1

UNIVERSIDAD AUTONOMA CHAPINGO

UNIDAD REGIONAL UNIVERSITARIA DE
ZONAS ARIDAS
Reporte de Prctica
* Elaboracin de un medio de cultivo
* Traspaso de Explantes para multiplicacin invitro

Nombre:
Eder Prez Gonzlez
Materia:
Cultivo de Tejidos Vegetales
Profesor:
Dr. Sigifredo Armendriz Erives
Sptimo Ao Sistemas Agrcolas

Bermejillo, Dgo a noviembre del 2011

Elaboracin de un medio de cultivo slido para el traspaso

de explantes de diversas especies vegetales para su
multiplicacin in vitro.

Introduccin
La expresin cultivo in vitro de plantas, significa cultivar plantas dentro
de un frasco de vidrio en un ambiente artificial.
Esta

forma

de

cultivar

las

plantas

tiene

dos

caractersticas

fundamentales:

Asepsia (ausencia de grmenes, etc), y

Control de los factores que afectan el crecimiento.

El avance alcanzado por las ciencias biolgicas ha permitido en los

ltimos aos el estudio detallado de las plantas tanto a nivel celular
como molecular, y en condiciones de laboratorio es posible actualmente
reproducir todos los factores que puedan incidir en el crecimiento y
desarrollo de las plantas. Este principio general se aplica tambin al
cultivo in vitro de plantas (Castillo, s/f).
Esta tcnica tiene numerosas aplicaciones:

Clonacin

de

individuos

de

caractersticas

agronmicas

muy

deseables durante todo el ao.

Obtencin de plantas libres de virus.

Conservacin de germoplasma: material de un conjunto de individuos

que representa la variabilidad gentica de una poblacin vegetal.

Obtencin de metabolitos secundarios.

Mejora gentica

de

plantas, incluyendo

obtencin

de plantas

transgnicas.

Germinacin de semillas.

Produccin de haploides.

Estudios fisiolgicos diversos.

En los protocolos utilizados durante el cultivo in vitro, se pueden

distinguir las siguientes etapas:
1) Eleccin de la planta.
2) Establecimiento: desinfeccin de los explantes (con

hipoclorito de

sodio) y su posterior adaptacin al medio artificial de modo de inducir

callo, brote, raz o embrin somtico, segn se desee.
3) Multiplicacin:

generar

una

masa

vegetal

suficiente

para

la

regeneracin del nmero de plantas necesarias.

4) Enraizamiento: formacin de races con el fin de convertir los brotes o
embriones somticos en plntulas completas.
5) Rusticacin: aclimatacin de las plntulas obtenidas in vitro a las
condiciones medioambientales ex vitro (suelo o algn sustrato
inerte).
El cultivo de tejidos constituye una de las alternativas tecnolgicas ms
utilizadas para conseguir la propagacin clonal rpida de cultivos que
presentan bajos ndices de multiplicacin. Se puede lograr la produccin
masiva de plantas sanas de alta calidad, libre de cualquier patgeno que
pueda afectar el desarrollo y aprovechamiento del cultivo.

Objetivos

Aprender la tcnica de micropropagacin en cactceas y pastos.

Elaborar un medio de cultivo slido a partir del concentrado de

sales MS.

Traspasar explantes de diversas especies de plantas (cactceas y

pastos) de un medio agotado al elaborado.

Evaluar sobrevivencia, brotacin y enraizamiento de las especias

en el medio de cultivo elaborado.

Materiales y Metodologa
Materiales:

Agente solidificante agar

Agitador
Alcohol de 70
Autoclave
Bistur y pinzas de

Concentrado de medio

diseccin
Cajas de Petri de plstico
Campana de flujo laminar
Cinta autoadherible
Concentrado de HCl (0.1N)
Concentrado de NaOH (1.0

nutritivo MS
Explantes diversos

N)

(Cactceas y pastos)
Frascos de cultivo in vitro
Marcador permanente
Matraz Erlenmeyer
Mecheros de alcohol
Peachmetro
Vaso de precipitado de
1000mL

Elaboracin del medio de cultivo:

El medio de cultivo a elaborar es el Murashige and Skoog
(1962), ingredientes:
Concentrado de medio nutritivo MS 4.3 g/L
Benzyl Adenina (BA) 1 mg/L

Sacarosa 3% 30 g/L
Tiamina 10 ml/L
Inositol 100 mg/L
Agar 0.8% 8 g/L
HCl
NaOH
Ajustar la solucin a un pH de 5.7 0.1.

Pasos para la elaboracin del medio de cultivo:

Se preparo1 L del medio de cultivo. Para esto se aadieron los

ingredientes en un vaso de precipitados con un poco de agua
destilada, luego se aforo a 1000ml.

Con el cido clorhdrico (HCl) y el hidrxido de sodio (NaOH) se ajust

el pH a 5.8 para esto se uso un agitador magntico.

Posteriormente se depositaron 8 g de agar para solidificar el medio.

Se llev el medio a un autoclave durante 15 minutos a una presin de

1.25kg/cm2.

Luego se coloc el medio de cultivo en los tubos de ensayo, y stos

se llevaron a la cmara de incubacin para que solidificaran.

Traspaso de explantes a un nuevo medio de cultivo:

Se traspasaron los Explantes de cultivos invitro previamente
realizados, esto con la finalidad de permitir la multiplicacin y el
adecuado desarrollo de las vitroplantas.
Pasos para el traspaso de los explantes:

El traspaso de los explantes se realiz en una campana de flujo

laminar y con un tapabocas.

Se procedi a esterilizar todos los materiales a utilizar con alcohol al

70%.

Constantemente se estuvo limpiando las manos con un trozo de

algodn y alcohol al 70%.

Se destap el tubo de ensayo del cultivo in vitro y con ayuda de unas

pinzas previamente flameadas se tom el explante del medio y se
coloco en el nuevo medio de cultivo.

Se utiliz una caja petri para colocar el explante y tomar solo una
planta, pues en algunos casos el explante estaba formando varias
vitroplantas.

Se coloc la tapa a los tubos de ensayo y se sello con ayuda de la

cinta adherible.

Se etiquetaron los tubos con el marcador permanente.

Los frascos fueron llevados a la cmara de incubacin.

Tiempo despus se estuvo acudiendo al laboratorio para poder

evaluar:

Porcentaje de brotacin
Porcentaje de enraizamiento
Plantas que sobrevivieron

Resultados
Los resultados de la evaluacin realizada fueron los siguientes:

Tu

So

Br

Enr

bo

bre

ot

aiza

de

viv

aci

mie

en

enc

nto

sa

ia

yo
1

10

Tot

80

50

80%

al

Se obtuvo una sobrevivencia de 8 plantas, con 5 plantas con

brotaciones y 8 con races de las 10 que evale.

A continuacin se muestran algunas fotos de los tubos de

ensayo que yo evale en esta prctica.

Conclusin

 La micropropagacin es una tcnica muy importante ya que gracias a ella se

pueden tener plantas ms vigorosas, libres de enfermedades y en mucho
menos tiempo y espacio.
El cultivo in-vitro de especies vegetales ha servido para disminuir los riesgos
de extincin de algunas plantas.
Las actividades realizadas en una prctica de micropropagacin deben de
ser realizadas con el mayor grado de asepsia posible para que los resultados
sean favorables.
Los resultados de sobrevivencia, brotacin y enraizamiento dependern del
medio de cultivo utilizado, pero sobre todo del mtodo utilizado y de la
manera en que se lleve a cabo por parte del investigador.

Literatura citada

Castillo, s/f. Propagacin de plantas por cultivo in vitro: una

biotecnologa que nos acompaa hace mucho tiempo. INIA.

Segretn, M. 2006. Los cultivos celulares y sus aplicaciones.
ARGENBIO. Recuperado el da 26 de noviembre del 2011 de:
http://www.argenbio.org/adc/uploads/pdf/Cultivos%20celulares%20II

%20Euge.pdf

Pierik, R.L.M. 1987. In vitro culture of higher plants. Editorial Martinus Nijhoff
Publishers