Acreditacin

ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil
Dr. Alberto Zamora Palma

Verificacin de la Imprecisin. Primera Parte

Definiciones:
Precisin
La Precisin de un Mtodo Analtico es el grado de proximidad entre resultados independientes obtenidos en
condiciones estipuladas. Se expresa cuantitativamente en trminos de Imprecisin, Error Aleatorio,
Desviacin Estndar (SD) o como coeficiente de variacin (CV) de una serie de medidas.
Precisin Intermedia
La Precisin Intermedia es una cantidad que indica la dispersin de una serie de medidas desarrolladas sobre
un material, con el mismo procedimiento de medida, en el mismo laboratorio sobre un perodo extenso de
tiempo.
Repetibilidad
La Repetibilidad o Precisin Intra-corrida es una cantidad que indica la dispersin de una serie de medidas,
desarrolladas en idnticas condiciones (dentro de una misma corrida).
Veracidad
La Veracidad de un Mtodo Analtico es el grado de proximidad entre el valor promedio obtenido de una
distribucin de resultados y el valor verdadero de la muestra. La medida de Veracidad es expresada
usualmente como el Bias o sesgo.
Validacin:
Verificacin de que los requisitos especificados son adecuados para el uso previsto
Verificacin:
Aportacin de evidencia objetiva de que un elemento satisface los requisitos especificados.
Vocabulario Internacional de Metrologa

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

Introduccin
Con la creciente cultura de la calidad entre los Laboratorios Clnicos, tambin a aumentado la necesidad de la
evaluacin del desempeo de los mtodos analticos que utiliza para la realizacin de los exmenes ofrecidos
a sus clientes; una de las herramientas estadsticas que de inicio suelen utilizar para lograr este objetivo es la
evaluacin de la Precisin, sin embargo, al intentar realizar esta actividad, el profesional del laboratorio
encontrar dos opciones la primera es el documento EP15-A2, publicado por el CLSI, formalmente conocido
como NCCLS, este es uno de los primeros documentos de referencia que se han publicado en el mundo para
promover las buenas prcticas de laboratorio y es un protocolo riguroso para asegurar la integridad cientfica
de los resultados emitidos por el laboratorio.
El otro documento que el profesional encontrar es la Gua para la validacin y la verificacin de los
procedimientos de examen cuantitativos empleados por el laboratorio clnico, publicada por la EMA (Entidad
Mexicana de Acreditacin), el cual resulta un documento sencillo y prctico, que toma como base la
informacin publicada en libros emitidos por alguna autoridad en la materia (por ejemplo: ICH, ILAC, ISO,
IUPAC, NCCLS, IFCC), mtodos establecidos o autorizados por organismos cientficos nacionales o
internacionales (ejemplo: NOM-199-SSA1- 2000), publicados en artculos o revistas especializadas, mtodos
revisados por pares o publicados en directrices internacionales, regionales o nacionales, as como los
mtodos de examen especificados por el fabricante del equipo. Aunque actualmente para fines de
acreditacin la Entidad Mexicana de acreditacin acepta los ensayos con cualquiera de las dos
aproximaciones, le corresponder al profesional del laboratorio tomar en cuenta los costos, y la complejidad
de las dos propuestas para tomar una decisin correcta en la medicin de la imprecisin. A continuacin se
explican las dos opciones.

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

1. EP15-A2 User Verification of Performance for Precision and Trueness.

Este documento debe utilizarse cuando se ha establecido
un mtodo analtico inicialmente en un laboratorio clnico,
con la finalidad de verificar el desempeo del mtodo antes
de ser utilizado con muestras de pacientes, sin embargo,
tambin puede emplearse vara verificar el desempeo de
un mtodo despus de implementar Acciones Correctivas
para Programa de Ensayos de Aptitud no aprobados. Para
evaluar la precisin.
CLSI recomienda utilizar los documentos EP15-A y EP05A2. EP05-A se utiliza para validar un mtodo contra los
requisitos del usuario y es utilizado generalmente por
proveedores de reactivos e instrumentos para demostrar la
precisin de sus mtodos. En contraste EP15-A2 se emplea
para verificar que el desempeo de un laboratorio es
consistente con las especificaciones del fabricante .

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

Evaluacin de la Imprecisin. Mtodo.

Para realizar este protocolo pueden utilizarse varios materiales como un pool de muestras de pacientes,
materiales de control de calidad o estndares comerciales con valores conocidos.
El protocolo EP05-A2 dice que:
La evaluacin se realiza en al menos dos niveles
Cada Nivel se corre por duplicado, con dos corridas por da durante 20 das, cada corrida debe
realizarse con un tiempo mnimo de dos horas entre ellas.
Debe haber al menos una muestra control en cada corrida.
Debe modificarse el orden del anlisis del material de prueba y el material de control en cada
corrida o por cada da.
Para simular la operacin real , incluya al menos 10 muestras de pacientes en cada corrida.
El protocolo EP15-A2 es similar excepto que el experimento se realiza con tres rplicas por cinco das de
al menos dos niveles.
Los valores atpicos (outliers) son aquellos que exceden 5.5 veces la DS obtenida en la prueba de
precisin primaria, en estos casos, los nmero pares deben ser rechazados, se deben investigar las
causas de la desviacin y repetir la corrida.

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

Evaluacin de la Imprecisin. Mtodo.

Repetibilidad utilizando Calcio Nivel 1 (mmol/L)
Corrida / Da

Rplica 1

Rplica 2

Rplica 3

2.015

2.013

1.963

2.019

2.002

1.979

2.025

1.959

2.000

1.972

1.950

1.973

1.981

1.656

1.957

La repetibilidad se estima utilizando la siguiente frmula:

D

Sr =

(X dr Xd)2

d=1 r =1

D (n -1)

Donde :
D=
n=
Xdr =
Xd =

Nmero total de dias

Nmero total de rplicas por dia
Resultado por cada replica en el da
Promedio de todas las rplicas en el da .

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

Evaluacin de la Imprecisin. Primer Paso.

Calcule la media de los replicados por da
Reste la media a cada uno de los resultados
Eleve al cuadrado el valor resultante.
Media de las rplicas por da:
Promedio por da

(R1- Promedio)2

(R2- Promedio)2

(R3- Promedio)2

1.997

0.00032

0.00026

0.00116

2.000

0.00036

0.00000

0.00044

1.995

0.00092

0.00127

0.00003

1.965

0.00005

0.00022

0.00006

1.965

0.00027

0.00008

0.00006

La suma de las diferencias al cuadro es 0.0055 y sabemos que:

D=5yn=3
Sr =

0.005
5 (3 -1)

Sr = 0.023 mmol/L

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

Evaluacin de la Imprecisin. Segundo Paso.

El siguiente paso es calcular la varianza de los promedios diarios (S b2) utilizando la siguiente ecuacin.
D

Sb =
2

(X d X)2
d=1

D (n -1)

D = Nmero total de das

Xd = Promedio de todas las rplicas en el da
X=

Promedio de todos los resultados

Utilizando los valores de nuestro ejemplo, la media de todos los resultados es 1.984 mmol/L. En el da
1 la media de las tres rplicas es 1.997 (ver tabla 2), de manera que el cuadro de las diferencias es
(1.997-1.984)2 = 0.000162.
Tabla 3: Clculos para los siguientes das

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

Evaluacin de la Imprecisin. Segundo Paso.

Sumando los cuadrados de las diferencias tendremos un total de 0.00127. As, la varianza de los promedio
diarios es:
0.00127
Sb2 =

= 0.000318

Calculo de la Precisin Intra laboratorio

Podemos realizar el clculo utilizando la siguiente ecuacin
n-1
Si =

* Sr + Sb2

Donde:
n = Nmero de rplicas por dia
As, utilizando los valores del ejemplo tendremos
Si =

3-1
* 0.000529+000318= 0.026 mmol/L
3

Evaluacin de los resultados

El mtodo EP15-A2, se utiliza para verificar que el mtodo cumple con las especificaciones del fabricante,
por lo tanto la si la repetibilidad y la DS son menores que las indicadas por el fabricante para el analito en
particular, podemos afirmar que el ensayo es aceptado y no se requiere ninguna verificacin 2,3,4.

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

2. PROTOCOLO PUBLICADO EN LA GUIA PARA LA VALIDACIN Y LA VERIFICACIN DE

LOS PROCEDIMIENTOS DE EXAMEN CUANTITATIVOS EMPLEADOS POR EL
LABORATORIO CLNICO. (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin
Para evaluar la imprecisin de acuerdo al protocolo propuesto por la ema.ac, se puede aplicar alguna de las
siguientes opciones:
a)

Realizar el examen de un material (muestras de pacientes, muestras control, etc.) de valor conocido o no,
analizado por lo menos 20 veces en forma continua, llamado intraserial o intracorrida o 20 veces en el
transcurso del da (24 h) llamado intrada.

b) Utilizar 20 valores obtenidos uno cada da de la misma muestra de un paciente o bien obtenidos de una curva
de un programa de control de calidad interno de 20 das diferentes y del mismo lote (interserial o
intercorrida).
En ambos casos se debe calcular la media, la desviacin estndar y el Coeficiente de Variacin expresado en
porcentaje.
Criterio de Aceptabilidad
Acorde al fabricante
La precisin del mtodo obtenida por el laboratorio debe ser menor o igual a la precisin del mtodo que
proporciona el fabricante.
En caso de que sea mayor, el laboratorio deber presentar la justificacin estadstica documentada de que no
existe una diferencia significativa.

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

2. PROTOCOLO PUBLICADO EN LA GUIA PARA LA VALIDACIN Y LA VERIFICACIN DE

LOS PROCEDIMIENTOS DE EXAMEN CUANTITATIVOS EMPLEADOS POR EL
LABORATORIO CLNICO. (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin
Precisin acorde a criterios del Clinical Laboratory Improvement Amendments (CLIA).
Los resultados en la corrida intraserial o en la intrada tendrn menor precisin que la interserial, por lo tanto el
criterio de aceptabilidad debe ser diferente.
Para la precisin intraserial o intrada, la desviacin estndar obtenida debe ser igual o menor a del error
total permitido esto es:
DE intraserial o DE intrada 0,25 ET (error total permitido)
De manera similar para la precisin interserial, la desviacin estndar debe ser de o menor del error total,
esto es:
DE interserial 0,33 ET (error total permitido)
Una mayor desviacin estndar implica un mayor coeficiente de variacin y por lo tanto una mayor precisin del
mtodo analtico 5.

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

2. PROTOCOLO PUBLICADO EN LA GUIA PARA LA VALIDACIN Y LA VERIFICACIN DE

LOS PROCEDIMIENTOS DE EXAMEN CUANTITATIVOS EMPLEADOS POR EL
LABORATORIO CLNICO. (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin
Ejemplo:
Tabla 4: Imprecisin de Calcio Nivel 1

Con los datos anteriores generamos la siguiente tabla:

Tabla 5: Modelo para el Informe de la Imprecisin

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

2. PROTOCOLO PUBLICADO EN LA GUIA PARA LA VALIDACIN Y LA VERIFICACIN DE

LOS PROCEDIMIENTOS DE EXAMEN CUANTITATIVOS EMPLEADOS POR EL
LABORATORIO CLNICO. (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin
ANALISIS:
Es evidente que el protocolo EP15-A2 User Verification Of Performance For Precision And Trueness,
resulta un tanto mas complejo que el propuesto en la Gua Para La Validacin Y La Verificacin De Los
Procedimientos De Examen Cuantitativos Empleados Por El Laboratorio Clnico. Publicado por la
(ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin. Sin embargo, tambin es uno de los protocolos con mayor
solidez metrolgica para evaluar la imprecisin, la dificultad que presenta

del modelo matemtico es

impactante de inicio pero basta con familiarizarse con la metodologa para entender que es muy prctico y
til para la evaluacin del desempeo de los mtodos analticos; por otra parte, el modelo propuesto por la
ema.ac, es mucho mas sencillo y no es menos confiable que el primero para evaluar la imprecisin. Ambos
mtodos son herramientas estadsticas fundamentales que le permiten al profesional del laboratorio evaluar
confiablemente el desempeo de sus mtodos analticos.

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

2. PROTOCOLO PUBLICADO EN LA GUIA PARA LA VALIDACIN Y LA VERIFICACIN DE

LOS PROCEDIMIENTOS DE EXAMEN CUANTITATIVOS EMPLEADOS POR EL
LABORATORIO CLNICO. (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin
CONCLUSIONES
Probablemente la actividad esencial del profesional del laboratorio es la medicin, lo hacemos todos los das,
y en un mundo globalizado lo debemos hacer con base en estndares internacionales, de manera que
nuestros resultados puedan tener trazabilidad y por lo tanto validez en cualquier pas. Dos herramientas
bsicas y tiles son el modelo propuesto por el CLSI con el protocolo EP15-A2 User Verification Of
Performance For Precision And Trueness, y el protocolo propuesto por la ema.ac en la Gua Para La
Validacin Y La Verificacin De Los Procedimientos De Examen Cuantitativos Empleados Por El
Laboratorio Clnico, el primero con mayor difusin internacional y probablemente con mayor aceptacin, sin
embargo, el propuesto por la ema.ac. es interesante por su fcil aplicacin e interpretacin sin perder su
validez metrolgica.
Es necesario realizar evaluaciones comparativas y prospectivas para saber cual de los mtodos propuestos
refleja mejor el desempeo de los mtodos analticos.
Independientemente del protocolo que decida emplear el usuario, no debe perderse de vista que esta
actividad metrolgica siempre deber hacer con bases cientficas y con la responsabilidad suficiente de
manera que puedan brindarse resultados confiables y siempre con la idea de medir correctamente en
beneficio de nuestros pacientes.

Acreditacin
ISO 15189:2007
Cmo hacerlo.fcil

2. PROTOCOLO PUBLICADO EN LA GUIA PARA LA VALIDACIN Y LA VERIFICACIN DE

LOS PROCEDIMIENTOS DE EXAMEN CUANTITATIVOS EMPLEADOS POR EL
LABORATORIO CLNICO. (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin
Bibliografa:
1.

JCGM 200:2008. Vocabulario Internacional de Metrologa Conceptos Fundamentales y Generales y

Trminos Asociados (VIM). Traduccin al Espaol de VIM 3.

2.Tholen D. CLSI EP Documents, CLSI evaluation protocols.August 2006. Recursos: Acceso el 20 de Julio
2011. www.mlo.online.com.
3. Chesher D, Evaluating Assay Precision. Clin Biochem Rev Vol 29 Suppl (i) August 2008.
4. Clinical and Laboratory Standards Institute. User verification of performance for precision and trueness;
approved guideline second edition. CLSI document, EP15-A2. Wayne, PA, USA: CLSI; 2005.
5. Entidad Mexicana de Acreditacin (EMA). Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de
examen cuantitativos empleados por el laboratorio clnico, publicada. Mxico, Abril 2008.