20/04/2014

1
Clase 6: Crecimiento microbiano-
Esterilizacin-Tipos de Biorreactores


Hugo Menzella

Abril de 2014

Procesos Biotecnolgicos II
1
Crecimiento microbiano
Generacin (n)
Es el nmero de divisiones celulares que ocurren en
un determinado tiempo en un cultivo microbiano
Velocidad de crecimiento: n
vc =
t
Es el cambio en el nmero de generaciones por unidad
de tiempo
Tiempo de generacin
Es el tiempo requerido para que a partir de una clula
se formen dos, o sea el tiempo requerido para
duplicar el nmero de clulas de una poblacin

2
20/04/2014
2


Representacin aritmtica y
exponencial del crecimiento
3
Los factores que intervienen son:
- concentracin de sustratos
- temperatura
- pH
- actividad de agua
- potencial redox,concentrac de oxigeno
- presin hidrosttica
Factores que afectan a la rapidez de
crecimiento

4
20/04/2014
3
Formas de medicin del crecimiento
microbiano
-Peso seco celular
- Absorcin
- Peso hmedo
- Volumen
- Nmero de clulas
- Mediciones fsicas
5
Peso seco celular

.
Consiste en dejar secar volmenes conocidos de cultivo
celular lentamente hasta que alcancen peso cte. Se
mide en g/l
En ocasiones para concentrar las clulas se usa el
centrifugado o filtrado segn la dificultad.
Es el mas usado
Desventaja: pueden dar grandes errores en caso
de absorcin de humedad por las clulas secas
6
20/04/2014
4
Absorcin
Consiste en el uso de celdas espectrofotomtricas
pues las clulas desvan la luz q llega al detector y
esa desviacin est relacionada con el n de clulas
presentes (o tambin puede relacionarse con la
densidad ) en la muestra segn la Ley de Beer

7
Peso hmedo
Consiste en una centrifugacin
o filtracin seguida del pesado.
Este proceso es extrarrpido, hay necesidad
de estandarizar el proceso ya que se mide
tanto el agua intracelular como el extracelular
ocasionando errores considerables.


8
20/04/2014
5
Recuento de viables - Filtracin por
membrana
9
Volumen
Consiste en la centrifugacin en
tubos graduados de tal forma q me
permitan determinar el volumen de
clulas empacadas.
Es un mtodo bastante inexacto
especialmente para pequeos cambios de
la poblacin celular
10
20/04/2014
6
por cmara de Petroff-Hausser
Muestra de cultivo diludo en cmara de volumen pequeo y
conocido (2,5x10
-7
ml), recuento de clulas en numerosos
cuadrados de la cmara. Promedio de clulas contenidas en
dicho volumen se expresa por ml de muestra (alto error
experimental).
Desventaja: no se pueden distinguir clulas viable y no viables
Recuento de clulas
11
Mediciones fsicas
El crecimiento de clulas origina la
generacin de calor la cual est
relacionada con la concentracin de
biomasa. Es un proceso rpido y no
necesita de muestreo. Se usa para el caso
de biorreactores , pues sino las variaciones
de calor generado son pequeas para
poder ser mediadas adecuadamente.
12
20/04/2014
7

OBJETIVOS:
Evitar el desarrollo de microorganismos patgenos.
Evitar el desarrollo de microorganismos alterantes.
Incrementar la reproducibilidad del proceso (rendimiento, pureza y
tiempo de produccin).
MTODOS DE ESTERILIZACIN:
Calor hmedo (autoclave o chorro de vapor).
Calor seco
Radiacin ( Rayos X ,UV)
Esterilizacin qumica con lquidos o gases.
Filtracin (filtros de superficie o de profundidad).
Nuevos mtodos ( altas presiones, campos elctricos)
ESTERILIZACIN DE CULTIVOS
13
Esterlizacin
DONDE SE CONTROLA LA ESTERILIDAD?
Mantener la pureza del inculo.
Esterilizar el medio de cultivo y los aditivos.
Esterilizar el material en contacto con el medio ( recipiente,
fermentador, vlvulas y conductos)
Esterilizar los gases entrantes y salientes.
Manterner las condiciones aspticas durante la manipulacin.
Contruccin apropiada del biorreactor para su esterilizacin y
para la prevencin durante la fermentacin.
14
20/04/2014
8
15
16
Costos Produccin Plasa
Insumos 1,30 Redimiento de fermentacion (g Enzima/L) 3,00
Staff 0,05 Cantidad de fermentaciones anuales 132,00
Consumibles 0,05 Staff 202.000,00
Capex 0,04 Vol fermentador 30.000,00
Energia 0,01 Costo capital 1.500.000,00
Total por litro de fermentacin
procesado 1,45
amortizacion equipos (aos) 10,00
consumibles annual 200.000,00
Total por kg formulado idem
competidor USD 14,49
duracion ciclo fermentacion (dias) 2,50
Produccion PLasa annual (kg) 11.880,00
Produccion formulada idem competidor (L) 396.000,00
Toneladas de Aceite que pueden tratarse 1.980.000,00
20/04/2014
9

TIPOS DE ESTERILIZACIN.

ESTERILIZACIN DISCONTINUA ESTERILIZACIN CONTINUA
T 121C 20-30 segundos a 90-120 C
30-120 segundos a 140C
20-30 segundos refrigeracin
Calentamiento por inyeccin de vapor Calentamiento por inyeccin de vapor
o intercambiadores de calor o intercambiadores de calor
Alto consumo de energa. Formacin de sales insolubles
Alteracin y destruccin de nutrientes. Tamao de la partcula restringida a 1-2 mm
Tiempos de esterilizacin mayores(2-3h)
17
Tipos de Biorreactores




18
20/04/2014
10
Biorreactor:

- Recipiente en el que se lleva a cabo una transformacin
qumica en la que interviene un biocatalizador.

- Utilizado en procesos industriales de produccin de
medicamentos, enzimas o commodities

- Provee un ambiente ptimo para el crecimiento celular
y la productividad asegurando el control de distintos
parmetros tales como temperatura, pH, etc.



19
El biorreactor ideal debe:

- Mantener las clulas uniformemente distribuidas
en el volumen de cultivo.
- Mantener constante y homognea la temperatura.
- Minimizar los gradientes de concentracin de
nutrientes.
- Mantener el cultivo puro.
- Mantener un ambiente asptico.
- Maximizar el rendimiento y la produccin.
- Minimizar el gasto y los costos de produccin.
- Reducir al mximo el tiempo del proceso.



20
20/04/2014
11
Clasificacin de Biorreactores

1- Por su forma y tipo de agitacin
2- De acuerdo a las fases: homogeneos o heterogeneos
3- Por el tipo de operacin (continuos, semicontinuos,
discontinuos)
4- Biorreactores especiales: de estado slido y foto-
biorreactores

21
1- Clasificacin de biorreactores por su
forma y tipo de agitacin
Agitacin mcanica: utilizan equipos mecnicos

Agitacin numatica: utilizan gas a presin
22
20/04/2014
12
1- Clasificacin de biorreactores por su forma y
tipo de agitacin: biorreactores de columna
23
1- Clasificacin de biorreactores por su forma y
tipo de agitacin: biorreactores de columna
24
20/04/2014
13
1- Clasificacin de biorreactores por su forma y
tipo de agitacin
Caracteristicas del Air-lift:
25
1- Clasificacin de biorreactores por su forma y
tipo de agitacin
Caracteristicas del Air-lift:
26
20/04/2014
14
1- Clasificacin de biorreactores por su forma y tipo
de agitacin

Biorreactor de tanque agitado

- Son los ms utilizados
- Sistema de agitacin mecnica
- Agitacin continua
- Inyeccin de aire por la parte inferior




27
28
A- Inyeccin de aire
B- Difusor
C- Eje transmisor
D- Motor
E- Agitadores
F- Controladores
G- Salida gases
H- Entrada
I- Deflectores
J- Rompe-espuma
K- Camisa
L- Salida
Fermentador tipo tanque agitado
20/04/2014
15
29
30
20/04/2014
16
31
Sistema de agitacin en biorreactores de
tanque agitados:
Genera la potencia necesaria para producir una mezcla
perfecta para el sistema de cultivo
Maximiza la difusin de gases en el lquido y minimiza la
produccin de esfuerzos cortantes y la presin
hidrodinmica local y global, para optimizar los fenmenos
de transferencia de calor y masa.
32
20/04/2014
17
Componentes sistema de agitacin
Eje de transmisin
de potencia Rotor
Motor en pedestal
33
2- Clasificacin de biorreactores de acuerdo a las
fases:

- Biorreactores homogeneos: las clulas (o
enzimas) permanecen en suspensin en el medio
de cultivo durante todo el proceso.


- Biorreactores heterogeneos: las clulas (o
enzimas) estn unidas a una fase solida en
contacto eco el medio de cultivo.




34
20/04/2014
18
2- Clasificacin de biorreactores de acuerdo a las
fases:





35
2- Clasificacin de biorreactores de acuerdo a las
fases:





36
20/04/2014
19
3- Clasificacin por el tipo de operacin

- Proceso continuos
- Procesos en batch o discontinuos
- Procesos en batch alimentado o
semicontinuos

37
4- Biorreactores especiales

38