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Inc Med de Tecnica en Espectrometria UV VISIBLE
Inc Med de Tecnica en Espectrometria UV VISIBLE
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PRESENTACIN
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AUTORES1
Aguiar Meugniot Ricardo.- MOVILAB
Aguilar Molina Rosala. IMSS.
lvarez Tapia, Rubn- LABORATORIOS SAS S.A. DE C.V.
Becerril, Silvia.- Auber y Asociados
Bonilla Lpez David. SENASICA-SAGARPA
Corts Coln, Rocio. E.- Independiente
Esparza de Len Mara. Onsite Analtica de Mxico, S.A. de C.V.
Espinosa Eva. PEMEX Refinacin.
Espinosa Rodrguez Irene.- Independiente
Garca Gmez Ma. De Lourdes. Laboratorio de Calidad Qumica
Veracruzana ,S.A. de C.V.
Hernndez River Rosala.- CIDESI
Lopz Cristina. - Independiente
Meja Snchez Dimas. SENASICA-SAGARPA
Montante L. Miriam E.- CFPPNL
Moreno Ramrez Ma. Genoveva.- CENAM
Muraira Martnez, Luca M.- CFPPNL
Rosas Garca, Eva.- ENTIDAD MEXICANA DE ACREDITACIN
A.C.
Rosas Garza Unberto. INDEQUIM.
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NDICE
Pgina
PRESENTACIN.2
AUTORES.4
NDICE..6
1. PROPSITO DE LA GUA TCNICA ............................................................................ 7
2. ALCANCE DE LA GUA TCNICA ............................................................................... 8
3. MENSURANDO .............................................................................................................. 10
4. MTODO Y/O SISTEMA DE MEDICIN.................................................................... 11
5. CONFIRMACIN METROLGICA Y CALIFICACIN DE EQUIPOS.................... 13
6. TRAZABILIDAD DE LA MEDICIN........................................................................... 16
7. INCERTIDUMBRE DE MEDICIN .............................................................................. 20
8. VALIDACIN DE MTODOS ...................................................................................... 22
9. BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO ............................................................... 24
10. BIBLIOGRAFA ............................................................................................................ 24
11. ANEXOS ........................................................................................................................ 25
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Radiacin
policromtica
Materia
Espectro de
absorcin
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= abc
donde:
=absorbancia
b = espesor de la celda
a =absortividad
c = concentracin
b) La cantidad de energa electromagntica monocromtica absorbida por un elemento
es directamente proporcional a la concentracin de la(s) especie(s) que absorbe(n) y
a la longitud de la trayectoria de la muestra para un conjunto de condiciones
instrumentales establecidas.
si
entonces
T = ( I/ I0) donde: T = transmitancia
= -log T
El intervalo de longitudes de onda consideradas para la tcnica de espectrofotometra de
ultravioleta-visible son:
1. De 190 a 326 nm longitud de onda de la radiacin generada por lmpara de deuterio
para la regin de ultravioleta
2. De 326 a 1100 nm longitud de onda de la radiacin generada por lmpara de
tungsteno para la regin del visible.
Los equipos comnmente utilizados en las tcnicas analticas de espectrofotometra son los
espectrofotmetros y los fotocolormetros o fotmetros.
Los espectrofotmetros son equipos que tienen en su sistema un monocromador que
permite la seleccin de la longitud de onda con una alta resolucin.
Un fotocolormetro a diferencia del espectrofotmetro utiliza slo sistemas de filtros para
seleccionar un intervalo de longitudes de onda con una menor resolucin que el
espectrofotmetro.
Los componentes principales de un espectrofotmetro se muestran en la figura 2.
Fuente de
energa
Monocromador
Compartimiento
de muestra
Detector
Amplificador y
registrador
y/o
computadora
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3. MENSURANDO
Un ejemplo de mensurando que puede ser medido a travs de la tcnica de medicin de
espectrofotometra ultravioleta - visible se describe en la Tabla de trazabilidad de las
Mediciones Analticas de los mtodos de ensayo, Anexo 1.
Los evaluadores deben solicitar a los laboratorios la identificacin clara y precisa del (los)
mensurando(s) sujeto(s) al alcance de la acreditacin, incluidos en los Mtodos de
Medicin que utiliza la Tcnica de Medicin objeto de esta gua, empleando el formato de
la tabla del Anexo 1.
En la elaboracin de los informes de resultados de ensayo, en caso de que los mtodos de
ensayo o los clientes requieran la expresin del mensurando en unidades diferentes a las del
SI, se debe reportar el resultado en las Unidades SI [3] y a su vez en las unidades
equivalentes como parte del Informe de Resultados
Ejemplo, X mg/kg (Y libras/barriles).
Para mayor informacin ver captulo I, artculos 5 y 6 de la Ley Federal sobre Metrologa y
Normalizacin (LFMN) y la NOM 008 SCFI 2001.
Ver Glosario de trminos (Anexo 2) para las definiciones correspondientes.
3.1 Intervalo de trabajo de los mtodos de medicin
Los evaluadores deben verificar los intervalos de trabajo de los mtodos de medicin que
emplea la tcnica de espectrofotometra de Ultravioleta -Visible, solicitando la
documentacin que proporcione evidencia de la determinacin del intervalo de trabajo de
los mtodos de medicin por parte del laboratorio, ste debe estar basado en la validacin
Gua Tcnica sobre Trazabilidad e Incertidumbre en las Mediciones Analticas
que emplea la tcnica de Espectrofotometra de Ultravioleta-Visible 2004-06-28
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parcial total del mtodo y debe ser coherente con la aplicacin del resultado del ensayo
(ver Anexo 2, Glosario de Trminos para las definiciones correspondientes).
El intervalo de trabajo de los mtodos de medicin debe tomar en cuenta los lmites
mximos permisibles o las especificaciones de la Norma a la que se evale su conformidad,
las especificaciones de procesos que se estn evaluando o los requerimientos de los clientes
del laboratorio, los cuales idealmente deben estar en la seccin media del intervalo de
trabajo.
Por ejemplo: Si el limite mximo permisible para cianuros en aguas residuales es de
0,07 mg/L, el intervalo de trabajo ideal es de 0,01 a 1 mg/L
3.2 Incertidumbre
Los evaluadores deben verificar que la estimacin de incertidumbre de los mtodos de
medicin que emplea la tcnica de espectrofotometra de Ultravioleta -Visible, solicitando
la documentacin que proporcione evidencia de la estimacin de incertidumbre por parte
del laboratorio, basndose en lo que se estipula en la seccin 7 de esta Gua Tcnica.
Para el caso de las acreditaciones iniciales, ampliaciones o actualizaciones de mtodos de
ensayo renovaciones hacia la NMX-EC-17025-IMNC-2000[2], el laboratorio deber
iniciar su proceso de estimacin de incertidumbre en la validacin parcial del mtodo y
tener un plan de implantacin de acuerdo al captulo 4 inciso 4.2.3 de las Polticas
Referentes a la Trazabilidad e incertidumbre de mediciones de la ema, para cuantificar
todos aquellos componentes de incertidumbre que contribuyan significativamente a la
incertidumbre final de la medicin. Esto ltimo debe ser realizado segn el punto 7 de esta
gua.
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Etapa de medicin
12. Materiales de Referencia Certificados (MRC)
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Es importante que los instrumentos de medicin se mantengan bajo control, con la finalidad
de evaluar su desempeo y cumplir con los requisitos de la NMX-EC-17025-IMNC2000[2], que requieren a los laboratorios de ensayo la evidencia de que los instrumentos
cumplen con el propsito de uso establecido, con un estado de mantenimiento adecuado y
calibrados a patrones nacionales o internacionales, esto con la finalidad de demostrar la
validez de sus resultados de medicin.
La presentacin de evidencia se realiza mediante los resultados de los procesos de la
Confirmacin Metrolgica (CM)[6] y la Calificacin de Equipo de Instrumentos Analticos
(CEIMA)[7].
El proceso de CM se aplica a los instrumentos que se utilizan en mediciones fsicas y que
se calibran externamente por medio de laboratorios de calibracin acreditados, este proceso
evidencia que el equipo es adecuado al uso propuesto. El proceso de CEIMA se debe
aplicar a todos los instrumentos de medicin analtica.
5.1 Confirmacin Metrolgica (CM)
Las caractersticas metrolgicas del equipo de medicin (CMEM) son factores que
contribuyen a la incertidumbre de la medicin. Las CMEM permiten realizar la
comparacin directa con los Requisitos Metrolgicos del Cliente2 (RMC) para establecer la
Confirmacin Metrolgica (CM).
Los RMC en este sentido se refieren normalmente a los requerimientos del mtodo de
ensayo acreditado para satisfacer las necesidades del cliente del laboratorio, en cuanto al
desempeo y especificaciones de los equipos a utilizarse.
Ver definiciones correspondientes a la confirmacin metrolgica en el Glosario de
Trminos (Anexo 2).
El evaluador debe solicitar la documentacin que contenga los requisitos metrolgicos del
cliente (RMC) considerados en el proceso de CM.
Ejemplo de algunos RMC:
Intervalo de trabajo, sesgo, incertidumbre, estabilidad, deriva, resolucin, entre otros.
Ver en el Anexo 3 un ejemplo especfico.
El evaluador debe solicitar la documentacin que contenga las caractersticas metrolgicas
del equipo de medicin (CMEM) consideradas en el proceso de CM.
Ejemplo de documentos que contengan CMEM:
Certificado de calibracin, Informe de calibracin.
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Debe seguir los lineamientos de la CM, para los termmetros, as como para las
balanzas analticas que se utilicen para pesar muestras y materiales de referencia.
Debe seguir los lineamientos de la CM, para el material volumtrico que se utilice
para la preparacin de los materiales de referencia (disoluciones de trabajo), salvo
que dichas disoluciones sean preparadas gravimtricamente.
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En el Anexo 4.1 se presenta un ejemplo de CEIMA con tablas de parmetros bsicos por
etapa de calificacin de un espectrofotmetro ultravioleta -visible.
El evaluador debe solicitar que los registros del CEIMA se encuentren documentados de
acuerdo a las caractersticas metrolgicas del equipo, ver ejemplos del Anexo 4.1.
Adicionalmente el evaluador debe solicitar la recalificacin del equipo, en los siguientes
casos:
Cambio de localizacin del equipo.
Interrupcin prolongada de los servicios que pueda poner en duda la
estabilidad del desempeo del equipo o su calibracin.
Mantenimiento mayor con cambio de partes que afecten la medicin
(lmparas, celda de flujo, detector).
Modificacin de diseo.
En el caso de los siguientes componentes de los sistemas de medicin que emplea la tcnica
que se incluyen en esta Gua, se debe considerar el siguiente lineamiento:
6. TRAZABILIDAD DE LA MEDICIN
6.1 Trazabilidad, calibracin, patrones y Materiales de Referencia Certificados
(MRC)
Gua Tcnica sobre Trazabilidad e Incertidumbre en las Mediciones Analticas
que emplea la tcnica de Espectrofotometra de Ultravioleta-Visible 2004-06-28
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Adicionalmente, se deber asegurar que el mtodo este bajo control mediante el uso de
materiales de control de calidad, ya sean MRC MR y la participacin continua en pruebas
interlaboratorio, si existen.
El evaluador debe solicitar que los MRC utilizados para la medicin por espectrofotometra
de ultravioleta -visible proporcionen trazabilidad a patrones nacionales certificados por el
CENAM, siempre y cuando estn disponibles, o en su defecto a patrones extranjeros con la
autorizacin respectiva de la Direccin General de Normas (DGN), segn lo especificado
en los Art. 26 de la LFMN, 20 y 24 del Reglamento de la LFMN y la Poltica de
Trazabilidad de la ema.
Es importante mencionar que la mayora de los elementos qumicos incluidos en stas
tcnicas de medicin, que estn sancionados por la normatividad nacional para la
evaluacin de la conformidad de dichas normas, se encuentran disponibles en el CENAM,
por lo que los evaluadores deben asegurarse que los laboratorios de ensayo los utilicen
segn se especifica en la Poltica de Trazabilidad de la ema. (Se recomienda consultar la
disponibilidad de MRC en CENAM en www.cenam.mx).
Los evaluadores deben solicitar, donde aplique, lo establecido en la Tabla de Trazabilidad
de las Mediciones Analticas del Anexo 1, donde indican los instrumentos y equipos de
medicin que requieran calibracin externa, CM o CEIMA, y las caractersticas de los
materiales de referencia, as como las rutas de trazabilidad para las mediciones por
espectrofotometra ultravioleta -visible.
El evaluador debe revisar los mecanismos que el laboratorio tiene para mantener la
trazabilidad, como el uso de patrones, con los propsitos de:
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Por ejemplo:
Carta de trazabilidad para la medicin de la concentracin de masa Cromo
hexavalente por espectrofotometra de ultravioleta - visible
Magnitud: cantidad de
sustancia
Unidad : mol
MRC K2Cr2O7Cr(VI)
Magnitud: fraccin de masa
Unidad: g/g
U rel = 0,03 %
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7. INCERTIDUMBRE DE MEDICIN
Consultar el Glosario de Trminos (Anexo 2) para las definiciones correspondientes.
Los ensayos usualmente tienen el propsito de llevar a cabo la evaluacin de la
conformidad con requisitos establecidos, mediante la comparacin de stos con los
resultados de sus mediciones, esto no los excluye de una declaracin de la incertidumbre de
medicin en los resultados, adems de ser una parte indispensable en la expresin de un
resultado de medicin. Los resultados de tal evaluacin pueden ser conforme o no
conforme.
7.1 Elementos de la incertidumbre[4] de la medicin
Una tabla con los componentes de incertidumbre que contenga al menos, para cada
uno de ellos la incertidumbre de la medicin, su variabilidad, la distribucin de
probabilidad que se le asocie, el coeficiente de sensibilidad y su contribucin a la
incertidumbre estndar combinada de la medicin. La tabla tambin debe mostrar la
incertidumbre estndar combinada y expandida.
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3.
Calibracin
(Trazabilidad)
4. Medicin
Concentracin de
masa
8. VALIDACIN DE MTODOS
Consultar el Glosario de Trminos (Anexo 2) para su definicin.
La validacin examina las caractersticas de desempeo de un mtodo para establecer
cualquier limitacin que pueda esperarse del mtodo cuando se aplique a un tipo especfico
de muestras [8].
Los parmetros recomendados para la validacin de un mtodo de ensayo (prueba) que
incluye mediciones por espectrofotometra de ultravioleta -visible son:
1. Recuperacin
2. Sensibilidad
3. Selectividad
4. Robustez
5. Lmite de deteccin
6. Lmite de cuantificacin
7. Intervalo lineal y de trabajo
8. Reproducibilidad
9. Repetibilidad
10. Sesgo (En algunos casos evaluado a partir de recuperacin)
11. Incertidumbre (de acuerdo al punto 7 de esta Gua)
Para el caso de los mtodos incluidos en esta Gua, los parmetros para realizar una
validacin parcial son los siguientes:
1. Recuperacin
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que emplea la tcnica de Espectrofotometra de Ultravioleta-Visible 2004-06-28
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2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin
Intervalo lineal y de trabajo
Reproducibilidad (medicin durante al menos tres das)
Repetibilidad
Sesgo (En algunos casos evaluado a partir de la recuperacin)
Incertidumbre (de acuerdo al punto 7 de esta gua)
GRADO DE VALIDACIN O
REVALIDACIN REQUERIDA
Completo
Completo
Parcial o completo
Parcial o completo
Parcial o completo
Parcial
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Parcial
Parcial
10. BIBLIOGRAFA
[1] NMX-Z-055:1996 IMNC Metrologa Vocabulario de trminos fundamentales y
generales, equivalente al documento International Vocabulary of Basic and General
Terms in Metrology, BIPM, IEC, IFCC, ISO, IUPAC, IUPAP, OIML, 1993.
[2] NMX-EC-17025-IMNC-2000 (ISO/IEC 17025:1999) Requisitos generales para la
competencia de los laboratorios de ensayo y calibracin.
[3] NOM-008-SCFI 2002 Sistema General de Unidades de Medida.
[4] Eurachem-Citac Guide Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement 2nd.
Edition, 2000.
Gua Tcnica sobre Trazabilidad e Incertidumbre en las Mediciones Analticas
que emplea la tcnica de Espectrofotometra de Ultravioleta-Visible 2004-06-28
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11. ANEXOS
1.-Ejemplo de tabla de trazabilidad e incertidumbre de los mtodos de ensayo (prueba) que
se solicita acreditar ms comnmente.
2.-Glosario de trminos
3.-Ejemplo del proceso de confirmacin metrolgica para una balanza analtica
4.-Ejemplo de Calificacin (CEIMA) para la Calificacin de Espectrofotmetros
ultravioleta visible.
5.-Ejemplo de estimacin de incertidumbre
6.- Buenas prcticas de laboratorio en espectrofotometra ultravioleta visible.
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No.
NOMBRE DE LA PRUEBA
(1)
(2)
SUBCOMIT (3)
MATRIZ (4)
REFERENCIA
TCNICA DE MEDICION -
ANALITO,
COMPUESTO
MAGNITUD (6)
UNIDADES (7)
NORMA (8)
Concentracin de
masa fraccin
de masa
mg/L
NMX-AA-044SCFI-2001
DOCUMENTO (9)
PARMETRO (5)
DETERMINACIN DE
CROMO
HEXAVALENTE EN
AGUAS NATURALES,
RESIDUALES Y
RESIDUALES
TRATADAS
agua
naturales,
Agua
potables,
residuales,
residuales
CROMO
HEXAVALENTE
ESPECTROFOTOMETRIA
tratadas
volumen
volumen
masa
(1)
(2)
(3)
(4)
Nmero consecutivo
Nombre de la prueba
Nombre del subcomit
Especificar la matriz en la cual se encuentra el analito o compuesto. Por ejemplo:
Leche, suelo, agua, aceite, cermica, etc.
(5) Nombre del analito o compuesto
(6) Indicar en las filas: el nombre de la magnitud de inters, nombre de aquellas
magnitudes que son medidas para determinar el valor del mensurando, nombre de
aquellas magnitudes de influencia que participan en la prueba. Usar tantas filas
como sea necesario.
(7) Unidades correspondientes al valor del mensurando, a aquellas magnitudes que son
medidas para determinar el valor del mensurando, a aquellas magnitudes de
influencia que participan en la prueba.
(8) Norma(s) en la que se basa la medicin de la magnitud correspondiente.
(9) Nombre del (los) documento(s) (procedimiento interno, mtodo de referencia
nacional o internacional), en el que se basa la medicin de la magnitud
correspondiente.
(10) Nombre de la tcnica de medicin o tcnica analtica utilizada para realizar la
medicin de la magnitud correspondiente
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ESPECTROFOTOMETRO
UV/VIS, pipeta, matrz,
balanza
METROLGICA (14)
Si
C EIMA
ESTIMACIN DE LA
INCERTIDUMBRE
O
CONFIRMACIN
MEDICIN (13)
INSTRUMENT
CALIBRADO (12)
MTODO DE
CEIMA /
REFERENCIA
VALIDACIN
MRC o Patrn
(11)
INSTRUMENTO Y/O
de Referencia
TRAZABILIDAD (15)
SISTEMA DE MEDICIN
OBSERVACIONES
(16)
Si
pipeta
CM
Si
matraz
balanza
CM
CM
Si
Si
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Ensayo (Prueba)
DEFINICIN
Operacin tcnica que consiste en la
determinacin de una o ms caractersticas o
desempeo de un producto, material, equipo,
organismo, fenmeno fsico, proceso o servicio
dado, de acuerdo a un procedimiento
especificado.
Procedimiento tcnico especfico para desarrollar
un ensayo (prueba).
Qu solicita el evaluador?
Este no se localiza en ningn
documento, el evaluador no lo
debe solicitar.
El evaluador lo debe solicitar
como documento de referencia,
(generalmente una norma,
indicado en el alcance de la
acreditacin) para compararlo
con el procedimiento interno.
Se encuentra descrito
generalmente dentro del
documento de referencia. El
evaluador no lo debe solicitar.
Mtodo de medicin
Procedimiento de medicin
Se encuentra descrito
especficamente dentro del
procedimiento interno.
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29 de 70
30 de 70
Ref [6]
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[NATA Tech Note #13, EURACHEM The fitness for Purpose of Analytical Methods
1998]
LMITE DE CUANTIFICACIN: Es la concentracin ms baja del analito que puede
determinarse con un nivel de incertidumbre aceptable.
NOTA: Debe establecerse empleando materiales de referencia o muestras
apropiadas.
Este lmite, generalmente es el punto ms bajo de la curva de calibracin
(excluyendo el blanco). No debe ser determinado extrapolando la curva de
calibracin.
Algunas convenciones toman el lmite de cuantificacin como 5, 6 o 10 veces la
desviacin estndar de la medicin del blanco.:
xL = xbl + ksbl
Donde xbl es la media de las mediciones del blanco y sbl la desviacin estndar de
las mediciones del blanco, y k es un factor numrico elegido de acuerdo al nivel de
confianza deseado, siendo k = 5, 6 10.
[CITAC/EURACHEM Guide to Quality in Analytical Chemistry]
LINEALIDAD: Define la habilidad del mtodo para obtener resultados proporcionales a la
concentracin del analito en la prueba.
Nota: Se infiere que el intervalo lineal es el intervalo de concentraciones del
analito sobre las cuales el mtodo proporciona resultados de pruebas
proporcionales a la concentracin del analito.
[AOAC PVMC; EURACHEM The fitness for Purpose of Analytical Methods
1998]
MAGNITUD: Atributo de un fenmeno, cuerpo o sustancia que puede ser diferenciado
cualitativamente y determinado cuantitativamente.
[VIM 1.1, NMX Z-055 IMNC 1996]
MATERIAL DE REFERENCIA: Material o sustancia en el cul uno o ms valores de sus
propiedades son suficientemente homogneos y bien definidos, para ser utilizadas para la
calibracin de aparatos, la evaluacin de un mtodo de medicin o para asignar valores a
los materiales.
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NOTAS
1
Para que una expresin de la reproducibilidad sea vlida, es necesario
especificar las condiciones que se hacen variar.
2
Las condiciones que se hacen variar pueden ser:
- el principio de medicin;
- el mtodo de medicin;
- el observador;
- el instrumento de medicin;
- el patrn de referencia;
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3
4
corregidos.
- el lugar
- las condiciones de uso;
- el tiempo.
La repetibilidad puede ser expresada cuantitativamente con la ayuda de las
caractersticas de la dispersin de los resultados.
Los resultados considerados aqu son, habitualmente, los resultados
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TRAZABILIDAD: Propiedad del resultado de una medicin o de un patrn, tal que esta
pueda ser relacionada con referencias determinadas, generalmente patrones nacionales o
internacionales, por medio de una cadena ininterrumpida de comparaciones teniendo todas
ellas incertidumbres determinadas.
[VIM 4.5, NMX Z 055 IMNC 1996]
NOTAS
i.
ii.
iii.
40 de 70
41 de 70
(20 200) g
< 0,000 40 g
Repetibilidad
< 0,000 03 g
Resolucin
0,000 01 g
(0 210 )g
< 0,000 1 g
Repetibilidad
Resolucin
0,000 01 g
42 de 70
Carga
100 g
Variacin mxima
0,16 mg
Carga
100g
200g
Repetibilidad
0,000 01 g
0,000 04 g
Pruebas de repetibilidad:
Resolucin
0,01 mg
0,01 mg
Carga nominal
(g)
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
43 de 70
Verificacin
metrolgica
Cumple
Cumple
No cumple
Cumple
CMEM
(20 200 )g
Mximo 0,000 15 g
Mxima 0,000 04 g
0,00001 g
Carga
100 g
Variacin mxima
0,000 03 g
Carga
100g
200g
Repetibilidad
0,000 01 g
0,000 02 g
Pruebas de repetibilidad:
Resolucin
0,01 mg
0,01 mg
Correccin
(g)
Incertidumbre
(g)
44 de 70
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
- 0,000 06
-0,000 12
-0,000 20
-0,000 25
-0,000 29
-0,000 32
-0,000 36
-0,000 37
-0,000 36
-0,000 34
0,000 08
0,000 09
0,000 09
0,000 11
0,000 09
0,000 11
0,000 12
0,000 12
0,000 15
0,000 12
CMEM
Verificacin
metrolgica
(20 200 )g
Cumple
Incertidumbre
< 0,000 40 g
Mximo 0,000 15 g
Cumple
Repetibilidad
< 0,000 03 g
Mxima 0,000 02 g
Cumple
0,00001 g
Cumple
Resolucin
0,000 01 g
Como resultado de la verificacin metrolgica, se concluye que las CMEM cumplen los
RMC, se documenta la Confirmacin Metrolgica (F), se realiza la identificacin del
estado de calibracin (D) y se concluye que la balanza puede ser utilizada para el propsito
para el cual fue confirmada.
El la figura 1 se muestra el diagrama del proceso de confirmacin.
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Verificacin metrolgica
Certificado informe
de calibracin
Identificacin del
estado de calibracina
F
El equipo
cumple con los
requisitos?
Si
Documento de
verificacin/confirma
cin
No
Acciones y decisiones
Calibracin
No
Es posible
ajustarlo o
repararlo?
Identificacin
del estado
Si
Ajuste o
reparacin
Informe de prueba:
Verificacin fallida
Cliente b
Devolucin al
cliente
Fin
47 de 70
CD
x
x
x
CI
x
x
x
CO
x
CF
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
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Especificacin
Funcional
Fuente
Monocromador
Intervalo de longitud de
onda (175 - 3200) nm
Ancho de banda (0,05 5,0) nm
Alcance Fotomtrico en
absorbancia () de 6,0
Compartimiento y/o
Introduccin de
muestra
Detector
Fuente de
alimentacin
Especificacin
del Proveedor
seleccionado.
CD
Cumple
175-3200 nm
0,05-5,0 nm
6,0
1 cm
Reproducibilidad
Fotomtrica en un
0,0004 - 1
intervalo de absorbancia
() 0,0004 - 1
Exactitud fotomtrica en
un intervalo de
0,003 - 1
0,002 -0,5
absorbancia () de
0,003 - 1 y 0,002 - 0,5
Reproducibilidad de
longitud de onda 0,02
0,02 nm
nm
Exactitud en longitud de
0,15 nm
onda 0,15 nm
Luz espurea 0,00008 % 0,00008 % T a
T a 220 nm
220 nm
Ruido 0,000050 a RMS 0,000050 a RMS
a 500 nm.
a 500 nm.
Estabilidad fotomtrica
0,0002 /h
0,0002 /h despus de 1 h. despus de 1 h.
Instalacin elctrica (127 (127 10) V;
10) V; Mx. VA 300
Mx. VA 300
No
cumple
x
x
x
x
x
x
49 de 70
Especificacin
Resultado
Cumple
(0,05 - 5,0) nm
0 - 6,0)
(175 - 3200)
nm
1 nm
6,0
0,0004 - 1
0,005
0,003 - 1
0,002 - 0,5
0,005
0,05
0,02 nm
0,02 nm
0,15 nm
0,15 nm
(175 - 3200) nm
0,00008 % T a 220 nm
0,000050 a RMS a
500 nm.
0,0002 /h despus de
1 h.
0,00008 % T a
220 nm
0,000050 a
RMS a 500
nm.
0,0002 /h
despus de 1 h.
No
cumple
x
x
x
x
x
x
50 de 70
Resultado
Cumple
(175 - 3200) nm
0,005
0,05
0,015 nm
0,02 nm
0,00008 % T a 220 nm
0,0002 /h despus de 1
h.
No
cumple
x
x
x
Resultado
0,005
0,05
Cumple
No
cumple
0,0002 /h despus de 1
x
h.
Luz espuria 0,00008 % T a 220 nm
0,00008 % T a 220 nm
x
* La exactitud se puede verificar con MRC por ejemplo: disolucin de xido de holmio,
disolucin de platino cobalto, filtro de vidrio de didimio.
Con la cual se puede realizar las cartas de control.
Estabilidad 0,0002 h despus de 1 h.
NOTA:
Para las pruebas involucradas en la Calificacin de desempeo, se recomienda donde
aplique, realizar grficos de cartas de control.
51 de 70
1. INTRODUCCIN:
Estimacin de incertidumbre en mediciones de elementos y/o compuestos qumicos, de
bajas concentraciones (mg/L) empleando la tcnica de espectrofotometra de ultravioleta
visible.
2. ALCANCE
Aplica a las mediciones de elementos y/o compuestos qumicos empleando la tcnica de
espectrofotometra de ultravioleta visible, que involucra preparacin de muestra y procesos
de dilucin.
3. INTRODUCCIN
El mtodo se basa en una reaccin de xido reduccin donde el cromo hexavalente
reacciona con la 1,5-difenilcarbazida en medio cido para dar Cr3+ y 1,5difenilcarbazona de color violeta que se lee espectrofotomtricamente a 540 nm. La
intensidad de color es directamente proporcional a la concentracin de cromo hexavalente.
4. PROCEDIMIENTO
4.1 Modelo Matemtico
El clculo involucrado en la medicin de una concentracin de cualquier elemento
qumico, basndose en el mtodo descrito, esta dada por la ecuacin 1:
Cr (VI ) = ( x B ) * fd n * fc
Donde
Cr(VI)
(x- B)
fdn
fc
(1)
52 de 70
Preparacin de la
disolucin de referencia
certificada para control.
Tratamiento de muestra
( digestin, extraccin)
Preparacin de
MRC de
Calibracin
analtica UV-Vis
Medicin en UV-Vis
Resultados
53 de 70
Concentracin
Concentracin
Cr(VI)
Cr
Cr(VI)
Cr(VI)
(VI)
m
mg/L
g/L
Factor de
Dilucin
fdn(muestra)
Calibracin especificacin
de la pipeta
Temperatura
Repetibilidad
Repetibilidad
Volumen 2
(aforo)
reproducibilidad
Precisin
n muestras
Sn(m)
Sn(m)
MRC de
Control
fC
Repetibilidad
Preparacin de
Estndar de Control
(ECd)
ECd)
Precisin
Repetibilidad
Repetibilidad
Calibracin
especificacin de la pipeta
Volumen 1
(alcuota)
Factor de
dilucin
(fd EC)
Material de
Referencia
Certificado
Reproducibilidad
Repetibilidad
Temperatura
Repetibilidad
Repetibilidad
Calibracin
especificacin del matraz
Volumen 2
(aforo)
Temperatura
Repetibilidad
Repetibilidad
54 de 70
= b1 + b0
(2)
( b0 )
b1
(3)
Donde
La concentracin de masa (mg/L) de Cr(VI), resultado de la curva de calibracin.
Es la respuesta observada del instrumento, en este caso la unidad es la absorbancia.
bo La ordenada al origen
b1 La pendiente calculada.
La incertidumbre debida a la curva de calibracin puede calcularse por varios mtodos,
(Ver apndice E.3 de Eurachem/CITAC Guide Second edition 2000) el que se
ejemplificara aqu es la incertidumbre obtenida a partir de los datos de la curva de
calibracin de una lnea recta.
55 de 70
x1
x1,y1
Donde n = i * j
x2
Concentraciones
Curvas de calibracin
y1
y2
yj
...
xi
xi,yj
Figura 3
Para este arreglo se realiza la regresin lineal y calculamos b1 y bo
El ejemplo mostrado esta basado en la Eurachem/CITAC Guide Second edition 2000.
Con los datos obtenidos, para la elaboracin de la ecuacin de la lnea recta en la curva de
calibracin, se estima la incertidumbre, de una concentracin de masa del elemento
qumico a medir " " , en base al calculo de regresin lineal de la curva de calibracin, con
una repuesta " ". Como se muestra en la ecuacin 4
u ( Cr (VI )B ) =
Donde:
u((Cr(VI)-B)
S
b1
p
n
(Cr(VI)-B)
MRC
Sxx
S
b1
1 1 ( (( Cr (VI ) B MRC )
+ +
p n
S XX
(4)
56 de 70
[y (b
n
S=
+ b1 *
)]
j =1
(5)
n2
(6)
S XX = ( j )
n
j =1
Donde:
S
desviacin estndar residual del calculo dela regresin lineal.
j Las "i" lectura observadas correspondientes a iMRC conocidas con las que se calibro
el instrumento
Las " i" lecturas ajustadas correspondientes a iMRC conocidas del instrumento en las
curvas de calibracin.
bo Ordenada al origen de la curva de calibracin.
b1 Pendiente calculada de la curva de calibracin.
n
Numero total de datos ( i*j)
sxx suma de cuadrados de los residuales de las concentraciones obtenidas por la curva de
calibracin.
i Cada una de las concentraciones de las diluciones de referencia (MRC) empleadas en
la curva de calibracin.
El promedio de las concentraciones de las disoluciones de referencia empleadas en
u MRC =
U EXP
k
(7)
57 de 70
Donde:
uMRC incertidumbre estndar del MRC
UEXP incertidumbre expandida reportada en el certificado
k
Factor de cobertura.
En caso que se realicen un nmero n de diluciones, para obtener la concentracin requerida
del MRC en estudio en la curva de calibracin, se debe considerar la incertidumbre de las
mismas y combinarse con la incertidumbre estndar del MRC en forma relativa y
cuadrtica con la incertidumbre del MRC, basndose en la regla 2 indicada en el captulo 8,
Seccin 8.2.6 de Eurachem/CITAC Guide Second edition 2000.
Ver el punto 2 en donde se describe la estimacin de incertidumbre en un proceso de
dilucin.
Pueden llegar a usar una o ms diluciones con lo cual se tendran una o mas fuentes de
incertidumbre, dependiendo del nmero de diluciones a realizar, el modelo matemtico
para encontrar el valor del MRC se muestra en la ecuacin 8.
(8)
u dilMRC
dilMRC
u
= MRC
MRC
u
u
+ fd1 + ............. fd n
fd 1
fd n
(9)
Donde:
SB
N
SB
n
(10)
58 de 70
u ( b ) = u ( ( B ) ) + (u B ) + (u MRC )
2
(11)
Donde
u((-B)) Incertidumbre del mesurando por la curva de calibracin del instrumento
uMRC
Incertidumbre del material de referencia certificado (1.3)
uB
Incertidumbre por la correccin del blanco (Cuando aplique) (1.4)
NOTA IMPORTANTE: Dependiendo de cada laboratorio y su mtodo, en este punto se
pueden considerar otras fuentes de incertidumbres, siempre y cuando sean significativas
tales como los factores del instrumento: sensibilidad y reproducibilidad, y entonces sern
combinadas de forma cuadrtica con la u((x)i
4.3.2. Factor de dilucin
El factor de dilucin normalmente se emplea cuando se miden elementos qumicos en
muestras de concentracin de masa (mg/L) mayor al intervalo de trabajo del mtodo, este
se obtiene a partir de un proceso de dilucin y pueden llevarse a cabo n diluciones de la
muestra. El modelo matemtico de una dilucin esta dado por:
(12)
V1
fd n =
V2
Donde
fdn Factor de dilucin
V2 Volumen de aforo
V1 Volumen de alcuota
En el proceso de una dilucin se identifican dos fuentes de incertidumbre, el V2 de aforo y
el V1 de la alcuota de la muestra. La estimacin de incertidumbre relativa del factor de
dilucin, se realiza combinando las incertidumbres de ambas mediciones: volumen de la
alcuota de muestra y volumen de aforo, de forma relativa y cuadrtica, de acuerdo a la
ecuacin 13,
2
u u
= V 1 + V 2
fd 1
V1 V2
u fd 1
(13)
59 de 70
u fdn
= 1
fd n
fdn
u fdn
(14)
uv =
S
n
(15)
Donde
S Desviacin estndar de las pesadas del volumen transferido.
n Nmero de mediciones.
2. Variacin de la temperatura con respecto a la temperatura de calibracin del material
volumtrico, la incertidumbre se estima sobre la base del efecto por dilatacin trmica se
calculo usando el coeficiente de dilatacin trmica del material con el que est construido el
60 de 70
recipiente, donde el coeficiente de expansin del volumen del agua por C, = 0,00021
mL/ C
[(T T20 ) * V ]
u =
(16)
3
Donde
T
Temperatura del agua C al momento de la medicin
T20 20 C, temperatura de referencia
1
Coeficiente de expansin del volumen del agua C-1.
V
Volumen de la pipeta
3. Tolerancia del material volumtrico (Tol) se toma de la especificacin del material
volumtrico correspondiente que proporciona el proveedor y para convertir a incertidumbre
estndar se asume una distribucin rectangular dividiendo entre raz de 3.
Tol
(17 )
u t1 =
3
Donde
Tol Tolerancia especificada por el fabricante.
3 Distribucin triangular.
En el caso de emplear material volumtrico calibrado, este valor es sustituido por la
incertidumbre del material volumtrico calibrado (UV) y se localiza en el certificado de
calibracin, para convertirla a incertidumbre estndar se divide por el factor de cobertura k
indicado en el certificado de calibracin.
U
u
= V
Tol
k
(18)
u Vn
Vn1
Donde:
uVn
Vn
u
= R
mm
u Exp. Liq
+
Vn
u tol
+
V
n
(19)
61 de 70
uR
mm
u tol
Vn
MRCp
cn
( 20 )
ecp
Donde:
fc
Factor de correccin
La
concentracin del material de referencia certificado.
MRC
El promedio de las concentraciones resultado de las mediciones experimentales
cn exp
del MRC ne mg/L.
La estimacin de incertidumbre relativa del factor de dilucin, se realiza combinando las
incertidumbres estndar de la concentracin de masa del MRC (MRC) y la incertidumbre
estndar de la concentracin de masa experimental (de n mediciones) del MRC, de forma
relativa y cuadrtica, de acuerdo a la ecuacin (17).
u
prepMRC
fc
u prepMRC
=
prep
u exp MRC
+
exp
(21)
(22)
62 de 70
-Cuando el MRC a emplear requiera una preparacin preliminar, como una dilucin
varias diluciones para llegar a la concentracin de masa deseada, se integrarn tantos
factores de dilucin (fdn) como sea necesario al modelo matemtico que define la
concentracin de masa final del MRC.
(23)
u
= MRC
MRC
u fd1
u
+
+ .......... ... fd n
fd1
fd n
(24)
u exp MRC =
S exp MRC
(25)
Donde:
Sexp MRC La desviacin estndar de las lecturas realizadas
n
Nmero de lecturas
Sm
(26)
63 de 70
SB
n
i = ( B ) * fd n * fc
(27)
i
( B ) l
u fdn 2 u fc 2
+
+
fd n fc
(28)
Donde
(-B) La incertidumbre de la curva de calibracin (punto 1)
u fdn
ufc
Donde
i
i =i +
i
( 26 )
ui = ucombinada * i
Gua Tcnica sobre Trazabilidad e Incertidumbre en las Mediciones Analticas
que emplea la tcnica de Espectrofotometra de Ultravioleta-Visible 2004-06-28
(29)
64 de 70
U EXP = u i * k
(30)
Nota:
El valor del factor de cobertura cambia con el nivel de confianza considerado.
4.2.6. En la tabla 1 se muestra una propuesta de formato de informe de estimacin de
incertidumbre en la medicin.
Tabla 1
(x-B)
fdn
fr
Reprod.
Magnitud de
Valor
entrada Xi
estimado
Fuente de
xi
incertidumbre
Concentracin
de la muestra a
partir de la curva
Cx-B
Concentracin
del MRC a partir
de la curva
Concentracin
de la curva Cx
Concentracin
del blanco a
partir de la curva
CB
factor de
dilucin,
factor de
correccin.
Reproducibilidad
de la medicin
unidades
Fuente de
informacin
Incertidumbre
original
Tipo de
distribucin
Incertidumbre Contribucin
ui(y)
estndar u(xi)
Magnitud de entrada
Valor estimado
Xi Fuente de
xi
incertidumbre
unidades
Curva de calibracin
0,1989
mg/L
factor de dilucin, fd
10
mL
Incertidumbre de la
concentracin de la
muestra a partir de la
curva
Reproducibilidad de la
medicin, Cm
Concentracin de
masa, CrVI
Concentracin
de masa, CrVI
Fuente de
informacin
Mediciones
repetidas
Mediciones
repetidas
mg/L
Mediciones
repetidas
2,010
mg/L
Mediciones
repetidas
2,01
mg/L
2,01
mg/L
Incertidumbre
original
Tipo de
distribucin
Incertidumbre
estandar u(xi)
Contribucin
ui(y)
0,00045
A, normal
0,0023
0,00225
0,03672
A, normal
0,037
0,00367
0,0086
A, normal
0,00079
A, normal
0,0008
0,000394
U rel
0,0086
0,017
U expandida considerando un factor
de cobertura K=2
0,034
65 de 70
4.3.7
Reprod.
Serie1
fd
C(x-B)
0,00000
0,00100
0,00200
0,00300
0,00400
Contribucin ui(y)
Figura 1
5.0 Referencias
1. Polticas Referentes a la Trazabilidad e Incertidumbres de Mediciones Entidad
Mexicana de Acreditacin, Enero 2002, Mxico D.F.
2. "Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement"; Eurachem / CITAC Guide ;
Second Edition; QUAM:2000.P1.
66 de 70
1. Requisitos en el laboratorio
Condiciones ambientales.
Espacio
Condiciones elctricas
Seguridad
2. -Limpieza del material de vidrio.
3.- Limpieza y cuidados de las celdas.
4.- Cuidados del espectrofotmetro ultravioleta visible.
5. -Preparacin de muestras.
6. -Uso de Materiales de Referencia.
Las buenas prcticas de laboratorio forman parte del proceso de control de calidad, cubren
aspectos sencillos del trabajo diario en el laboratorio, deben documentarse y habilitarse
formalmente, cubren aspectos como: mantenimiento, registros, manejo y disposicin de
muestras, control de reactivos, limpieza del material de vidrio, ambiente, etc.
1. Requisitos en el laboratorio
Condiciones ambientales.
En un rea libre de polvo y vapores corrosivos para instalar el instrumento
para una mxima estabilidad y un mantenimiento mnimo.
Mantener la humedad relativa del ambiente entre 45% y 60 %
Mantener la temperatura del laboratorio entre 17 C y 25 C.
Evitar la exposicin del instrumento a los rayos solares.
Disponer de un cuarto bien iluminado.
Espacio
Colocar el instrumento en una mesa de dimensiones adecuadas.
Disponer de una mesa de preferencias antivibratoria, plana, limpia y seca.
67 de 70
Condiciones elctricas
Consultar los requerimientos elctricos especificados en al manual del
instrumento.
Evitar fluctuaciones de la potencia elctrica, utilizando reguladores de poder.
Disponer de conexin a tierra fsica
Seguridad
Utilizar guantes, bata de laboratorio, lentes de seguridad .
Nunca realizar ajustes al instrumento o reemplazar partes esenciales, lo debe
de hacer el tcnico de servicio.
El servicio deber estar a cargo de un especialista.
Almacenar residuos qumicos en lugares especiales para ello nunca en en el
laboratorio
Trabajar en campana de extraccin cuando sea necesario
Mantener etiquetadas todas las sustancias qumicas utilizadas en el
laboratorio.
2. Limpieza del material de vidrio
Analitos inorgnicos
Enjuagar el material con agua (3 veces)
Llenar con HNO3 20 % (v/v), dejar reposar durante toda la noche
Desechar el HNO3 y enjuagar con agua (5 veces)
Dejar el material lleno con agua durante toda la noche
Desechar el agua y poner a secar en un rea limpia
Analitos orgnicos
Lavar el material con agua y jabn libre de fosfatos
Enjuagar con agua; puede ser de la llave; posteriormente enjuagar con agua
de medicin (3 veces)
Enjuagar con acetona (2 veces) grado reactivo.
Enjuagar con el disolvente que se utilizar en la medicin, por ejemplo:
Medicin de sustancias activas al azul de metileno (SAAM), enjuagar el
material con cloroformo.
Casos especiales. En la medicin de cianuros es importante que el material no
contenga restos de cido.
Enjuagar con acetona si el material presenta restos de grasas, an cuando se
van a medir analitos inorgnicos.
3. Limpieza de las celdas
4.
Las celdas son la base de cualquier anlisis por espectrofotometra
Los residuos de anlisis previos causan desviaciones en los resultados, baja
sensibilidad y precisin pobre
Limpiar regularmente las celdas.
Gua Tcnica sobre Trazabilidad e Incertidumbre en las Mediciones Analticas
que emplea la tcnica de Espectrofotometra de Ultravioleta-Visible 2004-06-28
68 de 70
medicin
69 de 70
Disolventes comunes
Agua.
Disoluciones de HCl, H2SO4, NaOH aprox. 0,1 eq/L
Disoluciones amortiguadoras de pH que no contengan sustancias
absorbentes por ejemplo mezclas de fosfato dicido de sodio con fosfato
cido de sodio, tiles en el intervalo de 4,5 a 8,9 de pH.
Disolventes orgnicos, grados espectroscpico, por ejemplo piridina,
benceno, cloroformo, alcohol etlico etc.
70 de 70