TEMA 11.

- CINTICA ENZIMTICA

Introduccin: Cintica enzimtica.
Ecuacin de Michaelis-Menten.
Ecuacin de Lineweaver-Burk.

Reacciones con mltiples substratos.

Inhibicin enzimtica:
- Reversible
Competitiva.
No competitiva.
Acompetitiva.
- Irreversible. Ejemplos de inhibidores irreversibles

Introduccin. Cintica enzimtica

La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas
por enzimas.
Perfil cintico de un enzima micaeliana

Perfil cintico de un enzima alostrico

Modelo Cintico de Michaelis-Menten

Las reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas:
Primera etapa, se forma el complejo enzima-sustrato.
Segunda etapa, el complejo enzima-sustrato se transforma en el producto,
liberando el enzima.

V1 = k1 [E] [S]
V2 = k2 [ES]
V3 = k3 [ES]
En equilibrio la V de formacin de ES es igual a la velocidad de descomposicin.
V1 = V2 + V3

k1[S] [E] = (k2 + k3 )[ES]

[E] = [ET] - [ES]

donde la expresin (k2+ k3)/k1 se ha sustitudo por KM, o constante de Michaelis-Menten

Modelo Cintico de Michaelis-Menten

La velocidad de reaccin = la velocidad de formacin del producto:

v = v3 = k3 [ES] =

La velocidad mxima (Vmax) se obtiene cuando el enzima est saturada por el S.

Vmax = k3 [ET]
Si introducimos el parmetro Vmax en la ecuacin general de la velocidad
obtenemos la expresin ms conocida de la ecuacin de Michaelis-Menten:

Modelo Cintico de Michaelis-Menten

La representacin grfica de la ecuacin de
Michaelis-Menten (v frente a [S]) es una hiprbola

KM

es la concentracin de sustrato
para la cual la velocidad de reaccin
es la mitad de la velocidad mxima.
En efecto, si KM = [S], la ecuacin de
Michaelis-Menten se reduce a:
v = Vmax/2.
El valor de KM da idea de la afinidad
del enzima por el sustrato: A menor
KM, mayor afinidad del enzima por el
sustrato, y a mayor KM, menor
afinidad.

Representacin de Lineweaver-Burk
Para determinar grficamente los valores de KM y Vmax es ms sencillo utilizar la
representacin doble recproca (1/v frente a 1/[S]), ya que es una lnea recta. Esta
representacin doble recproca recibe el nombre de representacin de Lineweaver-Burk

v =

Vmax [S]
Km + [S]

KM/Vmax

1
v

1
=
v

Km

[ ]
Vmax

1 + 1
Vmax
[S]

1
Vmax
-1
Km

1
[S]

y= m. x + b
pendiente es KM/Vmax
abscisa en el origen es -1/KM
ordenada en el origen es 1/Vmax

A partir de los datos experimentales se puede calcular grficamente, los valores

de KM y Vmax de un enzima para diversos sustratos.

Reacciones con mltiples substratos

a) Reaccin enzimtica con formacin de un complejo ternario (ES1S2)
a.1. Unin aleatoria de los S

a.2. Unin ordenada de los S

b) Reaccin enzimtica en la que no se forma de un complejo ternario

Mecanismo ping pong

Inhibicin Enzimtica
Inhibidor: Efector que se une al enzima y hace disminuir su actividad,
mediante interacciones con el centro activo u otros centros especficos.
Se excluyen todos aquellos agentes que inactivan a la enzima a travs de desnaturalizacin
de la molcula enzimtica.

Dos tipos de inhibidores:

* Inhibidores reversibles: establece un equilibrio con la enzima libre,
con el complejo enzima-substrato, o con ambos.

- COMPETITIVOS: El inhibidor se fija al centro activo de

la enzima libre, impidiendo la fijacin del sustrato.
- NO COMPETITIVOS: El inhibidor se fija a la enzima
independientemente de que lo haga o no el sustrato. No
impide la fijacin del sustrato a la enzima, pero s la accin
cataltica.
- ACOMPETITIVOS: El inhibidor se fija nicamente al
complejo enzima-sustrato una vez formado, impidiendo la
accin cataltica

* Inhibidores irreversibles: modifican qumicamente a la enzima mediante

uniones covalentes.

Inhibicin Enzimtica

Inhibicin reversible

Inhibicin competitiva

S
E

ES

E + P

I
EI

Se define una constante de equilibrio

de disociacin del inhibidor

Ki =

[E] [I]
[EI]

Caractersticas:
-Las fijaciones de sustrato e inhibidor son mutuamente excluyentes.
- A muy altas concentraciones de sustrato desaparece la inhibicin.
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo estructural del sustrato.
- El inhibidor es tan especfico como el sustrato.

Inhibicin Enzimtica

Inhibicin reversible

Inhibicin competitiva

Vmax [S]

v=
Representacin directa
Km
Inhibicin competitiva

[ ]

1+[I] + [S]
Ki

120

100

Sin Inhibidor
80

60

40

Km= Km (1+[I]/Ki)
Con Inhibidor

20

s
0
0

20

40

60

80

100

120

Inhibicin Enzimtica

Inhibicin competitiva - Representacin recproca doble

1/v

0.07

0.06

0.05

0.04

1/Vmax

0.03

0.02

-1/Km

0.01

1/s
0.00
-0.3

-0.2

-0.1

0.0

0.1

0.2

-1/(Km(1 + i/Ki))

0.3

0.4

0.5

0.6

Inhibicin Enzimtica

Ejemplo de inhibicin competitiva

COO-

FAD

FADH2

CH2
CH2
COO-

CH
SDH
Succinato
deshidrogenasa

Succinato

Inhibidores
competitivos

COOCH
COOFumarato

COO-

COO-

CH2

C O

COO-

CH2
COO-

Malonato

Oxalacetato

Inhibicin Enzimtica

Inhibicin reversible

Inhibicin no competitiva

S
E

ES

E + P

I
S
EI

ESI

Caractersticas:
- El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre (E) y al complejo
enzima-sustrato (ES)
- Ni el complejo EI ni el complejo ESI son productivos

Inhibicin Enzimtica

Inhibicin reversible

Inhibicin no competitiva

Vmax < Vmax

Vmax = Vmax /(1+[I]/Ki)

V =

Vmax . [S]
Km . (1+[I]/Ki) + [S] . (1+[I]/Ki)

Vmax= Vmax/(1+[I]/Ki)

Inhibicin Enzimtica

Inhibicin reversible

Inhibicin acompetitiva o mixta

- El I slo se une al complejo ES y en

un sitio distinto al que se fija el S en el centro
activo

- Baja la Km y Vmax, pero el cociente

Km/Vmax no se altera.
-Ocurre en reacciones multisustratos

El lugar de unin del I se crea

tras la unin del S al E

Inhibicin Enzimtica

Inhibicin reversible

Inhibicin acompetitiva o mixta

Inhibicin acompetitiva

Inhibicin Enzimtica

Inhibicin Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo qumico de la enzima,
modificndola covalentemente

E + I

- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente txicos.

- Una clase especial de inhibidores irreversibles son los Inhibidores suicidas:
Son poco reactivos hasta que se unen al centro activo del enzima, donde se
transforman en un compuesto muy reactivo, inactivando irreversiblemente al enzima.

Algunos tipos de inhibidores irreversibles:

1. Reactivos de grupos -SH
2. Organofosforados
3. Ligandos de metales
4. Metales pesados

Inhibicin Enzimtica

Ejemplos de inhibidores irreversibles

Compuestos organofosforados

Ser CH CH2

H3C

OH
Ser CH CH2

Diisopropil
fluorofosfato
(DFP)

H3C

CH3
CH

P O

CH3
CH

O P O
CH
H3C
CH3

CH
H3C
CH3

Malation

- Actan sobre enzimas sernicas (serin proteasas, acetil colinesterasa...),

unindose covalentemente a travs del grupo fosfato.
Ejemplos: DFP, Insecticidas (Paration, Malation)
Gases de guerra (Sarn), gas mostaza.

Inhibicin Enzimtica

Ejemplos de inhibidores irreversibles

In cianuro, CN-: Se fija con gran afinidad a la sexta posicin de
coordinacin del Fe hemnico del complejo citocromo oxidasa.

Penicilinas. Inhiben enzimas sernicas que participan

en la formacin de la pared bacteriana.

Inhibicin Enzimtica

Inhibidor suicida

(Inhibidores activados enzimticamente)

- Se trata de molculas que se unen al centro activo de manera especfica, igual

que el substrato o los inhibidores competitivos
- Una vez unidos al centro activo, la enzima transforma la molcula en una especie
qumica muy reactiva que modifica covalentemente a la enzima, inactivndola
- Tienen por tanto la especificidad del inhibidor competitivo y la potencia de los
inhibidores irreversibles

Modo de accin de los inhibidores suicidas

E + I
1.

EI

EI*

E + I*

El inhibidor se fija a la enzima igual que el sustrato o un inhibidor competitivo convencional.

2. La accin cataltica de la enzima convierte al inhibidor I en una especie altamente reactiva I*.
3. I* modifica covalentemente a la enzima, inactivndola de forma definitiva al igual que un
inhibidor irreversible.

Inhibicin Enzimtica

Ejemplo de inhibidores suicidas

Sistema de la -lactamasa bacteriana

La utilizacin masiva de antibiticos -lactmicos (penicilinas,derivados semisintticos y
cefalosporinas) ha conducido a la aparicin de resistencias a los mismos.
Los microorganismos resistentes a estos antibiticos lo son por producir una enzima, la
-lactamasa, que inactiva a los antibiticos -lactmicos.

Penicilina (activa)
S

R CO NH

CH3

COO-

-Lactamasa
R CO NH
O C HN
O-

CH3

N
O

Con frecuencia los preparados de penicilinas se formulan

aadiendo un inhibidor suicida de la -lactamasa, el
cido clavulnico
CH2OH
C
N
O

-Lactamasa

CH3

c.peniciloico (inactivo)

C
H

Esta molcula reacciona con la

serina activa de la -lactamasa,
produciendo su inactivacin

C
CH CH2
Ser

HN

CH2OH

COO-

CH3
COO-

O-

COO-

c.clavulnico
S

CH2OH
C

HN

H
COO-

Inhibicin Enzimtica

Resumen de los parmetros cinticos de las reacciones enzimticas:

efecto de los distintos tipos de inhibicin.
Tipo de inhibicin

Sin inhibidor

Inhibicin competitiva

Inhibicin no competitiva

Inhibicin acompetitiva o
mixta

Ecuacin de velocidad

V =

V =

Vmx . [S]
Km + [S]

Vmx . [S]
Km . (1+[I]/Ki) + [S]

Km

Vmx

Km

Vmx

Km (1+[I]/Ki)

Vmx

Vmx . [S]
V =

V =

Km.(1+[I]/Ki)+[S].(1+[I]/Ki)

Vmx . [S]
Km +[S].(1+[I]/Ki)

Km

Vmx/(1+[I]/Ki)

Km/(1+[I]/Ki)

Vmx/(1+[I]/Ki)