Documentos de la SEQC 2009 41

Recomendaciones para la calibracin de material volumtrico

en el laboratorio clnico
*
Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular (SEQC)
Comit Cientfco
Comisin de Metrologa
Documento E. Fase 3. Versin 2
Preparado por:
R. Ruz Morer
Composicin de la Comisin: J. Batista Castellv, F. Canalias Reverter, FJ. Gella Toms, B. Gonzlez de la Presa, R. Ruz Morer, M. Snchez Manrique (Presidenta)
*
Este documento se public en su primera versin en Quim Clin 2006; 25:104-110, con varios errores que se explicaban en una fe de erratas posteriormente publicada
en Quim Clin 2007; 26:85. Esta segunda versin difere de la primera nicamente en que se han corregido los errores mencionados.
ndice
0 Introduccin
1 Objeto y campo de aplicacin
2 Normas para consulta
3 Defniciones
4 Requisitos metrolgicos: criterios de aceptacin
5 Procedimiento
5.1 Patrones
5.2 Condiciones ambientales
5.3 Procedimiento de calibracin
5.4 Clculo del error sistemtico y de la incertidumbre de medida
5.5 Frecuencia de calibracin
6 Aplicaciones
7 Bibliografa
Anexo 1. Clculo de la incertidumbre
0 Introduccin
Las pipetas que se utilizan para la dispensacin de volmenes
que pudieran afectar, directa o indirectamente, la calidad de los
resultados generados en el laboratorio, deberan estar apropiada-
mente calibradas.
Segn las normas para la gestin de la calidad ISO 15189 e
ISO 9001, los laboratorios clnicos deben establecer una pro-
gramacin que controle y demuestre peridicamente que sus
instrumentos de medida se encuentran calibrados y mantener
documentos que describan los procedimientos de calibracin
y los criterios de aceptacin, as como informes que contengan
datos de las calibraciones efectuadas.
1 Objeto y campo de aplicacin
La presente recomendacin describe un procedimiento gravim-
trico para la calibracin de pipetas y dispensadores mecnicos, de
volmenes superiores a 0,05 mL
2
.
2 Normas para consulta
Asociacin Espaola de Normalizacin. Aparatos volumtri-
cos accionados mediante pistn. Parte 1: Terminologa, requisitos
generales y recomendaciones de uso. UNE-EN-ISO 8655-1: 2002.
Madrid: AENOR; 2002.
Asociacin Espaola de Normalizacin. Aparatos volumtricos
accionados mediante pistn. Parte 2: Pipetas tipo pistn. UNE-EN-
ISO 8655-2: 2002. Madrid: AENOR; 2002.
Asociacin Espaola de Normalizacin. Aparatos volumtricos
accionados mediante pistn. Parte 5: Dispensadores. UNE-EN-ISO
8655-5: 2002. Madrid: AENOR; 2002.
Asociacin Espaola de Normalizacin. Aparatos volumtricos
accionados mediante pistn. Parte 6: Mtodos gravimtricos para la
determinacin del error de medicin. UNE-EN-ISO 8655-6: 2002.
Madrid: AENOR; 2002.
Asociacin Espaola de Normalizacin. Laboratorios Clnicos.
Requisitos particulares relativos a la calidad y la competencia.
UNE-EN-ISO 15189: 2003. Madrid: AENOR; 2003.
Asociacin Espaola de Normalizacin. Sistemas de gestin de la
calidad. Requisitos. UNE-EN-ISO 9001:2000. Madrid: AENOR; 2000.
Centro Espaol de Metrologa. Vocabulario internacional de
trminos fundamentales y generales de metrologa (VIM). Madrid:
Ministerio de Obras Pblicas, Transportes y Medio Ambiente; 1994.
07 doc pipetas .indd 41 28/09/2009 15:38:10
42 Documentos de la SEQC 2009
Entidad Nacional de Acreditacin. Expresin de la incertidum-
bre de medida en las calibraciones. CEA-ENAC-LC/02 (Rev.1).
Madrid: ENAC; 1998
Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular.
Comit Cientfco. Comisin de Metrologa. Recomendaciones para
la calibracin de balanzas y para la estimacin de la incertidumbre
de las medidas de masa en el laboratorio clnico. Barcelona: Quim.
Cln. 2004; 23: 35-39.
3 Deniciones
3.1. Calibracin
Conjunto de operaciones que establecen, en condiciones especi-
fcadas, la relacin entre los valores de una magnitud indicados por
un instrumento de medida o un sistema de medida, o los valores
representados por una medida materializada o por un material de
referencia, y los valores correspondientes de esa magnitud realizados
por patrones (VIM).
NOTA: En el caso de material volumtrico, es el conjunto de operaciones
que establecen la relacin entre el volumen dispensado y el volumen nominal
o seleccionado correspondiente del aparato (ISO).
3.2. Error mximo permitido
(de un instrumento de medida)
Valor extremo de un error permitido por especifcaciones, regla-
mentos, etc., para un instrumento de medida dado (VIM).
NOTA: En el caso de material volumtrico, es el valor extremo su-
perior o inferior permitido para la desviacin del volumen dispensado
a partir del volumen nominal o el volumen seleccionado de un aparato
volumtrico accionado mediante pistn (ISO).
3.3. Error sistemtico
Media que resultara de un nmero infnito de medidas del mismo
mensurando realizadas bajo condiciones de repetibilidad menos un
valor verdadero del mensurando (VIM).
NOTA: En el caso de material volumtrico, es la diferencia entre el
volumen dispensado y el volumen nominal o volumen seleccionado de un
aparato volumtrico accionado mediante pistn (ISO).
3.4. Exactitud (de un instrumento de medida)
Aptitud de un instrumento de medida para dar respuestas prximas
a un valor verdadero (VIM).
3.5. Imprecisin
Coefciente de variacin de un conjunto de resultados obtenidos al
medir repetidamente un mensurando con un mismo procedimiento
de medida.
3.6. Incertidumbre de medida
Parmetro, asociado al resultado de una medicin, que caracte-
riza la dispersin de los valores que podran razonablemente ser
atribuidos al mensurando (VIM).
3.7. Intervalo de medida
Mdulo de la diferencia entre dos lmites de un rango nominal (VIM)
3.8. Patrn
Medida materializada, instrumento de medida, material de referen-
cia o sistema de medida destinado a defnir, conservar o reproducir
una unidad o uno o varios valores de una magnitud para que sirvan
de referencia (VIM).
3.9. Rango de indicacin
Conjunto de valores limitado por las indicaciones extremas (VIM).
3.10. Resolucin
La menor diferencia de indicacin de un dispositivo visualizador
que puede percibirse de forma signifcativa (VIM).
3.11. Trazabilidad
Propiedad del resultado de una medicin o de un patrn tal que
pueda relacionarse con referencias determinadas, generalmente a
patrones nacionales o internacionales, por medio de una cadena
ininterrumpida de comparaciones teniendo todas las incertidumbres
determinadas (VIM).
3.12. Valor nominal
Valor redondeado o aproximado de una caracterstica de un
instrumento de medida que sirve de gua para su utilizacin (VIM).
4. Requisitos metrolgicos:
criterios de aceptacin
El error mximo de medida de volumen permitido (EMP) en el
laboratorio clnico depende sustancialmente del objeto de la medi-
cin. De forma general pueden establecerse las siguientes categoras:
A. Mediciones de volumen que pueden afectar al valor de una magnitud
de un patrn/calibrador o relacionadas con un proceso de calibracin.
Por ejemplo, en la reconstitucin de un calibrador lioflizado.
B. Mediciones de volumen que pueden afectar al valor de una
magnitud de un material de control o relacionadas con procesos
de control/verifcacin. Por ejemplo, en la reconstitucin de un
control lioflizado
C. Mediciones de volumen que pueden afectar el valor de una
magnitud de una muestra. Por ejemplo, en procedimientos de medida
manuales o dilucin de una muestra para su reproceso
D. Otras mediciones de volumen. Por ejemplo, en la preparacin
de disoluciones de reactivos.
Teniendo en cuenta el estado actual de la tecnologa de los instru-
mentos para la dispensacin de volumen utilizables en los laboratorios
clnicos, se recomiendan los requisitos para el error mximo permitido
de las mediciones de volumen que se muestran en la siguiente tabla.
Estos valores deben considerarse como una aproximacin razonable
y aplicable a muchas situaciones del laboratorio clnico. No obstante,
determinadas circunstancias pueden exigir requisitos ms o menos
estrictos que los aqu recomendados.
2
Para volmenes inferiores a 0,05 mL, la evaporacin durante el proceso de calibracin debe ser compensada por clculo o tomar medidas adicionales para evitarla.
07 doc pipetas .indd 42 28/09/2009 15:38:10
Documentos de la SEQC 2009 43
Recomendaciones para la calibracin de material volumtrico
5.4. Clculo del error sistemtico
y de la incertidumbre de medida
a) Los clculos se realizan individualmente para cada uno de los
puntos de calibracin
4
.
b) Calcular el valor medio (v
m
) y la desviacin tpica (s
i
) de cada
serie de 10 medidas.
c) Calcular el error sistemtico relativo (ES
rel
), expresado en
%, restando el valor nominal (v
n
) de la media obtenida para dicho
volumen, y dividiendo posteriormente por el valor nominal.
d) Calcular la incertidumbre relativa combinada expandida para
una probabilidad de cobertura de aproximadamente el 95% (U
rel
),
expresada en %:
En el ANEXO-1 se detalla el origen de los trminos de esta ecuacin.
e) Evaluar los resultados. La suma del valor absoluto de
ES
rel
con la U
rel
debe ser inferior o igual al error mximo per-
mitido. Estas condiciones son aplicables a todos los puntos
de calibracin.
5.5. Frecuencia de calibracin
Se recomienda calibrar las pipetas y dispensadores cada 3 meses.
Tambin deberan calibrarse siempre que exista alguna sos-
pecha de funcionamiento incorrecto o de haber sido sometidas a
algn trato inadecuado u otra situacin que pueda comprometer
su funcionamiento.
6. Aplicaciones
El proceso de calibracin de las pipetas y dispensadores permite
obtener evidencia objetiva de que, cuando se utiliza el instrumento
para efectuar dispensaciones de volumen, no se cometen errores
inadmisibles, esto es, superiores el error mximo permitido.
Es posible que, en el caso de las pipetas de volumen variable,
se obtengan resultados insatisfactorios en alguno de los puntos
de calibracin (por ejemplo en el volumen de valor ms bajo).
Esto no cuestiona todas las mediciones que se efectuaron con
anterioridad con la misma pipeta, sino tan slo aqullas cerca-
nas al punto de calibracin para el que se obtuvieron resultados
anmalos. La pipeta puede utilizarse restringiendo su intervalo
de medida o variando el error mximo permitido en funcin de
la escala de medida.
7. Bibliografa
Dybkaer R. Vocabulary for use in measurement procedures and description
of reference materials inlaboratory medicine. Eur J Clin Chem Clin Biochem
1997; 35:141-173.
categora EMP (%)
A 1
B 2
C 3
D 5
Para cada pipeta o dispensador del laboratorio deben establecerse
las medidas que con dicho instrumento se efectan y asignarle como
error mximo permitido el ms estricto de las categoras de medida
que se realizan con el mismo. El error mximo permitido se utilizar
como criterio de aceptacin de las calibraciones.
5. Procedimiento
5.1. Patrones
Para la calibracin de las pipetas debe utilizarse como patrn
una balanza previamente calibrada y de resolucin adecuada para
el volumen de la pipeta a calibrar.
La balanza puede ser calibrada por el propio laboratorio cl-
nico
3
o por una empresa externa, en cuyo caso la calibracin
debe acompaarse de un certifcado de calibracin expedido por
un laboratorio acreditado o un instituto nacional de metrologa,
debiendo constar en dicho certifcado la trazabilidad al patrn
nacional, la incertidumbre expandida y el factor (o probabilidad)
de cobertura que se ha utilizado en el clculo de la incertidumbre
expandida.
5.2. Condiciones ambientales
Deben evitarse situaciones ambientales extremas, procurando
que la calibracin se realice bajo condiciones similares a las de uso
de la pipeta. Evitar las corrientes de aire y reducir en lo posible la
duracin de la ejecucin de las medidas u otras condiciones que
pudieran favorecer la evaporacin.
5.3. Procedimiento de calibracin
Cuando la pipeta es de volumen variable, seleccionar para la
calibracin el volumen mnimo, el volumen mximo y un volumen
intermedio, y para cada uno de ellos proceder como sigue:
a) Antes de realizar la calibracin debe llevarse a cabo una ins-
peccin visual de la balanza, comprobar que est adecuadamente
calibrada y llevar a cabo su limpieza, si es oportuno.
b) Colocar el recipiente de pesada en el plato de la balanza, pesarlo
y anotar el valor de la tara (que se tendr en cuenta para seleccionar
la incertidumbre expandida correspondiente al punto de calibracin
de la balanza ms cercano a la masa total que se mide). Realizar
un ajuste a 0 de la tara.
c) Dispensar el volumen de agua destilada correspondiente al
volumen nominal de la pipeta en el recipiente y anotar el valor de
la pesada.
d) Repetir el apartado c 10 veces consecutivas.
3
Ver documento "Recomendaciones para la calibracin de balanzas y para la estimacin de la incertidumbre de masa en el laboratorio clnico.
4
La Comisin de Metrologa de la SEQC ha preparado una hoja de clculo apropiada para estos fnes y que puede ser obtenida en el sitio de la Comisin de
Metrologa de la web de la Sociedad
07 doc pipetas .indd 43 28/09/2009 15:38:10
44 Documentos de la SEQC 2009
Anexo 1. Clculo de la incertidumbre
Las medidas realizadas con la pipeta, tienen las siguientes fuentes
de incertidumbre (u):
a) Incertidumbre debida a la medida (u
i
). Los errores aleatorios de
dispensacin originan imprecisin en las medidas. Este componente
de la incertidumbre puede ser calculado a partir de la desviacin
tpica de las medidas repetidas (s
i
).
u
i
= s
i
b) Incertidumbre debida a la resolucin (u
r
). La resolucin (r)
de la pipeta ocasiona errores aleatorios de redondeo. La amplitud
de la distribucin de los posibles errores es igual a la resolucin y,
en ese intervalo, cualquier valor tiene las mismas probabilidades
de producirse (distribucin rectangular o uniforme). En este tipo
de distribucin, la desviacin tpica (s
r
) es igual a la amplitud de la
distribucin dividida por la raz cuadrada de 12.
(En las pipetas de volumen fjo, el valor de resolucin es 0).
c) Incertidumbre debida al patrn (u
p
). Se calcula a partir de los
datos que proporciona el certifcado de calibracin de la balanza: la
incertidumbre expandida (U
p
) del punto de calibracin de la balanza
5
En caso de disponer nicamente del valor de la incertidumbre relativa y expandida (U
rel
) respecto al punto de calibracin de la balanza requerido, calcular U
p

mediante: U
p
= valor masa x U
rel
/100.
6
Teniendo en cuenta el tamao habitual del EMP, se ha considerado despreciable la diferencia entre volumen medido y el valor nominal.
ms cercano a la masa total que se mide (incluyendo recipiente)
5
,
generalmente para el 95% de confanza, y el valor del factor de
cobertura empleado (habitualmente k
p
= 2)
d) Otros componentes de la incertidumbre, como el ocasionado por
la presin del aire y la densidad del agua, pueden ser ignorados por su
escasa relevancia en las aplicaciones habituales del laboratorio clnico.
La incertidumbre combinada tpica (u
c
) puede calcularse a partir
de la suma de cuadrados de las incertidumbres de cada componente:
y la incertidumbre combinada expandida (U
c
) para el intervalo de
confanza de aproximadamente el 95% resulta de multiplicar la
anterior por el factor de cobertura 2.
Finalmente, la incertidumbre relativa combinada expandida (U
rel
)
resulta de dividir la incertidumbre absoluta combinada expandida
por el valor medio medido de cada punto de calibracin (v
m
)
6
y,
multiplicndola por 100, se expresa en porcentaje.
U
rel
07 doc pipetas .indd 44 28/09/2009 15:38:10