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que para el protn, 1H, cuya constante magnetogrica vale H = 26.75 x 107 rad T-1 s-1 ,
operando con un campo magntico B0 = 2.35 T (23500 gauss), da una frecuencia de Larmor
de 100.00 MHz, dentro del rango de la radiofrecuencia. Como es bien sabido, la irradiacin
de la muestra, por medio de radiacin electromagntica polarizada circularmente en el plano
perpendicular a B0 y cuya frecuencia sea precisamente la de Larmor, lleva a la resonancia del
sistema, producindose transiciones entre los niveles energticos.
La deteccin de la absorcin de esta radiofrecuencia en un espectrmetro RMN no es
inmediata, ya que las cantidades de energa involucradas (h0) son muy pequeas, alrededor
de unas pocas milicaloras por mol. Ello impide el uso de tcnicas tradicionales en las
espectroscopas pticas (UV-vis, IR), en las que se comparan las intensidades de dos haces de
radiacin, uno de los cuales ha atravesado la muestra mientras que el otro constituye el haz de
referencia. As, a causa del pequeo valor de las energas involucradas, la RMN es una
tcnica espectroscpica de muy baja sensibilidad. En condiciones ptimas, en un
espectrmetro moderno de alto campo magntico, se requiere un mnimo de 1015 spins de una
determinada especie isotpica (de las "fciles" de medir) para poder detectar seales tiles en
un perodo de una hora.
Y, a pesar de estas limitaciones, la RMN es la tcnica ms ampliamente utilizada en
investigaciones estructurales o dinmicas de compuestos qumicos en fase condensada, tanto
desde el punto de vista de los fsicos como, en especial, del de los qumicos, y ms
recientemente de los bilogos o los mdicos. A diferencia de otras tcnicas de investigacin
estructural, la RMN no se limita al caso de pequeas molculas de bajo peso molecular y alta
simetra, sino que proporciona datos precisos y muy tiles incluso con biopolmeros de peso
molecular relativamente elevado (protenas), sin requerir la previa cristalizacin de la
muestra.
Esta gran utilidad de la RMN se puede describir usando las palabras de Richard R. Ernst,
Premio Nobel de Qumica 1991:
Los sistemas de spins nucleares presentan caractersticas singulares que los
predestinan para el estudio de las molculas:
1) Los ncleos atmicos empleados como sensores se encuentran
perfectamente localizados, con dimetros de unos pocos femtometros, y pueden
proporcionar informacin sobre la situacin de su entorno inmediato,
haciendo as posible una exploracin muy detallada de las molculas y de la
materia.
2) La energa de interaccin de los sensores con el entorno es pequesima,
inferior a 0.2 J mol-1, equivalente a la energa trmica a 30 mK. De este modo,
la observacin y la medicin de propiedades moleculares se puede realizar
prcticamente sin perturbaciones. No obstante, las interacciones presentan
una elevada sensibilidad respecto del entorno local.
3) La informacin sobre la estructura de las molculas puede obtenerse a
partir de las interacciones entre pares de ncleos. As, las interacciones
magnticas dipolo-dipolo proporcionan informacin sobre las distancias
internucleares. Por su parte, los acoplamientos escalares J permiten la
determinacin de ngulos de torsin.
Este conjunto de propiedades es el que ha hecho que la RMN sea hoy una herramienta
imprescindible en todos los laboratorios de qumica preparativa y de bioqumica estructural o
dinmica. En otro contexto, los instrumentos de imagen por RMN son tambin
imprescindibles en los hospitales. Pero para llegar a la situacin actual ha sido preciso superar
las dificultades asociadas a la baja sensibilidad caracterstica de la RMN. De hecho, la historia
de la RMN es una sucesin de brillantes avances experimentales que han permitido ir
aumentando con los aos la sensibilidad de la tcnica.
sobre RMN en fase condensada. Por este motivo fu posible efectuar con xito el experimento
a los pocos meses de su retorno a Stanford, acabada la guerra.
especie isotpica presentan frecuencias que dependen de la especie qumica sobre la cual se
efectan las determinaciones. Este descubrimiento fu efectuado en Stanford por Proctor y
Yu, dos jvenes estudiantes postdoctorales del grupo de Bloch. Sigamos el relato de
W.G. Proctor:
Tras haber diseado y construido un espectrmetro RMN de campo muy homogneo,
que constituy mi tesis doctoral en Stanford, el Prof. Bloch nos encarg a Yu (recin
graduado en Ohio State University) y a m la tarea de localizar las resonancias y
medir los momentos magnticos y los spins de cuantos istopos estables fuera posible,
con el objetivo de completar la tabla peridica en un ao, aproximadamente. En el
curso de estos trabajos, al tocarle el turno al nitrgeno como ncleo de referencia,
nos propusimos medir su momento magntico con gran precisin (creo recordar que
la resonancia de 14N haba sido medida el ao anterior por Pound en Harvard).
Recuerdo que fu al almacn de qumica y anduve rebuscando un compuesto que diera
la resonancia ms fuerte posible. Pronto eleg el frasco marcado NH4NO3, ya que
obviamente haba de ser muy soluble en agua y, adems, al tener dos nitrgenos haba
de dar una seal muy fuerte. Tras preparar una solucin concentrada e introducirla
en el imn, Yu y yo aguardbamos expectantes junto al imn, esperando que el
pequeo motor de reloj que cambiaba gradualmente la frecuencia del espectrmetro
hiciera aparecer la resonancia. As fu, y apareci una magnfica seal de resonancia
en la cinta que registraba el espectro. Pero mientras mirbamos, para nuestro
asombro, apareci una segunda seal de igual amplitud que la primera. Incrdulos,
repetimos el experimento diversas veces para descartar cualquier posible error
instrumental, siempre con igual resultado. Subimos los registros al despacho del Prof.
Bloch, que se mostr muy interesado, e inmediatamente nos pusimos a discutir
posibles causas para este fenmeno. Seleccionamos dos posibles explicaciones, una
mucho ms interesante que la otra. La ms interesante era la posible existencia de
ismeros nucleares estables, de la misma masa, con propiedades ligeramente
distintas. Creamos haber hecho un descubrimiento fsico trascendental. Pero era
preciso descartar la segunda posible causa, sin ningn inters para nosotros,
consistente en algn fenmeno qumico, tal como un apantallamiento diamagntico
del ncleo, dependiente de su entorno qumico, que pudiera afectar la densidad
electrnica del ncleo de nitrgeno.
Para descartar esta segunda y poco interesante hiptesis, Bloch pidi al Prof. Segra
una pequea muestra de 15N. Si las dos resonancias no aparecan en una muestra de
nitrato amnico preparada a partir de 15N, obviamente la explicacin haba de ser
nuclear, como nosotros desebamos, y no simplemente qumica. La conversin de la
muestra de 15N en nitrato amnico tard tres semanas, muy angustiosas para todos
nosotros. Finalmente la muestra lleg y, a las pocas horas, habamos vuelto a
observar las dos seales de igual intensidad, proporcionalmente con la misma
separacin entre ambas. Por tanto, nos vimos forzados a admitir que se trataba de un
enojoso efecto meramente qumico, que poda llegar a impedirnos progresar
rpidamente en nuestra carrera. Nuestro artculo se public en 1950 en forma de
carta, y por casualidad en el mismo nmero de Phys. Rev. que contena un artculo de
W.C. Dickinson, de MIT, que describa el mismo fenmeno para el ncleo de 19F.
De este modo se descubri el desplazamiento qumico, sin el cual la RMN no tendra hoy
gran utilidad analtica. Y fu precisamente durante sus estudios para clarificar las causas del
espectros RMN era una tarea larga y delicada, reservada a buenos especialistas
instrumentales. Pero la recompensa por la obtencin de buenos espectros era muy importante.
Los qumicos orgnicos pronto comprobaron que la espectroscopa RMN era la tcnica ideal
para la elucidacin o comprobacin estructural de molculas de peso molecular moderado.
Casi todos los compuestos de la poyata daban nuevos e interesantes datos espectrales de
utilidad general. En 1958 apareci el clsico artculo de Shoolery y Rogers sobre el estudio de
esteroides por RMN, en el que se demostraba que incluso a 40 MHz los desplazamientos
qumicos de los metilos angulares eran de gran valor diagnstico. Tambin en aquellos aos
se publicaron numerosos datos de biomolculas, tales como alcaloides, azcares, porfirinas y
otros compuestos. Pronto Karplus demostr que las constantes de acoplamiento vicinales a
tres enlaces se podan correlacionar con los ngulos de torsin, y esto di origen a numerosos
estudios conformacionales, especialmente en el campo de los azcares. Hacia finales de la
dcada, en 1959, aparecieron el clsico libro de Jackman, en el que se correlacionaban los
datos de RMN con la estructura molecular, y el pequeo opsculo de Roberts, en el que se
efectuaba una breve introduccin de los principios tericos bsicos con argumentos sencillos,
al alcance de los qumicos orgnicos. Aparecieron en el mercado instrumentos comerciales de
imn permanente, a 60 MHz para protn, con mucha ms estabilidad y resolucin que los
primeros aparatos comerciales, y con los cuales los espectros eran mucho ms reproducibles.
En 1961-1962 se instalaron en Espaa los dos primeros espectrmetros RMN. El
primero de ellos se instal en Madrid, bajo la supervisin del Prof. Manuel Rico, de cuyo
magisterio nos hemos venido beneficiando todos cuantos nos hemos dedicado a la RMN en
Espaa. El segundo se instal muy poco despus en Barcelona, bajo la supervisin del Prof.
Josep Castells, introductor de la RMN en Catalunya y que fu mi director de tesis. Recuerdo
bien que durante mi tesis utilic intensivamente este segundo instrumento, un Perkin-Elmer
R-10, a 60 MHz, que requera un mnimo de 60-100 mg de muestra slida, disuelta en CCl4,
para compuestos de peso molecular inferior a 300, a menos que la muestra fuera lquida, en
cuyo caso se usaba el lquido puro para maximizar las seales. O tempora, o mores!