1

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA DIAGNSTICO DEL VIRUS

DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA TIPO 1 (VIH-1) POR
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

ELABORACION:
Ada Valverde Rojas
Licenciada en Tecnologa Mdica
Laboratorio en "Enfermedades de Transmisin Sexual y Chlamydias
Centro Nacional de Laboratorios en Salud Pblica
Instituto Nacional de Salud

Soledad Romero Ruiz

Microbiloga
Laboratorio en Enfermedades de Transmisin Sexual y Chlamydias
Centro Nacional de Laboratorios en Salud Pblica
Instituto Nacional de Salud

ISBN: 9972-857-12-3
ISSN: 1607-4904
Hecho el deposito legal: 15011052001-3199
Ministerio se salud 2001
Av. Salaverry cuadra 8 s/n, Jess Maria, Lima, Peru
Telf. 431-0410
Instituto Nacional de Salud, 2001
Jr. Cpac Yupanqui 1400, Jess Maria,Lima,11,
Telf: 471-9920, Fax. 471-01
e-mail: posmaster@ins.sld.pe
Pagina web: www.ins.sld.pe

Esta publicacin fue realizada gracias al

apoyo financiero del Proyecto Enfrentando las
Amenazas de las Enfermedades Infecciosas
Emergentes y Remergentes (Convenio de
Cooperacin entre el Ministerio de Salud del
Peru y La Agencia de los Estados Unidos para
el Desarrollo Internacional, USAID.

CONTENIDO

CONTENIDO

INTRODUCCIN

VIRUS VIH

SECCION 1 GENERALIDADES

10

1.1

OBJETIVO

10

1.2

CAMPO DE APLICACIN

10

1.3

RESPONSABILIDADES

10

1.4

DOCUMENTOS DE REFERENCIA

10

SECCION 2 MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD

11

2.1

DISPOSICIONES

11

2.2

PRINCIPALES MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD

12

2.3

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN EL TRANSPORTE

13

SECCION 3 OBTENCIN DE MUESTRAS

13

3.1

OBJETIVO

13

3.2

CAMPO DE APLICACIN

13

3.3

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

13

3.4

PROCEDIMIENTO

14

3.5

OBTENCIN DEL SUERO O PLASMA

14

SECCION 4 CONSERVACIN, EMBALAJE, TRANSPORTE Y REMISIN DE MUESTRAS

15

4.1

CONSERVACIN DE LA MUESTRA

15

4.2

EMBALAJE

15

4.3

REMISIN

16

SECCION 5 ENSAYO O ANLISIS EN LABORATORIO

17

5.1

RESUMEN Y EXPLICACIN DEL ENSAYO

17

5.2

FUNDAMENTO DEL ENSAYO

18

5.3

EXAMEN DE LA MUESTRA

18

SECCION 6 DETERMINACIN DE LA DILUCIN PTIMA DEL CONJUGADO

ANTI-INMUNOGLOBULlNA HUMANA PARA LA DETECCIN DE
ANTICUERPOS ANTI-VIH MEDIANTE IFI

18

6.1

OBJETIVO

18

6.2

MATERIALES

19

6.3

PROCEDIMIENTO

20

6.4

INTERPRETACION DE RESULTADOS

20

6.5

PROBLEMAS EN LA DETERMINACIN DE LA DILUCION PTIMA

20

6.6

PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA

22

SECCION 7 TCNICA DE INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (IFI) PARA LA

DETECCIN DE ANTICUERPOS ANTI-VIH (IFI-VIH)

23

7.1

PRINCIPIO Y UTILIDAD DEL ENSAYO

23

7.2

ESQUEMA Y SIMBOLOGA

23

7.3

FUNDAMENTO DE LA TCNICA

24

7.4

MATERIALES Y REACTIVOS

25

7.5

PROCEDIMIENTO

26

SECCION 8 PREPARACIN Y ALMACENAMIENTO DE LOS REACTIVOS

27

8.1

PORTAOBJETOS

27

8.2

CONJUGADOS

27

8.3

PREPARACIN DE AZUL DE EVANS

27

8.4

PRECAUCIN

27

8.5

PROCEDIMIENTO

27

8.6

SOLUCIN AMORTIGUADORA DE FOSFATOS (PBS) 0,01M, pH 7,2 - 7,4

27

8.7

MEDIO DE MONTAJE

28

8.8

PROBLEMAS EN LA FLUORESCENCIA DE IFI

30

SECCION 9 BIBLIOGRAFA

30

ANEXO A

GUA TCNICA PARA RESOLVER PROBLEMAS

32

ANEXO B

ACCIDENTES CON MATERIAL SOSPECHOSO DE CONTENER VIH

34

ANEXO C

FORMULARIO PARA EL ENVIO DE MUESTRAS PARA DIAGNSTICO DE VIH

36

ANEXO D

HOJA DE TRABAJO DE INMUNOFLUORESCENCIA - VIH 1

38

ANEXO E

SEROTECA DE VIH

39

ANEXO F

FLUJOGRAMA PARA EL DIAGNSTICO SEROLGICO DE INFECCIN

POR VIH EN LA RED DE LABORATORIOS DE REFERENCIA NACIONAL

40

ANEXO G

ALGORITMO PARA EL DIAGNSTICO SEROLGICO DE INFECCIN POR VIH

41

Figura 1

Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH)

Figura 2

Sistema bsico de embalaje triple

16

Figura 3

Esquema de aplicacin de la tcnica

21

Figura 4

Esquema de lmina IFI - VIH -1

23

Figura 5

Simbologa empleada en el procedimiento

23

INTRODUCCIN
El Instituto Nacional de Salud tiene como funciones promover, programar, ejecutar y evaluar las
investigaciones en salud y el desarrollo de tecnologas apropiadas, a travs de la red de laboratorios a
nivel nacional. Asimismo, brinda capacitacin y asesoramiento tcnico a fin de fortalecer la calidad del
diagnstico de las enfermedades transmisibles, logrando establecer una homogeneidad en la
metodologa empleada por los laboratorios para garantizar resultados confiables, reproducibles y
oportunos, y asegurar la vigilancia epidemiolgica y las actividades de control.
Desde la aparicin del SIDA en el mundo en 1981, y luego del descubrimiento del VIH, se han venido
desarrollando tcnicas de diagnstico para las infecciones por VIH. En la actualidad se cuenta con
tcnicas de tamizaje como Dot Blot, Inmunocromatografa, y ELlSA; y para la confirmacin se emplean
metodologas tales como Western Blot (w'B), Inmunofluorescencia Indirecta (IFI), Radio
inmunoprecipitacin (RIPA), y Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), cuya aplicacin es limitada en
pases en desarrollo debido a que las pruebas de tamizaje no estn libres de resultados falsos positivos
(su nivel de especificidad no alcanza el (100%)), siendo necesaria la realizacin de pruebas
confirmatorias como W.B e IFI, que se caracterizan por una elevada sensibilidad y especificidad.
Actualmente en el Per, los laboratorios utilizan la tcnica del W,B como herramienta confirmatoria de
infeccin por VIH. Sin embargo, el alto costo hace cada vez ms difcil su utilizacin como tcnica
rutinaria de confirmacin. Una tcnica de sensibilidad y especificidad equivalente al W.B, es la prueba de
IFI, alternativa recomendada por la OMS, y que ofrece la ventaja adicional de ser ms econmica que las
otras pruebas confirmatorias.
En 1994, el Laboratorio de Referencia de VIH/SIDA del Instituto Nacional de Salud particip en el
proyecto Latinoamericano IFI-VIH OMS-OPS y, desde 1995 hasta 1997 se realiz la confirmacin de
infeccin por VIH con lminas producidas por Chile y Argentina para 13 pases latinoamericanos con el
auspicio de OPS/OMS.
En 1998 se desarroll en el Instituto Nacional de Salud el proyecto "CULTIVO DE LlNFOCITOS PARA LA
PRODUCCION DE LAMINAS IFI PARA EL DIAGNSTICO DE VIH"; como resultado de este proyecto se
cuenta con una produccin de lminas, las que han sido validadas, en el Programa de Proficiencia, del
CDC - Atlanta. Adems se ha logrado establecer y estandarizar una tcnica IFI-VIH de alta sensibilidad,
especificidad y bajo costo.
Este Manual representa un esfuerzo para difundir el diagnstico confirmatorio de la infeccin por VIH-1
mediante la tcnica de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) a fin de contar con personal de laboratorio
debidamente capacitado en IFI-VIH-1 en los establecimientos de salud integrantes de la red nacional de
laboratorios en el Per y los laboratorios de ESSALUD, Fuerzas Armadas, Polica Nacional y Clnicas
privadas.

VIRUS VIH
Los virus VIH (VIH-1 y VIH-2) son retrovirus de cido ribonucleico (ARN) con envoltura, y en general
infectan primariamente las clulas blancas de la sangre humana (Iinfocitos). Se les llama retrovirus
porque tienen la particularidad de integrar su material gentico (ARN del genoma) en el ADN celular del
husped (conteniendo ahora el genoma viral) albergando al provirus VIH.
El virin del VIH es esfrico, de aproximadamente 100 nanmetros de dimetro, su apariencia externa es
la de un baln de ftbol, con una envoltura formada por pentgonos. En su interior se encuentra la
nucleoprotena organizada en una estructura cnica. El virin tiene una envoltura de naturaleza
lipoproteica y asociada a ella un componente de glucoprotena de peso molecular 160 000 (Gp 160), esta
glucoprotena se desdobla en una de 120 000 (Gp 120), la cual corresponde al componente que permite
al virin adherirse al receptor de la clula husped; el otro componente de peso molecular 41 000 (Gp 41)
es una protena estructural, especfica del virus VIH, al interior se encuentran los llamados antgenos de
grupo (GAG), que corresponden a protenas de peso molecular 17 000 (P17) Y 24 000 (P24). En el
interior del ncleo se encuentran dos molculas de ARN y un componente enzimtico la polimerasa
(POL), como la Transcriptasa reversa (P66) y la integrasa o endonucleasa (P51 y P31). Todas estas
protenas estructurales son parte del virin y son requeridas para su replicacin. Tambin existen
protenas no estructurales TAT, REV, VIF, VPR, NEF, VPU, que estn presentes slo en clulas
infectadas. Generalmente estos componentes son responsables de modificar la expresin de las
protenas virales y de la replicacin del virus, por lo tanto pueden tambin gobernar la capacidad
infecciosa del virus.

DIAGNSTICO DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA TIPO 1 (VIH-1) POR

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
SECCIN 1
GENERALIDADES
1.1

OBJETIVO
Establecer las disposiciones que se deben cumplir para realizar el diagnstico del virus de la
inmunodeficiencia humana Tipo 1 (VIH) utilizando el mtodo de inmunofluorescencia
indirecta (IFI).

1.2

CAMPO DE APLICACIN
Se aplica en laboratorios de establecimientos de salud que cuenten con personal calificado,
instalaciones, equipos y materiales idneos para llevar a cabo el diagnstico del VIH a partir
de muestras obtenidas de pacientes hospitalizados y ambulatorios.

1.3

RESPONSABILIDADES

1.3.1

Los Directores o Jefes de Departamento o Seccin de un establecimiento de salud que

realiza el diagnstico del VIH, son responsables de supervisar el cumplimiento de las
disposiciones contenidas en el presente Manual.

1.3.2

Los Jefes de Laboratorio son responsables de mantener la competencia tcnica de su

personal, la idoneidad y confiabilidad de sus equipos, materiales, sustancias, reactivos e
instalaciones. Adems, deben verificar la calidad de los resultados y supervisar el
cumplimiento de las Buenas Prcticas de Laboratorio y las Medidas de Bioseguridad.

1.3.3

Los profesionales designados para realizar el diagnstico son responsables de controlar el

cumplimiento de las disposiciones contenidas en el presente Manual, mantener la
confidencialidad de sus actividades e informar a su jefatura inmediata superior en caso de
ocurrencia de desviaciones de las especificaciones de los procedimientos establecidos.

1.3.4

El personal asignado a los procesos descritos en el presente Manual debe conocer, estar
calificado en las tcnicas y mtodos de ensayo, aplicar las medidas de Bioseguridad y de las
Buenas Prcticas de Laboratorio, y mantener la confidencialidad de las actividades que
realiza.

1.4

DOCUMENTOS DE REFERENCIA

1.4.1

Instituto Nacional de Salud - MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA

LA OBTENCIN Y ENVIO DE MUESTRAS (I).. Serie de Normas Tcnicas N 15. Diciembre
de 1997.

1.4.2

Instituto Nacional de Salud - MANUAL DE NORMAS DE BIOSEGURIDAD. Serie de Normas

Tcnicas N 18. Diciembre de 1997.

1.4.3

PRT-CNLSP-001. ENVIO DE MUESTRAS BIOLOGICAS EN LA RED NACIONAL DE

10

LABORATORIOS DE REFERENCIA EN SALUD PBLICA.

SECCION 2
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
2.1

DISPOSICIONES

2.1.1

Las disposiciones contenidas en el Manual de Normas de Bioseguridad, Serie de Normas

Tcnicas N18, son aplicables para el cumplimiento de las disposiciones del presente
Manual.

2.1.2

Para establecer niveles de bioseguridad aceptables dentro del laboratorio, se recomienda

manejar todas las muestras de sangre, suero o plasma como material potencialmente
infectante, es decir, capaz de transmitir agentes patgenos.

2.1.3

Se deben aplicar las medidas de bioseguridad pertinentes especialmente las aplicables a:

2.1.3.1

El ambiente,

2.1.3.2

El personal,

2.1.3.3

El vestido,

2.1.3.4

Las muestras y su procesamiento, y

2.1.3.5

La esterilizacin terminal.

2.1.4

La bioseguridad es un conjunto de medidas preventivas de sentido comn para proteger la

salud y la seguridad del personal que trabaja en el laboratorio, frente a diferentes riesgos
producidos por agentes.

2.1.5

Es responsabilidad de la direccin del laboratorio establecer una organizacin para garantizar

la seguridad en todas las reas del mismo mediante la aplicacin de normas y
procedimientos de seguridad, claramente detalladas por escrito. Se puede optar por una
estructura de personal con dedicacin exclusiva a las tareas de seguridad, o bien, asignar
parte del tiempo de trabajo del personal de laboratorio a estas tareas.

2.1.6

La administracin del establecimiento de salud debe dar las facilidades para que las normas
de bioseguridad se cumplan.

2.1.7

El VIH ha sido aislado en sangre, semen, saliva, lgrimas, leche materna, lquido
cefaloraqudeo, vmitos, orina, secreciones cervicales, lquido amnitico y tejidos de
personas infectadas. Al obtener y procesar cualquier tipo de muestra en el laboratorio se
deben tomar las precauciones universales, ya que no podramos identificar de manera
confiable mediante la historia clnica a los individuos infectados por VIH.

2.1.8

Los principales peligros son las exposiciones por puntura accidental con una aguja, por
cortes con equipo contaminado, por exposicin de las membranas mucosas o de la piel
cortada a material contaminado, laceraciones, heridas, rasguos. Todo el equipo y material
de laboratorio deberan ser usados como si estuvieran contaminados, incluidos los artculos

11

de escritorio (no llevarse lpices, lapiceros y plumones a la boca).

2.2

PRINCIPALES MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD

2.2.1

Todas las muestras deben ser tratadas como altamente infecciosas para evitar el posible
contagio.

2.2.2

El ingreso al laboratorio debe estar restringido.

2.2.3

Debe utilizarse siempre guardapolvo o mandilones de laboratorio en la zona de trabajo.

2.2.4

El guardapolvo no debe salir de la zona del laboratorio, salvo para enviarlo a lavar.

2.2.5

No pipetear con la boca.

2.2.6

Est prohibido comer, beber, fumar, guardar alimentos, ni aplicarse cosmticos en el

laboratorio.

2.2.7

El cabello largo debe usarse recogido y cubierto.

2.2.8

Lavarse las manos luego de quitarse los guantes y antes de salir del laboratorio.

2.2.9

Utilizar proteccin para los ojos cuando el procedimiento genere gotas o aerosoles.

2.2.10

Utilizar siempre guantes esterilizados y mascarillas.

2.2.11

Las cortaduras o rasguos en las manos y brazos deben cubrirse y protegerse bien.

2.2.12

Deben utilizarse zapatos protectores que cubran completamente los pies (no usar sandalias o
zapatos abiertos).

2.2.13

El procesamiento de las muestras debe realizarse sobre una superficie de trabajo protegida
(papel absorbente plastificado o papel de filtro).

2.2.14

Las superficies de trabajo deben ser descontaminadas por el operador antes y despus de
cada actividad.

2.2.15

Los reactivos deben estar bien etiquetados, y ser almacenados en viales de plstico con tapa
rosca

2.2.16

Todos los laboratorios deben tener a su disposicin un equipo de primeros auxilios.

2.2.17

Informar inmediatamente cualquier accidente al jefe del laboratorio.

2.2.18

Se debe disponer de un lugar para el lavado de ojos en caso de exposicin accidental a

salpicaduras.

2.2.19

Todos los deshechos del laboratorio deben descontaminarse adecuadamente antes de

eliminarlos, en solucin desinfectante y ser autoclavados a 121C durante 20 minutos o
incinerarse.

12

2.2.20

El material infeccioso debe ser fcilmente identificado como tal y ser esterilizado lo antes
posible.

2.2.21

Si se trabaja con cultivo de linfocitos o tcnicas moleculares, utilizar una cabina de flujo
laminar tipo 3.

2.2.22

Se debe limpiar a diario los pisos con un trapeador limpio y solucin desinfectante.

2.3

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN EL TRANSPORTE

2.3.1

El envo y transporte de las muestras que no han sido cuidadosamente embaladas, genera
riesgos de infeccin para toda la gente que est directamente en contacto con cualquier parte
del proceso.

2.3.2

El manejo descuidado y negligente de las muestras pone en peligro no slo al personal del
laboratorio, sino tambin al personal administrativo y personal de apoyo.

2.3.3

El trnsito de las muestras de un lugar a otro genera un riesgo tanto para el pblico como
para el personal del medio de transporte, sea este por va area o terrestre.
SECCIN 3
OBTENCIN DE MUESTRAS

3.1

OBJETIVO
Establecer y uniformizar el procedimiento de obtencin de muestras de sangre para realizar
el diagnstico del virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH -1).

3.2

CAMPO DE APLlCACION
Comprende la obtencin de muestras de sangre intravenosa de pacientes ambulatorios u
hospitalizados.

3.3

MATERIALES, EQUIPOS y REACTIVOS

3.3.1

Jeringas descartables de 10 mL o tubos al vaco de 10 mL, con o sin anticoagulante.

3.3:2

Agujas N. 20, N.21 N. 22.

3.3.3

Tubos estriles 100 x 13, con tapa de caucho o tapa rosca.

3.3.4

Compresas y torundas.

3.3.5

Alcohol de 70%.

3.3.6

Bandas o tubos flexibles de ltex (ligadura).

3.3.7

Centrfuga.

13

3.3.8

Recipientes de paredes rgidas.

3.4

PROCEDIMIENTO

3.4.1

Vestir con mandil y guantes

3.4.2

Escoger una vena adecuada para la puncin y extraccin.

3.4.3

Limpiar la zona elegida con una torunda de algodn humedecida con alcohol de 70%.

3.4.4

Dejar secar.

3.4.5

Colocar el torniquete, haciendo un nudo corredizo por encima del punto escogido para la
puncin e indicar al paciente que abra y cierre la mano enrgicamente varias veces, hasta
que la vena se encuentre ingurgitada, y luego que mantenga la mano cerrada.

3.4.6

Sin tocar con el dedo la vena escogida extraer de 5 mL a 10 mL de sangre.

3.4.7

Retirar la aguja de la vena escogida y colocar una torunda de algodn en el punto de

puncin, indicando al paciente la flexin del brazo.

3.4.8

En la jeringa utilizada retirar la aguja con una pinza. No reinsertar el capuchn y colocar la
aguja en un recipiente de paredes rgidas y de boca ancha que contengan una solucin de
hipoclorito de sodio de 3 a 5% para la eliminacin de agujas.

3.4.9

Abrir el tubo esterilizado y depositar la sangre, hacindola resbalar lentamente por las
paredes. Taparlo inmediatamente.

3.4.10

Si el tubo tiene anticoagulante, mezclar suavemente con la sangre depositada.

3.4.11

Rotular con una etiqueta donde conste un cdigo que corresponder a los datos de la
solicitud del pedido.

3.4.12

Para extraer suero por centrifugacin, dejar reposar el tubo inclinado unos 30 minutos para
permitir la formacin del cogulo.

3.4.13

Para extraer plasma, centrifugar inmediatamente el tubo con la muestra.

3.5

OBTENCIN DEL SUERO O PLASMA

3.5.1

Colocar el tubo con la muestra de sangre debidamente rotulada en la centrfuga, y equilibrar

la misma con igual peso.

3.5.2

Centrifugar durante 5 minutos a una velocidad entre 1 500 r.p.m. a 2 500 r.p.m.

3.5.3

Trasvasar los sueros a tubos plsticos estriles con tapa rosca utilizando una pipeta Pasteur,
micropipetas o pipetas serolgicas descartables.

3.5.4

Rotular debidamel1te los tubos con plumn indeleble o lpiz de grafito, identificndolos
cuidadosamente con el nmero correlativo y verificando que coincidan con el nmero de ficha
que acompaan las muestras.

14

SECCIN 4
CONSERVACIN, EMBALAJE, TRANSPORTE Y REMISIN DE MUESTRAS
4.1

CONSERVACIN DE LA MUESTRA

4.1.1

Si la ejecucin de la prueba se programa antes del trmino de una semana, conservar las
muestras de suero o plasma entre 2C a 8C (refrigeracin). Antes de la prueba, se debe
esperar 30 minutos para que las muestras alcancen la temperatura ambiente del laboratorio.

4.1.2

Si la ejecucin de la prueba se programa despus de una semana, congelar las muestras a

20C. En este caso, las muestras congeladas se deben descongelar totalmente,
homogenizar y centrifugar antes de realizar el ensayo.

4.1.3

Evitar congelaciones y descongelaciones repetidas, ya que el ttulo de anticuerpos disminuye

por ese procedimiento. Las muestras no deben ser sometidas a congelacin y
descongelacin ms de una o dos veces.

4.2

EMBALAJE

4.2.1

Los contenedores individuales de las muestras deben ser resistentes a fisuras, golpes y
rupturas, y deben tener tapa de rosca

4.2.2

Sus tapas deben estar selladas con cinta de seguridad, deben estar envueltas en papel toalla
o material absorbente e introducidas preferentemente en una funda plstica resistente.

4.2.3

La muestra as envuelta debe ser colocada en otro envase metlico o de plstico, igualmente
resistente a las fisuras y rupturas. Colocar suficiente material absorbente a su alrededor para
que resista y amortige los golpes.

4.2.4

Este segundo envase debe empacarse con suficiente seguridad, para protegerlo contra
daos fsicos y agua. Se coloca en un paquete de envo que lo protege de los elementos
externos, tales como dao fsico mientras se encuentra en trnsito (Vase Figura 2).

4.2.5

Despus de cerrarlas, limpiar por fuera con un desinfectante con una concentracin de
solucin de cloro al 0,1% (1 gl L), y luego secarlas completamente.

4.2.6

Al recibir y antes de abrir los envases, estos deben limpiarse con solucin de cloro, y luego
colocarse en gradillas de metal o plstico resistentes a fisuras.

15

4.3

REMISIN

4.3.1

Las muestras no deben enviarse, si antes no se han hecho los arreglos entre el servicio de
transporte y la persona que ha de recibirlas, indicando la fecha de envo, el nmero de gua,
el itinerario, y el nmero de vuelo.

4.3.2

Debe elegirse el itinerario ms directo, con el menor nmero de transbordos y esperas de

16

trnsito. Se procurar que el envo no llegue sbado, domingo o das feriados.

4.3.3

Todas las muestras deben enviarse rotuladas, indicando el cdigo del paciente, la fecha de la
toma de muestra escrito con lpiz en la cinta adhesiva o esparadrapo. No se debe emplearse
tinta ni cinta de papel, pues son vulnerables a la humedad. Esta informacin deber
protegerse de todo dao o humedad y deber colocarse en la parte exterior de la caja de
embalaje protegida, preferiblemente, por una envoltura plstica.

4.3.4

Si el trnsito va a demorar ms de 2 horas deben enviarse en una caja trmica con

refrigerante.

4.3.5

La caja debe poseer exteriormente flechas y una leyenda acerca de la posicin en que debe
manejarse, y con las indicaciones de "URGENTE, FRAGlL, MATERIAL MDICO,
MANTNGASE FRIO, POSICIN VERTICAL, ENTREGA INMEDIATA, TELFONO Y
DIRECCIN DEL DESTINATARIO. NO ABRIR SIN AUTORIZACIN, MATERIAL
CONTAMINANTE, PELIGROSO.
SECCION 5
ENSAYO O ANLISIS EN LABORATORIO

5.1

RESUMEN Y EXPLICACIN DEL ENSAYO

5.1.1

El VIH-1 es el agente causal del sndrome De inmunodeficiencia adquirida (SI DA). Datos
actuales indican que el virus del SIDA se transmite a travs del contacto sexual, de la
exposicin a sangre (incluyendo compartir jeringas y agujas contaminadas) y otros fluidos
contaminados. El kit IFI-VIH1 est diseado para detectar la presencia de anticuerpos
especficos para VIH-1.

5.1.2

Este ensayo emplea como fuente de antgeno viral las protenas de VIH-1 expresadas en
clulas T infectadas crnica mente.

5.1.3

Las clulas linfoblastoideas de origen humano (H9-HTLV 111-8 que son clulas infectadas y
K-562 que son clulas de control), son fijadas a la superficie de un portaobjeto de vidrio para
inmunofluorescencia. Cuando una muestra de suero o plasma con anticuerpos para VIH-1
entra en contacto con los antgenos de VIH-1 presentes en el citoplasma y la membrana de
las clulas infectadas, se produce el reconocimiento de los antgenos virales por los
anticuerpos de la muestra, generndose un complejo antgeno-anticuerpo. Este complejo es
detectado mediante una segunda incubacin con anti-gamma-globulina humana marcada
con isotiocianato de fluorescena, la que reconoce los anticuerpos humanos y fluoresce
cuando se expone a la luz ultravioleta (LUV).

5.1.4

La intensidad y ubicacin de la fluorescencia en las clulas infectadas y no infectadas

evaluadas comparativamente son los criterios determinantes para establecer la presencia o
ausencia de anticuerpos virales.

5.1.5

Algunos individuos infectados con VIH-2 pueden presentar anticuerpos que reconocen y se
unen a los antgenos presentes en los pocillos de clulas infectadas de IFI-VIH-1. Esto
sucede porque algunos antgenos presentan epitopes similares en ambos virus. Este kit de

17

5.2

IFI-VIH-1 est diseado para identificar exclusivamente infecciones por VIH-1.

FUNDAMENTO DEL ENSAYO

5.2.1

El ensayo de IFI para la deteccin de anticuerpos anti-VIH-1 se basa en la unin de los

anticuerpos especficos a los antgenos de VIH-1 (HTLV 11I-8) expresados en la superficie y
citoplasma de clulas linfoblastoideas T humanas fijadas a un portaobjeto. Las clulas no
infectadas que no expresan antgeno de VIH-1 sirven como control para cada muestra. Las
lminas son procesadas para bloquear cualquier actividad viral en las clulas infectadas
mediante la desecacin al aire o por fijacin con acetona, la cual ejerce un efecto
deshidratante por evaporacin y a la vez disuelve los componentes lipdicos del virus. Este
proceso de inactivacin permite tambin la fijacin de las clulas infectadas y no infectadas a
sus respectivos pocillos, a saber: las clulas infectadas en los pocillos superiores y las no
infectadas en los pocillos inferiores.

5.2.2

Para realizar el ensayo se incuba una muestra de suero o plasma diluido en los pocillos
superiores e inferiores (con clulas infectadas y clulas no infectadas como control de la
reaccin, respectivamente) a 37C por 30 minutos. Si la muestra presenta anticuerpos contra
el VIH-1, stos se unen a 19S antgenos virales presentes en el citoplasma y la membrana de
las clulas infectadas. El material no unido a los antgenos es removido mediante sucesivos
lavados. Posteriormente, se aade un antisuero antigamma-globulina humana conjugado con
isotiocianato de fluorescena WITC) a las clulas infectadas y no infectadas del portaobjeto y
nuevamente se incuban a 37C. El material no unido es eliminado mediante lavado.
Finalmente, se procede a preparar la lmina para su observacin en un microscopio con luz
ultravioleta.

5.2.3

Si se encuentran presentes los anticuerpos en el suero estudiado aparecer una

fluorescencia caracterstica de localizacin especfica y visible con luz ultravioleta. La
interpretacin de la lectura se establece comparando la fluorescencia observada en las
clulas infectadas y no infectadas para cada muestra.

5.3

EXAMEN DE LA MUESTRA

5.3.1

Examinar la muestra cuidadosamente para observar si hay contaminacin microbiana,

hemlisis grosera, lipemia o si el plasma est gelificado antes de realizar el ensayo, ya que
estos factores pueden interferir negativamente en el procesamiento o la interpretacin de
resultados.

5.3.2

De ser este el caso, debe obtenerse - en lo posible - una nueva muestra que rena las
condiciones indicadas. Cuando sea necesario se debe retirar el material particulado por
medio de una breve centrifugacin previa al ensayo.
SECCION 6

DETERMINACIN DE LA DILUCIN PTIMA DEL CONJUGADO ANTI-INMUNOGLOBULlNA

HUMANA PARA LA DETECCIN DE ANTICUERPOS ANTI-VIH MEDIANTE IFI
6.1

OBJETIVO
Determinar experimentalmente la dilucin ptima de trabajo.
Nota: El kit IFI-VIH indica la dilucin ideal del conjugado provisto

18

6.2

MATERIALES

6.2.1

Suero humano, positivo para VIH con un ttulo (punto final) de anticuerpos determinado
mediante la prueba de IFI.
Portaobjetos, con 12 pocillos. Los 6 pocillos superiores, con 30% de clulas de cultivo
infectadas H9-HTLV III-B y 70% de clulas no infectadas; y en los 6 pocillos inferiores, con
100% de clulas no infectadas como control.

6.2.2

6.2.3

Suero de Cabra anti-lgG humano conjugado con fluorescena, Fragmento F(AB')2 molcula
completa Cappell , catlogo No 55201 (01180).

6.2.4

PBS: solucin amortiguadora de fosfatos, pH 7,2 - 7,4.

6.2.5

Solucin de contraste: Solucin de Azul de Evans 100X.

6.2.6

Medio de montaje: Glicerina al 90% en PBS (9 partes de glicerol +1 parte de PBS).

6.2.7

Cubre objetos de 60 mm x 22 mm.

6.2.8

Micropipetas de O uL a 20 uL.

6.2.9

Tubos para dilucin.

6.2.10

Koplin.

6.2.11

Incubador de 37C.

6.2.12

Fosfato de sodio monobsico monohidratado, Fosfato de sodio dibsico anhidro, Cloruro de

sodio, para la preparacin de PBS.

6.2.13

Cmara hmeda.

6.2.14

Reloj.

6.2.15

Agua destilada.

6.2.16

Centrfuga.

6.2.17

Microscopio de Inmunofluorescencia.

6.2.18

Kit IFI-VIH-1 para 60 determinaciones:

6.2.18.1

Frotis de IFI-VIH

10 laminas

6.2.18.2

Conjugado FITC

100uL

6.2.18.3

Azul de Evans

2 mL

6.2.18.4

Medio de montaje

5 mL

19

6.2.18.5

Control negativo

200 uL

6.2.18.6

Control positivo

200 uL

6.2.18.7

Cubre objetos

10 unidades

6.2.18.8

Gua de Procedimientos

1unidad

6.3

PROCEDIMIENTO

6.3.1

Retirar dos portaobjetos del estuche (2C - 8C).

6.3.2

Secar los portaobjetos a temperatura ambiente (20C - 30C).

6.3.3

Diluir los sueros controles 1/10 con PBS (pH 7,2 - 7,4).

6.3.4

Colocar 20 uL de los sueros diluidos en cada uno de los pocillos superiores e inferiores.

6.3.5

Incubar los portaobjetos en una cmara hmeda a 37C durante 30 minutos.

6.3.6

Enjuagar los portaobjetos en PBS rpidamente, descartar el PBS y repetir el lavado con PBS
durante 5 minutos, usando un koplin.

6.3.7

Dejar secar los portaobjetos a temperatura ambiente (20C - 30C) durante 8 a10 minutos.

6.3.8

Titular el conjugado anti-lgG humano mediante 5 diluciones desde 1/20 hasta 1/320,
utilizando diluciones 1:2. En la Figura 3, se describe el esquema de aplicacin de la tcnica.

6.3.9

Aadir solucin de azul de Evans 100X (1X dilucin final).

6.3.10

Agregar 20 uL de cada dilucin del conjugado a cada pocillo superior e inferior del
portaobjetos correspondiente.

6.3.11

Incubar los portaobjetos en una cmara hmeda a 37C durante 30 minutos.

6.3.12

Lavar los portaobjetos con PBS por 5 minutos, descartar el PBS, repetir el lavado con PBS
durante 5 minutos, y enjuagar con agua destilada.

6.3.13

Dejar secar los portaobjetos a temperatura ambiente (20C - 30C) durante 8 a10 minutos.

6.3.14

Colocar el medio de montaje y la laminilla cubreobjeto.

6.3.15

Leer en microscopio de IFI, con aumento de 40X.

6.4

INTERPRETACION DE RESULTADOS
La dilucin ptima del conjugado ser la ms alta dilucin que revele la fluorescencia ms
brillante, con la ms alta dilucin del suero positivo.

6.5

PROBLEMAS EN LA DETERMINACION DE LA DILUCION PTIMA

6.5.1

No se observa fluorescencia especfica con el nuevo conjugado. Recomendacin: No usar

conjugado poco sensible.

6.5.2

No hay disminucin de fluorescencia con la ms alta dilucin del conjugado. Recomendacin:

Titular nuevamente el conjugado con diluciones ms altas hasta que se observe una cada de
la fluorescencia.

20

21

6.6

PRECAUCIONES A TENER EN CUENTA

6.6.1

No utilizar el kit o alguno de sus componentes pasada la fecha de vencimiento.

6.6.2

No intercambiar reactivos de distintos kits ni tapas de los viales.

6.6.3

Llevar el kit a temperatura ambiente (20C 30C) antes de aplicar la tcnica

6.6.4

Mantener el kit refrigerado ( 2C 8C) cuando no este en uso.

6.6.5

Utilizar una tcnica asptica (puntas o tips y viales estriles) al abrir y retirar materiales de los
viales del kit. Evitar la contaminacin de los reactivos.

6.6.6

No utilizar reactivos que estn turbios y revelen crecimiento microbiano. Cualquier elemento
que conspire contra la transparencia de la imagen dar malos resultados y el porta objeto
resultara dificultoso para leer.

6.6.7

Es indispensable utilizar una punta o tips para la micropipeta para cada muestra y control.

6.6.8

La contaminacin del control negativo o de cualquier muestra con trazas de un suero positivo
pueden dar resultados falsos positivos.

6.6.9

La contaminacin del conjugado por cualquier muestra o control causara la neutralizacin

parcial o completa y puede llevar a resultados falsos positivos.

6.6.10

No intercambiar las tapas de los viales para evitar la contaminacin cruzada. Para ello, los
viales han sido provistos con tapas de distinto color.

6.6.11

Coger los portaobjetos por su extremo translucido (rea para colocar el numero de orden). Al
abrir el estuche plstico, no presionar ni tocar los pocillos de las clulas.

6.6.12

Utilizar agua destilada en la preparacin de los reactivos.

6.6.13

No sacudir los portaobjetos para evitar la contaminacin cruzada entre los pocillos.

6.6.14

Al dispensar la muestra, no tocar los pocillos ni rayar con la punta de la micropipeta.

6.6.15

La prolongada observacin microscpica de la muestra disminuye la fluorescencia. Tener

cuidado de no exponer cada campo mas de 15-30 segundos.

6.6.16

Asegurar que el microscopio de inmunofluorescencia, filtros y lmpara, estn en ptimas

condiciones. Para probar la lmpara conviene usar diluciones del control positivo
peridicamente para constatar si se mantiene el mismo titulo.

22

SECCION 7
TCNICA DE INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (IFI) PARA LA DETECCIN DE
ANTICUERPOS ANTI-VIH (IFI-VIH)
7.1

PRINCIPIO Y UTILIDAD DEL ENSAYO

Si en el suero del paciente existen anticuerpos VIH, estos se unirn al antgeno viral que est
en las clulas adheridas al portaobjeto. Este complejo es detectado mediante la adicin de
antiinmunoglobulina humana conjugada con fluorescena, siendo esta reaccin observada
mediante microscopio de fluorescencia.

7.2

ESQUEMA Y SIMBOLOGA

23

7.3

FUNDAMENTO DE LA TCNICA
Las clulas humanas H9 expresando antgenos de VIH -1 (H9 HTLV 11I - B) estn
firmemente adheridas a los pocillos 1 - 6 del portaobjeto. El antgeno est fijado y
permeabilizado por acetona.

7.3.1

Se aaden 20 mL de la muestra de suero diluida a un pocillo de clulas infectadas (1 - 6) Y

a un pocillo de clulas no infectadas (7 - 12) Y se incuba el portaobjeto a 37C . Si la
muestra tiene anticuerpos contra el VIH - 1 se forma un complejo antgeno - anticuerpo
sobre las clulas infectadas. En el pocillo de clulas no infectadas no habr unin de
anticuerpos. Se retiran los anticuerpos no unidos durante los lavados.

7.3.2

Luego del proceso de lavado, se colocan 20 mL de una dilucin apropiada del conjugado
antiIgG- humana con FITC a ambas hileras de pocillos con clulas infectadas (1 - 6) Y no
infectadas (7-12) se incuba a 37 C.

24

7.3.3

Si en la primera incubacin se unieron los anticuerpos especficos de la muestra al antgeno

VIH -1, entonces en la segunda incubacin estos anticuerpos son a su vez acoplados con el
conjugado FITC, formando una estructura de tipo "sandwich". Los restos del conjugado son
retirados por lavados.

7.3.4

La unin del conjugado FITC al complejo antgeno - anticuerpo demuestra la presencia de

anticuerpos en la muestra problema. La presencia de Ia estructura "sandwich" formada por:
conjugado FITC I anticuerpo anti VIH - 1 I antgeno VIH -1 es detectada por la fluorescencia
emitida por el fluorocromo (FITC) bajo la excitacin de la luz ultravioleta. Si no se observa
fluorescencia es porque la muestra no contiene anticuerpos.

7 .4

MATERIALES Y REACTIVOS

7.4.1

Portaobjetos con 12 pocillos de clulas de cultivo (25% de clulas infectadas H9 HTLV-IIIB

mezcladas con 75% de clulas no infectadas; 30000 clulas en total en cada uno de los
pocillos).

7.4.2

Suero Humano reactivo para VIH mediante la tcnica de IFI (suero control positivo).

7.4.3

Suero Humano no reactivo para VIH mediante la tcnica de IFI (suero control negativo).

25

7.4.4
7.4.5

Suero de Cabra anti-lgG humano conjugado con fluorescena Fragmento F(AB')2 molcula
completa.
PBS: solucin amortiguadora de fosfatos, pH 7,2 a 7,4.

7.4.6

Solucin de contraste: Solucin de Azul de Evans 100X.

7.4.7

Medio de montaje: glicerina al 90% en PBS (9 partes de glicerol + 1 parte de PBS).

7.4.8

Laminillas cubreobjetos de 60 x 22 mm.

7.5

PROCEDIMIENTO

7.5.1

Retirar los portaobjetos del congelador. Se requiere un portaobjeto (6 determinaciones) para

3 muestras problemas, 1 control PBS, 1 control negativo y 1 control positivo.

7.5.2

Anotar en la hoja de trabajo, el orden de la ubicacin de cada muestra que se colocar en los
pocillos de los portaobjetos.
Secar los portaobjetos a temperatura ambiente (20C - 30C), durante 5 a 10 minutos.

7.5.3
7.5.4

Centrifugar las muestras durante .5 minutos a 1000 rpm. Cuidar de mover el sedimento y
trabajar con el sobrenadante.

7.5.5

Diluir las muestras centrifugadas y los controles a 1:10 en PBS.

7.5.6

Aadir 20 uL de control positivo, control negativo y control PBS a cada uno de los pocillos
indicados, utilizar un solo control positivo, control negativo y control PBS por corrida.

7.5.7

Colocar 20 uL de cada muestra diluida tanto en el pocillo superior como en el inferior. En esta
etapa tenga extremo cuidado en no daar las clulas fijadas y no contaminar otros pocillos.

7.5.8

Incubar los portaobjetos en una cmara hmeda a 37C durante 30 minutos.

7.5.9

Enjuagarlos en PBS rpidamente, descartar el PBS y sumergir nuevamente en PBS durante 5

minutos con agitacin suave. Repetir el lavado por 5 minutos (se recomienda usar un Koplin).

7.5.10

Secar los portaobjetos a temperatura ambiente (20C - 30C) durante 5 a 10 minutos.

7.5.11

Diluir el conjugado anti-lgG humano a su dilucin ptima de trabajo, y aadir la solucin de

azul de Evans 100X (1X dilucin final). Ver Seccin 6.

7.5.12

Agregar 20 uL de conjugado diluido a todos los pocillos.

7.5.13

Incubar los portaobjetos en una cmara hmeda a 37C durante 30 minutos.

7.5.14

Enjuagarlos en PBS rpidamente, descartar el PBS y sumergir nuevamente en PBS durante

5 minutos con agitacin suave. Repetir el lavado por 5 minutos (se recomienda usar un
Koplin).

7.5.15

Secar los portaobjetos a temperatura ambiente (20C - 30C), durante 5 a 10 minutos.

7.5.16

Agregar 5 uL de medio de montaje a cada pocillo y colocar una laminilla cubreobjeto sobre el

26

porta objeto. Leer en microscopio de inmunofluorescencia. Los portaobjetos montados se

pueden mantener hasta 24 h a 4C en la oscuridad.
SECCIN 8
PREPARACIN Y ALMACENAMIENTO DE LOS REACTIVOS
8.1

PORTAOBJETOS
Se deben almacenar congelados preferentemente a -70C, de no ser posible a -20C. Se
recomienda no utilizar los portaobjetos con ms de 12 meses de antigedad.

8.2

CONJUGADO

8.2.1

La conservacin ptima es a 4C.

8.2.2

No se debe usar conjugados con fecha de vencimiento expirada.

8.2.3

Se recomienda fraccionar el conjugado en alcuotas (ej. 100 mL) para evitar que la solucin
stock de conjugado sufra cambios de temperatura excesivos, al sacarlo del refrigerador y
trabajar con l.

8.2.4

Utilizar siempre tips estriles con el conjugado para evitar cualquier tipo de contaminacin
que lo deteriore irreversiblemente.

8.2.5

Eliminar el sobrante de conjugado diluido en PBS utilizado en la tcnica de IFI-VIH.

8.3

PREPARACIN DE AZUL DE EVANS

8.3.1

Frmula solucin stock Azul de Evans 100X:

8.3.1.1

Azul de Evans

1,0 g.

8.3.1.2

Agua destilada

100 mL.

8.4

PRECAUCIN

8.4.1

Este colorante es mutagnico y cancergeno, por lo que al pesar el polvo se debe usar
guantes y mascarilla. El procedimiento debera realizarse en una campana.

8.5

PROCEDIMIENTO

8.5.1

Diluir el Azul de Evans en el agua destilada hasta su completa disolucin.

8.5.2

Guardar la solucin en un frasco oscuro, etiquetndolo como Azul de Evans 100X.

Nota: El Azul de Evans se aade al conjugado como colorante de contraste para reducir la
fluorescencia inespecfica o transfondo. Se recomienda mantener este reactivo refrigerado. La
solucin concentrada se puede mantener hasta 2 meses en refrigeracin.

8.6

SOLUCIN AMORTIGUADORA DE FOSFATOS (PBS) O,01M, pH 7,2-7,4

.6.1

Frmula

27

NaCI
Na2HP04
NaH2P04 H2O
Agua destilada

85g
11,77g
2,23g
10L

8.6.2

Preparacin

8.6.2.1

Pesar los reactivos y colocarlos en un frasco o matraz volumtrico de 2 L.

8.6.2.2

Agregar agua destilada hasta completar los 2 L.

8.6.2.3

Disolver completamente.

8.6.2.4

Colocar la solucin en un recipiente de 10 L Y completar hasta el volumen final de 10 L,

agregando agua destilada; mezclar vigorosamente.

8.6.2.5

Tomar una alcuota y medir el pH que debe estar dentro del rango 7,2 - 7,4.

8.6.2.6

Se recomienda guardar el PBS en el refrigerador a 4C. Estabilidad 6 meses.

8.7

MEDIO DE MONTAJE

8.7.1

Frmula
Tris base O,4M:
Tris-(hidroximetil )-aminometano
Agua destilada

4,8 g.
100 mL

HCI O,2N:
HCI concentrado
Agua destilada

1,6 mL.
100 mL

8.7.2

Preparacin

8.7.2.1

Para 10 mL de Tris base O,4M, adicionar HCI O,2N hasta alcanzar un pH 8,5.

8.7.2.2

Adicionar 10 mL de esta mezcla a 90 mL de glicerol.

8.7.2.3

Controlar el pH. No usar glicerol envejecido e hidrolizado porque acidifica el medio de

montaje.

8.7.3

Interpretacin de Resultados

8.7.3.1

El suero control positivo deber presentar fluorescencia en el 30% de las clulas con el
patrn tpico para este antgeno. El suero control negativo y el control de PBS no debern
presentar fluorescencia.

8.7.3.2

Reaccin Positiva: Esta deber presentar fluorescencia tpica de membrana en el nmero

correcto de clulas segn lo determinado por el control positivo. Los sueros positivos con
bajo ttulo de anticuerpos pueden dar una reaccin ms tenue aunque tpica en un porcentaje
menor de clulas infectadas.

28

8.7.3.3

Reaccin negativa: Esta deber presentar ausencia de fluorescencia

8.7.3.4

Reaccin Inespecfica: Esta presenta igual fluorescencia en las clulas infectadas y no

infectadas que impide la interpretacin correcta.

29

8.8

PROBLEMAS EN LA FLUORESCENCIA DE IFI

8.8

El suero control positivo no presenta fluorescencia.

8.8.1.1

Acciones Correctivas:

a
b
c
d

Buscar la presencia de antgeno en otros sueros positivos.

Revisar la identificacin y dilucin del suero control utilizado.
Ensayar el conjugado anti-humano con antgeno y suero control distinto.
Repetir la prueba.

8.8.2

El suero control negativo presenta fluorescencia.

8.8.2.1

Acciones Correctivas:

Analizar la fluorescencia observada en el control negativo, comparndola con la detectada

con el control positivo.
No usar el conjugado si la fluorescencia en el control negativo es similar a la observada con
el antgeno en el control positivo.
No usar el conjugado si se detecta fluorescencia con algn contaminante en las clulas con
el antgeno, por ejemplo: micoplasmas, bacterias, levaduras, etc

b
c

8.8.3

El suero muestra presenta fluorescencia inespecfica.

8.8.3.1

Acciones Correctivas:

Diluir la muestra a 1:100 (dilucin final) y volver a realizar la prueba. Si en este caso se.
observa fluorescencia especfica en el 30% de la clulas, se puede diagnosticar como
positivo.

Nota:

En el Anexo A se presenta una Gua para resolver problemas en la Fluorescencia de las

muestras
SECCION 9
BIBLIOGRAFIA

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30

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9.19

Valverde A, Romero S. Cultivo de Linfocitos para la produccin de lminas

Inmunofluorescencia Indirecta para la confirmacin del diagnstico de VIH-1. 111 Reunin de
sistemas nacionales de laboratorio en salud pblica. I Congreso de la Red Nacional de
laboratorios en salud pblica, Libro de resmenes 1999.

31

ANEXO A
GUIA TCNICA PARA RESOLVER PROBLEMAS

32

33

ANEXO B
ACCIDENTES CON MATERIAL SOSPECHOSO DE CONTENER VIH
B.1

PRIMEROS AUXILIOS
En caso de salpicaduras, sacar la ropa contaminada.
Permitir el sangrado inmediato de la herida.
Lavar la zona afectada con agua y jabn, aplicar un antisptico disponible, si es necesario se
cubre la herida con un apsito.
Si estn afectados los ojos, nariz o boca, lavarlos bien con grandes cantidades de agua.

B.2

REPORTE Y EVALUACIN
Informar inmediatamente al mdico de turno y otras personas designadas (jefe del laboratorio,
investigador principal, comit de bioseguridad).
Anotar los detalles del accidente y evaluar la gravedad del accidente.
Es importante que el trabajador de salud sea asesorado lo ms rpido posible.
Si se va a utilizar quimioprofilaxis, sta debe comenzar lo ms pronto posible, preferentemente
dentro de las primeras 2 horas de la exposicin (se sabe que el VIH est circulando en la
sangre de 4 a 6 horas antes de penetrar al linfocito T4).

B.3

EVALUACIN DEL ACCIDENTE

Determinar si la herida y algn fluido corporal estn involucrados a fin de establecer si la
exposicin del trabajador de salud es significativa.

B.4

TIPO DE FLUIDO CORPORAL

Sangre, suero, plasma o cualquier liquido biolgico contaminado con sangre.
Muestras de laboratorio o cultivos que pueden tener grandes cantidades de VIH, VHB o VHC
(virus de la hepatitis B y C respectivamente).
rganos o tejidos transplantados.
Lquido pleural, amnitico, pericardio, peritoneal, sinovial o cefaloraqudeo.
Las heces, secreciones nasales, esputo, lgrimas, orina o vmito no han sido implicados en la
transmisin de VIH, VHB o VHC, si es que stos no estuviesen visiblemente contaminados con
sangre.

B.5

VAS DE ENTRADA
Heridas superficiales (por Ej. cortes, abrasiones, magulladuras) o profundas (percutnea,
mordeduras, etc.) a travs de las cuales puede penetrar material infectado.
Membranas mucosas (ojos, nariz, boca).
Nota:
Se debe determinar el rea de piel expuesta y el tiempo de exposicin. Por lo tanto,
es necesario saber si el tipo de fluido corporal y herida indican que ha sucedido una

34

exposicin significativa.
Se debe tener un consentimiento estricto del trabajador de salud y mantener una
estricta confidencialidad de toda la informacin que se ha obtenido.
B.6

LESIN SIGNIFICATIVA
Tomar una muestra de sangre basal del trabajador para serologa de VIH.
Examinar de la misma manera, la muestra del paciente con la que se contamin el personal de
salud.
Se aconseja administrar zidovudina (AZT) al accidentado a una dosis de ataque de 400 mg. lo
antes posible y luego 200 mg. cada 8 horas por 6 semanas como mnimo.
Si la serologa de VIH del trabajador es negativa, esta prueba debe repetirse a los 3 y 6 meses.
Si al cabo de este tiempo la serologa para VIH se mantiene negativa, se concluir que no
existe infeccin. Mientras tanto se deben tomar las precauciones necesarias (evitar el
embarazo, no donar sangre, proteger a la pareja en las relaciones sexuales usando
preservativos, etc.). El trabajador tiene derecho a que se proteja su confidencialidad.
Si el resultado de la muestra basal es positiva la infeccin no puede ser atribuda al
accidente.

B.7

DESINFECTANTES SUGERIDOS

35

36

37

38

39

40

41

42

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

SEDE CENTRAL
Cpac Yupanqui N 1400, Jess Mara
Lima ll, Apartado N. 451
Telf.: 4719920. Fax: 471 0179
e-mail: postmaster@ins.sld.pe
Pgina Web: www.ins.sld.pe

43