UNIVERSIDAD AUTONOMA DEL ESTADO DE

MEXICO
HUMANISMO QUE TRANSFORMA

MATERIA: BIOFSICA
PROTOCOLO DE: CINETICA DE FARMACOS
PROFESOR: DR.EDGAR VILLAGRAN
INTEGRANTES:
-JUAN ANTONIO ARRIGA VIVEROS
-KATYA DOMNGUEZ JAIMES
-INDRA NAYELI MUOZ HIGAREDA
-ALDO ESCOBAR GUADARRAMA
- MARA DE PILAR MORALES
RODRGUEZ.
- KATHIA ALVAREZ BENITEZ
-GRISELDA FELIPE BRITO

ENTREGA: 20/ABRIL/2015

INTRODUCCION
La licenciatura en biotecnologa es una carrera multidisciplinaria, por lo tanto
engloba distintas reas de estudio como; matemticas, biologa, qumica, fsica
etc. En esta ocasin nos enfocaremos en el rea de estudio de la biologa y
biofsica La cual es un reflejo de los avances cientficos y tecnolgicos ocurridos
durante los ltimos aos, es por ello que ocupan un papel muy importante en las
aplicaciones biotecnolgicas, puesto que su campo de estudio se enfoca en las
aplicaciones, de la biologa, con principios y mtodos de la fsica.
En esta prctica se pretende aplicar la cinemtica de los frmacos, auxilindonos
en estas reas de estudio.
La cinemtica, es la rama de la fsica que estudia las leyes del movimiento de los
cuerpos sin considerar las causas que lo originan (las fuerzas) y se limita,
esencialmente, al estudio de la trayectoria en funcin del tiempo. La aceleracin
es el ritmo con el que cambia la velocidad. La velocidad y la aceleracin son las
dos principales magnitudes que describen cmo cambia la posicin en funcin del
tiempo.
En este caso como la prctica consiste en el cultivo de bacterias y conocer el
efecto de un frmaco sobre ellos, de debe de tomar el nmero de bacterias en
crecimientos en funcin del tiempo en un grfico, y poder conocer as poder llegar
a objetivos planteados.

OBJETIVOS
OBJETIVOS GENERALES

Conocer la importancia as como la relacin entre las distintas disciplinas

estudiadas.
Conocer aplicaciones de la biofsica en el rea biolgica.
Saber aplicar conocimientos, para poder establecer buenos resultados, y
que sean verdicos.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Aplicar conocimientos previos para llevar acabo correctamente la prctica.

Poder obtener una grfica que nos muestre el crecimiento de bacterias, en
funcin del tiempo, (efectos).

HIPOTESIS
EL antibitico reducir el crecimiento de estafilococos, en caso de muerte
prematura del microorganismo, este no podr dar ms crecimiento y se detendr
la produccin. Mientras mayor sea la cantidad de frmaco el crecimiento de
bacterias disminuir. (Puede provocar su extincin)

MATERIALES
ESPECTROFOTMETRO: Es el aparato que se utiliza para medir la turbidez.
Este aparato proporciona luz monocromtica por medio de un filtro que permite
slo el paso de la longitud de onda elegida (normalmente las longitudes de onda
usadas para medir la turbidez bacteriana estn en el rango 540 660 nm).
Requerimientos para su uso:
Debe de estar a 0 de absorbancia, a 100 de transmitancia.la cubeta es donde se
coloca la muestra.
BLA: Se refiere al blanco de reactivo que puede ser agua.

Imagen 1. Espectrofotmetro

Cubeta de espectrofotmetro:

Fabricado en

plstico, vidrio o cuarzo

(transparente a la luz ultravioleta) y diseado para mantener las muestras durante

los experimentos de espectroscopia. Las cubetas deben ser tan claras o

transparentes como sea posible, sin impurezas que puedan afectar a una lectura
espectroscpica. Al igual que un tubo de ensayo, una cubeta puede estar abierta a
la atmsfera por la parte superior o tener una tapa para sellarla.
Imagen 2. Tubo para espectro.
Matraz Erlenmeyer, 250 mL: Fabricados en vidrio borosilicato, para
calentamiento y agitacin de soluciones sin riesgo de derrames. Es apto para
conservar lquidos durante largo tiempo. Cuenta con un dimetro base 85mm,
dimetro boca 32mm, altura 140mm, capacidad 250mL

Imagen3. Matraz 250mi

Tubos de ensayo: Son tubos de vidrio donde se pueden verificar y observar

reacciones qumicas a escala de laboratorio. Debido a que en su composicin
tienen algo de plomo, soportan grandes temperaturas pudindose calentar al
fuego directo.

Imagen 4 Tubos de ensayo.

Cajas petri: Se utiliza en Microbiologa para cultivar clulas, observar la germinacin de
las semillas o examinar el comportamiento de pequeos animales.

Imagen 5. Caja petri.

Incubadora: Es un dispositivo que sirve para mantener y hacer crecer cultivos
microbiolgicos o cultivos celulares. La incubadora mantiene la temperatura, la humedad
y otras condiciones en grado ptimo, tales como el contenido de dixido de carbono (CO2)
y de oxgeno en su atmsfera interior.

Imagen 6. Incubadora.
Agar sangre: Es una combinacin de un agar base (agar nutritivo) con el agregado de
5 % de sangre humana, para cultivos en una placa de Agar. El agar sangre aporta
muchos factores de enriquecimiento.

Imagen 7. Agar sangre.

Caldo nutritivo: Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo
de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso est descripto en
muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de
importancia sanitaria. En este caso fue implementado para estafilococos.

Imagen 8. Caldo nutritivo en tubos de ensayo.

Estafilococos: Los estafilococos crecen fcilmente sobre casi todos los medios
bacteriolgicos, en cultivos su crecimiento es mejor en el medio sal manitol y agar
sangre, esto puede llegar a dar problemas en el corazn hgado, tales como la
perdida de un hgado. Es un coco anaerobio facultativo, esto significa que puede
crecer tanto en condiciones con oxgeno como carente de ste. Su mayor
velocidad de crecimiento es a 5 - 25 C

Imagen 9. Estafilococos en agar sangre.

PROCEDIMIENTO
1) Se adquirio la cepa bacteriana (estafilococos) que fue tomada de una
muestra de exudado faringeo (garganta de Pilar)
2) Se sembro en agar estafilococo 110 y se dejo incubando.
37C durante 24hrs.
3) Ya adquirido el cultivo se aislo la cepa en agar sangre por metodo de estria
cruzada.
Se incubo por 24hrs a 37C
4) Preparamos caldo nutritivo en 2 matraces d 250ml. Se utilizaron 110ml de
agua y .88g de caldo nutritivo.
Mezclar caldo nutritivo y agua hasta estar completamente
disuelto. Meter al autoclave para esterilizacin del medio.
5) Se metio el caldo dentro de los tubos de ensayo y se dejo reposando un da
en el refirgerador.
6) Tomamos muestra del estafilococos que crecio en el agar sangre con un
asa y se sembro en tubo recto.
Procedimiento realizado en 3 tubos.
7) Dejamos incubando por 2hrs y realizamos la primera espectrofotometra.
Balanceamos el espectrofotometro con agua destilada para

calibrarlo a 0 de absorbancia y 100 de transmitancia.

Tomamos 2ml del primer tubo y se colocaron en cubeta para

espectrofotometro.
Anotamos resultados de absorbancia (este proceso se realizo con

los 3 tubos)
8) Volvieron los tubos a la incubadora y al pasar 2hrs se volvio a realizar el
paso 7. Este proceso se realizo 5 veces con los 3 tubos para sacar los
puntos de nuetsras graficas.

Imagen 10. Procedimiento de espectrofotometra.

RESULTADOS
Graficas de la Absorbancia vs. Tiempo
Las grficas presentadas fueron realizadas en Origen Pro 9.1, realizando para
todas un ajuste polinomio, ajustando (x, y)

Tubo 1
Tiempo

Absorba
ncia

120
250
390
506
530

0,054
0,125
0,365
0,535
0,593

Marge
n de
error
del
tiempo
10
10
10
10
10

Margen
de error
de la
absorba
ncia
0,003
0,003
0,003
0,003
0,003

Tubo 2
Tiempo

Absorba
ncia

120
250
390
506
530

0,156
0,43
0,527
0,554
0,637

Marge
n de
error
del
tiempo
10
10
10
10
10

Margen
de error
de la
absorba
ncia
0,003
0,003
0,003
0,003
0,003

Tubo 3
Tiempo
(minut
os)

Absorba
ncia

120
250
390
506
530

0,193
0,477
0,577
0,633
0,695

Marge
n de
error
del
tiempo
10
10
10
10
10

Margen
de error
de la
absorba
ncia
0,003
0,003
0,003
0,003
0,003

PROCESO DE IMPLEMENTACIN DE ANTIBITICO

La ceftriaxona, como todos los antibiticos beta-lactmicos es bactericida,
inhibiendo la sntesis de la pared bacteriana al unirse especficamente a unas
protenas llamadas "protenas ligandos de la penicilina (PBPs)" que se localizan en
dicha pared. Las PBPs son responsables de varios de los pasos en la sntesis de
la pared bacteriana y su nmero oscila entre varios cientos a varios miles de
molculas en cada bacteria.

Materiales:

3 Tubo con tapn de rosca o de baquelita

Pipeta Pasteur
Pipeta graduada
Vaso de pp 5mL
Bascula.
Tubo

Asa
Mechero de bunsen.
Cerillos.
Matraz.
Pala.
Agua destilada. 50 mL

Reactivos:

Ceftriaxona.(10 g)
Caldo Nutritivo.

Imagen 11. Ceftriaxona.

Procedimiento:

1.- Preparamos Caldo Nutritivo para 24ml. (Solo lo realizamos con dos tubos)
2.-Vertimos 12ml de Caldo en cada tubo.
3.-Los etiquetamos con nmero.
4.- De nuestra colonia madre donde tomamos la muestra para hacer el conteo de
absorbancia en el espectrofotmetro, tomaremos una asada y la colocaremos en
el primer tubo con tapn, y de igual forma con los otros dos.
5.- Agitaremos suavemente para que las colonias se dispersen.
6.-Los introduciremos en la incubadora. (Por 2 hrs)
7.-Mediremos la absorbencia con el espectrofotmetro calibrado en blanco con
540nm
8.

Tubo 1, 0.048g de Ceftriaxona (una sola vez). (Cada hora mediremos la

turbidez)
Tubo 2: 0.030g. cada hora mediremos la turbidez.

BIBLIOGRAFA:
http://www.garrahan.gov.ar/vademecum/vademec.php?
campo=nom_generico&ntexto=Ceftriaxona
http://www.uib.cat/depart/dba/microbiologia/micro2/practicas.pdf
http://www.cdc.gov/ncidod/dbmd/gss/publications/documents/argentinaleveli/manual_procedimientos.pdf
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR
%C3%8DA.pdf
http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/nutritivocaldo.htm