Qumica Biolgica 2010

Qumica Biolgica
TP 1: ESPECTROFOTOMETRIA .
Introduccin
Al obserar u!a soluci! acuosa "e u! colora!#e a #raslu$% obseramos u!a lee coloraci!% la cual se
"ebe a la i!#eracci! e!#re las mol&culas "el colora!#e ' la lu$ (ue a#raiesa la "isoluci!. A"em)s e!
caso "e #e!er arias solucio!es "e "is#i!#as co!ce!#racio!es es *osible "e#ermi!ar u! gra"ie!#e "e
co!ce!#raci! a *ar#ir "e la i!#e!si"a" "e la coloraci!. Es#as obseracio!es "a! orige! a u!a serie "e
*r)c#icas a!al#icas llama"a Es*ec#ro+o#ome#ra% basa"a e! la i!#eracci! "e las mol&culas ' las
ra"iacio!es elec#romag!&#icas.
,!a ra"iaci! elec#romag!&#ica se *ue"e "escribir como u! +lu-o "e *ar#culas llama"as +o#o!es% o bie!
como u!a o!"a *ro*ag)!"ose e! el es*acio. .e es#a /l#ima "escri*ci! se #oma el co!ce*#o "e lo!gi#u"
"e o!"a% "e+i!i&!"olo como la "is#a!cia e!#re "os m)0imos co!secu#ios "e la o!"a. 1a lo!gi#u" "e o!"a
es i!ersame!#e *ro*orcio!al a la e!erga "e la misma% "e #al ma!era (ue el es*ec#ro "e ra"iacio!es
elec#romag!&#icas abarca u! am*lio ra!go "e e!ergas% las "e me!or e!erga so! las o!"as "e ra"io ' las
"e ma'or e!erga so! las llama"as ra"iaci! gamma.
El es#a"o e!erg&#ico "e u!a mol&cula se *ue"e al#erar *or la absorci! "e ra"iaci! elec#romag!&#ica a
"e#ermi!a"a lo!gi#u" "e o!"a% lo (ue se *ue"e me"ir *ara reali$ar u! es#u"io cuali o cua!#i#a#io% es#e
+e!me!o es el +u!"ame!#o "e la es*ec#ro+o#ome#ra. Cua!"o u! 2a$ "e lu$ i!ci"e sobre u! me"io
2omog&!eo *ar#e "e la ra"iaci! es absorbi"a ' *ar#e #ra!smi#i"a% la +racci! "e lu$ (ue se absorbe ' se
#ra!smi#e "e*e!"er) "e la ca!#i"a" "e mol&culas *rese!#es e! el me"io 3"e la co!ce!#raci!4 los (ue !os
*ermi#e cua!#i+icar u!a sus#a!cia
1as *ri!ci*ales e!#a-as "e la es*ec#ro+o#ome#ra so!:
Se!sibili"a" rela#ia elea"a.
Facili"a" *ara reali$ar me"icio!es r)*i"as.
1
Qumica Biolgica 2010
5ra"o "e es*eci+ici"a" rela#iame!#e elea"o.
Para ob#e!er la m)0ima se!sibili"a" e! u!a "e#ermi!aci! "ebe co!ocerse la lo!gi#u" "e o!"a "e ma'or
absorci! "e la sus#a!cia a!ali$a"a% (ue !o "eber) coi!ci"ir co! u!a al#a absorci! "e o#ras sus#a!cias
*rese!#es e! la reacci!.
Sea I la i!#e!si"a" "e u!a ra"iaci! (ue a#raiesa u! me"io 2omog&!eo% *ar#e "e la ra"iaci! es
absorbi"a *or la mues#ra ' o#ra *ar#e es #ra!smi#i"a% ambas co! u!a i!#e!si"a"% i% "e #al ma!era (ue se
"e+i!e #ra!smi#a!cia "e u!a mues#ra como la relaci! e!#re la ra"iaci! #ra!smi#i"a i ersus la i!#e!si"a"
lumi!osa i!ci"e!#e I% mul#i*lica"o 0 166:
% T = ( i / I) x 100

1a absorba!cia es u!a me"i"a "e la ca!#i"a" "e E!erga lumi!osa i!ci"e!#e absorbi"a *or u!a sus#a!cia
e! soluci!. Es#) relacio!a"a co! Tra!smi#a!cia *or me"io "e :
A= - Log T A= log ( 100 / %T)
1a 1e' "e Lambert y Beer e0*resa (ue la absorba!cia "e u!a soluci! es "irec#ame!#e *ro*orcio!al al
cami!o recorri"o *or la ra"iaci! elec#romag!&#ica ' a la co!ce!#raci! "e la soluci!.
A= abc
A: absorba!cia
a: absor#ii"a" es*ec+ica "e ca"a solu#o
b: "is#a!cia recorri"a *or el 2a$ "e lu$ e! cm
c: co!ce!#raci! "e la soluci!
1a absor#ii"a" es la co!s#a!#e "e *ro*orcio!ali"a" (ue !os *ermi#e igualar la ecuaci!% sus u!i"a"es
"e*e!"er)! "e b ' c% 'a (ue la absorba!cia !o #ie!e u!i"a"es7 si b es#) e! ce!#me#ros ' c e! moles *or
li#ro% la absor#ii"a" es#ar) e! li#ros 8 mol ce!#me#ro ' se "e!omi!a coe+icie!#e "e absorci! molar 3E4.
Re(uerimie!#os *ara *o"er a*licar la 1e':
9 1a me"ici! "el : "e T es reali$a"a co! lu$ mo!ocrom)#ica
9 1a me"ici! "el : "e T es reali$a"a a u!a regi! "e absorci! "el com*o!e!#e a es#u"iar.
9 1a re+ere!cia es elegi"a "e #al ma!era (ue C;6 cua!"o T; 166: o A; 6:
9 1a !a#urale$a "e la soluci! "ebe ser #al (ue su #ra!smisi! res*o!"a a ariacio!es "e C.
<
Qumica Biolgica 2010
Espectrofotmetro
1os a*ara#os "e me"i"a "e la absorci! "e la ra"iaci! elec#romag!&#ica se "e!omi!a!
es*ec#ro+o#me#ros ' *ue"e! re*rese!#arse "e +orma se!cilla me"ia!#e el siguie!#e es(uema:
1a lu$ *roce"e!#e "e la +ue!#e se 2ace *asar a #ra&s "el mo!ocroma"or% (ue la "es"obla e! 2aces
mo!ocrom)#icos. El colima"or #ie!e u!a re!"i-a "e a-us#e ariable% ' seg/! su aber#ura se ob#ie!e lu$ "e
u!a "e#ermi!a"a lo!gi#u" "e o!"a.1a lo!gi#u" "e o!"a (ue se "esee u#ili$ar se seleccio!a aria!"o la
*osici! "el mo!ocroma"or. 1a lu$ (ue sale "el colima"or se 2ace *asar *or la soluci! ' luego i!ci"e
sobre el +o#o#ubo% "o!"e se "e#ec#a. 1a se=al se e!a a u! regis#ra"or% el cual *ue"e ser la escala "e u!
gala!me#ro calibra"o.
!alibraci" #el espectrofotmetro
Pre!"er el e(ui*o llea!"o la llae 2acia arriba. Es*erar 1> mi!u#os *ara (ue los circui#os alca!ce!
#em*era#ura.
Elegir la lo!gi#u" "e o!"a "esea"a co! el selec#or.
?eri+icar 6: "e T. Se reali$a e! mo"o #ra!smi#a!cia ' coloca!"o u! cuer*o !egro e! reem*la$o "el #ubo
Espectro #e absorci"
Co!sis#e e! u! gr)+ico (ue re*rese!#a el : T o la Absorba!cia e! +u!ci! "e la 1o!gi#u" "e o!"a a la cual
se reali$a la me"ici!% *ara u! am*lio ra!go "e lo!gi#u"es "e o!"a ' *ara u!a misma co!ce!#raci! c "e
la mues#ra.
Permi#e "e#ermi!ar las lo!gi#u"es "e o!"a *#imas "e absorci! ' las co!ce!#racio!es a"ecua"as "e
#raba-o. 1a lo!gi#u" "e o!"a o*#ima ser) a(uella e! el (ue el alor "e absorba!cia sea m)0imo
1os *asos *ara reali$ar u! es*ec#ro "e absorci! so!:
Seleccio!ar la lo!gi#u" "e o!"a.
A-us#ar 166 : T o 6 : A co! el Bla!co "e reac#ios.
@
Qumica Biolgica 2010
Reem*la$ar el bla!co *or la mues#ra ' leer absorba!cia.
Seleccio!ar u!a !uea lo!gi#u" "e o!"a ' re*e#ir las o*eracio!es.
5ra+icar Absorba!cia s lo!gi#u" "e o!"a ' seleccio!ar a(uella "o!"e la A sea m)0ima.
!$r%a #e calibraci"
Permi#e "e#ermi!ar la co!ce!#raci! "e u!a mues#ra i!cg!i#a. Co!sis#e e! me"ir u!a serie "e solucio!es
co!ce!#raci! co!oci"a "e la sus#a!cia "e la mues#ra i!cg!i#a. Se gra+ica! esos *u!#os ' se em*lea "ic2o
gra+ico *ara calcular la mues#ra *roblema.
1os *asos *ara reali$ar u!a cura "e calibraci! so!:
Me"ir la A "e las solucio!es "e co!ce!#raci! co!oci"a.
Me"ir la A "e la mues#ra *roblema.
5ra+icar Absorba!cia s co!ce!#raci!.
Si la sus#a!cia cum*le co! la 1e' "e 1amber# ' Beer el gr)+ico ser) u!a rec#a ' ser) *osible sacar u!
+ac#or 'a (ue la *e!"ie!#e "e la rec#a ser) la misma e! #o"os los *u!#os. As se *o"r) calcular la
co!ce!#raci! "e la mues#ra *roblema.
Si la sus#a!cia !o cum*le la 1e'% el gr)+ico ser) u!a cura ' se e0#ra*olar) "e!#ro "e u! ra!go a*ro*ia"o
*ara calcular el alor "e la mues#ra *roblema.
Par#e e0*erime!#al
Objetivos
9 A*re!"er el uso "el es*ec#ro+o#me#ro.
9 Reali$ar es*ec#ro "e absorci! "e sus#a!cias *uras: solucio!es "e a$ul "e me#ile!o.
9 Reali$ar u!a cura "e calibraci! *ara "e#ermi!ar la co!ce!#raci! "e u!a mues#ra *roblema "e a$ul
"e me#ile!o.
Actividades:
19 Es*ec#ro "e absorci! "e soluci! "e a$ul "e me#ile!o
A
Qumica Biolgica 2010
,#ili$ar la soluci! "e a$ul "e me#ile!o "e >mg8l.1lear a cero "e absorba!cia co! agua "es#ila"a a!#es
"e reali$ar ca"a lec#ura e! el es*ec#ro+o#me#ro. Me"ir las absorba!cias a "is#i!#as lo!gi#u"es "e o!"a%
co! i!#eralos "e <6 !m% "es"e >66 !m 2as#a B66 !m ' ca"a 16 !m e!#re C66 ' B66 !m.
5ra+icar cura "e absorba!cia ersus lo!gi#u" "e o!"a.
Obserar cu)l es la lo!gi#u" "e o!"a "e ma'or absorci! (ue se u#ili$ar) *ara reali$ar la cura "e
calibraci! ' "e#ermi!ar la co!ce!#raci! "e u!a mues#ra *roblema.
<9 Cura "e calibraci!
A *ar#ir "e la soluci! *a#r! "e > mg8l reali$ar ci!co "ilucio!es: 18<7 18A7 18>7 18C7 18D7 18167 181>.
Me"ir sus absorba!cias a la lo!gi#u" "e o!"a "e#ermi!a"a a!#eriorme!#e ' gra+icar absorba!cia ersus
co!ce!#raci!.
.e#ermi!ar co! la gr)+ica a!#erior la co!ce!#raci! "e la mues#ra *roblema.
Problemas
19 El coe+icie!#e "e absorci! es*ec+ico "e u!a *ro#e!a es "e C "l8g.cm. Calc/lese la co!ce!#raci!
e! mg8ml si u!a soluci! "e &s#a *rese!#a u!a absorba!cia "e 6%D< e! u!a cube#a "e 1 cm .

<9 ,! barbi#/rico *rese!#a u! m)0imo "e absorba!cia a <A> !m e! u! me"io +uer#eme!#e alcali!o.
Traba-a!"o co! u!a cel"a "e 1 cm "e es*esor se ob#ie!e! los siguie!#es "a#os:

co!ce!#raci! 3M4 Absorba!cia
<%6> 0 16
9>
6%1BE
A%16 0 16
9>
6%@>C
D%<6 0 16
9>
6%B1D
1C%A6 0 16
9>
1%A@6
.e#ermi!ar si cum*le la le' "e 1amber# ' Beer.
@9 Calcule la co!ce!#raci! "e u!a soluci! "e ATP (ue *osee u!a absorba!cia "e 6%DB a <>E !m%si el
coe+icie!#e "e absorci! molar a *F B%6 es "e 1>%A l8molcm

' la lo!gi#u" "e *aso "e la cuba es "e 1cm.
Cu)l ser) la absorba!cia "e u!a soluci! "e ATP "e co!ce!#raci! 16g81G. PM ATP: AE1
>
Qumica Biolgica 2010
A9 ,!a soluci! (ue co!#ie!e < gr8l "e u!a sus#a!cia% #ra!smi#e el B>: "e la lu$ i!ci"e!#e e! u!a
cube#a "e 1 cm a u!a "e#ermi!a"a lo!gi#u" "e o!"a. Calcular la #ra!smi#a!cia "e u!a soluci! (ue
co!#e!ga A gr8l ' la absorba!cia "e u!a soluci! (ue co!#e!ga C gr8l.
>9 Al reali$ar u! es*ec#ro "e absorci! "e *ro#e!as% se e!co!#raro! las siguie!#es absorba!cias:
1o!gi#u" "e o!"a 3!m4 Abs
<A6 6%166
<>6 6%6EE
<C6 6%1B6
<B6 6%<A>
<D6 6%<E6
<E6 6%1ED
@66 6%1B1
@16 6%11>
5ra+icar ' "e#ermi!ar la lo!gi#u" "e o!"a (ue u#ili$ara *ara me"ir *ro#e!as.
C9 Calcular la co!ce!#raci! "e u!a mues#ra *roblema "e 2emoglobi!a sabie!"o (ue *rese!#a a >A6
!m u!a absorba!cia "e 6%A>. E! la cura "e calibraci! se ob#uiero! los siguie!#es "a#os:
Absorba!cia Co!ce!#raci! 3 g8 "l4
6%@B 11
6%A6A 1<
6%A@D 1@
6%AB< 1A
6%>6> 1>
.e#ermi!ar si el com*ues#o cum*le co! la 1e' "e 1amber# ' Beer a esa lo!gi#u" "e o!"a.
B9 E! u!a mues#ra "e suelo se "e#ermi! !i#ri#os *or u! m&#o"o colorim&#rico. 1a absorba!cia "e la
mues#ra a >A6 !m +ue "e 6%><. E! la cura "e calibraci! se e!co!#raro! los siguie!#es alores:
Absorba!cia Co!ce!#raci! 3 ug8 ml4
6%<@ 6%<6
6%AB 6%A6
6%C> 6%C6
6%E6 6%D6
C
Qumica Biolgica 2010
.e#ermi!ar la co!ce!#raci! "e !i#ri#os e! la mues#ra.
Es *osible sacar u! +ac#or *ara "e#ermi!ar !i#ri#os e! *r0imas mues#rasG. Hus#i+icar.
B