Tcnicas de Laboratorio

usadas en inmunologa

OBJETIVOS
Comprender y entender las tcnicas basadas
en el uso de anticuerpos.
Comprender y entender las tcnicas basadas
en la biologa molecular.

Saber los fundamentos tericos de las

diferentes tcnicas mencionadas.

Tcnicas de laboratorio basadas en el uso de anticuerpos

monoclonales
sueros policlonales
Tcnicas de laboratorio basadas en biologa molecular

Anticuerpos monoclonales

Reconocen un slo eptopo

Son altamente especficos para el

antgeno.

Tcnicas de laboratorio basadas en el uso de anticuerpos

Cuantificacin de antgenos por inmunoensayos
Radioinmunoensayo (RIA)

radioactividad

Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)

colorimetra

Tcnicas de laboratorio basadas en el uso de anticuerpos

Purificacin e identificacin de protenas
Inmunoprecipitacin

Cromatografa de afinidad

Western Blot

Tcnicas de laboratorio basadas en el uso de anticuerpos

Marcaje y deteccin de antgenos en clulas y tejidos
Citometra de flujo y
FACS (Fluorescence Activated
Cell Sorting)

Inmunofluorescencia e inmunohistoqumica

Identificacin del tipo celular en un tejido

Detalle de la localizacin subcelular

Tcnicas de laboratorio basadas en el uso de anticuerpos

Medida de las interacciones antgeno-anticuerpo
Mide la afinidad de un anticuerpo por un antgeno pequeo (normalmente un hapteno)
La tcnica se denomina dilisis de equilibrio.

Tcnicas de laboratorio basadas en biologa molecular

Anlisis de la estructura gnica y de la expresin
M. musculus

Southern y Northern Blot

Sty I
Kb

Eco
RI

Hind
III

Pst
I

Bam
HI

R. norvegicus
Eco Hind
RI III

Pst Bam
I
HI

O. cuniculus
Hind
III

Pst Bam
I
HI

H. sapiens
Hind
III

Pst
I

Bam
HI

19.0
7.7
6.2
4.2
3.4
2.7
1.9
1.5

0.9

0.4

dpn

4.2 Kb
2.8 Kb

-actina

Ensayo de proteccin de RNasa

10 12 14 15 16 17 18 19 20 22 Ad

Reaccin en cadena de la polimerasa

Tcnicas de laboratorio basadas en biologa molecular

Ratones transgnicos y Knockout de genes dirigido.
Ratones transgnicos
Ver expresin ectpica de un gen determinado
Ver sobreexpresin de un gen determinado
Anular la expresin de un gen
Introducir una mutacin en un gen determinado

Cruce de ratones

Obtencin de embriones

Cultivo de embriones

Microinyeccin de embriones

Cultivo de embriones toda la noche

Transferencia a madres pseudopreadas

y ......... a los 19 das...................

Knockout de genes dirigidos

Recombinacin homloga

Knockout de genes dirigidos

Knock-in de genes dirigidos

OBJETIVOS
Comprender y entender las tcnicas basadas
en el uso de anticuerpos.
Comprender y entender las tcnicas basadas
en la biologa molecular.

Saber los fundamentos tericos de las

diferentes tcnicas mencionadas.

LECTURA FUERTEMENTE SUGERIDA:

APNDICE III LIBRO ABAS 5th ED.