos de tiempo relativamente largos (meses).
RESUMEN
Existen dos tipos de fotorreceptores, conos y bastones.
Las ondas luminosas impactan con estos receptores produciendo cambios qumicos que dan lugar a impulsos nerviosos que se transmiten al cerebro. Estos dos tipos de clulas requieren vitamina A para la formacin de los diferentes tipos de fotopigmentos. El E-caroteno produce dos
molculas de vitamina A (retinol). La oxidacin del retinol
en el carbono nmero 15 produce la forma aldehdica o
retinal. La rodopsina, pigmento visual, est formada por
retinal y la protena opsina. En la oscuridad, el retinal de la
rodopsina se encuentra en la forma 11-cis. Cuando son
excitadas por la luz visible las molculas de rodopsina, el
11-cis retinal experimenta una serie de transformaciones
que rinden todo-trans-retinal, el cual fuerza un cambio en
la forma de la molcula de rodopsina. Esta transformacin
conduce a una seal elctrica hacia el cerebro, que es la
base de la transduccin visual.
APLICACIONES CLNICAS
Xeroftalma o ceguera nocturna
La vitamina A interviene en el proceso de la visin y su deficiencia provoca adems de otros trastornos, ceguera nocturna. Dado que esta vitamina se almacena en el hgado, la carencia de la misma slo aparece despus de periodos prolongados
de ingestin inadecuada. La ceguera nocturna es un sntoma
precoz de carencia leve de vitamina A que consiste en que los
receptores lumnicos de los bastones no responden normalmente al estmulo luminoso. La deficiencia grave de vitamina A
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da lugar a una progresiva queratinizacin de la cornea, conocida como xeroftalma en sus estados avanzados. En las etapas
finales suele aparecer infeccin seguida de hemorragia ocular y
perdida permanente de visin. Los sntomas graves de carencia
de vitamina A generalmente slo se ven en pases subdesarrollados.
Por otra parte el exceso de almacenamiento de la vitamina
o hipervitaminosis es un cuadro txico. La ingesta alimentaria
de vitamina A no provoca toxicidad, por lo que la mayora de
los casos de hipervitaminosis ocurren por dosis farmacolgicas
masivas utilizadas en el tratamiento del acn o en la prevencin
de resfriados, si bien esta prctica, comn en tiempos pasados,
es relativamente rara en la actualidad.
Discromatopsias
Algunas enfermedades genticas se caracterizan por la ausencia de un tipo o ms de determinados conos, en estos casos
se encuentra alterada la sntesis de fotopigmento. La discromatopsia estar ms o menos acentuada en funcin del nmero
de pigmentos afectados y de su grado de afectacin. En cada
caso, existir ceguera para el color codificado por el tipo de
cono afectado. Este tipo de trastornos de la visin se encuentra
en aproximadamente el 10% de la poblacin, del cual el 90%
corresponde a los varones, ya que se trata de una enfermedad
gentica ligada al cromosoma X. La alteracin de los fotopigmentos puede llegar a hacerlos completamente insensibles a la
luz, en este caso se habla de ceguera total para los colores. Esta
forma de la enfermedad es muy rara y afecta solo al 0,01% de
la poblacin.
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