VI JORNADA DE

FORMACIN
INTERHOSPITALARIA
DEL LABORATORIO
CLNICO
3. TCNI CAS EN EL LABORATORI O
DE AUTOI NMUNI DAD
PATRICIA MORAIS FERREIRA
RI. BIOQUMICA CLNICA
PRI NCI PALES TCNI CAS DE
I NMUNOANLI SI S
Aglutinacin
Inmunoprecipitacin en medio lquido
Turbidimetra
Nefelometra
Inmunodifusin doble
Contrainmunoelectroforesis
Inmunofluorescencia
Citometra de flujo
Inmunoanlisis con indicadores marcados
ELISA
Inmunotransferencia
Westernblot, Slot blot
AGLUTI NACI N
Primeras tcnicas empleadas en los estudios de
autoinmunidad.
Antgeno particulado + Acs agregados
macroscpicos con aglutinacin.
Se realiza generalmente en placa, tambin en tubo.
Se mezcla la suspensin de clulas o partculas
con el suero. Se hace oscilar la placa durante unos
minutos y se observa la aglutinacin.
Ventajas:
facilidad de realizacin
no equipamiento
Desventajas:
baja sensibilidad
dificultad de cuantificar
APLI CACI ONES
Deteccin del factor reumatoide isotipoIgM
aglutina partculas recubiertas con IgGhumana.
Determinacin anticuerpos contra el ncleo
(ANA).
Algunos anticuerpos especficos de rgano.
Anticuerpos contra la actina.
Anticuerpos contra los espermatozoides.
I NMUNOPRECI PI TACI N
Antgeno soluble + Anticuerpos
precipitacin
ZONA DE EQUI VALENCI A
I NMUNOPRECI PI TACI N
EN MEDI O L QUI DO
TURBIDIMETRA
Mide la disminucin de la intensidad de la luz cuando
atraviesa una solucin proporcional a la cantidad y
tamao de las partculas.
NEFELOMETRA
Mide la luz dispersada a diversos ngulos por la
suspensin particulada proporcional a la concentracin
de partculas del medio.
I NMUNOPRECI PI TACI N EN
GELES
I NMUNODI FUSI N DOBLE
Patrn de identidad
Patrn de disparidad
Patrnde
semiidentidad
CONTRAI NMUNOELECTROFORESI S
Migracin electrofortica
Atg(-) nodo (+)
Ac(+) ctodo(-)
Ms sensible que la inmunodifusin
Cualitativa
CATODO (-) ANODO (+)
I NMUNOFLUORESCENCI A
Emplea anticuerpos que llevan unidos compuestos
fluorescentes o fluorocromos.
Isotiocianato de fluorescena 488nm 530nm
Rodamina B 545nm 585nm
Excitacin Emisin
Ficoeritrina 488nm 576nm
directa
indirecta
I NMUNOFLUORESCENCI A
I NDI RECTA
Aparicin fluorescencia presencia de
autoanticuerpos
Patrones de fluorescencia posibilidad de
orientar y caracterizar el autoanticuerpo
Antiinmunoglobulina
marcada
Corte de tejido
Ventajas:
posibilidad de discriminar entre diversos
patrones
buen mtodo de escrutinio
Desventajas:
interpretacin subjetiva
margen de referencia
baja sensibilidad
difcil de estandarizar
no es posible la automatizacin
ELI SA
Enzimoinmunoanlisis
conjugacin del anticuerpo con un enzima que produce
una reaccin cuyo producto puede ser medido
espectofotomtricamente.
Enzimas:
peroxidasade rbano
fosfatasaalcalina
B-galactosidasa
G6PD
ELI SA I NDI RECTO
+
E E
+
suero
E E
antianticuerpo
marcado
sustrato
Espectrofotometra
450nm
Evaluacin cuantitativa
-curva de saturacin de los calibradores :
absorbancia de cada calibrador frente a su
concentracin.
-la concentracin de autoanticuerpos se
obtiene al leerla en la curva de calibracin.
Evaluacin cualitativa
DOCut-off = DOCP* Factor
I NMUNOTRANSFERENCI A
La transferencia de protenas o `blotting supone
la inmovilizacin de las protenas sobre
membranas sintticas ya sea mediante
transferencia o mediante aplicacin directa.
Deteccin reaccin antgeno-anticuerpo:
Mtodos radioqumicos emiten radiaciones
ionizantes.
Enzimas peroxidasa, fosfatasaalcalina
Reaccin de quimioluminiscenciay radiografa
WESTERN BLOT
SLOT BLOT
CI TOMETR A DE FLUJ O
Tecnologa que permite la determinacin
simultnea de varios autoanticuerposen clulas en
suspensin mediante el empleo de fluorocromos..
Utiliza conjuntos de microesferas de ltex
marcadas internamente con diferentes
proporciones de dos fluorocromos.
biotina
Atg suero
estreptavidina-ficoeritrina
576nm
PARMETROS
Dispersin frontal captada por la lente del
detector ForwardScatter (FSC). En posicin frontal
respecto a la fuente de luz. Relacionado con el
tamao de la partcula.
Dispersin lateral captada por el detector Side
Scatter (SSC). Medida relativa de la complejidad
interna de la clula.
Fluorescencia de los dos fluorocromos internos de
las microesferas.
Fluorescencia de los conjugados unidos a las
microesferas(detectores de fluorescencia).
forwardscatter
sidescatter
FL1
FL2
FL3 FL4
forwardscatter
lser Argn 488nm
tamao
complejidad