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MTODOS DE ESTUDIO DE LA CLULA
CLASIFICACIN
Clasificaremos los mtodos que se utilizan para el estudio de la clula en dos grandes
grupos:
I) Tcnicas para el estudio fisicoqumico: sirven para conocer la composicin y relacionar esta
composicin con las estructuras celulares. Estos mtodos son:
a) Centrifugacin
b) Cromatografa
c) Electroforesis
d) Cultivos "in vitro"
II) Tcnicas para el estudio morfolgico de la clula. Nos permiten conocer cmo es su forma,
su tamao y su estructura. Son, fundamentalmente:
a) Microscopa ptica
b) Microscopa electrnica
1) Microscopio electrnico de Trasmisin (MET)
2) Microscopio electrnico de barrido (MEB)
J. L. Snchez Guilln
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I) Biomolculas
A) CENTRIFUGACIN
Consiste en la separacin de los componentes
de una mezcla en funcin de las diferencias entre
las velocidades que presentan al someterlos a
elevadas aceleraciones (g). Esto se consigue
haciendo girar la mezcla en un rotor a un gran
nmero de vueltas por minuto. Los aparatos
empleados con este fin se denominan
ultracentrfugas.
Esta tcnica requiere los siguientes pasos:
1) FRACCIONAMIENTO U HOMOGENEIZACIN: El material biolgico, por ejemplo: un
fragmento de tejido del hgado, es triturado para
disgregarlo y romper las membranas celulares.
Fig. 1 Homogeneizador.
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I) Biomolculas
introduce el borde del papel en una sustancia en la que sean solubles los componentes de la
mezcla que queremos separar. El disolvente se desplazar por capilaridad y los ir
arrastrando. Los componentes de la mezcla viajarn ms o menos rpido segn establezcan
fuerzas ms o menos grandes con las molculas del papel. Para observar los componentes
ya separados se emplean reacciones coloreadas especficas.
2) CROMATOGRAFA DE GASES: El aparato consiste en un serpentn largo y delgado cuyas
paredes estn impregnadas de un lquido (fase estacionaria). La mezcla a separar se vaporiza
y atraviesa el serpentn transportada por un gas. La fase estacionaria retiene ms o menos los
diferentes componentes de la mezcla. stos se detectan cuando al atravesar una llama entran
en combustin, lo que aumenta la conductividad elctrica del detector. Este mtodo tiene la
ventaja de necesitar pequesimas cantidades (0,05 mg) y es capaz de separar sustancias
muy parecidas qumicamente; por ejemplo: cidos grasos,azcares u hormonas.
C) ELECTROFORESIS
En este mtodo, la mezcla a separar se
deposita en una cubeta sobre un soporte de tipo
poroso (acetato de celulosa o tambin gel de
almidn). A continuacin se establece una
diferencia de potencial entre los extremos del
soporte. Las sustancias que componen la mezcla
se desplazarn en funcin de su carga elctrica.
Naturalmente este mtodo se emplear con
sustancias que presenten cargas elctricas
(protenas y cidos nuclicos)
D) CULTIVOS IN VITRO
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I) Biomolculas
CLASES DE MICROSCOPIOS
A) MICROSCOPIO PTICO O FOTNICO
1) FUNDAMENTO: Funciona de la siguiente
manera: Una fuente luminosa enva rayos de luz
a una primera lente, llamada condensador, que
concentra los rayos de luz sobre el objeto a
observar. Estos rayos atraviesan el objeto y una
lente denominada objetivo da una imagen
aumentada de ste. Una segunda lente, el
ocular, vuelve a aumentar la imagen dada por el
objetivo. Esta ltima imagen es la que ser
recibida por el observador.
2) PREPARACIN DEL MATERIAL:
En el
microscopio ptico la luz atraviesa el objeto a
observar. Si ste es muy grueso, la luz no lo
atravesar y el objeto aparecer demasiado
oscuro; adems se superpondrn los diferentes
planos dando una imagen borrosa. Si el objeto es
demasiado delgado o muy transparente, no se
observarn sus estructuras. En cualquier caso,
deberemos realizar una preparacin.
ocular
revolver
objetivo
pinzas
macromtrico
platina
micromtrico
Fuente de
iluminacin
ocular
16
revolver
10
objetivos
macromtrico
micromtrico
platina
diafragma
lmpara
2- FIJACIN. Su fin es matar a las clulas con la menor alteracin de las estructuras
posible, para evitar las modificaciones que pudiesen producirse posteriormente por el
metabolismo celular o por la descomposicin. Como fijadores se emplean
determinadas sustancias qumicas (por ejemplo: formaldehdo y tetrxido de osmio).
3- DESHIDRATACIN. La extraccin del agua del interior de las clulas permitir
tambin una mejor conservacin y la penetracin de los colorantes. Para deshidratar el
material a observar se le sumerge en alcoholes de cada vez mayor graduacin que por
dilucin irn extrayendo el agua.4- TINCIN. Es la coloracin de las clulas o de partes
de stas para que resalten y posibilitar as su observacin. Algunos colorantes son
selectivos pues tien partes concretas de la clula.
Existen dos clases de colorantes:
a) Los colorantes vitales. Que tien las estructuras celulares pero sin matar a las
clulas (por ejemplo: el verde jano, el rojo neutro, el azul tripn, el azul de metileno).
b) Los colorantes no vitales. Que matan a las clulas (eosina, hematoxilina).
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I) Biomolculas
5- MONTAJE. Una vez realizadas las anteriores operaciones el material se coloca entre
un porta-objetos y un cubre-objetos. Para un montaje no definitivo, se coloca entre
"porta" y "cubre" una gota de glicerina. Este tipo de preparaciones tiene una duracin
limitada y slo sirven para la observacin momentnea o a lo sumo de unos das. Si se
desea una mayor duracin debe realizarse el montaje en gelatina-glicerina o en
euparal.
B) EL MICROSCOPIO ELECTRNICO
Existen dos clases de microscopios electrnicos:
B1) Microscopio electrnico de trasmisin (MET).
B2) Microscopio electrnico de barrido (MEB).
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I) Biomolculas
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Microscopio ptico
Microscopio electrnico
Se observa la estructura
Se observa la ultraestructura
Preparaciones sencillas
Preparaciones complejas
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