PRACTICA N 01:

COLUMNA DE
WINOGRADSKY
Curso : Ecologa Microbiana
Docente : Csar Julio Cceda Quiroz
Alumnos : Carlos Walter Tala Chipoco 2010-35440
Jos Sandoval Niebles 2009-34021

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GORHMANN
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL BIOLOGIA - MICROBIOLOGIA

La columna de
Winogradsky simula un
microambiente

que ilustra cmo los
microorganismos
utilizan microespacios
altamente especficos

de acuerdo con
sus necesidades
vitales.

Carbono
Azufre
Energa
Interdependencia


El tipo de estudio de la estructura de la
comunidad microbiana acutica o de su
actividad depende del objetivo de la
investigacin que se pretenda realizar.

Los estudios microbiolgicos tradicionales
han sido la identificacin taxonmica de la
diversidad microbiana en la naturaleza
,funcion bioquimica e interacciones.


Figura 01:
Fuente: Google Imgenes

Finales del Siglo XIX:
Sergei Winogradsky.
Figura 02:
Fuente: Google Imgenes

Es una columna
compacta de lodo
cubierta con agua
para imitar un lago.
Donde diversas
bacterias se
desarrollan en un
periodo de meses.
en diferentes
zonas: aerbica,
microaerofila y
anaerbica.
Figura 03:
Fuente: Google Imgenes

Es un ecosistema anxico en
miniatura,
que puede usarse como
suministro a largo plazo de
bacterias para cultivos de
enriquecimiento.
Bacterias fototrficas
prpuras y verdes
Bacterias sulfato reductoras
Otros anaerobios
Chlorobium
limicola
Thiospirillum
genense
Desulfovibrio
sp

Las bacterias sulfato reductoras son las que
utilizan el sulfato como agente oxidante,
reducindolo a sulfuro.

Desulfobacterales
Desulfovibrionales
Syntrophobacterales


1 botella de plstico transparente 3L.
Sulfato clcico y Carbonato clcico
CaHPO
4

2 electrodos
1 yema de huevo cocido.
Papel peridico finamente cortado
Cinta adhesiva, Film transparente y Bandas
elsticas
Balanza de precisin, papel de aluminio .
3 tornillos o clavos de hierro



Guantes de ltex.
Tijeras.
Fango de charca de agua dulce, marisma o marino.
(Zona con materia vegetal abundante)
Agua del mismo origen.
Arena de color claro.
Bagueta de vidrio
Removedores de madera
Bolsas de basura grandes para proteccin de zona de
trabajo.


Lavar perfectamente
una botella de 2 L de
plstico transparente
y eliminar las
etiquetas, cortar con
unas tijeras el cuello
de la botella para
usarlo como embudo.

Figura 04:
Fuente: Google Imgenes

Marcar en la parte
superior de la
columna el nombre
de la pareja y las
condiciones de la
columna.
Esta inscripcin
servir como
referencia para su
orientacin a la luz.

Figura 05:
Fuente: Google Imgenes

Pegar, con un poco de
cinta adhesiva, en el
interior de la botella un
electrodo que llegue
hasta al fondo y
sobresalga al menos 10
cm del borde superior.

Pegar el extremo
sobresaliente

Figura 06:
Fuente: Google Imgenes

Pesar:
5-10 gramos de fuente
de Carbono de
utilizacin lenta (papel
de filtro cortado en
trocitos, serrn, papel de
peridico, restos
vegetales secos, etc)

5 gramos de Sulfato
Clcico

5 gramos de Carbonato
clcico


Figura 07:
Fuente: Google Imgenes

En un vaso de precipitados
aadir unos 750 mL de
fango, quitando los restos
vegetales o piedras que
puedan existir.

Aadir poco a poco agua
(del mismo origen que el
fango), si es necesario,

A la vez que se remueve
con un trozo de madera
hasta lograr una crema
espesa.


Figura 08:
Fuente: Google Imgenes

Aadir la fuente de
carbono, el sulfato y el
carbonato, removiendo
bien para su perfecta
distribucin.

Asegurarse de que
queda una crema fluida
que pueda discurrir a
travs del embudo.


Figura 08:
Fuente: Google Imgenes

Seguir aadiendo la mezcla a la botella,
golpeando unas cuantas veces el fondo sobre
la mesa

para que se distribuya uniformemente y se
elimine el oxigeno atrapado. (50%)

Repetir varias veces.



Aadir ahora a travs
del embudo arena de
color claro,

previamente
empapada con agua
del mismo origen que
el fango,

hasta completar el
75% del volumen.


Figura 09:
Fuente: Google Imgenes

Rellenar
cuidadosamente con
agua hasta casi el
borde

y tapar la columna con
film transparente

asegurndolo con
una banda elstica.


Figura 10:
Fuente: Google Imgenes

Se tapa el cilindro para evitar evaporacin.


Figura 11:
Fuente: Google Imgenes

Se coloca el cilindro
cerca de una ventana
donde reciba luz solar
atenuada y se deja
durante varias semanas.

El nombre de la pareja
deber estar orientado
hacia el interior del
laboratorio

de forma que sea
visible.



Figura 12:
Fuente: Google Imgenes
En la columna de Winogradsky
tpica se desarrollan una
mezcla de microorganismos:

Zona aerbica

Las algas y cianobacterias
ocupan rapidamente la parte
superior y al producir oxigeno
ayudan a mantener esta zona
oxica.
Figura 13:
Fuente: Google Imgenes

Zona aerbica:
La zona superior de la columna suele
volverse de color verde por la
presencia de algas y cianobacterias.

El oxgeno producido por estos
microorganismos permite el desarrollo de
hongos y bacterias hetertrofas aerobios.
Zona Microaerfila : La capa de agua
situada en contacto con el sedimento
contiene menor concentracin de oxgeno y
adems recibe algo de SH2.

Crecimiento de los oxidadores de sulfuro
microaerfilos
Thiothrix
Beggiatoa
Figura 14:
Fuente: Google Imgenes
Thiobacillus thioparus
Zona Microaerfila
Figura 15:
Fuente: Google Imgenes
Zona Anaerbica:

La parte superior de
la columna es de
color marrn - rojizo
debido al crecimiento
de principalmente
fotohetertrofos
anaerobios.

Rhodospirillum rubrum
Figura 16:
Fuente: Google Imgenes
Zona Anaerbica:
Contina una zona rojo-prpura, indicativa del
crecimiento de las bacterias prpuras del azufre.
Ms abajo, una zona verdosa indica el
crecimiento de bacterias verdes del azufre.
Chromatiaceae
Chlorobiaceae
(Chlorobium)
Figura 17:
Fuente: Google Imgenes

Zona Anaerbica:

El sulfuro producido por bacterias sulfato
reductoras provoca el crecimiento de:

Bacterias prpuras y verdes
del azufre
Crecen en el lodo de la
columna
Desarrollan profusamente en
el agua
Crecimiento de bacterias del azufre.
Figura 18:
Fuente: Google Imgenes
Zona Anaerbica:

En la zona inferior se desarrollan organismos
fermentadores que producen alcohol y
cidos grasos como subproductos de su
metabolismo.

Constituyen el sustrato para el desarrollo de
bacterias sulfatoreductoras.
Zona Anaerbica:

Las bacterias sulfatoreductoras como resultado
de su metabolismo, liberan sulfuros que difunden
a la zona superior oxigenada.

Creando un gradiente en el que se desarrollan
bacterias fotosintticas que utilizan el azufre.
Zona Anaerbica:

En esta zona, el color negro intenso que se
extiende hacia arriba desde el fondo del
sedimento se debe a la formacin de sulfuros
metlicos, principalmente sulfuro ferroso (FeS)
por:

La actividad de los reductores de sulfato.
Desulfovibrio, Desulfotomaculum
Figura 19:
Fuente: Google Imgenes
Esquema del desarrollo de microorganismos
Figura 20:
Fuente: Google Imgenes
Despus de 3 a 4 semanas de incubacin
aumenta la cantidad de los distintos tipos
de microrganismos,

Que de acuerdo a sus caractersticas
fisiolgicas se establecen en:

Diferentes zonas a lo largo de la columna.
Se introduce una pipeta larga con la que se
recoge un poco de lodo o agua coloreados.

Esta muestra se puede usar para:
Caracterizacin
Aislamiento
Una forma de examinar la biota de una
C.W. completamente desarrollada consiste
en desmontarla capa por capa

examinar por microscopa o aislar y cultivar
las algas, protozoos, cianobacterias,
Beggiatoa y dems m.o. asociados a cada
capa.
Brock, Thomas. Biologa de los
Microorganismos 10
a
ed.

Universidad autnoma de Mxico. Protocolo
de Prcticas de Microbiologa Experimental.
Mxico,2012.

Gua de Prcticas de Laboratorio de
Ecologa Microbiana, 2008.

GRACIAS