Manual Lab Farmacologia

Universidad Autnoma de Baja California
Facultad de Ciencias Qumicas e Ingeniera

Qumico Farmacobilogo
Manual del Laboratorio de Farmacologa

Semestre 2008-1
Q. Hermelinda de la Cruz Durn

Enero 2007

Prctica No. 1
Experimentacin con Animales de Laboratorio
Objetivo
El alumno se familiarizar con los mtodos empleados para la sujecin e identificacin de
los animales utilizados en la prctica de laboratorio.
Introduccin
El bienestar de los animales utilizados en investigacin es un tema de inters y en muchos
pases se han desarrollado leyes y regulaciones que aseguran ese bienestar. Se han buscado
alternativas para sustituir el uso de animales de laboratorio, como por ejemplo simulacin
con computadoras, modelos in-vitro, cultivos de rganos y tejidos, y las modernas tcnicas
biotecnolgicas.
Sin embargo existen todava limitantes de estas alternativas para algunos temas, sobre todo
en lo que se refiere a farmacologa. Por lo que en algunos casos es indispensable la
utilizacin de animales, especialmente el de tipo roedor. Deben considerarse entonces
algunas medidas para su mantenimiento en lugares apropiados (bioterios); en donde
recibirn alimentacin y cuidados especiales de acuerdo a las caractersticas propias de la
especie a que pertenecen, como son: alimentacin, jaulas de contencin, control de
enfermedades, reproduccin, condiciones ambientales, etc.
Notas:
1. Se suspender en forma definitiva de las sesiones de laboratorio al alumno que
se sorprenda molestando a los animales (bajo ninguna circunstancia se deber
hacer sufrir al animal, el maestro responsable deber indicar la manera en que
ha de ser sacrificado, en caso necesario, as como su manejo durante la
experimentacin).
2. En caso de mordedura la persona deber acudir inmediatamente al CUMAI
para recibir inmunizacin contra ttanos, as como recibir atencin
preventiva, aplica lo mismo para excoriaciones hechas por material que ha
estado en contacto con los animales. El animal agresor deber ser puesto en
observacin durante un perodo no menor de 10 das, el incidente debe ser
reportado tanto al instructor como al responsable del bioterio.
Procedimiento
1. Se har un recorrido por las instalaciones en forma ordenada para identificar las
diferentes salas existentes.
2. El instructor mostrar la forma correcta en que se sujeta a cada animal de acuerdo a
su especie (conejo, ratn, rata y perro).
3. Anote todas sus observaciones.
Enero 2007

Resultados
1. Elabore un informe escrito de las actividades realizadas durante el recorrido as
como de los siguientes datos:
a. Forma de sujetar a cada animal.
b. En caso de requerirse la administracin de una sustancia, cual es el
procedimiento mas adecuado en cada caso (sujecin y administracin)?
c. Las caractersticas de la cama que utilizan cada uno de ellos.
d. El tipo de alimentacin (incluida agua y alimento slido).
e. Las condiciones ambientales ptimas que deben existir en un bioterio.
f. Las diferentes formas de identificacin que existen (marcaje).
2. Elabore sus conclusiones.
Cuestionario Complementario
1.
Cual es la dosis de pentobarbital utilizada por va intraperitoneal para anestesiar al

ratn, rata, perro y conejo?
2.
Cual es el volumen mximo de una solucin farmacolgica que puede

administrarse a las especies mencionadas en la pregunta numero uno, por va IV,
IM, IP, SC y Oral?
Elaboro: Q. Hermelinda de la Cruz Durn

Fecha: Enero 30 de 2007

Enero 2007

Prctica No. 2
Variabilidad Biolgica
Objetivo
El alumno diferenciar los diferentes aspectos que pueden variar el efecto de un frmaco y
aplicarlos en los regimenes de dosificacin.
Introduccin
Los valores de las magnitudes biolgicas no son constantes: varan en un mismo individuo
y entre los individuos. Este fenmeno, se conoce como variabilidad biolgica. Esta
variabilidad se divide en variabilidad fisiolgica, causada por las fluctuaciones metablicas
y otros procesos fisiolgicos, variabilidad patolgica, causada por las enfermedades, y
variabilidad iatrognica, causada principalmente por los tratamientos farmacolgicos. Es
importante subrayar que la variabilidad biolgica es un fenmeno absolutamente
independiente de la variabilidad debida a los procedimientos de medida, conocida como
variabilidad metrolgica.
Las variaciones iatrognicas estn causadas, estrictamente, por medicamentos o actos
teraputicos o diagnsticos. Sin embargo, no son los medicamentos los nicos xenobiticos
que pueden provocar la variacin del valor de alguna magnitud biolgica; los xenobiticos
de uso ms generalizado en nuestra sociedad cafena, nicotina y etanol y las drogas
de abuso tambin pueden hacerlo.
As pues, la biologa y la prctica clnica indican que no hay dos sujetos iguales, la
farmacologa demuestra que la misma dosis de frmaco provoca una intensidad de
respuesta diferente en diferentes pacientes. Esta diversidad, en parte a la farmacocintica
(diferente absorcin, metabolismo y excrecin del frmaco) y a la farmacodinmia
(interaccin frmaco-receptor), por causas del tipo gentico, ambientales o del curso
clnico de las enfermedades (agudas, crnicas, etc.), hace que la medicin de los
fenmenos biolgicos vare a causa de estos factores ingobernables o accidentales.
Los valores obtenidos sern diferentes, sin embargo cada valor se aproxima mas o menos
a un valor medio, por lo que puede decirse que ese conjunto de valores se distribuye en
torno a la media (X). Cuando mayor sea el nmero total de medidas, el valor de la media
se acercara al valor verdadero del fenmeno de referencia y la distribucin de esas medidas
ser simtrica porque las variaciones positivas o negativas se equilibran mutuamente. El
valor verdadero lo es tericamente en un conjunto infinitamente grande o universo, pero
ante la imposibilidad de obtener ese conjunto o universo, podemos obtener un valor
cercano al verdadero si estudiamos una parte de tal universo, o sea efectuar un nmero
finito de medidas, experimentos u observaciones, que constituyen lo que se llama una
"muestra" coleccin de ensayo o tanteo.

Enero 2007

Procedimiento
1. Nombrar dos voluntarios por equipo, siguiendo los criterios de inclusin
establecidos.
2. Determinar la temperatura corporal basal de cada individuo.
3. Administrar una dosis de aspirina de 500mg a cada uno y determinar la temperatura
en los siguientes intervalos de tiempo: 5, 10, 15, 20, 25, 30 y 60 minutos
postadministracin.
4. Concentrar en una tabla los resultados de cada equipo.
5. Con los datos de todo el grupo determinar las variables: media (X) y desviacin
estndar () a cada intervalo de tiempo.
6. Hacer una grfica con los resultados, con un margen de una desviacin estndar.
Resultados
1. Anota tus observaciones durante el experimento.
2. Elabora tus conclusiones con base en los resultados obtenidos y los plasmados en la
grfica.
1. Que es la desviacin estndar.
2. Cuales son los factores ms comunes que interfieren en la respuesta de un frmaco.
3. Como puede interferir la variabilidad biolgica en un rgimen teraputico.

Fecha: Agosto 21 de 2006

Enero 2007

Prctica No. 3
Vas de Administracin
Objetivo
El alumno ser capaz de observar la influencia de las diferentes vas de administracin,
utilizando animales de laboratorio y una solucin que permitir apreciar la llegada de los
compuestos administrados a diferentes rganos y tejidos.
Introduccin
Existen diversos medios por los que el medicamento puede introducirse en el organismo.
Es posible que un mismo medicamento est preparado para utilizar ms de una va, del
mismo modo que existen frmacos diseados para acceder al organismo por un nico
camino. Existen varias vas de administracin para los medicamentos como la oral,
sublingual, bucal, tpica, transdrmica, inhalacin, instilacin ocular, rectal, vaginal o
parenteral (subcutnea, intramuscular, intravenosa). Cada medicamento est preparado
para ser administrado por va determinada y que ejerza su accin de la forma ms
conveniente. Para cada va de administracin existen diferentes formas farmacuticas. Por
ejemplo, para la va oral se preparan cpsulas, comprimidos, comprimidos recubiertos,
comprimidos efervescentes, comprimidos masticables, suspensiones, soluciones, jarabes,
elixires, etc.
La eleccin depende de diversas variables. Algunas son: el tipo de medicamento, es decir,
sus particularidades. La absorcin del mismo: en qu lugar del organismo (estmago,
duodeno, piel, etc.) conviene que se produzca y a qu velocidad. El propio paciente; hay
que tener en cuenta los condicionantes fisiolgicos (como el estado de su aparato digestivo,
necesidad de una accin ms o menos rpida, etc.) y condicionantes psicolgicos (es
frecuente que a los nios les entre mejor un jarabe que una grageas).
Procedimiento
1. Pesar las ratas y calcular para cada una el volumen de anestsico a administrar de
acuerdo al peso del animal y a una dosis ponderada de 15mg/100gr de peso.
2. Anestesiar las ratas administrando el volumen total de anestsico por va
intraperitoneal (IP), dejar reposar 10 minutos.
3. Administrar azul de metileno al 0.01%, utilizar una rata para cada va de
administracin de acuerdo a la siguiente tabla:

Enero 2007

Va de
Administracin
Intravenosa (IV)
Intramuscular (IM)
Intraperitoneal (IP)
Subcutnea (SC)
Oral (PO)
Volumen a
Administrar (ml)
0.5
1-2
5-10
5-10
1-2
4. Dejar reposar 20 minutos y hacer la diseccin de cavidad abdominal.

5. Llevar a cabo una exploracin fsica interna y por observacin buscar azul de
metileno en rganos y tejidos.
6. Anotar tus datos en la tabla de resultados.
1. Cuales son las principales vas de administracin de frmacos?
2. Explique ventajas y desventajas en la teraputica con frmacos en las siguientes
vas de administracin: oral, sublingual, rectal, inhalacin, subcutnea, intravenosa,
intratecal y tpica.
3. Define administracin parenteral y menciona todos los tipos que conozcas.
4. Mencione dos frmacos que se apliquen por cada va de administracin.

Fecha: Agosto 21 de 2006

Enero 2007

Prctica No. 4
Frmacos Antihistamnicos
Objetivo
A travs de la aplicacin drmica de histamina el alumno observar y medir el efecto de
frmacos antihistamnicos.
Introduccin
Los antihistamnicos han sido usados durante los ltimos 50 aos y se han convertido en
unos de los medicamentos de mayor prescripcin en Mxico. La denominacin actual es
antagonistas de los receptores de la histamina, su accin consiste en evitar el efecto de
la histamina en los diferentes tejidos del cuerpo. La histamina o b-aminoetilimidazol fue
aislada por vez primera en 1907 por Windaus y Vogt; en 1910, Daley y Laidlow estudiaron
su efecto biolgico y descubrieron que estimulaban a diversos msculos lisos. En 1940, se
desarroll el primer antihistamnico antagonista H1 para uso en el humano: fenobenzamina
con buenos resultados. En 1944 se comercializa el maleato de pirilamina; en 1946, la
difenhidramina y tripelenamina y, en 1949, la clorfeniramina. Todos estos antihistamnicos
H1 han sido denominados de primera generacin, clsicos o sedantes por ser los
primeros. En los ltimos 15 aos se han sintetizado antihistamnicos con alto potencial
inhibitorio; a stos se les denomina antihistamnicos H1 de segunda generacin. Con el
advenimiento de nuevas tcnicas de investigacin se fueron descubriendo nuevos
receptores de la histamina: el receptor H1 en 1966, el receptor H2 en 1972, el receptor H3
en 1983 y el receptor H4 en 2000. Cuando la histamina es liberada de mastocitos,
basfilos, neuronas histaminrgicas u otras clulas, se debe unir a cierto receptor de
histamina: H1, H2, H3 o H4. Los antihistamnicos H1 de primera y segunda generacin
antagonizan al receptor H1, utilizandose en la clnica contra rinitis, urticaria, lagrimeo, o
como antialrgicos. Los antagonistas del receptor H2 se utilizan en la clnica para reducir
la secrecin de cido gstrico en el tratamiento del paciente con enfermedad cido pptica.
Hasta el momento no existen antagonistas del receptor H3 y H4 para uso clnico; sin
embargo, dentro del campo de estudio de estos receptores se ha descubierto que participan,
respectivamente, en la regulacin de la neurotransmisin y en procesos inflamatorios.
Material
Balanza granataria
Lancetas estriles
Gotero
Regla
Matraz volumtrico de 10cc
Histamina
Agua estril
Alcohol
Algodn
Medicamentos antihistamnicos

Enero 2007

Soluciones
Histamina al 10%
Procedimiento
1. Formacin de equipos de trabajo.
2. Preparacin de soluciones.
Pesar exactamente 1 gr de histamina.
Disolver en 3cc de agua estril.
En Matraz volumtrico llevar a un volumen de 10cc con agua estril.
3. Administracin de medicamentos antihistamnicos.
Nombrar un voluntario por equipo y administrarle el medicamento
antihistamnico que seale el instructor.
Nombrar un equipo para que el voluntario sea el individuo control.
Administrar cada medicamento de acuerdo a la dosis usual del
antihistamnico que se trate.
4. Administracin de histamina.
Despus de transcurrida 1 hora de administrado el medicamentos
antihistamnico, asear con una torunda alcoholada el antebrazo del
voluntario.
Colocar una gotita de histamina al 10% sobre la piel, evitar que esta se
derrame.
Sobre la gota de histamina, pinchar con una lanceta estril.
Tomar lecturas del dimetro del halo de reaccin a la histamina
(inflamacin y/o enrojecimiento) a los 15, 30, 45, 60, 90 y 120 minutos post
aplicacin de la histamina.
5. Con el individuo control proceder igual que en 4; pero sin haber tomado algn
frmaco antihistamnico.
6. Elaborar una tabla con los resultados de todo el grupo.
7. Elabora tus conclusiones.
1. Menciona los tipos de receptores histamnicos?, con que efectos estn comnmente
relacionados en nuestro cuerpo?
2. Que efecto(s) tiene la histamina en nuestro cuerpo?
3. Cual es la frmula desarrollada de la histamina?
4. Que tipo de enlaces qumicos puede formar con su receptor biolgico?
5. Menciona los frmacos antihistamnicos que se utilizan con fines teraputicos?
6. Menciona al menos un medicamento para cada frmaco de los mencionados en la
pregunta anterior.


Enero 2007

Prctica No. 5
Distribucin de Frmacos
Objetivo
Por medio del anlisis cualitativo y cuantitativo determinar la distribucin de un frmaco
en los diferentes compartimentos del organismo.
Introduccin
La distribucin es un proceso farmacocintica en el que tiene lugar el transporte del
frmaco desde su lugar de absorcin hasta el rgano donde va a ejercer su efecto. No
obstante, es importante considerar que una vez absorbido el frmaco es distribuido no solo
hasta el sitio donde va a actuar, si no que al mismo tiempo llega a otros rganos en donde
va a ser eliminado, metabolizado o acumulado.
La mayora de los frmacos se unen a protenas plasmticas para circular en el organismo.
La albmina es la principal de estas protenas acarreadoras; tiene dos sitios de unin para
frmacos, uno para frmacos de carcter cido, y otro para frmacos de carcter bsico.
Los esteroides corticales y algunos otros frmacos de carcter bsico se unen tambin a las
alfa-1-globulinas.
La unin de los frmacos a las protenas depende esencialmente de la afinidad que tengan
los frmacos, y constituye una cifra estable para cada frmaco. Esta unin es reversible,
encontrndose siempre un determinado porcentaje libre y cuando ste se elimina del
plasma una nueva cantidad de frmaco se desprende de su unin a protenas y toma su
lugar, de tal modo que las fracciones libre y unida a protenas permanecen constantes.
Ocasionalmente, cuando se sobrepase la capacidad de fijacin de la albmina, aumenta la
fraccin libre.
Solamente el frmaco libre es activo, puesto que es el nico capaz de atravesar barreras y
difundir a los tejidos.
Una vez que el frmaco se encuentra en plasma, la concentracin que alcanza en los
diferentes tejidos depende esencialmente de dos factores: el flujo sanguneo regional, y la
salida del frmaco del interior vascular.
La unin del frmaco a las protenas y la salida del frmaco del interior vascular
condicionan un parmetro que conocemos con el nombre de volumen de distribucin (Vd).
Se define como Vd el volumen de agua corporal en el que el frmaco se encuentra
realmente disuelto. Pero este parmetro de Vd real no es fcilmente medible, por lo que
recurrimos al Vd aparente que corresponde a:
Vd =
DOSIS
Cp
Enero 2007

Decimos que este volumen de distribucin es aparente por que no refleja con exactitud
donde se encuentra el frmaco. Por ejemplo, Si la Cp es muy baja el Vd ser muy alto,
indicndonos que esta acumulado en algn tejido; por el contrario, si el frmaco esta muy
unido a protenas la Cp ser alta y el Vd ser bajo. A pesar de ello nos sirve para conocer la
distribucin corporal de un frmaco:
Vd
Vd
Vd
3 Litros
12 Litros
40 Litros
--------------------- Frmaco en plasma

--------------------- Frmaco en plasma + intersticio
--------------------- Frmaco en plasma + intersticio + clulas
Material y Equipo
Espectrofotmetro UV-VIS
Balanza analtica
Balanza granataria
Balanza para roedores
Mesa de ciruga para roedores
Equipo de diseccin completo
Jaula metablica
Centrfuga
Agitador Vortex
Portaobjetos (6)
Jeringa de 1cc (2)
Tubo de ensaye 16x100 con tapn de rosca (10)
Tubo de ensaye 16x125 con tapn de rosca (10)
Matraz volumtrico de 500 cc (1)

Pipeta volumtrica 0.5 cc (1)
Pipeta volumtrica 1 cc (3)
Pipeta graduada 20 cc (1)
Pipeta graduada de 10 cc (2)
Soluciones y Reactivos
Pentobarbital sdico
cido tricloroactico (TCA)
Nitrito de Sodio
Sulfacetamida
Cloroformo
Hidrxido de sodio
Alfa-naftiletilendiamina
Sulfamato de amonio
cido clorhdrico
Sulfacetamida 4 mg/cc (10cc)

Hidrxido de sodio 0.1 N ( 60cc)
cido tricloroactico 15% (25cc)
cido clorhdrico 4 N (10 cc)
Nitrito de sodio 0.1% (10cc)
Sulfamato de amonio 0.5% (10cc)
Alfa-naftiletilendiamina 0.1% (10cc)

Enero 2007

Procedimiento
Sesin 1 (primera parte)
1. Se administra a la rata sulfacetamida en dosis de 10 mg/Kg de peso.
2. Se coloca el animal en una jaula metablica por espacio de 30 minutos.
3. Si no se ha colectado orina en este intervalo de tiempo, induzca al animal
presionndole levemente la parte inferior del abdomen.
4. Anestesie al animal y preprelo en la mesa de ciruga. Abra la cavidad abdominal
(en este momento puede obtener orina por insicin directa en la vejiga, si no se
logro anteriormente).
5. Abra adems la cavidad torxico y craneana. Obtenga 1cc de sangre por puncin
directa al corazn del animal.
6. Obtenga tambin muestras de 0.5-1.0 gr de los siguientes rganos: hgado, rin,
intestino, corazn, cerebro y msculo de la regin gltea.
7. Coloque las muestras obtenidas en un portaobjetos y pselo, despus de esto
proceda a desmenuzarlas con la ayuda de una navaja de bistur y transfiralas a un
tubo de ensaye que contenga 10cc de NaOH 0.1 N, lave el portaobjetos y pselo de
nuevo por diferencia conocer el peso de la muestra.
8. Procese cada una de las muestras de acuerdo al procedimiento indicado.
Procesamiento de las muestras:
Sangre: Lleve 1cc de sangre a un tubo que contenga 9cc de agua y agite en vortex. Tome
1cc de esta dilucin y transfirala a otro tubo, adicione 12cc de agua y agite de nuevo.
Agregue 4cc de ATC al 15% y agite por 1 minuto. Centrifugue a 3,000 rpm por 3 min. Del
sobrenadante tome una muestra de 5cc y psela a un tubo limpio. Etiquetar el tubo
especificando fecha, laboratorio, nmero de equipo y contenido. Guardar en congelacin
para la segunda parte de esta prctica.
Orina: Tome 100 mcl de orina y agregue a un tubo que contenga 1.9cc de agua. Agite y
tome 1cc de esta orina diluida y transfirala a otro tubo conteniendo 11cc de agua.
Adicione 4cc de TCA al 15% agite y centrifugue a 3,000 rpm por 3 minutos. Del
sobrenadante tome una muestra de 5cc y psela a un tubo limpio. Etiquetar el tubo
especificando fecha, laboratorio, nmero de equipo y contenido. Guardar en congelacin
para la segunda parte de esta prctica.
Tejidos y rganos: En el tubo que contiene la muestra y la solucin de NaOH deber
agitarse en vortex por 1 minuto en 3 ocasiones, en un perodo de 10 minutos. Despus se
dejar reposar por 15 minutos. Se toman 2cc del sobrenadante y se adicionan 2cc de TCA
al 15%, agitar por 30 seg. Adicionar 6cc de agua y agitar de nuevo. Centrifugar por 5
minutos a 3,000 rpm. Tomar del sobrenadante una muestra de 5cc y pasar a un tubo limpio.
Etiquetar el tubo especificando fecha, laboratorio, nmero de equipo y contenido. Guardar
en congelacin para la segunda parte de esta prctica.
Enero 2007

Sesin 2 (segunda parte)

Para iniciar con esta sesin, permita que las muestras se descongelen a temperatura
ambiente, o en bao de agua a temperatura ambiente.
Cuantificacin de Sulfacetamida por la tcnica analtica de Bratton-Marshal
1. A 5cc del sobrenadante se le adicionan 1cc de HCl 4N, 1cc de Nitrito de sodio al
01% y se agita en vortex por 5 minutos.
2. Posteriormente agregar 1cc de Sulfamato de amonio al 0.5% y agite de nuevo por 3
minutos, manualmente de manera vigorosa.
3. Por ultimo adicione 1cc de alfa-naftiletilendiamina al 0.1%, agite y repose en la
oscuridad por 10 minutos.
4. Lea la absorbancia en espectrofotmetro a una longitud de onda de 546 nm.
5. Hacer exactamente este mismo procedimiento a un blanco que consiste en 5cc de
agua, que se trata a la par con las muestras..
Curva patrn de sulfacetamida:
Solucin patron de Sulfacetamida (100 mcg/cc): Pesar en balanza analtica 50mg de
Sulfacetamida, colocarla en un matraz volumetrico de 500cc. Llevar al aforo con agua.
Soluciones estndar de Sulfacetamida: Tomar la alcuota necesaria de la solucin patrn
de sulfacetamida y preparar 25 cc de cada una de las concentraciones descritas a
continuacin: 1, 2, 4, 6, 8, 12 y 16 mcg/cc.
Tomar 5 ml de cada una de las soluciones estndar de sulfacetamida y colocar en un tubo
de ensaye y proceder de acuerdo a la tcnica de Bratton-Marshal. Hacer este procedimiento
por duplicado para cada una de las concentraciones. Incluir un blanco con 5cc de agua.
Resultados
Con los resultados de la curva estndar calcular el promedio, desviacin estndar y el
coeficiente de variacin de las absorbancias obtenidas para cada concentracin.
Elaborar una grfica de concentracin de sulfacetamida (mcg/ml) vs Absorbancia
promedio; calcular por mnimos cuadrados el coeficiente de correlacin.
Con la grfica obtenida hacer interpolaciones con los valores de absorbancias de las
muestras y calcular las concentraciones de sulfacetamida en sangre, orina y en los
diferentes rganos y tejidos.
Reporte sus resultados en una tabla donde se especifiquen los valores de absorbancia y
concentraciones obtenidas, y la grfica correspondiente.
Elabora tus conclusiones.
Enero 2007

1. Que propiedades deber tener un frmaco para poder encontrarse en el eritrocito?
2. Cual es el componente proteico ms importante en la distribucin de frmacos.
3. La distribucin ser un proceso reversible?

Enero 2007

Prctica No. 6
Estimulacin en Inhibicin del Metabolismo Farmacolgico
Objetivo
Estudiar la influencia de la induccin del metabolismo por medio de dao heptico y la
estimulacin del metabolismo por medio de la administracin crnica de un frmaco
utilizando animales de laboratorio.
Introduccin
El metabolismo es uno de los principales mecanismos por medio del cual la accin de un
frmaco se puede concluir. La mayora de los frmacos pasan por un proceso metablico,
que los convierte en productos ms polares (metabolitos). Esto es de suma importancia en
el manejo global de un frmaco, ya que al pasar por esta biotransformacin no solo se
diminuye su actividad biolgica, si no que lo hace ms susceptible a ser excretado.
La intensidad y duracin de la accin de un frmaco es determinada por el grado de
biotransformacin que sufre y la velocidad con que sea eliminado del cuerpo. Este grado
de transformacin o metabolismo puede ser afectado por varios factores como edad, sexo,
raza, dieta, aspectos genticos, exposicin a sustancias qumicas, etc. A travs de estudio
cinticos esta demostrado que una sustancia puede ser capaz de modificar el patrn
metablico de otra. Ejemplos de ello son el Ketoconazol (antimictico) que es capaz de
inhibir el metabolismo de Diacepam (anticonvulsivo), pudiendo presentarse sntomas de
intoxicacin por elevacin de niveles plasmticos de Diacepam.
Mientras que por otro lado Fenobarbital es capaz de inducir el metabolismo de muchos
otros frmacos disminuyendo su concentracin, lo que podra hacer que se presenten
niveles subteraputicos.
Material y Equipo
Balanza para roedores
Jeringa 1cc
Pentobarbital sdico
Tetracloruro de carbono
Algodn
Jaula para ratones
Ratones
Procedimiento
1. Cada equipo tendr 5 ratones pesados y marcados perfectamente.
2. Los alumnos se dividirn en tres equipos, el equipo numero 1 trabajar con ratones
sin pretratamiento (control); el equipo numero 2 trabajara con ratones inducidos; y
el equipo numero 3, con ratones inhibidos.
Enero 2007

3. A cada ratn se le administra pentobarbital a una razn de 50 mg/Kg de peso.
4. Determinar el tiempo de inicio del sueo y duracin del mismo. El tiempo de inicio
de sueo se determina por la perdida del reflejo de enderezamiento. Esto se logra
cuando al voltear al animal ste no regresa instantneamente sobre sus patas.
Pretratamiento
Los ratones se tratarn por 5 das previos al experimento, como a continuacin se describe:
o Induccin enzimtica.- cada ratn recibe pentobarbital a una razn de 10 mg/Kg de
peso, por va intraperitoneal diariamente.
o Inhibicin enzimtica.- los ratones se introducen en un frasco que contiene algodn
impregnado de tetracloruro de carbono, hasta que el animal muestre algn signo de
incoordinacin. Squelo inmediatamente para que pueda recuperarse.
Tenga cuidado al utilizar el tetracloruro de carbono; el algodn no debe contener
lquido en exceso y la exposicin no debe ser prolongada, pues puede matar al
animal o sedarlo por completo, lo cual no es recomendable. Esto se repite
diariamente.
Resultados
1. Construya una tabla con los resultados de los tres grupos anotando los tiempos de
perdida del reflejo de enderezamiento (PRE) y duracin del efecto o tiempo de
sueo.
2. Calcule los tiempos promedio de cada grupo.
3. Elabore una grfica de barras y compare los tiempos promedio de induccin (I) y
duracin (D), obtenidos para cada grupo.
4. De acuerdo a los resultados y la grfica obtenidos que puede concluir acerca del
experimento?
1. Continuar por siempre la induccin enzimtica an cuando se suspenda la
administracin del frmaco que la ocasiona?
2. Defina los trminos de induccin e inhibicin farmacoinducida.
3. De por lo menos tres ejemplos de otros frmacos que sufran este mismo fenmeno.


Enero 2007

Prctica No. 7
Determinacin de Dosis Efectiva al 50 (DE50) y Dosis Letal al 50 (DL50)
Objetivo
El alumno se familiarizara con la metodologa experimental y los clculos necesarios para
obtener la Dosis Efectiva al 50 y Dosis Letal al 50 de un compuesto exgeno.
Introduccin
Una manera importante de conocer y caracterizar el efecto de un frmaco es la
determinacin de su curva dosis-respuesta. En este caso, en la ordenada o eje de las Y o
eje vertical se especifica la intensidad del efecto farmacolgico hasta su mxima expresin,
relacionndola con la dosis o el logaritmo de la dosis en el eje de las X o abscisa o eje
horizontal. En General el incremento de la dosis produce un aumento paralelo en la
intensidad de la respuesta, hasta un determinado limite que es el efecto mximo. En
Farmacologa la respuesta aumenta hasta ese punto mximo, despus del cual el
incremento de la dosis no va acompaado de un incremento de los efectos farmacolgicos.
El efecto mximo determina ante el aumento de la dosis, el plateau o la meseta de la curva.
En caso de aumentar la dosis despus del plateau pueden aparecer efectos txicos o la
muerte sin aumentar la intensidad de los efectos farmacolgicos. La toxicidad de un
frmaco puede medirse con el conocimiento de la dosis letal 50 (DL 50), que es la dosis
capaz de provocar la muerte del 50% de los animales de laboratorio. La dosis efectiva 50
(DE50) es por otra parte la dosis que produce los efectos deseados o teraputicos en el 50%
de los pacientes.

Enero 2007

El tratamiento logstico para la transformacin lineal de la curva, propuesto por Berkon
(1934) consiste en aplicar logaritmos a las dosis utilizadas y en la transformacin de la
respuesta en Logit de la siguiente manera:
L = ln (p/q)
Donde:
p = probabilidad de acierto.
q = probabilidad de error.
Entonces, graficando L vs ln D, obtenemos la ecuacin de la recta L = ln D + b; donde m

= pendiente y b = intercepto al eje de las Y. Y si queremos encontrar ln D50, despejando:
ln D50 = -b/m
D50 =
b/m
Procedimiento
1. Cada equipo de trabajo utilizar un grupo de 5 ratones. A los cuales se les
administrar una misma dosis.
2. Marcar y pesar cada uno de los ratones.
3. Administrar el volumen de anestsico que le corresponda a cada ratn de acuerdo a
su peso y a la dosis que le toca probar al equipo de trabajo.
4. Las dosis a probar durante el experimento son: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 120, y
160 mg/Kg de peso.
5. Determinar el nmero de animales muertos y vivos.
6. Despus de media hora sacrificar los ratones que hallan quedado vivos con una
dosis de pentobarbital a una razn de 200 mg/Kg de peso.
7. Proceder con los ratones muertos de acuerdo a las buenas prcticas de disposicin
de RPBI.
Resultados
1.
Dosis
(mg/Kg)
Ordena los resultados de tu experimento de acuerdo a la siguiente tabla:

Log D
No. Ratones
Dormidos
Muertos
Porcentaje Ratones
Dormidos
Muertos
p
Dormidos
q
Muertos
Dormidos
ln(p/q)
Muertos
Dormidos
Muertos
10
20
30
40
50
60
80
120
160
Enero 2007

2.
3.
4.
5.
6.
Elabora una grfica con tus resultados; con los valores de %Efecto vs Log D.
Elabora una grfica con los valores de L vs ln D.
Determina por el mtodo grfico la DE50 y DL50.
Calcula por el mtodo Logit los valores de DE50 y DL50.
Elabora tus conclusiones con respecto al experimento.
1. Cual es la DE50 y DL50 de pentobarbital sdico rata y ratn, reportados en la
literatura.
2. Como podemos medir la potencia de un frmaco?, explica tu respuesta.
3. Define los conceptos de:
a. Intervalo teraputico (IT).
b. Dosis Toxica 50 (DT50)
c. ndice de seguridad (IS)

Fecha: Octubre 30 de 2006

Enero 2007

Prctica No. 8
Influencia del pH Urinario en la Excrecin de Frmacos
Objetivo
A travs de la cuantificacin de cido acetil saliclico en orina el alumno determinar la
influencia del pH urinario en la excrecin de frmacos.
Introduccin
El rin es el rgano de excrecin de principios activos y de metabolitos. Pera esto, ejecuta
tres funciones: filtracin glomerular, secrecin tubular y reabsorcin tubular.
Filtracin glomerular: el paso del frmaco del plasma al filtrado glomerular se efecta a
travs de la pared del glomrulo por filtracin debido a un gradiente de presin. Solamente
pueden atravesar esta membrana las molculas que poseen un tamao lo suficientemente
reducido: las macromolculas, como la albmina, las globulinas y otras protenas
plasmticas no pueden atravesarla, ni mucho menos el frmaco que se encuentre unido a
ellas.
La velocidad de filtracin es funcin del flujo sanguneo renal, por lo que en casos de
insuficiencia cardiaca se producir un descenso de la excrecin renal de los frmacos. Se
trata de un proceso pasivo que no requiere gasto de energa.
Secrecin tubular: proceso que sigue un mecanismo de transporte activo, que se efecta en
el tbulo proximal, por el que algunos frmacos presentes en la sangre pasan a la luz
tubular. Se trata de un proceso saturable, existiendo, por lo tanto, mecanismo de
competencia por un mismo sistema de transporte activo.
Reabsorcin tubular: proceso por el que el frmaco que a llegado a la luz tubular, ya sea
por filtracin glomerular o por secrecin tubular, es reabsorbido a nivel tubular y pasa de
nuevo a la sangre. Este proceso se efecta por difusin pasiva, por lo que influyen
notablemente la liposolubilidad, el grado de ionizacin y el peso molecular del frmaco a
reabsorber.
Conviene recordar que el pH de la orina puede modificar el grado de ionizacin de
numerosos frmacos y, por tanto, su mayor o menor facilidad para poder ser reabsorbidos y
pasar a la sangre o, de forma alternativa, ser excretados en la orina. A la vista de todo lo
anterior, se puede afirmar que la velocidad de excrecin renal de un frmaco es igual a la
velocidad de filtracin ms la secrecin, menos la velocidad de reabsorcin.

Enero 2007

Procedimiento
A) El grupo se dividir en tres equipos.
Equipo No.1. Estudiar la excrecin de aspirina en un pH urinario alcalino.
Equipo N0.2: Estudiar la excrecin de aspirina en un pH urinario cido.
Equipo No.3: Estudiar la excrecin de aspirina en un pH normal.
Cada equipo nombrar un voluntario, quien se tomar una dosis de 1 gr de Aspirina va
oral, y proceder de acuerdo al protocolo experimental que a continuacin se muestra.
B) Criterios de inclusin y/o exclusin.
1. Jvenes sanos de 18 a 28 aos de edad.
2. Sexo masculino o femenino.
3. No padecer ningn tipo de enfermedad crnica.
4. Al momento del experimento no estar enfermos.
5. No consumir, al menos una semana antes y durante el experimento, algn frmaco
teraputico, social o de abuso.
6. No consumir bebidas alcohlicas al menos 3 das antes y durante el experimento.
7. Respetar el protocolo experimental, mismo que se le dar a leer y entender antes
de iniciar el estudio.
8. Firmar carta de consentimiento informado, antes de iniciar el estudio.
Protocolo experimental:
1. El da del experimento cada voluntario vaciar completamente la vejiga a las 5:00
am. Llevar a cabo la miccin en un vaso de precipitados. Tomar el pH de la orina,
anotar el valor en la hoja correspondiente y desechar la orina.
2. Tomar una tableta de Aspirina de 1g con 200 ml de agua natural. Anotar en la hoja
correspondiente la hora exacta de la toma del medicamento.
3. A las 6:00 am Tomar la siguiente solucin:
Equipo No.1 (orina alcalina): tomar 40 mEq (4 g) de bicarbonato de sodio
(NaHCO3), posteriormente tomar 12 mEq (1 g), cada 4 horas (a las 10:00
am y 2:00 pm).
Equipo No.2 (orina acida): tomar 4 g de cido ascrbico, posteriormente
tomar 2 g, cada 4 horas (a las 10:00 am y 2:00 pm).
Equipo No.3 (control): tomar 200 ml de agua natural.
4. Asegurarse de tomar 200 ml de agua cada hora, las primeras 6 horas
postadministracin. Despus de las 6 horas consumir agua al gusto.
5. Durante el experimento no consumir ninguna otra clase de lquidos (bebidas
carbonatadas, agua de frutas, agua con saborizantes, etc.).
6. Colectar la orina durante 10 horas (ultima orina colectada a las 3:00 pm)
postadministracin del frmaco. Durante este periodo orinar cada vez que el cuerpo
lo requiera. Asegurarse de cada vez de vaciar completamente la vejiga. Depositar la
orina en un vaso de precipitado y medir el volumen total en una probeta graduada.
Tomar el pH de la orina. Guardar una alcuota de 200 ml y desechar el resto. Anotar
volumen de orina, pH urinario y la hora de miccin en la hoja correspondiente.

Enero 2007

7. A las (8:00 am consumir un desayuno, el cual consistir de 2 sndwiches;
elaborados con una rebanada de jamn y una de queso, una rodaja de tomate y,
lechuga y mayonesa al gusto. Adems, una manzana de tamao mediano.
8. A las 13:00 consumir una comida al gusto. Incluir una bebida de t helado, mximo
de 300 ml.
Cuantificacin de salicilatos en orina
Material
1 matraz volumtrico de 100 ml
3 pipetas volumtricas de 1 ml
1 pipeta graduada de 5 ml
12 tubos de ensaye de 13x120 mm
Equipo
Balanza analtica
Espectrofotmetro UV-visible
Centrfuga
Agitador vortex
Reactivos
Salicilato de sodio
Nitrato frrico nonahidratado
Cloruro mercrico
cido clorhdrico 1N
Soluciones
Reactivo para desarrollar color: Pesar con exactitud y por separado 4 g de nitrato frrico
nonahidratado y 4 g de cloruro mercrico, colocarlos en un matraz volumtrico de 100 ml.
Adicionar un poco de agua destilada para disolver, aadir 12 ml de una solucin 1 N de
cido clorhdrico y diluir hasta el aforo con agua destilada.
Solucin patrn de referencia de salicilato de sodio a concentracin de 100 mcg/ml: Pesar
con exactitud 50 mg de salicilato de sodio y depositarlos en un matraz volumtrico de 50
ml, disolver totalmente en 20 ml de orina libre de medicamentos (diluida 1:1 con agua) y
llevar hasta el aforo con la misma orina. De esta solucin tomar con exactitud una alcuota
de 2.5 ml y depositar en un matraz volumtrico de 25 ml, llevar al aforo con agua.
Desarrollo del mtodo analtico para cuantificar salicilatos en orina.
En un tubo de ensaye colocar 1 ml de muestra de orina y adicionar 5 ml del reactivo para
desarrollar color, agitar la muestra en vortex durante 1 min y centrifugar durante 5 min a
2500 rpm para obtener una solucin transparente; decantar la solucin a un nuevo tubo de
ensaye y determinar absorbancia a una longitud de onda de 540 nm, ajustando a cero con
Enero 2007

un blanco de agua preparado a las mismas condiciones que la muestra. De igual manera
proceder con 5 ml de la solucin patrn de referencia de salicilato de sodio a 100 mcg/ml.
Resultados
1. Calcular la concentracin de salicilato en las muestras de orina, utilizando la
siguiente ecuacin:
(Concentracin solucin de referencia)(Absorbancia de la muestra)
Concentracin de la muestra =
(Absorbancia solucin patrn de referencia)
2. Calcula la cantidad total de salicilato en cada una de las muestras de orina.

3. Determinar la cantidad total de salicilato eliminado durante el periodo completo de
muestreo.
4. Compara los resultados de los tres equipos de trabajo y elabora tus conclusiones.
1. Que otro compuesto se puede utilizar para acidificar la orina?
2. Menciona tres frmacos bsicos y tres cidos con los cuales se favorezca su
excrecin acidificando o alcalinizando la orina, respectivamente?

Fecha: Noviembre 08 de 2006

Enero 2007

Hoja de Registro
Fecha:
Nombre del Voluntario:
Edad:
Peso:
)
Sexo:
Orina: Acida ( )
Alcalina ( )
pH Urinario Basal:
Hora de toma del medicamento:
Numer
o
Muestr
a
Hora
pH Orina
M( )
F(
Control ( )
Volumen
Excretado
Observaciones
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Comentarios:

Enero 2007

Carta de Consentimiento Informado

Lugar y Fecha: __________________________________________________________________.
Por medio de la presente acepto participar en el estudio de:
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________,
correspondiente a la practica No. 7 del manual de laboratorio de farmacologa.
El objetivo del estudio es:
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
__________________________________________________________.
Se me a explicado que mi participacin consistir en:
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________.
Declaro que se me ha informado ampliamente sobre los posibles riesgos,
inconvenientes, molestias y beneficios derivados de mi participacin en el estudio, que
son los siguientes:
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
__________________________________________________________.
El investigador(es) se ha(n) comprometido a responder cualquier pregunta y aclarar
cualquier duda que le plantee acerca de los procedimientos que se me llevaran a cabo,
los riegos, beneficios o cualquier otro asunto relacionado con el experimento.
Entiendo que conservo el derecho de retirarme del estudio en cualquier momento en
que lo considere conveniente, sin que ello afecte mi perfil como estudiante del
Laboratorio de Farmacologa.
Nombre y Firma del Voluntario: _____________________________________________________.

Nombre y Firma del Investigador: ___________________________________________________.
Testigos: ___________________________________ y __________________________________.

Enero 2007

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Cual es la dosis de pentobarbital utilizada por va intraperitoneal para anestesiar al

Cual es el volumen mximo de una solucin farmacolgica que puede

Elaboro: Q. Hermelinda de la Cruz Durn

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4. Dejar reposar 20 minutos y hacer la diseccin de cavidad abdominal.

Elaboro: Q. Hermelinda de la Cruz Durn

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--------------------- Frmaco en plasma

Matraz volumtrico de 500 cc (1)

Sulfacetamida 4 mg/cc (10cc)

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Sesin 2 (segunda parte)

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Entonces, graficando L vs ln D, obtenemos la ecuacin de la recta L = ln D + b; donde m

Ordena los resultados de tu experimento de acuerdo a la siguiente tabla:

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(Absorbancia solucin patrn de referencia)

2. Calcula la cantidad total de salicilato en cada una de las muestras de orina.

Elaboro: Q. Hermelinda de la Cruz Durn

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