Acreditacion de Laboratorios

Requerimientos sobre Validacin de Mtodos
en el marco de la Acreditacin de Laboratorios

segn la norma ISO 17025
Disertante:
Lic. Pablo lvarez
Calidad y Competitividad
INTI-Qumica
Requerimientos sobre Validacin de Mtodos en el marco de

la Acreditacin de Laboratorios segn la norma ISO 17025
Guas de referencia
EURACHEM
www.eurachem.org
The Fitness for Purpose of Analytical Methods - A

Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics
(1998)
Guide to Quality in Analytical Chemistry An Aid to
Accreditation (2002)
Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement 2nd Edition (2000)

Guas de referencia
IUPAC
www.iupac.org
Harmonized Guidelines for Single-Laboratory

Validation of Methods of Analysis - 2002
Nomenclature in Evaluation of Analytical Methods

including Detection and Quantification Capabilities
(IUPAC Recommendations 1995)

Guas de referencia
ICH
www.ich.org
Validation of Analytical Procedures:

Text and Methodology Q2(R1) - 2005

Qu es validar?
Definicin:
ISO/IEC 17025:2005
Confirmacin, mediante el examen y el aporte
de evidencias objetivas, de que se cumplen los
requisitos particulares para un uso especfico
previsto.

Qu se puede validar?
Mtodos analticos
Mtodos de control de limpieza
Equipos e instalaciones
Procesos
Programas de computacin
Personal

Cmo se valida un mtodo de ensayo?
Existen dos formas de validar un mtodo de ensayo:
Estudio colaborativo
Collaborative study
Un solo laboratorio
In-house validation
Single-laboratory validation

establecer requisitos
validar el mtodo
ajustar el
mtodo
evaluar el mtodo
NO
apto para el
propsito?
SI
FIN

evaluacin de
los parmetros
en forma
individual
criterios para
cada parmetro
Aptitud
para el
propsito
evaluacin
global de los
parmetros de
validacin
incertidumbre
de medicin

Parmetros tpicos de validacin
Selectividad (Especificidad)
Linealidad
Lmite de Deteccin
Lmite de Cuantificacin
Precisin
Veracidad (Exactitud)
Rango
Robustez
Incertidumbre de Medicin

Selectividad
Definicin
IUPAC
Capacidad de un mtodo para cuantificar
exactamente un analito en presencia de
interferencias

Selectividad
Qu es una interferencia?
Una interferencia es aquella especie qumica que causa
un error sistemtico en la determinacin de un analito.
Se pueden dar dos casos:
9 la presencia de interferencias que puedan dar una
respuesta analtica que no se diferencie de la
respuesta del analito.
9 la presencia de interferencias que afecten la seal del
analito (efecto matriz)

Selectividad
Cmo se evala?
Anlisis simultneo de:
Un blanco de reactivos
Una matriz natural o sinttica libre de analito
Analito en un solvente adecuado
La misma matriz con el agregado de una cantidad
conocida de analito o una muestra real
Potenciales interferencias en presencia de analito

Linealidad
Definicin
ICH
Capacidad de un mtodo analtico de

producir resultados que sean directamente,
o por medio de una transformacin
matemtica definida, proporcionales a la
concentracin de analito en la muestra.

Linealidad
Recomendaciones
Cantidad de puntos: 6 concentraciones
Igualmente espaciados
Cantidad de replicados por concentracin: 3
Replicados independientes
Usando analito puro o analito en matriz
Medidos aleatoriamente

Linealidad
Evaluacin
Evaluacin visual
Evaluacin estadstica (cuadrados mnimos)
Grfico de los residuos
Coeficiente de correlacin (R)
Ordenada al origen y pendiente

Linealidad
Evaluacin
A partir de la informacin obtenida en la evaluacin de la
linealidad, se determinar la estrategia a utilizar en el
mtodo de rutina. Puede ser que slo sea necesario
calibrar con un punto o tal vez con dos puntos. En otros
casos ser necesario calibrar con varios puntos.
Es importante tener en cuenta que los siguientes
parmetros de validacin, en particular la precisin y la
veracidad, sean evaluados utilizando la estrategia de
calibracin que se usar en el procedimiento elegido.

Lmites de Deteccin y de Cuantificacin
Definiciones
EURACHEM
LD:
Menor concentracin de analito en una muestra
de ensayo que puede ser confiablemente
distinguida del blanco.
LQ:
Menor concentracin de analito en una muestra que
puede ser determinada con un aceptable nivel de
incertidumbre.

Mtodos de determinacin
Si bien existen diferentes metodologas para calcular los
lmites de deteccin y cuantificacin, la ms utilizada es la
siguiente:
LD = 3 . s
LQ = 10 . s
s = desviacin estndar de un blanco o de
una muestra fortificada a baja concentracin

IMPORTANTE
Cuando sea necesario establecer la posible
presencia o ausencia de un componente en una
muestra, el resultado del ensayo nunca deber
contrastarse con el lmite de deteccin (LD).
En este caso, el parmetro indicado es el llamado
Lmite o Nivel crtico (Lc).
Adems, se recomienda informar no detectado
y evitar hacer declaraciones como ausente,
ausencia o no contiene.

Errores aleatorios y sistemticos
Definiciones (VIM 2008)

error de medicin: diferencia entre el resultado de
una medicin y un valor de referencia.
error aleatorio: componente del error de medicin
que, en mediciones repetidas, vara de forma
impredecible.
error sistemtico: componente del error de medicin
que, en mediciones repetidas, permanece constante
o vara de forma predecible.

error
aleatorio
Error de medicin
error sistemtico
(bias)
error de la
medicin xi
x
xi
xverdadero
del mesurando

errores aleatorios
errores sistemticos
Precisin
Veracidad
Precision
Trueness
Exactitud
Accuracy

ct
a
ex
veracidad
requisito 1
d
ti u
requisito 2
error sistemtico
precisin
error aleatorio

Precisin
Definicin
VIM 2008
Grado de concordancia entre resultados
obtenidos en mediciones repetidas de un mismo
objeto o de objetos similares, bajo condiciones
especificadas

Precisin
Diferentes condiciones
Repetibilidad
Precisin intermedia
Reproducibilidad

Precisin
Evaluacin
La precisin de un mtodo de ensayo se expresa
cuantitativamente como imprecisin a travs del
clculo de la desviacin estndar de una serie de
resultados (s).
En una validacin es conveniente evaluar la
precisin tanto en condiciones de repetibilidad
como de precisin intermedia.
Si el rango del mtodo es amplio deber evaluarse
la precisin para distintos valores dentro del rango.

Veracidad (trueness)
Definicin
VIM 2008
Grado de concordancia entre el promedio de un
nmero infinito de resultados y un valor de
referencia.

Cmo se evala?
A travs de la medicin del sesgo (bias), el cual se
puede expresar como:
Diferencia
Recuperacin
xref = valor de referencia
= xobs xref
%R =
xobs
xref
x 100
xobs= valor medio observado

Cmo se evala?
Analizar varias veces un material de referencia
certificado (MRC) o una muestra/matriz fortificada
dentro del rango del mtodo.
Tambin puede evaluarse la veracidad comparando el
mtodo con otro previamente validado o con un mtodo
primario.
En cualquier caso conviene llevar a cabo algn test
estadstico para evaluar si existen diferencias
estadsticamente significativas.

Rango
Definicin
IUPAC
Intervalo de concentraciones de analito
dentro del cual se puede considerar al
mtodo validado

Rango
No hay criterio unificado con respecto al

sentido de este parmetro; mientras algunos
hacen referencia al rango lineal, otros hablan
de rango de trabajo, pero lo ms importante
en una validacin es establecer el rango de
concentraciones de analito en la muestra para
el cual el mtodo est validado.

Robustez
Definicin
ICH
La robustez de un procedimiento analtico es una
medida de su capacidad para mantenerse sin
cambios ante pequeas pero deliberadas
variaciones en los parmetros del mtodo, que
provee una indicacin de su confiabilidad durante
el uso normal.

Robustez
Cmo se evala?
Se desafa al mtodo realizando variaciones tanto
en la preparacin de la muestra como en la
determinacin analtica.
Se estudia el efecto de tales variaciones sobre los
parmetros previamente validados, en particular
sobre la precisin y veracidad del mtodo.
Gran parte de esta informacin proviene del
desarrollo del mtodo.

Incertidumbre
Definicin
GUM
Parmetro, asociado con el resultado de una
medicin, que caracteriza la dispersin de los
valores que podran ser razonablemente
atribuidos al mesurando.

Incertidumbre
La incertidumbre puede evaluarse a partir de la

informacin obtenida en una validacin, en particular
a partir de la precisin intermedia y de la veracidad
del mtodo. (ver guas Eurachem 2nd ed. - 2000 y
Eurolab Technical Report N1/2007)
www.eurachem.org
www.eurolab.org
Dependiendo de los criterios establecidos

previamente a la validacin, este parmetro puede
servir para establecer el fitness for purpose del
mtodo analtico.

Requisito normativo
ISO/IEC 17025:2005
Requisitos generales para la competencia de los
laboratorios de ensayo y de calibracin
5.4.5.2 Validacin de los mtodos
El laboratorio debe validar los mtodos no normalizados,
los mtodos que disea o desarrolla, mtodos
normalizados empleados fuera del alcance previsto, as
como las ampliaciones y modificaciones de los mtodos
normalizados, para confirmar que los mtodos son aptos
para el fin previsto.

Requisito normativo
ISO/IEC 17025:2005
Requisitos generales para la competencia de los
laboratorios de ensayo y de calibracin
5.4.2 Seleccin de los mtodos
... El laboratorio debe confirmar que puede aplicar
correctamente los mtodos normalizados antes de
utilizarlos para los ensayos. Si el mtodo normalizado
cambia, se debe repetir la confirmacin...
verificacin del
mtodo

Requisito normativo
Qu es la verificacin de un mtodo?
La verificacin de un mtodo es el proceso de asegurar
que los parmetros de performance del mtodo,
previamente establecidos, pueden ser alcanzados por
el laboratorio.
Los parmetros que tpicamente se verifican, son la
precisin y la veracidad (trueness) del mtodo. En
algunos casos puede ser necesario verificar tambin
algn otro parmetro, por ejemplo, el lmite de
deteccin o la linealidad.

Requisito normativo
Mtodo
elegido
SI
verificacin
Ya
validado?
NO
validacin

Criterios del Organismo Argentino de Acreditacin (OAA)
Gua para Validacin de Mtodos de Ensayo del OAA

Habitualmente los organismos de acreditacin
establecen los requisitos indicados en las normas
de referencia y adems suelen agregar
requerimientos propios.
La Gua para Validacin de Mtodos de Ensayo
(DC-LE-05) del OAA establece los criterios de
dicho organismo con respecto al grado de
validacin requerido para los mtodos, en funcin
de sus caractersticas.

Etapas del proceso de validacin

La gua establece que la validacin es un proceso de tres
etapas:
1. establecimiento de los requisitos a cumplir, ya sea para
los parmetros de validacin en forma individual o
conjunta.
2. determinacin de los parmetros de validacin.
3. evaluacin de los resultados obtenidos para los
parmetros validados comparados con los requisitos
establecidos previamente.

Tipos de mtodos
La gua tambin establece el alcance de la validacin
dependiendo de las caractersticas del mtodo:
1. mtodo normalizado, ejecutado tal y como se establece
en el documento.
2. mtodo normalizado modificado, en el cual se hayan
realizado cambios que puedan tener repercusin sobre la
calidad de los resultados; por ejemplo cambio en la
metodologa de extraccin, cambio en la matriz, extensin
del rango, equipamiento nuevo, etc.
3. mtodo interno, elaborado por el laboratorio o sacado de
la bibliografa pero sin datos de performance del mtodo.

Mtodo normalizado
Un mtodo normalizado, en general, est totalmente validado
y por lo tanto el laboratorio, para demostrar que lo ejecuta
correctamente, slo deber verificarlo. Esto significa que
deber demostrar que puede alcanzar la performance
adecuada para ciertos parmetros de validacin.
Si bien no se pueden establecer criterios rgidos con respecto
a qu parmetros verificar, es habitual que se controlen la
precisin y la veracidad, en particular cuando estos
parmetros estn indicados en las normas de referencia.
Tamben se puede confirmar el mtodo a travs de la
participacin en ensayos de aptitud y/o la elaboracin de
grficos de control.

Mtodo normalizado
En el marco de la acreditacin de laboratorios se consideran
mtodos normalizados a:
9 mtodos publicados por organismos de normalizacin
internacionales, regionales o nacionales, ej.:
ISO, EN, NM, ASTM, BS, DIN, IRAM, etc.
9 mtodos publicados por organizaciones reconocidas
en diferentes mbitos, ej:
AOAC, FIL-IDF, EPA, SMW&W, USP, etc.

Mtodo normalizado modificado

Los mtodos normalizados que han sido modificados deben
ser validados de tal forma de evaluar qu incidencia tienen
los cambios realizados sobre los distintos parmetros de
validacin.
El laboratorio debe tener la competencia para evaluar qu
parmetros deberan revalidarse en funcin de los cambios
realizados.
Por ejemplos, cambios en el mtodo de extraccin podran
afectar la selectividad por la posible presencia de
interferencias y tambin podra afectar la veracidad.

Mtodo normalizado modificado

Otros ejemplos:
Modificacin
Posible efecto sobre...
tipo de matriz
selectividad, veracidad, LD, LQ
extensin del rango
linealidad, precisin
cambio de analista
precisin, veracidad
sistema de deteccin
selectividad, linealidad; LD

Mtodo interno
Los mtodos desarrollados internamente o los mtodos
obtenidos de bibliografa que no presenten valores de
performance declarados, debern ser validados
completamente.
El grado de validacin y los parmetros a evaluar
dependern de cada mtodo.
En la tabla siguiente se pueden observar algunos
ejemplos:

Mtodo
Cualitativo
Anlisis
de trazas
Comp.
mayoritario
Fsicoqumico
9
-
depende
Lmite de cuantificacin
9
-
depende
-
Precisin
Veracidad
Rango
Robustez
9
-
Selectividad
Linealidad
Lmite de deteccin
Incertidumbre

Informe de validacin
Un informe de validacin, tpicamente, debe contener la
siguiente informacin:
Objetivo y alcance (matrices, concentraciones)
Instrumentacin y materiales utilizados
Personal involucrado
Protocolo de validacin
Resultados y conclusiones
Procedimiento de ensayo
Firma del/de los responsable/s de la aprobacin
Muchas gracias por su atencin!

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Cantidad de puntos: 6 concentraciones

Cantidad de replicados por concentracin: 3

Usando analito puro o analito en matriz

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xref = valor de referencia

xobs= valor medio observado

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La incertidumbre puede evaluarse a partir de la

Dependiendo de los criterios establecidos

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