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BIOQUMICA Enzimas
ENZIMAS

Aceleran procesos biolgicos (biocatalizadores). Son molculas proteicas. Son muy pocas las
reacciones que no son catalizadas por enzimas.
Como funciona: si se pasa de A a B. Al principio solo hay A. A se transforma en B y B en A, hasta
que se llega al equilibrio de la reaccin. En el equilibrio la disminucin de A se termina y el
incremento de B se termina. Si a esta reaccin se le agrega una enzima A se transforma en B, solo
que el equilibrio de la reaccin va a llegar en un tiempo tremendamente menor. (Ejemplo de botar
un borrador)
La reaccin debe ser termodinmicamente posible, la energa que tiene A es tal que permite
transformarse en B (que queda con menos energa). La condicin energtica se llama energa libre.
Se requiere una energa libre de activacin. La enzima hace disminuir la energa de activacin del
reaccionante. Si la energa de activacin se reduce a la mitad, no implica que el tiempo tambin se
disminuye a la mitad.
Energa libre de activacin sin enzima
Energa libre de activacin con enzima

Progreso de la reaccin
CUALIDADES DE LAS ENZIMAS.
Acelerar la reaccin.
Son especficas: una enzima va a catalizar una o un grupo de reacciones pero no cualquier
reaccin. El reaccionante sobre el que va a actuar la enzima se llama sustrato (S) y lo que resulta
se llama producto (P). Las enzimas aceptan determinados grupos de sustratos. La ureasa tiene
como sustrato la urea; la glucoquinasa, la glucosa; el sustrato de las proteasas son las protenas
(en este caso la especifidad es relativa porque hay miles de protenas); de las nucleasas los
cidos nucleico; de los aminocidos oxidasas, los aminocidos (los oxidan); hay enzimas daminocidos oxidasas, que tienen como sustrato los d-aminocidos. *
Efectividad: cuando una enzima reacciona con un sustrato se forma un complejo inestable, luego
la enzima se recupera intacta y se puede volver a usar miles de veces. Una molcula de enzima
puede transformar muchas molculas de sustrato. La efectividad se mide por el nmero de
transferencia: N de molculas de sustrato que transforma un mol de enzima en un tiempo
determinado. La catalasa tiene un N de transferencia de 4 x 107 por segundo. La quimiotripsina:
100 por segundo.
Las enzimas en su funcin son regulables, hay una serie de factores que hacen que la encima
funcione o no funcione, ms rpidamente o no tan rpidamente. Se pueden regular por su
cantidad: hay mecanismos que le indican a la clula que fabrique ms una determinada enzima.

Esteban Arriagada

BIOQUMICA Enzimas

Se puede regular por su actividad: las enzimas estn, pero condiciones pueden inhibir la activdad
de la enzima.
Existen 2 tipos de reacciones enzimticas:
Reaccin Monosustrato:
A+E

AE

P+E

Reaccin multisustrato:
A+B+E

ABE

P+Q+E

En este ltimo caso las 2 molculas interactan con la enzima; ambos productos no pueden entrar ni
salir al mismo tiempo, por lo que se dan los siguientes casos:
1) Secuencial Ordenada: entra el primer sustrato y luego el segundo; sale el primer producto y
luego el otro.
P
Q
B
A
catlisis
E

EA

EAB

EPQ

EQ

2) Secuencial al azar: cualquiera de los 2 sustratos puede entrar primero y cualquiera de los 2
productos puede salir primero.
A

EA

P
EAB

EPQ

EB
B

EQ

EP
P

3) Mecanismo ping-pong: la enzima reacciona con el primer sustrato entrega el primer producto,
toma el segundo sustrato y entrega el segundo producto.
P

A
EA
E

EP

B
E

Q
EB

EQ
E

En trminos de regulacin, la actividad enzimtica va a depender del mecanismo de reaccin que se

de con una determinada enzima y si es de un sustrato o de dos sustratos.

Esteban Arriagada

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BIOQUMICA Enzimas

Cambios energticos de una reaccin en presencia de enzima y en ausencia de ella

Cuando una enzima cataliza una reaccin lo que vara no es el cambio de energa, sino la energa
libre de activacin que se necesita, lo que se traduce en una velocidad de reaccin menor. La enzima
no cambia el delta de energa al pasar de un sistema a otro, no se libera ms o menos energa. El
equilibrio de la reaccin expresado en la constante de equilibrio tampoco va a cambiar. Las enzimas
no desencadenan la reaccin, con o sin enzima igual va a ocurrir, pero acelera la reaccin y hace que
se llegue a mayor velocidad al equilibrio.

Primera fase: se ve una lnea recta

y proporcionalidad entre tiempo e
incremento. Alto rendimiento o
velocidad.
Segunda Fase: el incremento
existe, pero empieza a disminuir.
La velocidad ms baja.
El incremento se hace cero, se
llega al equilibrio.

La velocidad inicialmente no cambia.

Concentracin de Producto [P]

Las enzimas estn presentes en todas partes de un organismo biolgico, en cualquier tejido, en
cualquier lquido. Las enzimas son especficas, por lo que hay miles de enzimas.
Para estudiar, por ejemplo, una enzima de la saliva se toma un poco de saliva. All habrn muchas
enzimas (tambin hay de bacterias), para diferenciarla hay que aprovecharse de que son especficas
y se coloca el sustrato de esa enzima y se estudia el aparecimiento de producto o desaparecimiento
de sustrato. Si se dan las condiciones de temperatura y pH adecuado, aparece producto en un tiempo
determinado. Si se le da ms tiempo debera aparecer ms producto. Pero este incremento del
producto no es eterno, llega un momento en que no se incrementa ms; en este lapso de tiempo
donde se encuentra el mismo producto, se detuvo el incremento y la reaccin llega a su equilibrio.

Curva de progreso de una reaccin enzimtica

V=P
t

Una de las formas clsicas de

averiguar la presencia de una enzima,
cuanta hay, si est activa, etc., es a
travs de su actividad, para lo cual lo
Tiempo
esencial es agregarle el sustrato. Si en
1 Fase 2 Fase
las mismas condiciones se toma la
muestra de otra persona y se encuentra
una curva con menor ngulo con respecto a la horizontal, la enzima est presente pero en menor
cantidad.
Las enzimas pueden ser
Simples: formadas solo por aminocidos
Esteban Arriagada

BIOQUMICA Enzimas

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Complejas: tienen otra parte, llamado cofactor, denominandose apo enzima a la parte proteica; el
conjunto se llama holo Enzima
Hay varios cofactores, como las sustancias derivadas de vitaminas, caso en que se llaman
coenzimas, como el fosfato de piridoxal. Algunas estn unidas fuertemente a la enzima, otras no.

Las enzimas se recuperan y pueden volver a hacer lo mismo. Tampoco las coenzimas se necesitan en
grandes cantidades, por lo que no es necesario tomar tantas vitaminas.
Regulacin de la actividad enzimtica
Presentan un sitio preciso para el sustrato, con una conformacin precisa, llamado sitio activo de las
enzimas. Adems presentan otros sitios llamados sitios regulatorios o sitio alosterio, que sirve para
regular la actividad de la enzima a travs de la modificacin del sitio activo; a este sitio entran
molculas que pueden regular positiva (estimular) o negativamente (inhibir) la actividad enzimtica.
Un regulador positivo: cuando se une la molcula reguladora al sitio regulatorio, entonces se
produce un cambio de conformacin del sitio activo, lo que permite la formacin del complejo
enzima sustrato.
Un regulador negativo: cambia la conformacin a fin con el sustrato, lo que impide que se forme
el complejo enzima sustrato.
No todas las enzimas son tan regulables. En esto hay que tener en cuenta un efecto de economa
importante. La mayora de los efectos biolgicos dependen de reacciones mltiples, cascadas o
secuencias de reacciones; cada una de estas etapas es catalizada por una enzima (se habla de una
batera de enzimas). No hay necesidad de regular negativamente todas las enzimas de una cadena de
reacciones, basta con que se regule una (economa) y todo el proceso se afectar.
Los reguladores: son de muy variada naturaleza y pueden ser reguladores externos o internos.
Externo: por ejemplo, la propia glucosa puede ser un regulador para que se activen ciertos
mecanismos que tienen que ver con el metabolismo de la glucosa.
Internos: Se puede dar que la formacin de exceso de ATP regule negativamente alguna de las
enzimas de la glicolisis, as se inhibe todo el fenmeno. Si el organismo fabrica harto ATP y este
se gasta, se forma mucho ADP, el que se transforma en un regulador positivo de una de las
enzimas y se activa nuevamente la degradacin de la glucosa. As una enzima tendra un sitio
que le permite estimular su actividad y otra que lo inhibe.
Si se quiere verificar si una enzima est hay que colocarle harto sustrato (no suficiente), para as
medir la concentracin de enzimas. Harto significa garantizar que por un tiempo determinado todas
las molculas de enzimas tengan sustrato. Esto se llama saturacin de las enzimas por el sustrato y
permite construir una curva de progreso donde la lnea recta indica que todas las enzimas estaban
saturadas.
En el organismo las enzimas trabajan a una concentracin saturizante; si no hay glucosa las enzimas
estn insaturadas.

Esteban Arriagada

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BIOQUMICA Enzimas
Ecuacin Michaelis-Menten

Representa los efectos de la concentracin de sustrato sobre los ndices de numerosas reacciones
enzimticas.
La concentracin del sustrato que produce la mitad de la velocidad mxima Vi = V max [S]
Km + [S]
(constante de Michaeli o Km) se puede determinar graficando v i como
funcin de [S].
Cuando [S] es aproximadamente igual a Km, la enzima est Vi = V max 1 = V max
1+1
2
trabajando a la mitad de su velocidad. Supongamos un valor de 1
milimolar:
Vi = V max 0,1
1 + 0,1
Si la concentracin de sustrato es 0,1
Qu pasa si la concentracin de sustrato es 0,2; 100
veces Km o mil veces Km.? Cuando la concentracin
del sustrato es considerablemente inferior a la requerida
para producir la mitad de la velocidad mxima, la
velocidad inicial Vi depende de la concentracin del
sustrato.
Cuando la concentracin del sustrato excede con mucho
a Km la velocidad incial Vi es V max.
Cuando la concentracin del sustrato es igual al valor de
Km, la velocidad inicial Vi es semimxima.

V max
V

Efecto
saturacin

Km

[S]

Constante cataltica:
Se compara el valor Constante catalitica/Km con una enzima que tiene 2 sustratos: exoquinosa, que
trabaja con glucosa y galactosa, pero con una de ellas tiene un valor mayor y con la otra menor. Qu
significa (prueba).
Ecuacin Lineweaver-Burk
La ecuacin de Michaelis-Menten se reordena en forma de una lnea
recta para determinar Km y V max. (Puesto que numerosas enzimas
dan curvas de saturacin que no permiten fcilmente la valoracin de
V max).*
La Km puede ser calculada a partir de la grfica de
Lineweaver-Burk o del doble recproco, donde la
interseccin en y es 1/Vmax y la pendiente es Km/Vmax.
La interseccin negativa en x es 1/Km.

_ 1
Km

1 = Km 1_ + 1__
V Vmax [S] Vmax

i_
Vi

Pendiente= Km
Vmax

1__
Vmax
1
[S]

Esteban Arriagada

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BIOQUMICA Enzimas
INHIBIDORES DE ENZIMAS

Pueden disminuir la velocidad de la reaccin enzimtica. Esta sustancia al interactuar va a disminuir

el efecto de la enzima sobre el sustrato.
En un caso, cuando esta molcula se ubica en el sitio inhibidor, se altera la conformacin del
sitio activo, por lo que no se va a producir el
complejo enzima sustrato. Este inhibidor no
Con inhibidor
se puede desplazar porque la unin que forma
no competitivo
1/V
con la enzima es bastante fuerte (covalente).
Este inhibidor se llama no competitivo y se
Sin inhibidor
puede graficar. El valor de la velocidad
mxima disminuye, no se recupera aunque se
aumente el sustrato y se mantiene para esa
velocidad disminuida el valor de Km que se
1/S
encuentra en ausencia de esa inhibidor.

Otra situacin ocurre cuando el inhibidor tiene

la misma forma del sitio activo, ocupa el lugar
del sitio activo correspondiente al sustrato,
impidiendo la formacin del complejo enzima
sustrato. Se puede desplazar al inhibidor del
sitio activo por simple competencia,
aumentando la cantidad de sustrato. Estos
inhibidores no alteran la velocidad mxima,
sino la Km. Se llaman inhibidores
competitivos.

Con inhibidor
competitivo

1/V

Sin
inhibidor

1/S

Existen muchas alteraciones orgnicas donde se puede intervenir conociendo la patologa y la

enzimas. Todas las patologas comprometen la accin de una o ms enzimas. Ejemplo:
- La angiotensina eleva la presin, se sintetiza a partir de un angiotensingeno, que luego forma
angiotensina I, II y III. Cuando hay hipertensin se puede evitar la formacin de II y III con
inhibidores enzimticos competitivos.
- Hipercolesterolemia: el organismo sintetiza colesterol, un inhibidor hace que la sntesis del
colesterol baje.
Un inhibidor muy usado en el mundo (no reversible) es la aspirina. Su destino es interferir una
reaccin enzimtica que lleva a la produccin de prostaglandinas (precursor: cido araquidnico); la
oxigenasa tiene en su sitio activo un aminocido llamado serina con un radical con un grupo OH;
sobre esta enzima acta el cido acetilsalicilico; as la serina y la enzima no funcionan, lo que
produce una inhibicin irreversible. Cuando algn signo molesto ocurre en el organismo (fiebre,
dolor, coagulaciones intravasculares, etc), la disminucin de la sntesis de prostaglandinas hace que
estos signos se abatan.

Esteban Arriagada

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BIOQUMICA Enzimas
REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA.

Existen 2 mecanismos:
Sintetizar ms o menos enzimas de acuerdo a las necesidades.
Regulacin por va de la actividad. Hay muchos mecanismos reguladores de la actividad
enzimtica.
MECANISMOS REGULATORIOS
INDUCCIN Y REPRESIN
Si una persona tiene tendencia a presin baja, tender a producir ms sustancias que aumenten la
presin. Esto est afectado por factores externos, por ejemplo, si una persona come mucha azcar,
las enzimas degradadoras de glucosa estarn aumentadas y viceversa.
MODIFICACION COVALENTE
Agregado a las enzimas una sustancia que se une covalentemente a ellas se puede hacer ms activa o
menos activa. La regulacin esta en la enzima que une o separa una sustancia a la enzima. El caso
ms frecuente son las reacciones de fosforilacin, donde X es un grupo fosfato. Una enzima puede
fosforilarse o defosforilarse. Hay enzimas que al fosforilarse se activan y otras que al desfosforilarse
se activan; en cualquier caso se requiere de un sistema que fosforile y otro que defosforile.
PROTEOLISIS DE PROENZIMA
Hidrlisis: degradacin de enlaces peptdicos. Cuando* a una enzima (proenzima o cimgeno), se le
corta un trozo, se activa. Esto lo hace otra enzima, llamada proteoltica. Este mecanismo se da en un
solo sentido, no se vuelve atrs, no se le puede volver a unir el pptido a la enzima.
MECANISMOS ALOSTRICOS
Enzimas que aparte de su sitio activo tiene un sitio alostrico que cuando se une un efector
alostrico puede favorecer o desfavorecer (positivo o negativo) la actividad de la enzima, en
cualquier caso, regula.
COOPERATIVIDAD POSITIVA
La unin de un sustrato hace ms fcil la llegada de un
segundo sustrato. Cuando llega un sustrato al primer sitio
activo, se favorece la entrada de sustrato a los otros sitios
activos. Normalmente se da en enzimas de estructura
cuaternaria.

Sustrato solo
V
Cooperatividad
positiva

[S]

Esteban Arriagada

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BIOQUMICA Enzimas

ENZIMAS V/S DIAGNSTICO

Nivel Plasma

Las enzimas estn generalmente en el interior de las clulas; existe un recambio celular constante y
cuando la clula se muere, el contenido de enzimas pasa a la sangre. Por lo que se espera encontrar
una cantidad basal en la sangre; pero si la cantidad de enzimas aumenta, esto es signo del deterioro
de un determinado rgano, lo que ayuda al diagnstico.
Las enzimas aparecen, adems, con una determinada secuencia:

CF
5x
4x
3x
2x
x

GOT
OH But DH

3
5
7
Das post dolor torxico

x = valor normal
VITAMINAS
A veces las enzimas necesitan trabajar con una sustancia no proteica que se llama Coenzima (CoE).
En la estructura de estas coenzimas participan las vitaminas. Las vitaminas no son coenzimas y solo
algunas enzimas necesitan trabajar con coenzimas.
Las coenzimas pueden servir a varias enzimas, son poco especficas.
Como las enzimas son pocas, las coenzimas igual, por tanto, las vitaminas tambin se necesitan en
pequea cantidad.
Las vitaminas estn en todos los alimentos. Si una persona hace una dieta normal, jams necesitar
vitaminas.

Esteban Arriagada

BIOQUMICA Enzimas

16

COFACTORES ENZIMTICOS
Uno de ellos se refiere a las coenzimas. En general las coenzimas son sustancias que estn al
lado de las enzimas contribuyendo a la eficiencia de la reaccin enzimtica.
Las coenzimas son siempre cofactores positivos. En general estn hechos de vitaminas ms
algn agregado.
VITAMINAS
Deben venir de afuera porque el organismo humano no las sintetiza. Provienen de la dieta,
por lo que las vitaminas se llaman complementos de la dieta o factores accesorios de la
alimentacin. Estn en los vegetales y otros animales.
Las vitaminas, generalmente una vez que ingresan al organismo se catabolizan, por lo que
hay que irlas reemplazando diariamente.
Otra fuente importante de vitaminas es la flora bacteriana intestinal. Los antibiticos
esterilizan la zona bacteriana, por lo que se puede caer en un dficit de vitaminas.
Cuando ocurre una falla nutricional o un tratamiento de antiobiticos o una dificultad de
absorcin de las vitaminas, aparecen signos tpicos que en su conjunto corresponden a los cuadros
carenciales.
ALGUNAS VITAMINAS
La vitamina D contribuye a favorecer el proceso de mineralizacin de los tejidos duros; cuando
hay un cuadro carencial de vitamina D, se produce una hipocalcificacin de los tejidos duros, lo
que puede ocurrir en cualquier momento de la vida. Cuando esto ocurre en la infancia, la
desmineralizacin se llama raquitismo; cuando ocurre en los adultos se llama osteomalacia.
La vitamina K tiene un rol en la formacin de un grupo de enzimas que coagulan la sangre;
cuando hay dficit de vitamina K (por antibiticos, ya que un aporte importante lo entrega la
flora bacteriana) hay tendencia a sangramiento anormal largo.
La vitamina C tiene rol en la formacin de colgeno, estructura que le da firmeza a todos los
tejidos; cuando falta, se daan los tejidos de vasos sanguneos, por lo que se produce
sangramiento por ruptura de los vasos.
La gran mayora de las vitaminas deben su nombre a la funcin recin mencionada. As, la vitamina
D se denomina antirraqutica, la K, antihemorrgica, la C, antiescorbuto.

Esteban Arriagada

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BIOQUMICA Enzimas
ROL DE LAS VITAMINAS COMO COENZIMAS

Una parte del sustrato liberado por una enzima no queda libre, sino unido a la coenzima. La
coenzima acepta un grupo qumico del sustrato. Este complejo EC 0Eh se una a otro sustrato
formando un segundo complejo, al que se unir el elemento libre.
ECoEh

S2

ECoEhS2

ECoE +

S2h

Hay una transferencia de un grupo qumico de un elemento a otro, donde el elemento que
transfiere es la coenzima, es un aceptor transitorio del grupo qumico del sustrato.
La gran mayora de las reacciones qumicas consiste justamente en esto, en degradar un
sustrato y componer otro. Los grupos qumicos transferibles son muchos: metilar, carboxilar,
acetilar, hidrogenar, etc.
Por ejemplo, en las reacciones de oxido reduccin de la cadena respiratoria de las
mitocondrias o fosforilacin oxidativa se forma ATP, aqu lo que se hace es trasladar un grupo H al
oxgeno para formar agua; aqu hay coenzimas que sirven a la unin transitoria de hidrgeno.
(Cuando pierde hidrgeno se oxida, cuando gana H, se reduce.). De esto deriva el nombre de la
enzima y coenzima, ej: enzima oxireductasa y coenzima de co-oxidoreductasa.
Hay dos etapas diferentes. La coenzima le va a quitar H al sustrato; puede ocurrir que una
segunda enzima que va a entregar H a un segundo sustrato necesita una coenzima reducida; aqu se
ocuparon 2 enzimas. En otras oportunidades la misma enzima toma de un sustrato y se lo entrega a
otro sustrato.
SH2

CoEH2

CoEH2

CoE

OH2

Coenzimas de oxidorrecudccin o oxidorreductasa:

NAD (Nicotidamida adenina dinucletico)
FAD (flavina adenina dinucletido; flavina es la vitamina)
CoA (la vitamina es la A)

NUCLETIDOS
Son biomolculas de mltiples funciones:
Son precursores activados de ADN y ARN
Sirven como intermediarios de algunas biosntesis importantes; en el caso de la sntesis del
glicgeno es necesaria la presencia de un nucletido a base de uracilo.
Se definen como la moneda universal de la energa; el ATP (adenina) y el GTP (guanina) son
nucletidos.
Existen muchas coenzimas cuya estructura qumica es de nucletidos.
Algunos de ellos son reguladores de procesos metablicos, interfiriendo la actividad de ciertas
enzimas (AMPc)

Esteban Arriagada

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BIOQUMICA Enzimas
ESTRUCTURA
Estn formados por:
Base nitrogenada, que puede ser adenina, guanina, citosita, uracilo, timina
Azucar: ribosa o desoxirribosa.
Grupo fosfato que puede estar 1,2 o 3 veces (mono, di o trifosforado)

Cuando la base nitrogenada est unida al azcar se habla de nuclesido; cuando se agrega el
fosfato se transforma en nucletido.
ATP: adenosina (adenina ms ribosa) tri-fosfato; es un nuclesido trifosforado, (no
nucletido trifosforado). Cuando se habla de nucletidos se indica que el azcar es ribosa; cuando se
habla de d-cletidos, el azcar es desoxirribosa. (El carbono 2 de la ribosa lleva un grupo OH,
cuando desaparece, se transforma en desoxirribosa).
BASES NITROGENADAS
Se clasifican de 2 maneras
Prica: Estructura cclica carbonada y nitrogenada; puede ser adenina y guanina.
Pirimdica: puede ser citosina, timina y uracilo.
El organismo sintetiza las bases prica y pirimdica. La sntesis es extremadamente
complicada. Sin los nucletidos no se construyen cidos nucleicos, es una sntesis de las ms
costosas, complicadas y reguladas, porque cuando ocurre la divisin celular se necesitan muchsmas
bases nitrogenadas para construir el ADN.
Las bases nitrogenadas se construyen a partir de elementos muy simples, como los
aminocidos: glicina, glutamina, cido asprtico. A partir de los esqueletos formados hay que
construir las bases especficas, donde nuevamente hacen aporte los aminocidos.
La ribosa (pentosa) deriva de los glcidos, se come como almidn o glucgeno.
Adenina + ribosa = adenosina + P = AMP + P = ADP + P = ATP.
Guanina + ribosa = guanosina + P = GMP + P = GDP + P = GTP.
Timina + desoxirribosa = d-timidina + P = d-TMP + P = dTDP + P = dTTP
El ATP es una molcula de alto contenido de energa qumica, la que se libera al
desdoblarse. Cuando una clula est en reposo funcionan los mecanismos para sintetizar ATP;
cuando la clula ejerce su funcin se desdobla el ATP en ADP + P.
Para sintetizar nucletidos de timina hay que transformar el nucletido uracilo, sacarle el OH
(sistema enzimtico: reductasa) e insertarle un CH3 (como el nucletido de timina se llama cido
timirlico, la enzima se llama timidilato sintetasa).
Del uracilo se fabrica citosina y timina. Se necesita cido timirlico para construir timina para
la mitosis, se necesitan varios miles de millones.
Es daino que esta molcula se sintetice cuando el tejido se transforma en tumoral. Un
mecanismo que frena esta sntesis consiste en inhibir la timidilato sintetasa, que constituye una de
las terapias anticancergenas (frmacos fluoracilo y fluordesoxiuridilato), por medio de un inhibidor
competitivo.

Esteban Arriagada