Sara C.

Rodrguez
Curso de Biotecnologa Animal - 2014
Pontificia Universidad Javeriana de Cali

Las madres del cangrejo
El supremo arte de la guerra es doblegar al enemigo sin luchar.
- Sun Tzu (544 AC-496 AC)
Todos los seres vivos estamos hechos de minsculos pedacitos de vida llamados clulas, que se
encargan de realizar las tareas fundamentales para mantener nuestra condicin de organismos
autopoyticos. Entre los millones de clulas que nos constituyen, hay algunas que tienen la capacidad
extraordinaria de dividirse y crear ms clulas, permitiendo la regeneracin de casi todas las partes de
nuestro cuerpo, desde la piel hasta los huesos. A estas clulas especiales se les llama clulas madre, que,
en trminos generales, se definen funcionalmente como clulas que tienen la capacidad de generar
clulas hijas idnticas a la madre (auto-renovarse), as como la habilidad de generar progenie con unas
funciones ms especializadas (clulas diferenciadas) (Lanza, 2009).
Las clulas madre se pueden clasificar segn una caracterstica llamada potencia, que hace referencia a
los diferentes tipos de clulas diferenciadas que pueden originarse a partir de las clulas madre; entre
ms tipos pueda originar, mayor potencia tiene (Lanza, 2009). Las clulas madre embrionarias (CME de
ahora en adelante), que, como su nombre lo indica, son propias de la fase embrionaria de los animales,
tienen la habilidad de dar lugar a cualquiera de los tipos celulares que constituye los rganos y tejidos
(pluripotentes) de nuestro cuerpo. En etapas de vida posteriores a la fase embrionaria, tambin hay
clulas madre replicndose continuamente, y dando origen a todas las clulas nuevas que reemplazan a
las ancianas al borde de la apoptosis. Estas clulas son llamadas clulas madre adultas (CMA de ahora en
adelante) y tienen menor potencia que las CME. Las CMA son propias de cada tejido y solo estn en
capacidad de auto-renovarse y de generar clulas diferenciadas, caractersticas del tejido en el que se
encuentren (multi y unipotentes) (Lanza, 2009).
La naturaleza es contradictoria, as como nos da mecanismos para evitar daos en nuestras clulas, nos
ha hecho frgiles y susceptibles ante cualquier mutacin que logre pasar las barreras. Las clulas madre
normales estn reguladas por procesos genticos altamente especficos y muy delicados; los cambios
ms pequeos en nuestro genoma, pueden alterar esos procesos y crear clulas salvajes, fuera de
control. Algunas de estas clulas mutantes son las reconocidas clulas cancergenas, que dan lugar los
diferentes tipos de cncer. Incluso entre las clulas cancergenas hay clulas madre, un grupo de clulas
tumorales o cancerosas que tiene propiedades similares a las clulas madre normales; se auto-
regeneran, forman conglomerados tumorales, se diferencian en poblaciones heterogneas de clulas
cancergenas, y son capaces de originar nuevos tumores al ser trasplantadas a un medio de cultivo
(Ouyang et al., 2010). Las clulas madre cancergenas (CMC) son las encargadas de regir el progreso de
los tumores, transmitiendo las mutaciones oncogenticas y de supresores tumorales, que son lo que
permite definir al cncer como una enfermedad gentica (Hanahan & Weinberg, 2011).
Son aquellas propiedades compartidas con las clulas madres normales, junto con otras caractersticas,
las que permiten asegurar que las clulas cancergenas no son unidades independientes, y guardan una
estrecha relacin con las clulas madre normales, siendo reguladas dependiendo de su nicho de
desarrollo, del ciclo celular y por factores de regulacin gentica y epigentica.
Sara C. Rodrguez
Curso de Biotecnologa Animal - 2014
Pontificia Universidad Javeriana de Cali



Una hiptesis reciente sobre las CMC propone que un tumor cancergeno heterogneo contiene una
pequea fraccin de CMC, con propiedades de las clulas madre normales (como la auto-renovacin y la
habilidad de diferenciarse en clulas cancergenas no tumorignicas), y que tienen caractersticas nicas
que les permite sobrevivir a la quimioterapia, reteniendo el potencial para desarrollar nuevos tumores
(Cheng, 2004; Gao et al., 2010; Scaffidi & Misteli, 2011), hiptesis que establece una relacin estrecha
entre las CMC y las clulas madre normales. Para poder reconocer a las CMC se tienen en cuenta
algunos criterios, que permiten identificar un patrn persistente de clulas con caractersticas de clula
madre, como la capacidad de permanecer quiescente, la generacin de una jerarqua de amplificacin,
la resistencia a la quimioterapia, y mayor tumorigenicidad (estudiado en modelos murinos) (Gao et al,
2010).
La estrecha relacin entre las CMC y las clulas madre normales se puede ver con mayor claridad al
compararlas con clulas madre normales, como las clulas madre embrionarias (CME). Las CME pueden
ser derivadas de blastmeros de un embrin de 8 clulas y, debido a su pluripotencia, pueden
diferenciarse en una gran variedad de tipos celulares tanto in vitro como in vivo, dependiendo de los
estmulos a los que estn expuestas, y se caracterizan por su habilidad para auto-renovarse. Por otro
lado, las clulas madre adultas (CMA) residen en nichos especficos, tambin se pueden auto-renovar y
diferenciar en varios tipos celulares del tejido en el que residen, aunque se ha demostrado que estas
CMA tienen mayor potencial de diferenciacin que el anticipado originalmente (Lotem & Sachs, 2006).
Por ejemplo, Gao et al. en 2010, estudiaron clulas CD24
+
(una molcula de superficie celular, que se
expresa en granulocitos maduros y clulas B, y que modula el crecimiento y las seales de diferenciacin
en estas clulas) provenientes de muestras humanas de tumores de ovario, y definieron las
caractersticas heterogneas de estos clones celulares, identificndolos como potenciales CMC de ovario.
Encontraron que las clulas CD24
+
expresaban preferencialmente genes de clulas madre que tienen un
papel fundamental en la auto-renovacin de las clulas madre, su capacidad proliferativa, y la
determinacin de su destino, lo que sugiere que las caracterstica tipo clula madre de las clulas CD24
+

(y de las clulas madre en general, incluyendo las CMC) son reguladas por rutas de sealizacin,
principalmente aquellas involucradas en la regulacin de las funciones de las clulas madre normales, y
el microambiente en el que se encuentran (Gao et al., 2010).
Medema & Vermeulen, 2011, revisaron las ideas actuales sobre un tipo de clulas madre, las clulas
madre intestinales (CMI), y las seales derivadas del microambiente que estn implicadas en la
regulacin de la homeostasis. De acuerdo con estos investigadores, hay consenso en que las CMI residen
en un nicho (llamado a veces cripta o cmara) que provee las seales esenciales, junto con las rutas
morfogenticas, necesarias para el adecuado desarrollo de las clulas. Entre las rutas principales est la
ruta WNT, que se ha encontrado que tiene un papel crucial en la proliferacin y mantenimiento de las
CMI, y que la sobreexpresin de activadores de esta ruta induce la expansin de las CMI in vivo,
mientras que la activacin de inhibidores de WNT genera un bloqueo en las seales de esta ruta y, en
consecuencia, desgaste de la capa epitelial. La importancia de la ruta WNT est ligada a un tipo de
Sara C. Rodrguez
Curso de Biotecnologa Animal - 2014
Pontificia Universidad Javeriana de Cali

clulas intestinales llamadas clulas de Paneth, pues son estas las encargadas de producir las seales
necesarias para la ruta de WNT, y que adems siempre se encuentran ubicadas alrededor de las CMI,
concertndolas en el fondo de la cripta. Dado que hay cierto orden en la ubicacin de las clulas de
Paneth y las CMI, podemos hablar de una jerarqua en la cripta, donde las clulas tienen, al menos en un
principio, origen monoclonal.
El tener origen monoclonal significa que todas las clulas son copias de una nica clula inicial, y
mediante diferentes estudios se ha comprobado que la condicin de monoclonalidad tiende a
mantenerse en las criptas intestinales: cuando una mutacin es introducida, la cripta entra en una fase
de mosaico (con clulas mutadas y no mutadas), pero rpidamente se vuelve monoclonal de nuevo. Esta
particularidad sugiere que las mutaciones que ocurren en una clula en particular se pueden esparcir
rpidamente por toda la cripta, de manera que si ocurre, por ejemplo, una mutacin que silencia al
inhibidor de la ruta WNT (implicada en la auto-renovacin celular), la proliferacin se dispara y
rpidamente puede derivar en cncer (Reya et al., 2001; Medema & Vermeulen, 2011).
En humanos, son comunes los casos de cncer colorrectal, y se cree que estn fuertemente relacionados
con la monoclonalidad de las criptas intestinales y con la regulacin (o falta de ella) de las rutas de
sealizacin que estn implicadas en la proliferacin. Mutaciones particulares en genes como el APC
(que es un regulador negativo principal de la ruta WNT) estn implicadas en el desarrollo de plipos
(protuberancias benignas) y adenomas (tumores epiteliales benignos) que aumentan en gran medida la
probabilidad de desarrollar cncer colorrectal, y estas mutaciones o transformaciones, se cree que
pueden ocurrir de dos maneras: de abajo hacia arriba, es donde una CMI es la primera mutante, o de
arriba hacia abajo, donde una clula ya diferenciada es la primera clula transformada. Hay ms
evidencias genticas que soporten la teora de abajo hacia arriba puesto que es relativamente fcil
encontrar mutaciones que desregulen las rutas de sealizacin y que inicien una proliferacin exagerada,
mientras que la teora de arriba hacia abajo es principalmente soportada en observaciones
histopatolgicas. En este ltimo caso, las clulas diferenciadas tendran que sufrir mutaciones que de
alguna manera, les otorgue acceso a aquellos genes propios de clulas madre, que fueron silenciados
durante el proceso de diferenciacin (Medema & Vermeulen, 2011).
Para probar el origen gentico de las clulas cancergenas, y en particular, de CMC, a partir de clulas
diferenciadas, Scaffidi & Misteli, 2011, mostraron que CMC pueden ser generadas in vitro mediante la
reprogramacin oncognica de clulas somticas humanas (Reya et al., 2001), durante una
transformacin neoplstica (transformacin en clulas de proliferacin aberrante, formadoras de
tumores). Esta transformacin implica la adquisicin progresiva de algunas caractersticas particulares,
que son importantes en el desarrollo de los tumores y que identifican a las clulas cancergenas. Estas
marcas de identidad son; la resistencia a la muerte celular, al bloquear seales que inducen la apoptosis,
mantener seales proliferativas, evasin de los supresores de crecimiento, procesos activos de invasin
y metstasis, la capacidad de formar nuevos vasos sanguneos alrededor del tumor y la inmortalidad
replicativa (Hanahan & Weinberg, 2011). Al adquirir estas caractersticas, las clulas cancergenas
desafan a la vida misma, se vuelven dueas de su propio destino, y gobernantes del nuestro.
Scaffidi & Misteli lograron transformar in vivo una subpoblacin de fibroblastos, que se reprogramaron
en una clula multipotente y que adquirieron todas las marcas identificadoras de las CMC, y que
generan tumores organizados jerrquicamente. La transformacin se realiz al inducir la expresin
Sara C. Rodrguez
Curso de Biotecnologa Animal - 2014
Pontificia Universidad Javeriana de Cali

estable de genes como hTERT (telomerasa transcriptasa inversa en humanos) y el antgeno SV40 LT
(protena proto-ocognica, derivada de un virus), entre otros, que estn implicadas en la transformacin
de las clulas normales a clulas cancergenas. Demostraron, que el proceso de transformacin confiere
la habilidad de diferenciarse a fibroblastos somticos, y tomaron un marcador de CME llamado SSEA-1,
que se uso para identificar a las clulas transformadas, lo que permiti hacer un seguimiento a la
formacin de tumores a partir de los fibroblastos modificados (que fueron marcados con una GFP), y
encontraron que los fibroblastos SSEA-1
+
son las clulas responsables por el desarrollo de tumores y
contribuyen en mayor medida a la masa del tumor, son capaces de auto-regenerarse y tienen una firma
molecular especfica, mientras que fibroblastos SSEA-1
-
fueron en su mayora no tumorignicos (Scaffidi
& Misteli, 2011) (imagen 1). Estas clulas desdiferenciadas, volvieron a adquirir caractersticas propias
de clulas madre normales, lo que indica una correlacin entre las CMC y los genes que regulan el ciclo
celular, tanto de las clulas normales como de las CME y CMA.

El ciclo celular en las CME (estudiado principalmente en modelos murinos), se caracteriza por una
proliferacin rpida y ciclo celular de corta duracin, primordialmente debido a una reduccin en la
duracin de la fase G1, que prcticamente anula la fase G1 temprana (Orford & Scadden, 2008). Por otro
lado, en la mayora de las CMA, la proliferacin depende de la sealizacin de protenas quinasas
activadas por mitgenos (MAPK por su nombre en ingls), que tambin es un potente inductor de
diferenciacin celular, sobre todo cuando las clulas se exponen por periodos de tiempo prolongados a
las MAPK (Orford & Scadden, 2008). La diferenciacin multipotente de las CMA es muestra de que su
genoma puede ser epigenticamente reprogramado bajo las condiciones adecuadas, y la plasticidad de
diferenciacin de las CMA, que se crea que eran especficas para un tejido determinado, se asocia con
el acceso transcripcional a genes que son preferencialmente expresados en tejidos diferentes (Lotem &
Sachs, 2006). La ausencia de la fase temprana de G1 en las CME les permite esquivar la diferenciacin
inducida por efecto de rutas de sealizacin mitgenas, activas primordialmente en esta fase ausente.
Un ejemplo de ruta de sealizacin inductora de diferenciacin es la ruta MAPK, que inhibe la auto-
regeneracin de las CME e incita a que estas clulas se comprometan con un tipo celular especfico,
Imagen 1: Modelo de reprogramacin de clulas somticas a CMC. Tomado de Scaffidi, P. & Misteli, T. 2011. In vitro
generation of human cells with cancer stem cell properties. Nature Cell Biology 13, 10511061
Sara C. Rodrguez
Curso de Biotecnologa Animal - 2014
Pontificia Universidad Javeriana de Cali

mientras que si se inhibe la accin de MAPK, la auto-regeneracin aumenta, previniendo la regeneracin
autnoma de las CME (Orford & Scadden, 2008).
Las clulas cancerosas no siempre pierden su potencial de diferenciacin: pueden ser inducidas a
diferenciarse por citoquininas que regulan la diferenciacin de clulas normales, o en respuesta a una
variedad de compuestos como el cido ritinoico y la arabinosida (Lotem & Sachs, 2006). La
diferenciacin de las clulas cancergenas se asocia tambin con reprogramacin epigentica de su ADN
o de su cromatina, y en algunos casos, la diferenciacin celular cancergena puede ser inducida por
compuestos que inhiben la metilacin de ADN o la desacetilacin de histonas. Por el contrario,
experimentos con clulas de cerebro maduras han mostrado una prdida combinada de genes
supresores de tumor p16
Ink4
y p19
Arf
, y una activacin constitutiva del receptor EGF (factor de
crecimiento embrionario), causando una prdida de la diferenciacin. Las CMC pueden derivar tanto de
clulas madre normales como de clulas ya diferenciadas que se ha reprogramado para expresar
propiedades de clulas madre (Lotem & Sachs, 2006). La desmetilacin de ADN y/o acetilacin de
histonas puede inducir cambios estructurales en la cromatina, que activan la expresin de genes
durante la diferenciacin. Para que las clulas de diferencien, se requieren cambios epigenticos que
involucren la metilacin del ADN y el silenciamiento de ciertos genes. La desmetilacin del DNA es, por
lo tanto, uno de los pasos necesarios para que se den procesos de desdiferenciacin celular (Lotem &
Sachs, 2006).
Recientemente se ha demostrado que las CMC normalmente tienen caractersticas asociadas con clulas
mesenquimatosas, y tambin juegan un papel crtico en la iniciacin de tumores, su crecimiento,
metstasis y resistencia teraputica. Las CMC pueden resistir a la radioterapia y la quimioterapia, dando
origen continuo a clulas cancergenas y manteniendo el tumor en desarrollo. A medida que va
avanzando la diferenciacin del cncer, entre menos diferenciado est (entre el tumor sea ms
diferente al tejido en el que se encuentra), hay mayor cantidad de CMC, mientras que en etapas del
cncer ms diferenciados (las clulas cancergenas son ms similares a las clulas diferenciadas del
tejido) hay menor contenido de CSC.
La transicin epitelio-mesnquima (TEM) es un proceso o programa celular altamente conservado, que
permite que clulas epiteliales ya diferenciadas se conviertan en clulas motiles mesenquimatosas. Este
proceso es crtico para que se d una embriognesis correcta, y tambin juega un papel determinante
en la tumorignesis y la progresin del cncer. La TEM es suficiente para inducir una poblacin de
clulas con caractersticas propias de clulas madre a partir de clulas epiteliales y clulas cancergenas
bien diferenciadas, en otras palabras, es capaz de inducir la desdiferenciacin celular (Ouyang et al.,
2010).
Este proceso requiere que se den cambios complejos, tanto en la arquitectura como en el
comportamiento de las clulas, y se da debido a que las clulas epiteliales dejan de expresar la E-
caderina y otros compuestos, implicados en el mantenimiento de la unin de las clulas epiteliales. La
TEM se activa por seales inducidas extracelularmente, provenientes de la matriz extracelular
(microabiente), por factores de crecimiento y factores de transcripcin (Ouyang et al., 2010).
Las clulas madre dependen del medio en el que se encuentren, de los factores epigenticos, factores
de transcripcin y protenas de la matriz extracelular para mantenerse y proliferar. No son entes
Sara C. Rodrguez
Curso de Biotecnologa Animal - 2014
Pontificia Universidad Javeriana de Cali

independientes, dependen de que se den las condiciones propicias y que estas condiciones se
mantengan. Dependen de procesos celulares como EMT, mutaciones en genes que regulan el ciclo
celular, factores de transcripcin, rutas de sealizacin extracelular, etc., pero una vez han logrado todo
esto, y a falta de tratamientos efectivos, las CMC fcilmente nos dominan, ganan la batalla por la vida,
es la victoria sin lucha, de esa naturaleza contradictoria.
Referencias
Cheng, T. (2004). Cell cycle inhibitors in normal and tumor stem cells. Oncogene, 23, 72567266.
doi:10.1038/sj.onc.1207945
Gao, M., Choi, Y., Kang, S., Youn, J. H., & Cho, N. (2010). CD24 + cells from hierarchically organized
ovarian cancer are enriched in cancer stem cells. Oncogene, 29(18), 26722680.
doi:10.1038/onc.2010.35
Hanahan, D., & Weinberg, R. a. (2011). Hallmarks of cancer: the next generation. Cell, 144(5), 646674.
doi:10.1016/j.cell.2011.02.013
Lanza, R. (Ed.). (2009). Essentials of Stem Cell Biology (2nd ed.).
Lotem, J., & Sachs, L. (2006). Epigenetics and the plasticity of differentiation in normal and cancer stem
cells. Oncogene, 25, 76637672. doi:10.1038/sj.onc.1209816
Medema, J. P., & Vermeulen, L. (2011). Microenvironmental regulation of stem cells in intestinal
homeostasis and cancer. Nature, 474, 318326. doi:10.1038/nature10212
Orford, K. W., & Scadden, D. T. (2008). Deconstructing stem cell self-renewal: genetic insights into cell-
cycle regulation. Nature Reviews. Genetics, 9, 115128. doi:10.1038/nrg2269
Ouyang, G., Wang, Z., Fang, X., Liu, J., & Yang, Ch. J. (2010). Molecular signaling of the epithelial to
mesenchymal transition in generating and maintaining cancer stem cells. Cellular and Molecular
Life Sciences, 67, 26052618. doi:10.1007/s00018-010-0338-2
Reya, T., Morrison, S. J., Clarke, M. F., & Weissman, I. L. (2001). Stem cells, cancer, and cancer stem cells.
Nature, 414(November), 105112.
Scaffidi, P., & Misteli, T. (2011). In vitro generation of human cells with cancer stem cell properties.
Nature Cell Biology, 13(9), 105161. doi:10.1038/ncb2308