Universidad de Chile

Facultad de Ciencias
Escuela de Pregrado
Biologa General

Trabajo prctico N3:

Extraccin simple
de DNA

Profesor: Dr. Ricardo Cabrera

Autores: Nahuel Valenzuela
Carlos
Rodrguez

Fecha realizacin del prctico: 30-Abril-2015

Fecha entrega de informe: 07-Mayo-2015

I. Resumen
La clula es la unidad estructural de la vida, todos los organismos se
componen de clulas, y todas las clulas tienen muchas caractersticas
en comn, en este trabajo prctico analizaremos una de stas: El DNA.
En este prctico estaremos mencionando la importancia del DNA en el
desarrollo de la vida, ms especficamente en el entorno celular. La
explicacin de la extraccin y las propiedades de los materiales
utilizados sern los que ayudarn a cumplir el objetivo principal de
forma que puedan responder: Qu es el DNA?, Cules son sus
componentes?, Qu ocurre a nivel celular con los reactivos de la
extraccin?, e incluso otras preguntas ms profundas. Esto, con el fin
de informar al lector, con bases experimentales, sobre las caractersticas
del DNA, y a su vez, orientar a quien desee reproducir el prctico.
Esperamos obtener una hebra de DNA, para esto llevaremos a cabo una
serie de procesos, que desencadenarn en nuestro resultado final.
El laboratorio donde se realiza esta actividad est bajo condiciones
ambientales de temperatura y presin, sin tomar en cuenta la humedad
ya que esta ltima condicin no modificara nuestros resultados. Los
resultados en este prctico son cualitativos, as que se torna innecesario
el uso de alguna frmula. Segn los conocimientos previos, podemos
concluir el motivo del uso de los reactivos, ya que estos dejaran al
descubierto nuestra hebra de DNA.

La meticulosidad es la herramienta principal en este trabajo, ya que se

debe procurar trabajar con mucha limpieza, cuidado y precisin; con
esto obtuvimos los resultados esperados antes de iniciar el
experimento.II. Introduccin
Por su funcin el DNA es considerado una de las biomoleculas ms
importantes en los sistemas biolgicos, ya que tiene una gran
estabilidad qumica y la una gran capacidad de almacenar y codificar la
informacin gentica hereditaria. Junto con el ARN y protenas constituye
el dogma central de la biologa molecular. (1)
El dogma de la biologa molecular, se basa en esta capacidad de
almacenar y codificar informacin; mediante una serie de procesos
celulares, el DNA es transcrito a mRNA y ste a su vez, es traducido en
aminocidos que sern protenas que cumplirn distintas funciones
tanto dentro como afuera de la clula.
El DNA es un cido nucleico que, mediante la codificacin de la
informacin controla procesos celulares, ya que dirige la sntesis de
protenas segn sus secuencias de nucletidos y esto gracias a su gran
capacidad de guardar la informacin que es necesaria para cumplir la
sntesis proteica. Esta biomolcula est formada por cuatro bases
nitrogenadas: Adenina, Timina, Guanina y Citosina.
Normalmente las molculas de DNA se encuentra se forma compacta en
el ncleo celular (doble hlice), pero cuando se asocian con sus
protenas, llamadas Histonas (H1, H2A, H2B, H3 y H4) se forma el
complejo llamado Cromosoma que es el DNA empaquetado, este
cromosoma es fundamental para los procesos de divisin celular (mitosis
y meiosis).
El DNA es una molcula muy compleja, en las clulas procariontes se
encuentra en forma circular y desnudo, y en las clulas eucariontes se
encuentra en el ncleo celular. Todo esto es para la proteccin de esta
molcula que es fundamental en el correcto desarrollo de cualquier
forma de vida; y por esto se genera el inters de estudiarlo con cuidado
para no alterar ninguna de sus propiedades, esto es lo que realizaremos
en este experimento de extraccin del DNA.

III. Materiales y mtodos:

Materiales:
- 2 frutillas
- 30 mL de agua destilada
- 4 gr de sal
- 4 gr de lavalozas
- Etanol fro de distintas graduaciones (50%, 65%, 80%, 95%) en agua
- Mortero
- Centrfuga
- 4 tubos de ensayo
- 1 Tubo de centrfuga 50 mL
- 4 pipetas Pasteur
- 2 pipetas plsticas 3 mL
- Gradilla
- Balanza granataria

Metodologa:
1.- Quitar las hojas de las frutillas, luego de eso proceder a moler con el
mortero, hasta dejar una pulpa de frutillas. Luego agregar 20 mL de
agua destilada y seguir revolviendo hasta obtener una mezcla
homognea de agua con frutillas.
2.- Luego proceder a depositar en el tubo de centrfuga, 30 mL de la
mezcla homognea y proceder a masar con una balanza granataria.
3.- Con el tubo en la balanza, colocar 4 gr de lavalozas y 4 gr de sal.
Despus agregar agua destilada hasta completar 50 gr, masa acordada
para el equilibrio en la centrfuga.
4.- Agitar con suavidad, para evitar la efervescencia de la sal con el
lavalozas, realizar esto hasta que no queden cmulos de sal en el tubo.

5.- Colocar el tubo en la centrifuga a 6000 rpm por 10 minutos.

6.- Se retira el tubo de la centrfuga, se observaran dos fases en el tubo:
el sobrenadante (fase acuosa) y el pellet (fase slida). Con la ayuda de
la pipeta Pasteur, retirar una muestra del sobrenadante (sin sacar lquido
de la primera capa del sobrenadante), y dejarla en un tubo de ensayo,
completar los cuatro tubos de ensayo con la misma cantidad de
sobrenadante en todos. Procurar etiquetar cada tubo para diferenciarlos.
7.- En cada tubo se introduce 2 a 3 mL de etanol fro, se colocan
distintas concentraciones de ste en cada tubo. Observar los cambios en
la interfase del etanol.

IV. Resultados brutos:

En el inicio de este prctico tenemos dos frutillas (molidas) sin ninguna
modificacin, cuando se aaden la sal y el detergente a la pulpa de la
frutilla se observa el primer cambio, se nota un cambio en el color de
nuestra pulpa, tornndose ligeramente ms plido y perdiendo el
caracterstico color rojo de las frutillas.
Al sacar nuestro tubo de la centrifuga se notan dos fases, estos son el
sobrenadante y el pellet. Cuando extraemos el sobrenadante se nota un
lquido mas anaranjado, ste es el liquido que se deposita en el tubo de
ensayo.
Luego de incluir el alcohol en los respectivos tubos, es casi inmediata la
aparicin de una especie de tela de araa blanca en el alcohol, se
deduce, segn la informacin previa al prctico, que esto es DNA. Este
DNA va aumentando en
cantidad a medida que
avanza el tiempo.
.
Imagen 1.Esta foto fue
tomada a los 5 minutos
luego de haber puesto
etanol en los tubos, el
orden de concentraciones
va izquierda a derecha:
50%, 65%, 80% y 90%
respectivamente.

Imagen 2.Esta foto fue

tomada a los 10 minutos
luego de haber introducido
etanol en los tubos, se
encuentran
etiquetados
para indicar las concentraciones

V. Anlisis de resultados:
Durante el desarrollo de este prctico se fueron observando distintos
cambios indicados anteriormente en el punto IV. El primer cambio ocurre
con la adicin de sal y lavalozas a la pulpa de frutilla, la accin de la sal
en el medio provoca por osmosis que la clula trate de equilibrar el
medio hipertnico liberando agua y con esto deshidrata la clula; a su
vez el lavalozas produce otros cambios en el medio, ya que el lavalozas
cambia el pH del medio dejando un pH bsico, esto rompe los lpidos
presentes en la membrana celular de la frutilla, y deja libre el resto de
los organelos de la clula.
El ltimo cambio se produce con la accin del etanol en el tubo de
ensayo, los cidos nucleicos al no ser solubles en alcohol, precipitan en
direccin a la capa de alcohol. En contacto con alcohol, los cidos
nucleicos se desenrollan, y precipitan en la interfase agua-alcohol
hacindose visibles; se trata de unas fibras blanquecinas que tienen el
aspecto de una telaraa, visibles a simple vista como se muestran en
las imgenes 1 y 2.
Es esta la etapa del proceso en el que precipita el ADN y se observa en
los tubos de 65%, 80% y 95%, pero en mayor medida se pueden ver en
el tubo de 95%. En este tubo se observan muchas hebras de ADN,
debido a la accin que tiene mayor fuerza en las hebras por su
concentracin de etanol.

VI.- Discusin:
Como ya hemos mostrado anteriormente en el proceso de la extraccin
de DNA se agregan sal comn y lavalozas que provocan ciertas
reacciones en la clula, que gracias a varios procesos, que explicaremos
a continuacin, conlleva a la extraccin del DNA.
El detergente disuelve los lpidos (grasas) lo cual es indispensable para
extraer las protenas integradas a la bicapa lipdica celular y nuclear,
rompiendo las uniones que mantienen la integridad de las membranas y
mantenindolos en la solucin acuosa (2). De esta forma se libera el
contenido celular. Gracias a esto se puede extraer el ADN sin daarlo
innecesariamente. Luego, el detergente forma complejos con los lpidos
y las protenas, permitiendo que los mismos sean separados del ADN por
filtracin. As se libera el ADN. (3)
La sal se utiliza para: cubrir los terminales fosfatos negativos,
permitiendo as que los extremos de las protenas se unan; Deshidratar
la clula; evitar la unin de las protenas al material gentico, y que el
ADN plsmido precipite en la solucin de alcohol.
El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero,
cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase
entre el alcohol y el agua, y dependiendo del grado de alcohol que se
utilice har que se precipite ms ADN en la solucin (Se logra notar la
diferencia en las imgenes presentadas en los resultados brutos) lo cual
esperbamos resultados ms notables con el ADN disperso en la fase
transparente.

VII.- Conclusin.

1.- Al termino de este prctico logramos notar que incluso con la

utilizacin de compuestos de la vida cotidiana, tales como sal comn y
lavalozas, podemos obtener resultados satisfactorios en el proceso de
extraccin del DNA, aunque utilizamos materiales ms difciles de
obtener, como la centrifuga, que se puede reemplazar por slo
decantacin.
2.- Con las bases de este experimento podemos notar la presencia de los
elementos de la clula, ya que el uso de un lavalozas es para destruir la
membrana de fosfolpidos y la sal es para evitar que las protenas
tuvieran contacto con el DNA.

VIII.- Bibliografa

(1)T. M. Devlin, Bioqumica: libro de texto con aplicaciones clnicas, 4

Edicin, Reverte, Ao 2004, pgs. 28 y 29.
(2)R. Latorre, Biofsica y fisiologa celular, 1 Edicin, Universidad de
Sevilla, Ao 1996, Pg. 35.
(3)http://www.porquebiotecnologia.com.ar/index.php?
action=cuaderno&opt=5&tipo=3&note=65