ELECTROFORESIS

La mayora de los polmeros biolgicos poseen carga elctrica y, por lo

tanto, son capaces de migrar bajo la influencia de un campo elctrico. El
transporte de partculas a travs de un disolvente mediante un campo
elctrico recibe el nombre de electroforesis.
Una forma usual de caracterizar una macromolcula es la determinacin
de la velocidad con que se mueve al someterla a un campo elctrico.
Esta propiedad puede ser utilizada para calcular el peso molecular de
una protena para distinguir molculas por su carga neta o su forma,
para detectar cambios de aminocidos, de restos polares o no polares y
viceversa, para separar cuantitativamente distintas especies
moleculares.
Cuando una mezcla de molculas ionizadas y con carga neta son
colocadas en un campo elctrico, estas experimentan una fuerza de
atraccin hacia el polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir
cierto tiempo las molculas cargadas positivamente se desplazaran
hacia el ctodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se
desplazaran hacia el nodo (el polo positivo).
El movimiento de las molculas est gobernado tambin por dos
fuerzas adicionales; inicialmente la friccin con el solvente dificultar
este movimiento originando una fuerza que se opone , por otro lado las
molculas tienen que moverse en forma aleatoria o movimiento
browniano debido a que poseen energa cintica propia denominado
difusin. La energa cintica de las molculas aumenta con la
temperatura, por ello a mayor temperatura mayor difusin.
La suma de todas estas fuerzas provoca que las molculas no migren
de una manera homognea, de tal manera que, si las molculas son
colocadas en un cierto lugar de solucin, los iones comenzaran a
moverse formando un frente cuya anchura aumentara con el tiempo.
Para reducir la anchura de este frente podemos reducir el
movimiento de las molculas empleando un medio que oponga ms
resistencia a dicho movimiento. Una forma comn de hacer esto es
formar un gel. El gel consiste de un polmero soluble de muy alto peso
molecular que atrapa molculas de agua y forma un tamiz que dificulta
el movimiento de los solutos, consecuentemente, la migracin
electrofortica de las molculas ser ms lenta, pero el ensanchamiento
del frente se ver reducido tambin.

En la electroforesis la separacin partcula se realiza en base al

movimiento inducido por un campo elctrico. El campo elctrico resulta
en la aplicacin de una fuerza sobre las partculas que es proporcional a
su carga o potencial de superficie. La fuerza resultante induce una
velocidad diferente en las distintas macromolculas. Es decir, si se
aplica un campo elctrico durante un perodo de tiempo dado a travs
de una matriz que contiene una mezcla de macromolculas con
diferentes potenciales de superficie, las molculas estarn en diferentes
lugares al detener el campo.
Tipos de Electroforesis
Existen tres tipos de electroforesis: de frente mvil, zonal y continua.
En la electroforesis de frente mvil las macromolculas estn presentes
en la disolucin y su posicin (el frente que separa la disolucin del
disolvente) se determina en funcin del tiempo por ptica de shlieren.
Este mtodo, que es equivalente en muchos aspectos al de frente de
sedimentacin, es una tecnic analtica que ha sido utilizada
principalmente en la determinacin de la movilidad y puntos
isoelctricos de las protenas. Sin embargo, dada la poca utilidad de la
determinacin cuantitativa de la movilidad, la electroforesis de frente
mvil es muy poco usada.
En la electroforesis zonal, la disolucin a tratar se aplica como una
mancha, o como una banda, y las partculas migran a travs de un
disolvente, utilizando adems de un medio soporte inerte y homogneo,
tal como el papel o ciertos tipos de geles. Esta tcnica es utilizada para
analizar mezclas, para determinar la pureza de la muestra, para detectar
cambios de movilidad o de conformacin y para la purificacin de
sustancias. La determinacin cuantitativa de la movilidad nunca se lleva
a cabo, a causa de la imposibilidad virtual de tener en cuenta
tericamente los efectos que el material de soporte introduce en el
proceso electrofortico.
En la electroforesis continua, la muestra se aplica tambin en una zona,
pero se aade continuamente a lo largo del proceso.

Bibliografa:
Tiselius, A., A new apparatus for electrophoretic analysis of coloidal
mixtures, Trans. Faraday. Soc., 33, 524, 1937.
E.D.P. de Robertis, E.M.F. de Robertis I y II. Biologa Molecular y Celular
David Freifelder, Tcnicas de bioqumica y biologa molecular, Pag.
235,236