6. Cintica enzimtica.

Los principios generales de la cintica de las reacciones qumicas son

aplicables a las reacciones catalizadas por las enzimas, en los seres vivos. No
obstante, estas muestran (adems del fenmeno de la especificidad, antes
comentado) un rasgo caracterstico que no se observa en los catalizadores no
enzimticos, se trata de la saturacin por el sustrato, entendida en trminos de
ocupacin de los centros activos de todas las molculas de enzima.
Estudiar el efecto de la concentracin de sustrato sobre la actividad de una
enzima no es sencillo si pensamos que lgicamente la concentracin del
sustrato disminuye segn avanza la reaccin. Una simplificacin en los
experimentos cinticos consiste en medir la velocidad inicial (Vo). Si el tiempo
es suficientemente corto la disminucin de sustrato ser mnima y sta podr
considerarse, por tanto, casi constante. La Figura 5 muestra el efecto de
distintas concentraciones de sustrato sobre la velocidad inicial de la reaccin
catalizada por un enzima.

Figura 5.
Cintica enzimtica. Modelo de Michaelis-Menten.

En la cintica enzimtica de la Figura 5 se distinguen tres fases:

Para una concentracin baja de sustrato, la velocidad de la reaccin es

directamente proporcional a la concentracin del sustrato (relacin
lineal), la cintica es de primer orden.

Para una concentracin alta de sustrato, la velocidad de la reaccin se

hace prcticamente constante e independiente de la concentracin de
sustrato, la cintica se considera de orden cero.

Para concentraciones de sustrato intermedias la velocidad del proceso

deja de ser lineal, y a esta zona se la denomina de cintica mixta.

Este comportamiento es caracterstico de la mayora de las enzimas y fue

estudiado por Michaelis y Menten en 1913. La velocidad de una reaccin
catalizada nos indica la cantidad de sustrato consumido, o producto formado,
por unidad de tiempo. En el Sistema Internacional se designa por U (unidad
de actividad enzimtica) y corresponde a los moles de sustrato consumidos
en 1 min, o bien a los moles de producto formado en 1 min.

1 U mol S/min mol P/min

La curva que expresa la relacin entre la concentracin de sustrato y la

velocidad inicial tiene la misma forma para la mayora de las enzimas; se trata
de una hiprbola rectangular, cuya expresin algebraica viene dada por la Ec.
Michaelis-Menten.

Los trminos Vmax (velocidad mxima) y Km (constante de Michaelis) son dos

parmetros cinticos caractersticos de cada enzima, que pueden determinarse
experimentalmente. La velocidad mxima se obtiene cuando la velocidad de
reaccin se hace independiente de la concentracin de sustrato. Este valor
depende de la cantidad de enzima que tengamos. La K m nos indica la
concentracin de sustrato a la cul la velocidad de reaccin es la mitad de la
velocidad mxima, este parmetro es independiente de la concentracin de
enzima, y es caracterstico de cada enzima segn el sustrato utilizado (si tiene
varios). La Km tambin indica la afinidad que posee la enzima por el sustrato,
siendo sta mayor, cuanto menor es la K m. Cuanto menor sea la Km menor ser
la cantidad de sustrato necesaria para alcanzar la mitad de la velocidad
mxima, por lo que mayor ser la afinidad del enzima hacia ese sustrato.
La ecuacin de Michaelis-Menten puede deducirse matemticamente haciendo
la aproximacin del estado estacionario, segn esta aproximacin la
concentracin del complejo ES es constante en el estado estacionario y por lo
tanto las velocidades de formacin y destruccin del complejo ES son iguales.
Adems, asumimos que el paso limitante de la reaccin es el segundo y por lo
tanto la velocidad de la reaccin es: Vo=K2 ES.

Velocidad formacin del complejo ES = Velocidad destruccin del

complejo ES
K1ES= K-1 ES + K2ES
K1ES= (K-1 + K2 ) ES
La concentracin de enzima libre ser igual a la concentracin total de enzima
menos lo que est unido al sustrato. E= Et -ES, as que:
K1 Et S- K1 ES S = (K-1 + K2 ) ES
K1 Et S= (K-1 + K2 + K1S) ES
Despejando ES se obtiene un trmino constante formado por las tres
constantes e igual a la constante de Michaelis (K m). El trmino K1 Et ser
precisamente la V (velocidad mxima) cuando todo el enzima est unido al

sustrato formado un complejo ES, o sea, cuando la enzima est saturada por el
sustrato, es decir:
K1 Et =Vmax.
De modo que la forma final de la ecuacin de Michaelis-Menten es:

A partir de esta ecuacin podemos explicar matemticamente las tres fases de

la curva de Michaelis.

A baja [S (es decir, si Km >>> [S) el trmino Km+[S podemos

aproximarlo a la Km, quedando un expresin del tipo:
V = k [S

Esta es una cintica de primer orden, que se caracteriza por una variacin
lineal de la V respecto al tiempo.

A altas [S (es decir, Km<<<<[S) despreciaramos Km frente a [S, con lo

que V = Vmax (que sera constante); la cintica es de orden cero y se
habra alcanzado la saturacin por sustrato.

El tramo intermedio, en el que la [S Km correspondiente a una cintica

de orden mixto y se ajusta a la ecuacin de Michaelis.

En muchos casos es de vital importancia conocer estos parmetros cinticos.

En principio, podran obtenerse de forma poco rigurosa a partir de la curva de
Michaelis Menten, pero existen mtodos grficos ms fiables que facilitan el
clculo preciso de la Km y la Vmax. Los clculos se hacen en base a
transformaciones matemticas de la ecuacin de Michaelis; una de las
expresiones ms utilizadas es la representacin de Lineweaver-Burk, tambin
conocida como de dobles inversos (Figura 6). En esta forma de clculo se
representa 1/V frente a 1/S, obtenindose una recta cuya interseccin con el
eje X es 1/Km y con el eje Y es 1/Vmax, siendo la pendiente Km/Vmax.

Figura 6.
Cintica enzimtica. Representacin de Lineweaver-Burk.