MICROBIOLOGIA MEDICA Y DIAGNOSTICO

EMISION: 06.10.2014
CLAVE:Poe06102014-orina

Identificacin de Poteus vulgaris

1.0 Objetivo:
Realizar la determinacin y aislamiento de Proteus vulgaris en una muestra de orina.
2-0 Fundamento:
Proteus: es un gnero de bacterias gram negativas que incluye patgenos responsables de
muchas infecciones del tracto urinario. Las especies de Proteus normalmente no
fermentan lactosa por razn de no tener una galactosidasa. Son oxidasa-negativas y ureasapositivas. Algunas especies son mtiles. Tienden a ser organismos pleomrficos, no esporulados ni
capsulados y son productoras de fenilalaninadesaminasa. Con la excepcin de P. mirabilis, todos los
Proteus reaccionan positivos con la prueba de indol.
Proteus es un gnero de bacterias ubicuas, residentes del tracto intestinal del hombre y algunos
animales. Crecen en medios corrientes y moderadamente selectivos a temperatura corporal de
37 C. Forman capas diseminadas por virtud de su gran motilidad. Existen variantes inmviles que
forman colonias lisas
La estructura antignica est compuesta por antgeno somtico O, flagelar H y superficial K. El
antgeno flagelar H contribuye a la capacidad invasora de las vas urinarias. La variante X del
antgeno somtico O est presente en algunas cepas de P. mirabilis.
Hay tres especies que causan infecciones oportunistas en el hombre: P. vulgaris, P. mirabilis, y P.
penneri. Causan infecciones urinarias, enteritis (especialmente en nios), abscesos
hepticos, meningitis, otitis media y neumona con o sin empiema, entre otros. Es un frecuente
invasor secundario de quemaduras y heridas, as como infecciones nosocomiales.
Todas las especies de Proteus son resistentes a la ampicilina.

3.0 Metodologa
3.1 Tipo de muestra
o Orina
3.2 Recomendaciones al paciente antes de tomar la muestra
o
o

Se debe recoger la muestra en un recipiente limpio de plstico, de boca ancha y con tapa.
Llevar el frasco con orina, antes de las siguientes 6 horas.

3.3 Toma de muestra

3.3.1 Indicaciones al personal
o

Debe el personal que tome la muestra de portar guante de ltex, cofia y cubre bocas, como
medida de seguridad.

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o
o
o
o
o

Uso obligatorio de bata de laboratorio completamente cerrada

Calzado cerrado y adecuado al laboratorio
Cabello completamente recogido
Desinfectar el rea de trabajo antes y despus de la toma de muestra
Lavado correcto de manos antes de realizar la toma de muestra, y antes de salir del rea de
toma de muestra y cuando se tenga contacto con material contaminado.

3.3.2 Toma de la muestra.

o
o
o

Para la recoleccin de la muestra el paciente comenzara a orinar en el bao, desechando el

primer chorro de la orina y sin parar de orinar poner el frasco y llenarlo hasta mas o menos
la mitad, luego retirar el frasco y terminar de orinar.
Tapar el frasco y secar con papel higinico, no utilizar agua ni jabn sobre el frasco.
Proseguir con el cultivo de bacterias en los respectivos agares.

4.0 Equipo y Material

4.0.1 Equipo
o
o
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o
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o
o

Campana de Flujo Laminar.

Autoclave.
Incubadora.
Refrigerador.
Balanza analtica.
pHmetro.
Autoclave.

4.0.2 Material
o
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o

Aplicadores estriles.
Tubos de ensaye de 13 X 100.
Cajas Petri desechable y estril.
Matraces EM de 500ml.
Mechero Bunsen.
Asa Bacteriolgica.
Probeta de 100ml.
Esptula acanalada.
Portaobjetos.
Papel filtro.

4.1 Medios de Cultivo

o
o

Agar Sangre.
MacConkey

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4.1.1 Preparacin agar A.S

o
o
o
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o

Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada en ME 500ml.

Dejar reposar 5 min y mezclar perfectamente hasta obtener una suspensin homognea.
Calentar con agitacin frecuente y hervir por un minuto.
Esterilizar en autoclave por 15 min a 121 C.
Enfriar a una temperatura de 25 C y medir pH adecuado al medio: 7.30.2.
Agregar sangre hasta alcanzar un color en el agar rojo cereza
Homogenizar y distribuir en placas desechables.
Etiquetar placas: Nombre medio, Fecha preparacin, Fecha caducidad.

4.1.2 Preparacin agar Mac Conkey

o
o
o
o
o
o
o

Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada en ME 500ml.

Dejar reposar 5 min y mezclar perfectamente hasta obtener una suspensin homognea.
Calentar con agitacin frecuente y hervir por un minuto.
Esterilizar en autoclave por 15 min a 121 C.
Enfriar a una temperatura de 25 C y medir pH adecuado al medio: 7.30.2.
Homogenizar y distribuir en placas desechables.
Etiquetar placas: Nombre medio, Fecha preparacin, Fecha caducidad.

4.2 Reactivos y colorante

o
o
o
o
o

Solucin de cristal violeta.

Solucin de lugol.
Solucin de safranina.
Alcohol etlico.
Reactivo Kovack.

4.2.1 Preparacin solucin de cristal violeta

o
o
o

Tomar 1g de cristal violeta.

Agua destilada 100ml.
Disolver el cristal violeta en agua y guardar en frasco de vidrio mbar.

4.2.2 Preparacin solucin lugol

o
o
o

Pesar 20 g de Yodo.
Tomar 100ml de hidrxido de sodio 1M.
Disolver los grs. De yodo en el hidrxido de sodio y aforar a 1L con agua destilada, guardar
en frasco de vidrio mbar.

4.2.3 Preparacin solucin safranina

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o

Safranina 0.05g.
100ml de agua destilada.
Disolver los grs. De safranina en los 100 ml de agua destilada y guardar en frasco de vidrio
mbar.

5.0 Procesamiento de la muestra

5.1 Sembrar
5.1.1 Agar Sngre
o
o
o
o
o
o

En medio esteril tomar placa con agar A.S.

Descargar la muestra de orina en una placa con agar A.S cubriendo un campo.
Esterilizar asa de platino en mechero.
Extender en inocul mediante estra cruzada utilizando un asa de platino los 2 campos
restantes.
Rotular placa: Nro. De muestra, Tipo de muestra, Fecha se realizo la siembra.
Incubar a 34C-37C por 24-48 horas.

5.1.2 Tincin Gram

o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o

Seleccionar 2-3 colonias del agar A.S, utilizando un asa de platino.

Hacer el extendido con el asa y agregar una gota de agua sobre un portaobjetos.
Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.
Para fijar la muestra agregar cristal violeta y esperar 1 minuto. Todas las clulas gran
positivas se tien de color azul-purpura.
Lavar con agua destilada.
Agregar lugol y esperar un minuto.
Lavar con agua destilada.
Agregar alcohol-acetona y esperar 30 segundos.
Lavar con agua destilada.
Agregar tincin contrastante safranina y esperar un minuto. Deja de color rosado-rojizo las
bacterias gram negativas.
Lavar con agua destilada y dejar secar a temperatura ambiente.
Observar al microscopio con objetivo 40x o 100x.
Si se observa a 100x utilizar aceite de inmersin.

5.2 Pruebas Bioquimicas

5.2.1 Prueba Ureasa
o
o
o
o

Suspender 3.80 g del polvo en 100ml de agua destilada en ME 250ml.

Dejar reposar 5 min y mezclar perfectamente hasta obtener una suspensin homognea.
Calentar con agitacin frecuente y hervir por un minuto.
Vaciar 10ml contenido en cada tubo de ensaye de 16x100.

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o

Esterilizar en autoclave por 15 min a 121 C.

Enfriar a una temperatura de 25 C y medir pH adecuado al medio: 7.30.2.
Inocular y dejar incubar por 24hrs.

5.2.2 Prueba Oxidasa

o
o
o
o

Colocar un trozo de papel filtro.

Agregar de 2-3 gotas de reactivo Kovac en el centro del papel filtro.
Extender con el asa de siembra una colonia sobre el papel impregnado.
La reaccin se produce de 5-10 segundos, si la reaccin es positiva ser de un color
lavanda, si es oxidasa negativa no habr vire de color.

5.3 Observaciones
5.3.1 Crecimiento en agar A.S
o Colonias abundantes, y blanquecinas redondeadas, producen el efecto swarming.
5.3.2 Prueba Ureasa
o

Positiva el medio se torna de color rosa-rojizo.

5.3.3 Prueba Oxidasa

o

Negativa, no hay formacin de burbujas.

6.0 Residuos
o
o
o

Los residuos de esta prueba de identificacin son considerados residuos peligrosos

biolgicos-infecciosos (RPBI), los cuales se encuentran dentro de la clasificacin de:
Residuos patolgicos: Muestras biolgicas para anlisis microbiolgico.
Residuos no anatmicos: Hisopos, algodn, gasas, papeles.

6.1 Residuos patolgicos:

o
o

Slidos: Bolsa de polientileno color amarilla.

Liquidos: Recipiente hermtico color amarillo.

6.2Residuos no anatmicos:
o
o

Slidos: Bolsa de polientileno color roja.

Liquidos:Recipiente hermtico color roja.

6.3 Cultivos y cepas de agentes biolgicos infecciosos

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Slidos: Bolsa de polientileno color roja.

Liquidos: Recipiente hermtico color roja.
Antes de su disposicin deben ser esterilizados en autoclave 121C 15 min.

7.0 Reporte de resultados

o

Se reportan en el formato de reporte de resultados.

8.0 Bibliografa
o
o

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-087-ECOL-SSA1-2002, PROTECCION

AMBIENTAL-SALUD AMBIENTAL-RESIDUOS PELIGROSOS BIOLOGICOINFECCIOSOS- CLASIFICACION Y ESPECIFICACIONES DE MANEJO.
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/patogNOMStaphylococcusaureus_17365.
pdf

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